TECHNISCHES GEBIETTECHNICAL AREA

Die hier beschriebene Technologie betrifft unter anderem Liganden, z. B. Antikörper oder Fallen, zur Behandlung von Krankheiten, Methoden, Zusammensetzungen, Kits und Anwendungen.The technology described here relates, inter alia, to ligands, e.g. As antibodies or traps, for the treatment of diseases, methods, compositions, kits and applications.

HINTERGRUNDBACKGROUND

Es ist bekannt, dass sich einzelne Menschen in ihrer Sequenz unterscheiden, und in der jüngeren Zeit ließen mehrere Individuen, zum Beispiel von James Watson und Craig Venter, ihr Genom sequenzieren. Beim Vergleich der Genomsequenzen von Individuen wurden Unterschiede in ihrer Sequenz sowohl in den codierenden als auch in den nicht codierenden Teilen des Genoms festgestellt. Einige dieser Variationen bei Menschen sind signifikant und tragen zu den phänotypischen Unterschieden zwischen Individuen bei. In extremen Fällen führen sie zu genetischen Krankheiten. Ziel des 1000 Genomes Project ist die Katalogisierung von Sequenzen im humanen Genom, bei dem die Genome einer sehr großen Anzahl von Individuen aus unterschiedlichen, im Stand der Technik anerkannten humanen ethnischen Populationen sequenziert werden.It is known that individuals differ in their sequence, and more recently several individuals, for example James Watson and Craig Venter, have had their genome sequenced. In comparing the genome sequences of individuals, differences in their sequence were noted in both the coding and non-coding parts of the genome. Some of these variations in humans are significant and contribute to the phenotypic differences between individuals. In extreme cases, they lead to genetic diseases. The aim of the 1000 Genome Project is to catalog sequences in the human genome by sequencing the genomes of a very large number of individuals from different art recognized human ethnic populations.

KURZDARSTELLUNGSUMMARY

Unter Anwendung von humaner genetischer Variationsanalyse und rationell konzipierter Sequenzselektion stellt die vorliegende Erfindung Verbesserungen bei der Diagnose und Therapie menschlicher Patienten bereit. Es sei betont, dass die Erfindung die Entwicklung maßgeschneiderter Medikamente ermöglicht, die auf individuelle Genotypen oder Phänotypen humaner Patienten zielen.Using human genetic variation analysis and rationally designed sequence selection, the present invention provides improvements in the diagnosis and therapy of human patients. It should be emphasized that the invention enables the development of customized drugs targeting individual genotypes or phenotypes of human patients.

Die vom Erfinder durchgeführte Analyse einer großen Anzahl an natürlichen genomischen humanen TOI-Sequenzen zeigt, dass es eine beträchtliche Variation zwischen unterschiedlichen humanen Populationen gibt, und ermöglicht es, individuelle humane Patienten mit maßgeschneiderten, zielführenden medizinischen und diagnostischen Ansätzen zu korrelieren. Die technischen Anwendungen dieser Ergebnisse gemäß der vorliegenden Erfindung leisten somit einen Beitrag zur besseren Behandlung, Prophylaxe und Diagnose in Menschen und stellen einen Nutzen für den Patienten dar, indem sie individuell abgestimmte Medikamente und Therapien bereitstellen. Hierdurch werden Vorteile einer besseren Verschreibungspraxis, einer geringen Verschwendung von Medikamenten und verbesserten Chancen einer Wirksamkeit von Arzneimitteln sowie einer besseren Diagnose von Patienten bereitgestellt.The inventor's analysis of a large number of natural genomic human TOI sequences shows that there is considerable variation between different human populations, and makes it possible to correlate individual human patients with tailor-made, targeted medical and diagnostic approaches. The technical applications of these results according to the present invention thus contribute to better treatment, prophylaxis and diagnosis in humans and provide a benefit to the patient by providing personalized medications and therapies. This will provide benefits of better prescribing practice, less wasted medication and improved chances of drug efficacy and better patient diagnosis.

Ferner hat der Erfinder überraschenderweise festgestellt, dass einige der selteneren natürlichen Formen, wenngleich sie bei Menschen sehr viel weniger häufig auftreten als die herkömmliche Form, nichtsdestotrotz in mehreren und ethnisch unterschiedlichen humanen Populationen vorhanden sind, gewöhnlich mit vielen humanen Beispielen pro wiedergegebener ethnischer Population. Der Erfinder hat somit festgestellt, dass mit einer Zielausrichtung auf solche selteneren Formen eine wirksame Behandlung, Prophylaxe oder Diagnose über viele humane ethnische Populationen bereitgestellt würde, wodurch der Nutzen der vorliegenden Erfindung erweitert und Patienten in diesen Populationen besser gedient werden könnte.Further, the inventor has surprisingly discovered that some of the rarer natural forms, although much less common in humans than the conventional form, are nonetheless present in multiple and ethnically diverse human populations, usually with many human examples per reported ethnic population. The inventor has thus found that targeting such more rare forms would provide effective treatment, prophylaxis or diagnosis across many human ethnic populations, thereby enhancing the utility of the present invention and better serving patients in these populations.

Hiermit hat der Erfinder festgestellt, dass es beträchtliche industrielle und medizinische Anwendungen für die Erfindung gibt, was die Richtung bei der Auswahl eines Anti-TOI-Liganden zur Verabreichung an menschliche Patienten zur Therapie und/oder Prophylaxe von durch TOI vermittelte oder mit TOI assoziierte Krankheiten und Leiden betrifft. Auf diese Weise erhält der Patient Arzneimittel und Liganden, die auf seine – durch die genetische oder phänotypische Zusammensetzung des Patienten bedingten – Bedürfnisse zugeschnitten sind. Einhergehend hiermit stellt die Erfindung die Genotypisierung und/oder Phänotypisierung von Patienten im Zusammenhang mit einer solchen Behandlung bereit, wodurch es möglich wird, das passende Arzneimittel für den Patienten zu finden. Hierdurch erhöhen sich die Chancen einer medizinischen Wirksamkeit, die Wahrscheinlichkeit einer mangelhaften Behandlung mit Arzneimitteln oder Liganden, die nicht auf den Patienten abgestimmt sind (z. B. schlechte Wirksamkeit und/oder Nebenwirkungen), wird verringert und pharmazeutische Fehlverschreibungen und Verschwendung werden vermieden.Thus, the inventor has found that there are significant industrial and medical uses for the invention, which is the direction in the selection of an anti-TOI ligand for administration to human patients for the therapy and / or prophylaxis of TOI-mediated or TOI-associated diseases and suffering. In this way, the patient receives drugs and ligands that are tailored to his needs, due to the genetic or phenotypic composition of the patient. Along with this, the invention provides the genotyping and / or phenotyping of patients in connection with such treatment, thereby making it possible to find the appropriate drug for the patient. This increases the chances of medical efficacy, reduces the likelihood of poor treatment with drugs or ligands that are not personalized to the patient (eg, poor efficacy and / or side effects), and avoids pharmaceutical misconduct and waste.

Hierzu stellt die Erfindung bereit:For this purpose, the invention provides:

In einer ersten Konfiguration In a first configuration

Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst:

• a. die Verabreichung eines auf eine TOI-Variante in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden an den Menschen und die Behandlung oder Prävention dieser Krankheit bzw. dieses Leidens, wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz mit einer kumulativen humanen Allelhäufigkeit von weniger als 50% codiert wird und/oder wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird; wobei
• b. der Mensch vor Schritt (a) als positiv für die Nukleotidsequenz genotypisiert wurde oder wird oder als positiv für die TOI-Variante phänotypisiert wurde oder wird.

• a. administering to a human an anti-TOI ligand targeting a TOI variant in human and treating or preventing that disease, wherein the TOI in the human being is from a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50 % and / or wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence having a total typhoid frequency of less than 50%; in which
• b. the human was or is genotyped as being positive for the nucleotide sequence prior to step (a) or has been or will be phenotyped as positive for the TOI variant.

In einer zweiten KonfigurationIn a second configuration

Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst:

• a. die Verabreichung eines auf eine TOI-Variante in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden an den Menschen und die Behandlung oder Prävention dieser Krankheit bzw. dieses Leidens, wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz mit einer kumulativen humanen Allelhäufigkeit von weniger als 50% codiert wird und/oder wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird; wobei
• b. vor Schritt (a) der Ligand als zur Bindung der TOI-Variante fähig bestimmt wurde oder wird.

• a. administering to a human an anti-TOI ligand targeting a TOI variant in human and treating or preventing that disease, wherein the TOI in the human being is from a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50 % and / or wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence having a total typhoid frequency of less than 50%; in which
• b. before step (a) the ligand has been or is determined to be capable of binding to the TOI variant.

In einer dritten KonfigurationIn a third configuration

Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst:

• a. die Verabreichung eines auf eine TOI-Variante in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden an den Menschen und die Behandlung oder Prävention dieser Krankheit bzw. dieses Leidens, wobei es sich bei dem TOI in dem Menschen um eine Variante handelt, die von einer Nukleotidsequenz codiert wird, die eine kumulative humane Allelhäufigkeit von mehr als 50% hat und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von mehr als 50% hat; wobei
• b. der Mensch vor Schritt (a) als negativ für eine Nukleotidsequenzvariante mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat; oder als negativ für eine durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% codierte TOI-Variante phänotypisiert wurde und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat.

• a. administering to a human an anti-TOI ligand targeting a TOI variant in human and treating or preventing that disease, wherein the TOI in the human is a variant that is of a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of greater than 50% and / or having a total cumulative typhus frequency greater than 50%; in which
• b. the human has been or is genotyped prior to step (a) as negative for a nucleotide sequence variant having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or has a total tototenotic frequency of less than 50%; or has been phenotyped negative for a TOI variant encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or has a total tototenotic frequency of less than 50%.

In einer vierten KonfigurationIn a fourth configuration

Einen Antihuman-TOI-Liganden zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens in einem Menschen, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist und wobei das Genom des Menschen eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.An anti-human TOI ligand for use in a method of treating and / or preventing a TOI-mediated disease or a TOI-mediated disease in a human, wherein the TOI is present in humans as a distinct polymorphic variant, and wherein the genome of the Human has a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, the method comprising administering the ligand to a human.

In einer fünften KonfigurationIn a fifth configuration

Einen Liganden, der an ein humanes TOI bindet, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierten Aminosäuresequenz umfasst, zur Verwendung in einem Verfahren, welches den Schritt der Verwendung des Liganden zum Targeting des TOI in einem Menschen zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens umfasst, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.A ligand which binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, for use in a method comprising the step of Use of the ligand for targeting the TOI in a human for the treatment and / or prevention of a TOI-mediated disease or a TOI-mediated disease, which process comprises administering the ligand to a human.

In einer sechsten Konfiguration In a sixth configuration

Eine pharmazeutische Zusammensetzung oder ein pharmazeutisches Kit zur Behandlung oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens.A pharmaceutical composition or a pharmaceutical kit for treating or preventing a TOI-mediated disease or a TOI-mediated condition.

In einer siebten KonfigurationIn a seventh configuration

Ein Verfahren zur Herstellung einer Bindungsstelle für einen Antikörper gegen ein humanes TOI, wobei das Verfahren die Gewinnung einer Mehrzahl von Anti-TOI-Antikörperbindungsstellen, das Screening der Antikörperbindungsstellen auf Bindung an TOI umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, oder an ein Peptid davon umfassend eine Aminosäurevariation von der entsprechenden Sequenz codiert durch die TOI-codierende Nukleotidsequenz mit der höchsten kumulativen Humanallelhäufigkeit und/oder der höchsten Gesamthumangenotyphäufigkeit, und das Isolieren einer in dem Screening-Schritt bindenden Antikörperbindungsstelle umfasst.A method of producing a binding site for an antibody to a human TOI, the method comprising recovering a plurality of anti-TOI antibody binding sites, screening the antibody binding sites for binding to TOI comprising an amino acid sequence encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%; or a peptide thereof comprising an amino acid variation of the corresponding sequence encoded by the TOI coding nucleotide sequence having the highest cumulative human allele frequency and / or highest total typhus frequency, and isolating one in the Screening binding antibody binding site comprises.

In einer achten KonfigurationIn an eighth configuration

Ein Verfahren zur Herstellung eines Antikörpers gegen ein humanes TOI, wobei das Verfahren die Immunisierung eines nicht humanen Wirbeltieres (z. B. einer Maus oder Ratte) mit einem TOI umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, oder an ein Peptid davon, das eine Aminosäurevariation von der entsprechenden durch die TOI-codierende Nukleiotidsequenz mit der höchsten kumulativen Humanallelhäufigkeit und/oder der höchsten Gesamthumangenotyphäufigkeit codierten Sequenz umfasst, und das Isolieren eines Antikörpers, der an ein TOI bindet, das eine Aminosäuresequenz umfasst, die durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird, und gegebenenfalls die Herstellung eines TOI-bindenden Fragments oder Derivats des isolierten Antikörpers umfasst.A method for producing an antibody to a human TOI, which method comprises immunizing a non-human vertebrate (e.g., a mouse or rat) with a TOI comprising an amino acid sequence encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% or a total typhoid frequency less than 50%, or a peptide thereof comprising an amino acid variation from the corresponding sequence encoded by the TOI coding nucleotide sequence having the highest cumulative human allele frequency and / or highest total typhus frequency, and isolating an antibody which to a TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, and optionally, the production of a TOI binding fragment or derivative of the TOI includes isolated antibody.

In einer neunten KonfigurationIn a ninth configuration

Ein Kit zum TOI-Genotypisieren eines Menschen, wobei das Kit eine Nukleinsäure umfasst, die eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer TOI-Nukleotidsequenz hybridisiert, die so ausgewählt ist, dass sie eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, oder ein RNA-Transkript davon; und/oder die Nukleinsäure eine Nukleotidsequenz umfasst, die wenigstens 10 aufeinanderfolgende Nukleotide einer TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder eine Antisense-Sequenz davon umfasst.A kit for TOI genotyping of a human, the kit comprising a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that specifically hybridizes to a TOI nucleotide sequence selected to have a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total typhoid potential of less than 50%, or an RNA transcript thereof; and / or the nucleic acid comprises a nucleotide sequence comprising at least 10 consecutive nucleotides of a TOI nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or a total total sexuality of less than 50%, or an antisense sequence thereof.

In einer zehnten KonfigurationIn a tenth configuration

Die Verwendung eines Anti-TOI-Liganden, der ein humanes TOI bindet, umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens bei einem Menschen, dessen Genom eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst.The use of an anti-TOI ligand which binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% in the manufacture of a medicament Treatment and / or prevention of TOI-mediated disease or TOI-mediated disease in a human whose genome comprises a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%.

In einer elften KonfigurationIn an eleventh configuration

Die Verwendung eines Anti-TOI-Liganden, der an ein humanes TOI bindet, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, bei der Herstellung eines Medikaments zum Targeting des TOI in einem Menschen zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens.The use of an anti-TOI ligand which binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, in the manufacture of a A medicament for targeting the TOI in a human for the treatment and / or prevention of a TOI mediated disease or a TOI mediated condition.

In einer zwölften Konfiguration In a twelfth configuration

Ein Verfahren zum Targeting eines TOI zur Behandlung und/oder Prävention einer TOI-vermittelten Krankheit oder eines TOI-vermittelten Leidens bei einem Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden an einen Menschen umfasst, der eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst, wobei das Target ein TOI ist, das durch die Nukleotidsequenz codiert wird.A method of targeting a TOI for the treatment and / or prevention of TOI-mediated disease or TOI-mediated disease in a human, the method comprising administering to a human an anti-TOI ligand having a TOI nucleotide sequence with a TOI cumulative human allele frequency less than 50% and / or less than 50% total totalotic typhus, wherein the target is a TOI encoded by the nucleotide sequence.

In einer dreizehnten KonfigurationIn a thirteenth configuration

Ein Verfahren zum TOI-Genotypisieren einer Nukleinsäureprobe eines Menschen, wobei das Verfahren das Identifizieren des Vorhandenseins einer TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% in der Probe umfasst.A method of TOI genotyping a nucleic acid sample of a human, the method comprising identifying the presence of a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% in the sample.

In einer vierzehnten KonfigurationIn a fourteenth configuration

Ein Verfahren zum TOI-Typisieren einer Proteinprobe eines Menschen, wobei das Verfahren das Identifizieren des Vorhandenseins einer TOI-Aminosäuresequenz codiert durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% in der Probe umfasst.A method for TOI typing of a protein sample of a human, the method comprising identifying the presence of a TOI amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% in the sample includes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um ein humanes TOI ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus PCSK9, VEGF-A und IL6-Rezeptor. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um humanes IL4Ra, PDGF-B, PDGFR-B oder Ang-2.In one example, the TOI is a human TOI selected from the group consisting of PCSK9, VEGF-A and IL6 receptor. In one example, the TOI is human IL4Ra, PDGF-B, PDGFR-B or Ang-2.

Eine fünfzehnte Konfiguration stellt einen Liganden, ein Verfahren, die Anwendung, ein Kit oder eine Zusammensetzung der Erfindung bereit, wobei

• (i) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) Folgendes umfasst (a) eine variable Domäne, die von einer Nukleotidsequenz der humanen V-Region codiert wird, wobei sich die V-Nukleotidsequenz von einer Rekombination von humanen VH-, D- und JH-Gensegmenten oder humanen VL- und JL-Gensegmenten ableitet; oder (b) eine Domäne einer konstanten Region, die durch ein C-Region-Gensegment codiert wird; wobei ein erstes Gensegment der Gensegmente von (a) oder des C-Region-Gensegments von (b) einen ersten Einzelnukleotidpolymorphismus (Single Nucleotide Polymorphism, SNP) umfasst, der für einen ersten Aminosäurepolymorphismus codiert; und
• (ii) das Genom des Menschen den ersten SNP umfasst oder wobei der Mensch (a') eine variable Antikörperdomäne, die einen ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, oder (b') eine konstante Antikörperdomäne, die einen ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, exprimiert.

• (i) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises (a) a variable domain encoded by a human V region nucleotide sequence, wherein the V nucleotide sequence is dependent upon recombination of human V H , D and JH gene segments or human VL and JL gene segments; or (b) a domain of a constant region encoded by a C region gene segment; wherein a first gene segment of the gene segments of (a) or the C region gene segment of (b) comprises a first single nucleotide polymorphism (SNP) encoding a first amino acid polymorphism; and
• (ii) the human genome comprises the first SNP, or wherein human (a ') expresses a variable antibody domain comprising a first amino acid polymorphism, or (b') an antibody constant domain comprising a first amino acid polymorphism.

Eine sechzehnte Konfiguration stellt den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung bereit, wobei der Ligand einen Antikörper oder ein Fragment umfasst oder daraus besteht, der bzw. das die variable Domäne eines humanen Antikörpers umfasst, erhalten durch die Rekombination eines humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments, wenn es sich bei den variablen Domänen um VH-Domänen handelt); und wobei das Genom des Menschen das humane V-Gensegment umfasst und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Antikörperdomänen umfassen, die sich von der Rekombination des humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments) ableiten.A sixteenth configuration provides the ligand, method, use, kit, or composition of the invention, wherein the ligand comprises or consists of an antibody or a fragment comprising the variable domain of a human antibody, obtained by the recombination of a human V gene segment and a human J gene segment (and optionally a human D gene segment, when the variable domains are V H domains); and wherein the human genome comprises the human V gene segment and / or human expressing antibodies comprising antibody variable domains resulting from recombination of the human V gene segment and a human J gene segment (and optionally a human D gene segment) derived.

Eine sechzehnte Konfiguration stellt den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung bereit, wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen PCSK9-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Domäne einer humanen schweren Kette codiert durch eine erste Nukleotidsequenz einer konstanten Region umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren Kette umfasst, die identisch ist zu der ersten Nukleotidsequenz einer konstanten Region, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane konstante Domäne umfassen.A sixteenth configuration provides the ligand of the present invention, the method of the invention, the use of the invention, the kit of the invention, or the composition of the invention wherein the ligand (e.g., comprises an antibody or a fragment or a Fc-fused human PCSK9 receptor) consisting of) a human heavy chain constant domain encoded by a first nucleotide sequence of a constant region; and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a heavy chain constant region identical to the first nucleotide sequence of a constant region, and / or human expressing antibodies comprising the human constant domain.

Eine siebzehnte Konfiguration stellt den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung bereit, wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Region einer humanen schweren gamma-1-Kette, die ein Asp, welches der Position 204 von SEQ ID NO: 42 entspricht, oder ein Leu, welches der Position 206 von SEQ ID NO: 42 entspricht, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-1-Kette umfasst, die für ein solches Asp oder Leu codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-1-Regionen umfassen, die ein solches Asp oder Leu umfassen. A seventeenth configuration provides the ligand of the present invention, the method of the invention, the use of the invention, the kit of the invention, or the composition of the invention wherein the ligand (e.g., comprises or consists of an antibody or a fragment or a Fc-fused TOI receptor a constant region of a human heavy gamma-1 chain comprising an Asp corresponding to position 204 of SEQ ID NO: 42 or a Leu corresponding to position 206 of SEQ ID NO: 42, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a heavy gamma-1 heavy chain constant region encoding such an Asp or Leu, or human expressing antibodies comprising human gamma-1 constant regions comprising such an Asp or Leu ,

sEine achtzehnte Konfiguration stellt den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung bereit, wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Region einer humanen schweren gamma-2-Kette, die eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Pro, welches der Position 72 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Asn, welches der Position 75 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Phe, welches der Position 76 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Val, welches der Position 161 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und einem Ala, welches der Position 257 von SEQ ID NO: 44 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-2-Kette umfasst, die für eine solche ausgewählte Aminosäure codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-2-Regionen umfassen, die eine solche ausgewählte Aminosäure umfassen.An eighteenth configuration provides the ligand of the present invention, the method of the invention, the use of the invention, the kit of the invention, or the composition of the invention wherein the ligand (e.g., comprises or consists of an antibody or a fragment or a Fc-fused TOI receptor a constant region of a human heavy gamma-2 chain comprising an amino acid selected from the group consisting of a pro corresponding to position 72 of SEQ ID NO: 44, an Asn which is position 75 of SEQ ID NO: 44, a Phe corresponding to position 76 of SEQ ID NO: 44, a Val corresponding to position 161 of SEQ ID NO: 44, and an Ala corresponding to position 257 of SEQ ID NO: 44 , and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a heavy gamma 2 heavy chain constant region coding for such a selected amino acid, or the human expressing antibodies comprising human gamma 2 constant regions comprising such a selected amino acid.

Eine neunzehnte Konfiguration stellt den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung bereit, wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Region einer humanen leichten kappa-Kette, die ein Val, welches der Position 84 von SEQ ID NO: 50 entspricht, oder ein Cys, welches der Position 87 von SEQ ID NO: 50 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer leichten kappa-Kette umfasst, die für ein solches Val oder Cys codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante Regionen der leichten kappa-Kette umfassen, die ein solches Val oder Cys umfassen.A nineteenth configuration provides the ligand of the present invention, the method of the invention, the use of the invention, the kit of the invention, or the composition of the invention wherein the ligand (e.g., comprises or comprises an antibody or a fragment or a Fc-fused TOI receptor a constant region of a human kappa light chain comprising a Val corresponding to position 84 of SEQ ID NO: 50 or a Cys corresponding to position 87 of SEQ ID NO: 50, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a kappa light kappa constant region coding for such a Val or Cys or a human expressing antibodies comprising human kappa light chain constant regions comprising such a Val or Cys.

Eine zwanzigste Konfiguration stellt den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 79) bereit, wobei der Ligand einen Antikörper oder ein Fragment umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper bzw. das Fragment eine VH-Domäne umfasst, die sich aus der Rekombination eines humanen VH-Gensegments, eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Gensegments ableitet, wobei das VH-Gensegment ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus (i) IGHV1-18*01 und das Genom des Menschen eine humane IGHV1-18*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGHV1-18*01 ableiten; oder (ii) IGVH1-46*01 und das Genom des Menschen eine humane IGHV1-46*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich von der Rekombination von humanem IGHV1-46*01 ableiten.A twentieth configuration provides the ligand of the invention, the method of the invention, the use of the invention, the kit of the invention, or the composition of the invention (e.g., any of clauses 1-79) wherein the ligand comprises or consists of an antibody or fragment wherein the antibody or fragment comprises a VH domain derived from the recombination of a human VH gene segment, a human D gene segment and a human JH gene segment, wherein the V H gene segment is selected from the group consisting of (i) IGHV1-18 * 01 and the human genome comprises a human IGHV1-18 * 01 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGHV1-18 * 01; or (ii) IGVH1-46 * 01 and the human genome comprises a human IGHV1-46 * 01 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGHV1-46 * 01.

Eine einundzwanzigste Konfiguration stellt den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung bereit, wobei der Ligand einen Antikörper oder ein Fragment umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper bzw. das Fragment eine VL-Domäne umfasst, die sich aus der Rekombination eines humanen VL-Gensegments und eines humanen JL-Gensegments ableitet, wobei das VL-Gensegment ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus (i) IGKV4-1*01 und das Genom des Menschen eine humane IGKV4-1*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGKV4-1*01 ableiten; (ii) IGLV2-14*01 und das Genom des Menschen eine humane IGLV2-14*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGLV2-14*01 ableiten; oder (iii) IGKV1-13*02 und das Genom des Menschen eine humane IGKV1-13*02-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGKV1-13*02 ableiten.A twenty-first configuration provides the ligand of the invention, the method of the invention, the use of the invention, the kit of the invention, or the composition of the invention, wherein the ligand comprises or consists of an antibody or fragment, wherein the antibody or fragment comprises a VL domain derived from the recombination of a human VL gene segment and a human JL gene segment, wherein the VL gene segment is selected from the group consisting of (i) IGKV4-1 * 01 and the human genome is a human IGKV4-1 * 01 human nucleotide sequence or human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGKV4-1 * 01; (ii) IGLV2-14 * 01 and the human genome comprises a human IGLV2-14 * 01 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGLV2-14 * 01; or (iii) IGKV1-13 * 02 and the human genome comprises a human IGKV1-13 * 02 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGKV1-13 * 02.

Eine zweiundzwanzigste Konfiguration stellt ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer durch IL4Ra vermittelten Krankheit oder eines solchen Leidens bei einem dessen bedürftigen Menschen bereit, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Liganden (z. B. eines Antikörpers oder Antikörperfragments), der spezifisch an ein humanes IL4RA-Protein bindet, das eine aus der aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 bestehenden Gruppe ausgewählte Mutation umfasst, an den Menschen umfasst. Wie weiter unten erläutert finden sich diese Aminosäurevariationen in natürlich vorkommenden IL-4Ra-Varianten in Menschen, die sich in vielen Populationen finden. Dieser Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für ein IL4RA-Protein codiert, welches die aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 ausgewählte Mutation umfasst.A twenty-second configuration provides a method of treating or reducing the risk of an IL4Ra-mediated disease or condition in a person in need thereof The method provides for the administration of a ligand (eg, an antibody or antibody fragment) that specifically binds to a human IL4RA protein, one of the I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R, and S752A in SEQ ID NO: 67 includes existing group selected mutation, encompassing humans. As discussed below, these amino acid variations are found in naturally occurring IL-4Ra variants in humans found in many populations. This human comprises a nucleotide sequence encoding an IL4RA protein comprising the mutation selected from I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67.

Eine dreiundzwanzigste Konfiguration stellt einen Liganden (z. B. einen Antikörper oder ein Antikörperfragment) zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer durch IL4Ra vermittelten Krankheit oder eines solchen Leidens bei einem dessen bedürftigen Menschen bereit, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden, der spezifisch an ein humanes IL4RA-Protein bindet, das eine aus der aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 bestehenden Gruppe ausgewählte Mutation umfasst, an den Menschen umfasst. Dieser Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für ein IL4RA-Protein codiert, welches die aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 ausgewählte Mutation umfasst.A twenty-third configuration provides a ligand (e.g., an antibody or an antibody fragment) for treating or reducing the risk of IL4Ra-mediated disease or condition in a human in need thereof, the method comprising administering the ligand that specifically binds human IL4RA protein which comprises a mutation selected from the group consisting of I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67. This human comprises a nucleotide sequence encoding an IL4RA protein comprising the mutation selected from I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67.

Eine vierundzwanzigste Konfiguration stellt ein Verfahren zum Targeting von IL4Ra in einem Menschen bereit, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Liganden (z. B. eines Antikörpers oder Antikörperfragments), der spezifisch an ein humanes IL4RA-Protein bindet, das eine aus der aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 bestehenden Gruppe ausgewählte Mutation umfasst, an den Menschen umfasst. Dieser Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für ein IL4RA-Protein codiert, welches die aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 ausgewählte Mutation umfasst. Bei einem Beispiel leidet der Mensch an einer durch IL4Ra vermittelten Krankheit oder einem durch IL4Ra vermittelten Leiden, oder es besteht das Risiko einer solchen Krankheit oder eines solchen Leidens. Bei einem Beispiel wird mit dem Verfahren eine durch IL4Ra vermittelte Krankheit oder ein durch IL4Ra vermitteltes Leiden in dem Menschen behandelt oder das Risiko einer solchen Krankheit oder eines solchen Leidens reduziert.A twenty-fourth configuration provides a method for targeting IL4Ra in a human, the method comprising administering a ligand (eg, an antibody or antibody fragment) that specifically binds to a human IL4RA protein, one of the I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67 comprises a selected group of mutations present in humans. This human comprises a nucleotide sequence encoding an IL4RA protein comprising the mutation selected from I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67. In one example, a human being suffers from IL4Ra-mediated disease or IL4Ra-mediated disease, or is at risk for such disease or condition. In one example, the method treats or reduces the risk of IL4Ra-mediated disease or IL-mediated disease in the human.

Eine fünfundzwanzigste Konfiguration stellt einen Liganden (z. B. einen Antikörper oder ein Antikörperfragment) zum Targeting von IL4Ra in einem Menschen bereit, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst, wobei der Ligand spezifisch an ein humanes IL4RA-Protein bindet, das eine aus der aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 bestehenden Gruppe ausgewählte Mutation umfasst. Dieser Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für ein IL4RA-Protein codiert, welches die aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 ausgewählte Mutation umfasst. Bei einem Beispiel leidet der Mensch an einer durch IL4Ra vermittelten Krankheit oder einem durch IL4Ra vermittelten Leiden, oder es besteht das Risiko einer solchen Krankheit oder eines solchen Leidens. Bei einem Beispiel wird mit dem Verfahren eine durch IL4Ra vermittelte Krankheit oder ein durch IL4Ra vermitteltes Leiden in dem Menschen behandelt oder das Risiko einer solchen Krankheit oder eines solchen Leidens reduziert.A twenty-fifth configuration provides a ligand (e.g., an antibody or antibody fragment) for targeting IL4Ra in a human, the method comprising administering the ligand to a human, wherein the ligand specifically binds to a human IL4RA protein, which comprises a mutation selected from the group consisting of I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67. This human comprises a nucleotide sequence encoding an IL4RA protein comprising the mutation selected from I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67. In one example, a human being suffers from IL4Ra-mediated disease or IL4Ra-mediated disease, or is at risk for such disease or condition. In one example, the method treats or reduces the risk of IL4Ra-mediated disease or IL-mediated disease in the human.

Gemäß einer Ausführungsform einer der 21–25. Konfigurationen (i) umfasst der Antikörper bzw. das Fragment eine VH-Domäne, die durch die Rekombination eines humanen VH-Segments, eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Segments erhalten wird, wobei das humane VH-Segment für das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 codiert und wobei der Mensch ein VH-Gensegment umfasst, das für das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 codiert, oder der Mensch VH-Domänen exprimiert, die das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 umfassen; und wobei (ii) der Mensch eine Nukleotidsequenz umfasst, die für ein IL4RA-Protein codiert, das die aus der aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 bestehenden Gruppe ausgewählte Mutation umfasst.According to an embodiment of any one of 21-25. Configurations (i) the antibody or fragment comprises a VH domain obtained by recombining a human VH segment, a human D gene segment and a human JH segment, wherein the human VH segment for backbone 1 of SEQ ID NO: 40, and wherein the human comprises a VH gene segment coding for backbone 1 of SEQ ID NO: 40, or the human expressing VH domains comprising backbone 1 of SEQ ID NO: 40; and wherein (ii) the human comprises a nucleotide sequence encoding an IL4RA protein comprising the mutation selected from the group consisting of I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67.

Zusätzlich oder alternativ dazu umfasst gemäß einer Ausführungsform einer der 21–25. Konfigurationen, (i) der Antikörper bzw. das Fragment eine konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfasst, und wobei der Mensch ein IGHG4*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die konstanten Regionen der humanen schweren gamma-4-Kette umfassen, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfassen; und wobei (ii) der Mensch eine Nukleotidsequenz umfasst, die für das IL4RA-Protein codiert, das die Mutation ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67 umfasst.Additionally or alternatively, according to one embodiment, one of the 21-25. Configurations, (i) the antibody or fragment is a human gamma 4 heavy chain constant region comprising a leu in position 189, shown in SEQ ID NO: 73, or an arg in position 289, shown in SEQ ID NO : 73, and wherein the human comprises an IGHG4 * 01 human heavy chain constant region gene segment or human expresses antibodies comprising the human gamma 4 heavy chain constant regions comprising a leu in position 189, shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg in position 289 shown in SEQ ID NO: 73; and wherein (ii) the human comprises a nucleotide sequence encoding the IL4RA protein comprising the mutation selected from the group consisting of I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67.

In einer sechsundzwanzigsten Konfiguration, die hier als ein Verfahren zur Behandlung oder der Verminderung des Risikos einer durch Nav1.7 vermittelten Krankheit oder eines durch Nav1.7 vermittelten Leidens bei einem dessen bedürftigen Menschen beschrieben ist, umfasst das Verfahren die Verabreichung eines Liganden (z. B. eines Antikörpers oder Antikörperfragments), der spezifisch an ein humanes Nav1.7-Protein bindet, das eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst, an diesen Menchen; wobei (i) der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette umfasst, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfasst; und wobei der Mensch (i) ein IGHG4*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die konstanten Regionen der humanen schweren gamma-4-Kette umfassen, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfassen; und wobei (ii) der Mensch eine Nukleotidsequenz umfasst, die für das Nav1.7-Protein codiert, das die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G umfasst. Die Erfindung stellt auch einen entsprechenden Liganden, z. B. Antikörper oder Antikörperfragment, zur Verwendung in einem solchen Verfahren bereit.In a twenty-sixth configuration, here as a method of treating or reducing the risk of a Nav1.7-mediated disease or Nav1.7-mediated disease In the case of a person in need, the method comprises administering a ligand (eg, an antibody or antibody fragment) that specifically binds to a human Nav1.7 protein containing an amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R) , 328X (where X is an amino acid other than Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid, which is not E), 767X (where X is an amino acid other than I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X ( where X is an amino acid other than W), 1200L, 1235L, 1488X (where X is an ei an amino acid other than R), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than W) ), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G, to this group; wherein (i) the ligand comprises a human gamma 4 heavy chain constant region comprising a Leu at position 189 shown in SEQ ID NO: 73 or an Arg at position 289 shown at SEQ ID NO: 73 ; and wherein the human comprises (i) an IGHG4 * 01 human heavy chain constant region gene segment, or human expressing antibodies comprising the human gamma 4 heavy chain constant regions comprising a Leu at position 189 shown in U.S. Patent Nos. 4,199,431; SEQ ID NO: 73, or an Arg at position 289, shown in SEQ ID NO: 73; and wherein (ii) the human comprises a nucleotide sequence coding for the Nav1.7 protein comprising the amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid other than Y. ), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid other than E), 767X (where X is an amino acid which is not I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid other than W), 1200L , 1235L, 1488X (where X is an amino acid other than R), 1659X (where X is an amino acid other than khan delt), 1689X (where X is an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G. The invention also provides a corresponding ligand, e.g. Antibody or antibody fragment, for use in such a method.

Bei einigen Ausführungsformen ist die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P und 1449V; wobei es sich bei der Krankheit bzw. dem Leiden gegebenenfalls um eine Schmerzkrankheit oder ein Schmerzleiden handelt. Bei einigen Ausführungsformen ist die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I und 1627K; wobei es sich bei der Krankheit bzw. dem Leiden gegebenenfalls um eine Schmerzkrankheit oder ein Schmerzleiden handelt. Gemäß einigen Ausführungsformen ist die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt) and 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt); wobei es sich bei der Krankheit bzw. dem Leiden gegebenenfalls um eine Schmerzkrankheit oder ein Schmerzleiden handelt.In some embodiments, the amino acid is selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P and 1449V; where appropriate, the disease or condition is a pain disorder or a pain condition. In some embodiments, the amino acid is selected from the group consisting of 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I and 1627K; where appropriate, the disease or condition is a pain disorder or a pain condition. In some embodiments, the amino acid is selected from the group consisting of 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid other than Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid other than E), 767X (where X is an amino acid) which is not I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid other than W), 1200L, 1235L , 1488X (where X is an amino acid other than R), 1659X (where X is an amino acid other than K) and 1689X (where X is an amino acid in which it is not W); where appropriate, the disease or condition is a pain disorder or a pain condition.

Gemäß einigen Ausführungsformen handelt es sich bei dem von dem Menschen umfassten Gensegment der konstanten Region um ein Keimliniengensegment. Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst das Verfahren ferner vor der Verabreichung die Auswahl eines Menschen, der die Nukleotidsequenz von (ii) umfasst.According to some embodiments, the human region gene segment of the constant region is a germ line gene segment. In some embodiments, the method further comprises, prior to administration, selecting a human comprising the nucleotide sequence of (ii).

Gemäß einigen Ausführungsformen wurde festgestellt, dass der Mensch die Nukleotidsequenz umfasst, die für ein Nav1.7-Protein, das eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst und/oder ein Nav1.7-Protein, das die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst, codiert.According to some embodiments, it has been determined that the human comprises the nucleotide sequence necessary for a Nav1.7 protein which is an amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C , 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid other than Y), 395K, 459X (wherein X is an amino acid wherein it is not S), 693X (where X is an amino acid other than E), 767X (where X is an amino acid other than I), 830X (where X stands for an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid other than W), 1200L, 1235L, 1488X (wherein X is an amino acid wherein it is an amino acid not R), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L , 1002L, 1161W and 1919G and / or a Nav1.7 protein containing the amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 8 63P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (wherein X is an amino acid wherein it is not Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid other than E), 767X ( where X is an amino acid other than I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid which does not) is W), 1200L, 1235L, 1488X (where X is an amino acid other than R), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than W) comprising 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W, and 1919G.

Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst das Verfahren ferner den Schritt der Feststellung, dass der Mensch (a) die Nukleotidsequenz umfasst, die für ein Nav1.7-Protein, das eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst und/oder (b) ein Nav1.7-Protein, das die Mutation der Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst, codiert, wobei der Schitt der Feststellung gegebenenfalls vor dem Verabreichen des Antikörpers an den Menschen durchgeführt wird. Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst der Feststellungsschritt die Untersuchung einer biologischen Probe des Menschen auf eine Nukleotidsequenz, die für ein Nav1.7-Protein codiert, welches die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst. Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst die Untersuchung das Inkontaktbringen der biologischen Probe mit wenigstens einer Oligonukleotidsonde, welche eine Sequenz von wenigstens 10 aufeinanderfolgenden Nukleotiden einer Nukleotidsequenz umfasst, die für ein Nav1.7-Protein codiert, welches die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst oder eine Antisense-Sequenz der aufeinanderfolgenden Nukleotide umfasst, wobei die Sequenz aufeinanderfolgender Nukleotide eine Nukleotidsequenz umfasst, die für die Aminosäure codiert, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G, wobei, wenn wenigstens eine Nukleotidsequenz, die für das Nav1.7-Protein codiert, das die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst, vorhanden ist, ein Komplex gebildet wird; und Nachweis des Vorhandenseins oder der Abwesenheit des Komplexes, wobei der Nachweis des Vorhandenseins des Komplexes besagt, dass der Mensch das Nav1.7-Protein umfasst, das die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst. Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst die Untersuchung eine Nukleinsäureamplifikation und gegebenenfalls ein oder mehrere Verfahren ausgewählt aus Sequenzieren, Sequenzieren der nächsten Generation (Next Generation Sequencing), Nukleinsäurehybridisierung und allelspezifischer Amplifikation und/oder die Untersuchung erfolgt in einem Multiplex-Format. Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst die biologische Probe Serum, Blut, Kot, Gewebe, eine Zelle, Urin und/oder Speichel des Menschen.According to some embodiments, the method further comprises the step of determining that the human (a) comprises the nucleotide sequence coding for a Nav1.7 protein comprising an amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid which is other than Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid other than E) ), 767X (where X is an amino acid other than I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid) which is not W), 1200L, 1235L, 1488X (where X is an amino acid other than R) elt), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G and / or (b) a Nav1.7 protein comprising the amino acid mutation selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D , 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid other than Y), 395K , 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid other than E), 767X (where X is an amino acid in which it is not I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid other than W), 1200L, 1235L, 1488X (where X is an amino acid other than R), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid , which is not W), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W, and 1919G, where appropriate, the assay may be performed prior to administering the antibody to a human. According to some embodiments, the detecting step comprises examining a human biological sample for a nucleotide sequence encoding a Nav1.7 protein comprising the amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (wherein X is an amino acid wherein it is not Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid other than E), 767X ( where X is an amino acid other than I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid which does not) is W), 1200L, 1235L, 1488X (where X is an amino acid at which it is sic h is not R), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L , 1002L, 1161W and 1919G. According to some embodiments, the assay comprises contacting the biological sample with at least one oligonucleotide probe comprising a sequence of at least 10 consecutive nucleotides of a nucleotide sequence encoding a Nav1.7 protein comprising the amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S , 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid other than Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid) which is not E), 767X (where X is an amino acid other than I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid in which it is is not W), 1200L, 1235L, 1488X (where X is an amino acid other than R), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (wherein X represents an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G or comprises an antisense sequence of the consecutive nucleotides, wherein the Sequence of consecutive nucleotides comprises a nucleotide sequence encoding the amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V , 1464I, 1627K, 277X (where X is for an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid other than Y), 395K, 459X (wherein X is an amino acid other than R S), 693X (where X is an amino acid other than E), 767X (where X is an amino acid other than I), 830X (where X is an amino acid which is not R) 897X (where X is an amino acid other than W), 1200L, 1235L, 1488X (where X is an amino acid other than R 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G, wherein if at least one nucleotide sequence encoding the Nav1.7 protein is the amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S , 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid other than Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid) which is not E), 767X (where X is an amino acid other than I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X represents an amino acid other than W), 1200L, 1235L, 1488X (wherein X represents an amino acid other than R), 1659X (wherein X represents an amino acid wherein it is not K), 1689X (where X is an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W, and 1919G is formed; and detecting the presence or absence of the complex, wherein the detection of the presence of the complex indicates that the human comprises Nav1.7 protein containing the amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H , 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid which is not Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid other than E) , 767X (where X is an amino acid other than I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (wherein X is an amino acid wherein it is not W), 1200L, 1235L, 1488X (where X is an amino acid other than R) t), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G. According to some embodiments, the assay comprises a nucleic acid amplification and optionally one or more methods selected from sequencing, next generation sequencing, nucleic acid hybridization and allele specific amplification, and / or the assay is in a multiplex format. According to some embodiments, the biological sample comprises serum, blood, feces, tissue, a cell, urine and / or saliva of the human.

Gemäß einigen Ausführungsformen wurde festgestellt, dass der Mensch heterozygot für eine Nukleotidsequenz ist, die für ein Nav1.7-Protein, das eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst, codiert, wobei gegebenenfalls ferner festgestellt wurde, dass der Mensch die Nukleotidsequenz von SEQ ID NO: 76 umfasst oder festgestellt wurde, dass der Mensch homozygot für eine Nukleotidsequenz ist, die für das Nav1.7-Protein, das die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G umfasst, codiert.According to some embodiments, it has been found that the human is heterozygous for a nucleotide sequence specific for a Nav1.7 protein, which is an amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V , 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid which does not is Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid other than E), 767X (where X is for an amino acid other than I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid other than W) ), 1200L, 1235L, 1488X (where X is an amino acid other than R), 1659X (where X is an e is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G, optionally it has also been found that the human comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 76 or it has been found that the human is homozygous for a nucleotide sequence coding for the Nav1.7 protein containing the amino acid selected from the group consisting of 136I, 216S , 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid other than Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid) that is not E), 767X (where X is an amino acid other than I), 83 0X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid other than W), 1200L, 1235L, 1488X (wherein X is an amino acid which is not R), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than W), 422D , 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G.

Gemäß einigen Ausführungsformen wird oder wurde ferner festgestellt, dass der Mensch einer Schmerz- oder Juckreizbehandlung gegenüber im Wesentlichen resistent ist. Gemäß einigen Ausführungsformen wird oder wurde der Mensch gegen Schmerzen oder Juckreiz behandelt oder zeigt ein vermindertes Ansprechen auf eine Schmerz- oder Juckreizbehandlung. Gemäß einigen Ausführungsformen handelt es sich bei der Krankheit bzw. dem Leiden um eine Schmerz- oder Juckreizkrankheit bzw. ein Schmerz- oder Juckreizleiden. Gemäß einigen Ausführungsformen ist die Krankheit bzw. das Leiden eine Kanalopathie oder mit einer Kanalopathie assoziiert oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus primärer Erythermalgie (Primary Erythermalgia, PE), Krankheit mit extremen paroxysmalen Schmerzen (Paroxysmal Extreme Pain Disorder, PEPD) und kanalopathieassoziierter Schmerzunempfindlichkeit (Channelopathy-associated Insensitivity to Pain, CIP). Gemäß einigen Ausführungsformen wurde bei dem Menschen eine Schmerz- oder Juckreizkrankheit bzw. ein Schmerz- oder Juckreizleiden diagnostiziert.In accordance with some embodiments, it is further determined that the human being is substantially resistant to pain or itching treatment. According to some embodiments, the human being is or has been treated for pain or itching or has a decreased response to pain or itching treatment. According to some embodiments, the disease is a painful or pruritic disease or a pain or itching disorder. According to some embodiments, the disease is a channelopathy or associated with a channelopathy or selected from the group consisting of primary erythermalgia (PE), extreme paroxysmal pain (PEPD) and analgesia associated with analgesia ( Channelopathy-associated Insensitivity to Pain, CIP). In some embodiments, a human has been diagnosed as suffering from pain or itching.

Gemäß einigen Ausführungsformen wird durch das Ligandenfragment das Risiko einer Schmerz- oder Juckreizkrankheit bzw. eines Schmerz- oder Juckreizleidens bei dem Menschen behandelt oder reduziert.According to some embodiments, the ligand fragment is used to treat or reduce the risk of a painful or pruritic disease or a pain or itching disorder in humans.

Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst die Nukleotidsequenz einen oder mehrere SNPs ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus rs6746030, rs3750904, rs58022607, rs4369876, rs13402180 und rs12478318.According to some embodiments, the nucleotide sequence comprises one or more SNPs selected from the group consisting of rs6746030, rs3750904, rs58022607, rs4369876, rs13402180, and rs12478318.

In einer siebenundzwanzigsten Konfiguration ist hier ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer durch VEGF-A vermittelten Krankheit oder eines durch VEGF-A vermittelten Leidens bei einem Menschen beschrieben, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-VEGF-A-Liganden (z. B. einer Anti-VEGF-A-Falle, eines Anti-VEGF-A-Antikörpers oder eines Anti-VEGF-A-Antikörperfragments), der spezifisch an einen humanen VEGF-A bindet, der durch eine VEGF-A-Nukleotidsequenz exprimiert wird, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus rs699947, rs833061, rs2010963, rs3025039, rs699946, rs2146323, rs1413711, rs833068, rs833069, rs3025000 und rs1570360, an den Menschen umfasst, wobei der Mensch eine VEGF-A-Nukleotidsequenz umfasst, die den ausgewählten SNP umfasst. Die Erfindung stellt auch einen entsprechenden Liganden, z. B. Antikörper oder Antikörperfragment, zur Verwendung in einem solchen Verfahren bereit.In a twenty-seventh configuration herein is described a method of treating or reducing the risk of VEGF-A mediated disease or VEGF-A mediated disease in a human, the method comprising administration of an anti-VEGF A ligand (e.g. An anti-VEGF-A trap, an anti-VEGF-A antibody or an anti-VEGF-A antibody fragment) that specifically binds to a human VEGF-A expressed by a VEGF-A nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of rs699947, rs833061, rs2010963, rs3025039, rs699946, rs2146323, rs1413711, rs833068, rs833069, rs3025000 and rs1570360, in human, wherein the human comprises a VEGF-A nucleotide sequence comprising the human includes selected SNP. The invention also provides a corresponding ligand, e.g. Antibody or antibody fragment, for use in such a method.

In einer achtundzwanzigsten Konfiguration ist hier ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer durch VEGF-A vermittelten Krankheit oder eines durch VEGF-A vermittelten Leidens bei einem Menschen beschrieben, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-VEGF-A-Liganden (z. B. einer Anti-VEGF-A-Falle, eines Anti-VEGF-A-Antikörpers oder eines Anti-VEGF-A-Antikörperfragments), der spezifisch an einen humanen VEGF-A bindet, an den Menschen umfasst, wobei der Mensch (i) eine ARMS2-Nukleotidsequenz, die ein G in der Position des SNP rs10490924 umfasst; (ii) eine CFH-Nukleotidsequenz, die ein T in der Position des SNP rs1061170 oder ein T in der Position des rs3766404 umfasst; oder (iii) eine VEGFR2-Nukleotidsequenz, die SNP rs4576072 oder rs6828477 umfasst, wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-1-Kette umfasst, die eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Asp entsprechend Position 204 von SEQ ID NO: 42 und einem Leu entsprechend Position 206 von SEQ ID NO: 42 umfasst, und wobei der Mensch ein IGHG1*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-1-Kette umfassen, die die ausgewählte Aminosäure umfassen. Diese SNPs sind mit verbesserten Reaktionen nach einer Anti-VEGF-A-Behandlung einer Augenkrankheit bzw. eines Augenleidens assoziiert. Die Erfindung stellt auch einen entsprechenden Liganden, z. B. Antikörper oder Antikörperfragment, zur Verwendung in einem solchen Verfahren bereit.In a twenty-eighth configuration, there is described herein a method of treating or reducing the risk of VEGF-A mediated disease or VEGF-A mediated disease in a human, the method comprising administration of an anti-VEGF A ligand (e.g. An anti-VEGF-A trap, an anti-VEGF-A antibody or an anti-VEGF-A antibody fragment) that binds specifically to a human VEGF-A to human, wherein human (i ) an ARMS2 nucleotide sequence comprising a G in the position of SNP rs10490924; (ii) a CFH nucleotide sequence comprising a T in the position of the SNP rs1061170 or a T in the position of the rs3766404; or (iii) a VEGFR2 nucleotide sequence comprising SNP rs4576072 or rs6828477, said ligand comprising a human gamma-1 heavy chain constant region comprising an amino acid selected from the group consisting of an Asp corresponding to position 204 of SEQ ID NO : 42 and a leu corresponding to position 206 of SEQ ID NO: 42, and wherein the human comprises a human heavy chain constant region IGHG1 * 01 gene segment or human expresses antibodies that are human gamma 1 constant region Include chain comprising the selected amino acid. These SNPs are associated with improved responses following anti-VEGF-A treatment of ocular disease or disease. The invention also provides a corresponding ligand, e.g. Antibody or antibody fragment, for use in such a method.

In einer neunundzwanzigsten Konfiguration ist hier ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer durch VEGF-A vermittelten Krankheit oder eines durch VEGF-A vermittelten Leidens bei einem Menschen beschrieben, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-Human-VEGF-A-Liganden an einen Menschen umfasst, wobei der Mensch (i) eine PDGF-B-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus rs142404523 (d. h. ein C entsprechend Position –776) und ein C in der Position von rs1800818 (d. h. ein C entsprechend Position –735); oder (ii) eine PDGFR-B-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus rs246395 (d. h. ein G entsprechend Position 2601) und rs74943037 (d. h. ein T entsprechend Position 1391) umfasst. Die Erfindung stellt auch einen entsprechenden Liganden, z. B. Antikörper oder Antikörperfragment, zur Verwendung in einem solchen Verfahren bereit.In a twenty-ninth configuration herein is described a method for treating or reducing the risk of VEGF-A mediated disease or VEGF-A mediated disease in a human, the method comprising administration of an anti-human VEGF-A ligand a human, the human being (i) having a PDGF-B nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of rs142404523 (ie a C corresponding to position -776) and a C in the position of rs1800818 (ie a C corresponding to position -735); or (ii) a PDGFR-B nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of rs246395 (i.e., a G corresponding to position 2601) and rs74943037 (i.e., a T corresponding to position 1391). The invention also provides a corresponding ligand, e.g. Antibody or antibody fragment, for use in such a method.

Bei einem Beispiel einer beliebigen der 27–29. Konfigurationen umfasst der Ligand die konstante Region eines Antikörpers (z. B. die Fc-Region eines Antikörpers). Gegebenenfalls umfasst der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-1-Kette, die eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Asp entsprechend Position 204 von SEQ ID NO: 42 und einem Leu entsprechend Position 206 von SEQ ID NO: 42 umfasst, und wobei der Mensch ein IGHG1*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-1-Kette umfassen, die die ausgewählte Aminosäure umfassen. In an example of any of the 27-29. Configurations, the ligand comprises the constant region of an antibody (eg, the Fc region of an antibody). Optionally, the ligand comprises a human gamma-1 heavy chain constant region comprising an amino acid selected from the group consisting of an Asp corresponding to position 204 of SEQ ID NO: 42 and a Leu corresponding to position 206 of SEQ ID NO: 42, and wherein the human comprises an IGHG1 * 01 human heavy chain constant region gene segment, or human expresses antibodies comprising human gamma-1 heavy chain constant regions comprising the selected amino acid.

Bei einem Beispiel einer beliebigen der 27–29. Konfigurationen handelt es sich bei der Krankheit bzw. dem Leiden um ein Augenleiden oder Krebs, oder Angiogenese oder Neovaskularisierung.In an example of any of the 27-29. Configurations, the disease or condition is an ocular disease or cancer, or angiogenesis or neovascularization.

Bei einem Beispiel einer beliebigen der 27–29. Konfigurationen umfasst das Verfahren ferner das Antagonisieren von PDGF-B bei dem Menschen.In an example of any of the 27-29. In configurations, the method further comprises antagonizing PDGF-B in humans.

Bei einem Beispiel einer beliebigen der 27–29. Konfigurationen umfasst das Verfahren ferner das Antagonisieren von Angiopoietin-2 (Ang2) bei dem Menschen.In an example of any of the 27-29. In configurations, the method further comprises antagonizing angiopoietin-2 (Ang2) in humans.

In einer dreißigsten Konfiguration stellt die Erfindung Folgendes bereit:
Ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer durch PD-L1 vermittelten Krankheit oder eines durch PD-L1 vermittelten Leidens bei einem Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines spezifisch an einen humanen PD-L1, der durch eine PD-L1-Nukleotidsequenz exprimiert wird, die eine Variation ausgewählt aus den in Tabelle 21 aufgeführten Variationen umfasst, bindenden Anti-PD-L1-Liganden (z. B. einer Anti-PD-L1-Falle, eines Anti-PD-L1-Antikörpers oder eines Anti-PD-L1-Antikörperfragments) an den Menschen umfasst.In a thirtieth configuration, the invention provides:
A method for treating or reducing the risk of PD-L1 mediated disease or PD-L1 mediated disease in a human, the method comprising administering a specific to a human PD-L1 expressed by a PD-L1 nucleotide sequence containing a variation selected from the variations listed in Table 21, binding anti-PD-L1 ligands (e.g., an anti-PD-L1 trap, an anti-PD-L1 antibody or an anti-PD -L1 antibody fragment) in humans.

Zum Beispiel wird ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer durch PD-L1 vermittelten Krankheit oder eines durch PD-L1 vermittelten Leidens bei einem Menschen bereitgestellt, wobei das Verfahren die Verabreichung eines spezifisch an einen humanen PD-L1, der durch eine PD-L1-Nukleotidsequenz exprimiert wird, die eine Variation ausgewählt aus den in Tabelle 21 aufgeführten Variationen umfasst, bindenden Anti-PD-L1-Liganden (z. B. einer Anti-PD-L1-Falle, eines Anti-PD-L1-Antikörpers oder eines Anti-PD-L1-Antikörperfragments) an den Menschen umfasst, wobei der Mensch eine PD-L1-Nukleotidsequenz umfasst, die die ausgewählte Variation umfasst.For example, a method is provided for treating or reducing the risk of PD-L1 mediated disease or PD-L1 mediated disease in a human, the process comprising administering a specific to a human PD-L1 expressed by a PD. L1 nucleotide sequence comprising a variation selected from the variations listed in Table 21, binding anti-PD-L1 ligands (e.g., an anti-PD-L1 trap, an anti-PD-L1 antibody, or an anti-PD-L1 antibody fragment) to a human, wherein the human comprises a PD-L1 nucleotide sequence comprising the selected variation.

Zum Beispiel wird ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos von Krebs bei einem Menschen bereitgestellt, wobei das Verfahren die Verabreichung eines spezifisch an einen humanen PD-L1, der durch eine PD-L1-Nukleotidsequenz exprimiert wird, die eine Variation ausgewählt aus den in Tabelle 21 aufgeführten Variationen umfasst, bindenden Anti-PD-L1-Liganden (z. B. einer Anti-PD-L1-Falle, eines Anti-PD-L1-Antikörpers oder eines Anti-PD-L1-Antikörperfragments) an den Menschen umfasst, wobei der Mensch eine PD-L1-Nukleotidsequenz umfasst, die die ausgewählte Variation umfasst.For example, there is provided a method of treating or reducing the risk of cancer in a human, the method comprising administering a specific to a human PD-L1 expressed by a PD-L1 nucleotide sequence comprising a variation selected from those in U.S. Pat Table 21 includes binding anti-PD-L1 ligands (e.g., an anti-PD-L1 trap, an anti-PD-L1 antibody, or an anti-PD-L1 antibody fragment) to humans wherein the human comprises a PD-L1 nucleotide sequence comprising the selected variation.

Zum Beispiel wird ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer Autoimmunkrankheit oder eines Autoimmunleidens bei einem Menschen bereitgestellt, wobei das Verfahren die Verabreichung eines spezifisch an einen humanen PD-L1, der durch eine PD-L1-Nukleotidsequenz exprimiert wird, die eine Variation ausgewählt aus den in Tabelle 21 aufgeführten Variationen umfasst, bindenden Anti-PD-L1-Liganden (z. B. einer Anti-PD-L1-Falle, eines Anti-PD-L1-Antikörpers oder eines Anti-PD-L1-Antikörperfragments) an den Menschen umfasst, wobei der Mensch eine PD-L1-Nukleotidsequenz umfasst, die die ausgewählte Variation umfasst.For example, there is provided a method of treating or reducing the risk of autoimmune disease or autoimmune disease in a human, the method comprising administering a specific to a human PD-L1 expressed by a PD-L1 nucleotide sequence that selects a variation from the variations listed in Table 21, binding anti-PD-L1 ligands (e.g., an anti-PD-L1 trap, an anti-PD-L1 antibody, or an anti-PD-L1 antibody fragment) human, wherein the human comprises a PD-L1 nucleotide sequence comprising the selected variation.

Zum Beispiel wird ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer entzündlichen Krankheit oder eines entzündlichen Leidens bei einem Menschen bereitgestellt, wobei das Verfahren die Verabreichung eines spezifisch an einen humanen PD-L1, der durch eine PD-L1-Nukleotidsequenz exprimiert wird, die eine Variation ausgewählt aus den in Tabelle 21 aufgeführten Variationen umfasst, bindenden Anti-PD-L1-Liganden (z. B. einer Anti-PD-L1-Falle, eines Anti-PD-L1-Antikörpers oder eines Anti-PD-L1-Antikörperfragments) an den Menschen umfasst, wobei der Mensch eine PD-L1-Nukleotidsequenz umfasst, die die ausgewählte Variation umfasst.For example, there is provided a method of treating or reducing the risk of an inflammatory disease or inflammatory condition in a human, the method comprising administering a specific to a human PD-L1 expressed by a PD-L1 nucleotide sequence, the one Variation selected from the variations listed in Table 21 comprises binding anti-PD-L1 ligands (e.g., an anti-PD-L1 trap, an anti-PD-L1 antibody, or an anti-PD-L1 antibody fragment ), wherein the human comprises a PD-L1 nucleotide sequence comprising the selected variation.

In einer einunddreißigsten Konfiguration stellt die Erfindung einen Liganden gegen humanen PD-L1-Liganden (z. B. einen Antikörper, ein Antikörperfragment oder eine Falle für humanen PD-L1) zur Verwendung in einem Verfahren der dreißigsten Konfiguration bereit.In a thirty-first configuration, the invention provides a ligand against human PD-L1 ligands (e.g., an antibody, an antibody fragment, or a human PD-L1 trap) for use in a thirtieth-configuration method.

In einer zweiunddreißigsten Konfiguration stellt die Erfindung Folgendes bereit: Ein Verfahren zur Krebsimmuntherapie bei einem Menschen durch Targeting eines Immunzellen-TOI (z. B. PD-1) in dem Menschen, wobei das TOI in Menschen als eine Mehrzahl von Varianten vorliegt, die sich in einem oder mehreren Aminosäurepolymorphismen unterscheiden, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Liganden (z. B. eines Antikörpers oder Antikörperfragments) an den Menschen umfasst, wobei der Ligand erste und zweite Proteindomänen umfasst, wobei die erste Domäne spezifisch eine TOI-Variante bindet, die einen ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, wobei die zweite Domäne einen zweiten Polymorphismus umfasst, und wobei der Mensch (i) ein TOI, das den ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst; und (ii) Proteindomänen, die den zweiten Polymorphismus umfassen, exprimiert, wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette umfasst, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfasst und wobei der Mensch ein IGHG4*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-4-Kette umfassen, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfassen; und wobei die zweite Domäne von der konstanten Region der schweren gamma-4-Kette des Liganden umfasst ist. In a thirty-second configuration, the invention provides: A method of human cancer immunotherapy by targeting an immune cell TOI (eg, PD-1) in humans, wherein the TOI is present in humans as a plurality of variants in one or more amino acid polymorphisms, said method comprising administering to a human a ligand (eg, an antibody or antibody fragment), said ligand comprising first and second protein domains, said first domain specifically binding a TOI variant a first amino acid polymorphism, wherein the second domain comprises a second polymorphism, and wherein the human is (i) a TOI comprising the first amino acid polymorphism; and (ii) protein domains comprising the second polymorphism, said ligand comprising a human gamma 4 heavy chain constant region comprising a leu in position 189, shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg in position 289, shown in SEQ ID NO: 73, and wherein the human comprises an IGHG4 * 01 human heavy chain constant region gene segment, or the human expresses antibodies that comprise human gamma 4 heavy chain constant regions Leu in position 189, shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg in position 289, shown in SEQ ID NO: 73; and wherein the second domain is comprised of the gamma 4 heavy chain constant region of the ligand.

Diese Konfiguration stellt auch die folgenden Aspekte bereit:
Ein Verfahren zur Krebsimmuntherapie bei einem Menschen durch Targeting von PD-1 in dem Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Antikörpers oder Antikörperfragments an den Menschen umfasst, wobei der Antikörper bzw. das Antikörperfragment spezifisch einen PD-1 bindet, der durch eine PD-1-Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den in Tabelle 23 angeführten Variationen umfasst, wobei der Antikörper bzw. das Antikörperfragment eine konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette umfasst, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfasst und wobei der Mensch (i) ein IGHG4*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-4-Kette umfassen, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfassen; und (ii) eine PD-1-Nukleotidsequenz umfasst, die die ausgewählte SNP umfasst.This configuration also provides the following aspects:
A method for cancer immunotherapy in a human by targeting PD-1 in a human, the method comprising administering to the human an antibody or antibody fragment, wherein the antibody or antibody fragment specifically binds a PD-1 which is secreted by a PD 1 nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the variations listed in Table 23, wherein the antibody or antibody fragment comprises a human gamma 4 heavy chain constant region comprising a leu in position 189, shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg at position 289 shown in SEQ ID NO: 73, and wherein the human (i) comprises a human heavy chain constant region IGHG4 * 01 gene segment or human expresses antibodies comprising human Gamma 4 heavy chain constant regions comprising a Leu at position 189 shown in SEQ ID NO: 73 or an Arg at position 289 shown in SEQ ID NO : 73, include; and (ii) a PD-1 nucleotide sequence comprising the selected SNP.

Ein Verfahren zur Krebsimmuntherapie bei einem Menschen durch Targeting von PD-1 in dem Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Antikörpers oder Antikörperfragments an den Menschen umfasst, wobei der Antikörper bzw. das Antikörperfragment spezifisch einen PD-1 bindet, der durch eine PD-1-Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP (erster Polymorphismus) ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den in Tabelle 23 (z. B. ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus rs36084323, rs10204225, rs11568821, rs2227981 und rs2227982) angeführten Variationen umfasst, wobei der Antikörper bzw. das Antikörperfragment eine konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette umfasst, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfasst und wobei der Mensch (i) ein IGHG4*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-4-Kette umfassen, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfassen; und (ii) eine PD-1-Nukleotidsequenz umfasst, die die ausgewählte SNP umfasst.A method for cancer immunotherapy in a human by targeting PD-1 in a human, the method comprising administering to the human an antibody or antibody fragment, wherein the antibody or antibody fragment specifically binds a PD-1 which is secreted by a PD 1 nucleotide sequence comprising an SNP (first polymorphism) selected from the group consisting of the variations listed in Table 23 (eg selected from the group consisting of rs36084323, rs10204225, rs11568821, rs2227981 and rs2227982), wherein the The antibody or antibody fragment comprises a human heavy gamma 4 chain constant region comprising a Leu at position 189 shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg at position 289 shown at SEQ ID NO: 73, and wherein the human (i) comprises an IGHG4 * 01 human heavy chain constant region gene segment, or human expresses antibodies that express human constant regions gamma 4 chain comprising a Leu at position 189 shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg at position 289 shown in SEQ ID NO: 73; and (ii) a PD-1 nucleotide sequence comprising the selected SNP.

Ein Verfahren zur Behandlung von Krebs bei einem Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Antikörpers oder Antikörperfragments an den Menschen umfasst, wobei der Antikörper bzw. das Antikörperfragment die Bindung von PD-L1 oder PD-L2 an einen PD-1 inhibiert, der einen ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, wobei der Antikörper bzw. das Antikörperfragment eine konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette umfasst, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfasst und wobei der Mensch (i) ein IGHG4*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-4-Kette umfassen, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfassen; und (ii) eine PD-1-Nukleotidsequenz, die für ein PD-1 codiert, das den ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, oder der Mensch einen PD-1 exprimiert, der den ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst.A method of treating cancer in a human, the method comprising administering an antibody or antibody fragment to a human, wherein the antibody or antibody fragment inhibits the binding of PD-L1 or PD-L2 to a PD-1, which comprises a human first amino acid polymorphism, wherein the antibody or antibody fragment comprises a human gamma 4 heavy chain constant region comprising a leu in position 189, shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg in position 289, shown in SEQ ID NO: 73, and wherein the human comprises (i) an IGHG4 * 01 human heavy chain constant region gene segment, or the human expressing antibodies comprising human gamma 4 heavy chain constant regions containing a leu in position 189, shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg in position 289, shown in SEQ ID NO: 73; and (ii) a PD-1 nucleotide sequence encoding a PD-1 comprising the first amino acid polymorphism or the human expressing a PD-1 comprising the first amino acid polymorphism.

Bei einer Alternative stellt die Erfindung anstelle von ”einem Verfahren zur Krebsimmuntherapie” oder ”einem Verfahren zur Behandlung von Krebs” statt dessen ”Ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer Autoimmunkrankheit oder eines Autoimmunleidens” oder ”Ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer entzündlichen Krankheit oder eines entzündlichen Leidens” bereit und der TOI-Polymorphismus ist mit einer Autoimmunkrankheit oder einem Autoimmunleiden bzw. einer entzündlichen Krankheit bzw. einem entzündlichen Leiden assoziiert.Alternatively, instead of "a method of cancer immunotherapy" or "a method of treating cancer", the invention provides "a method of treating or reducing the risk of an autoimmune disease or autoimmune disease" or "a method of treating or reducing the risk an inflammatory disease or inflammatory condition "and the TOI polymorphism is associated with an autoimmune disease or an autoimmune disease or an inflammatory disease.

Die Erfindung stellt außerdem einen Liganden (z. B. eine Falle, einen Antikörper oder ein Antikörperfragment) zur Verwendung in einem der Verfahren bereit. The invention also provides a ligand (e.g., a trap, antibody, or antibody fragment) for use in either method.

In einer dreiunddreißigsten Konfiguration stellt die Erfindung Folgendes bereit: Ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer Krankheit oder eines Leidens (z. B. Anämie) bei einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein TOI vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als eine Mehrzahl von Varianten vorliegt, die sich in einem oder mehreren Aminosäurepolymorphismen unterscheiden, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Liganden (z. B. eines Antikörpers oder Antikörperfragments) an den Menschen umfasst, wobei der Ligand erste und zweite Proteindomänen umfasst, wobei die erste Domäne spezifisch eine TOI-Variante bindet, die einen ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, wobei die zweite Domäne einen zweiten Polymorphismus umfasst, und wobei der Mensch (i) ein TOI, das den ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst; und (ii) Proteindomänen, die den zweiten Polymorphismus umfassen, exprimiert, wobei der Ligand gegebenenfalls eine konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette umfasst, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfasst und wobei der Mensch ein IGHG4*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-4-Kette umfassen, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfassen; und wobei die zweite Domäne von der konstanten Region der schweren gamma-4-Kette des Liganden umfasst ist, wobei das TOI aus der humanen Hämojuvelin-BMP6-TMPRSS6-Hepcidin-Ferroportin-Transferrin-Achse ausgewählt ist.In a thirty-third configuration, the invention provides: A method of treating or reducing the risk of a disease or ailment (e.g., anemia) in a human, wherein the disease is mediated by a TOI, wherein the TOI in humans is a plurality of variants that differ in one or more amino acid polymorphisms, the method comprising administering to a human a ligand (eg, an antibody or antibody fragment), wherein the ligand comprises first and second protein domains, wherein the first domain specifically binds a TOI variant comprising a first amino acid polymorphism, wherein the second domain comprises a second polymorphism, and wherein the human is (i) a TOI comprising the first amino acid polymorphism; and (ii) protein domains comprising said second polymorphism, said ligand optionally comprising a human gamma 4 heavy chain constant region comprising a Leu at position 189 shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg in Position 289, shown in SEQ ID NO: 73, and wherein the human comprises an IGHG4 * 01 human heavy chain constant region gene segment or the human expresses antibodies comprising human gamma 4 heavy chain constant regions a leu in position 189, shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg in position 289, shown in SEQ ID NO: 73; and wherein the second domain is comprised of the gamma 4 heavy chain constant region of the ligand, wherein the TOI is selected from the human hemojuvelin BMP6 TMPRSS6 hepcidin-ferroportin-transferrin axis.

In einer vierunddreißigsten Konfiguration stellt die Erfindung Folgendes bereit:
Ein Verfahren zur Behandlung oder Reduzierung des Risikos einer durch IL6R vermittelten Krankheit oder eines durch IL6R vermittelten Leidens bei einem dessen bedürftigen Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Liganden (z. B. eines Antikörpers oder Antikörperfragments), der spezifisch ein IL6R-Protein bindet, dass eine Mutation Asp358Ala oder Val385Ile in SEQ ID NO: 78 umfasst, an den Menschen umfasst;
wobei der Mensch eine Nukleotidsequenz umfasst, die für das IL6R-Protein codiert, das die Asp358Ala oder Val385Ile in SEQ ID NO: 78 umfasst. Bei verschiedenen Ausführungsformen dieser Konfiguration sind Ligand und Mensch, was konstante und/oder variable Regionen betrifft, aufeinander abgestimmt. Diese Konfiguration der Erfindung stellt außerdem die entsprechenden Liganden, Anwendungen und Kits bereit.In a thirty-fourth configuration, the invention provides:
A method of treating or reducing the risk of IL6R-mediated disease or IL6R mediated disease in a human in need thereof, the method comprising administration of a ligand (eg, an antibody or antibody fragment) that specifically binds an IL6R protein in that a mutation comprises Asp358Ala or Val385Ile in SEQ ID NO: 78, in humans;
wherein the human comprises a nucleotide sequence encoding the IL6R protein comprising the Asp358Ala or Val385Ile in SEQ ID NO: 78. In various embodiments of this configuration, ligand and human are matched as far as constant and / or variable regions are concerned. This configuration of the invention also provides the corresponding ligands, applications, and kits.

In einer fünfunddreißigsten Konfiguration stellt die Erfindung Folgendes bereit: Einen gegen das Target of Interest (TOI) gerichteten Liganden zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens bei einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch das TOI vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen in verschiedenen polymorphen Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst, wobei der Ligand spezifisch an eine TOI-Variante bindet, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP (ersten SNP) mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst; wobei der Mensch eine TOI-codierende Nukleotidsequenz umfasst, die die SNP umfasst.In a thirty-fifth configuration, the invention provides: a target of interest (TOI) directed ligand for use in a method of treating or preventing a disease or condition in a human, the disease or condition mediated by the TOI wherein the TOI is present in humans in various polymorphic variants, the method comprising administering the ligand to a human, the ligand specifically binding to a TOI variant encoded by a nucleotide sequence encoding an SNP (first SNP ) having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or having a total cumulative genotype of less than 50%; wherein the human comprises a TOI-encoding nucleotide sequence comprising the SNP.

Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens bei einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen in verschiedenen polymorphen Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden an den Menschen umfasst, wobei der Ligand spezifisch an eine TOI-Variante bindet, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP (ersten SNP) mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst; wobei der Mensch eine TOI-codierende Nukleotidsequenz umfasst, die die SNP umfasst.A method of treating or preventing a disease or condition in a human, the disease or condition being mediated by a target of interest (TOI), wherein the TOI is present in humans in various polymorphic variants, the method comprising administration an anti-TOI ligand to a human, wherein the ligand specifically binds to a TOI variant encoded by a nucleotide sequence comprising an SNP (first SNP) having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or with a Total typhus frequency less than 50%; wherein the human comprises a TOI-encoding nucleotide sequence comprising the SNP.

Die Verwendung eines Anti-Target-of-Interest-(TOI)-Liganden, der spezifisch an eine humane TOI-Variante bindet, welches eine durch eine einen SNP (ersten SNP) umfassende TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in einem Verfahren zum Targeting des TOI in einem Menschen zur Behandlung oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorkommt und der Mensch eine TOI-codierende Nukleotidsequenz umfasst, die den SNP umfasst.The use of an anti-target-of-interest (TOI) ligand that specifically binds to a human TOI variant that has a TOI nucleotide sequence comprising a SNP (first SNP) with a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or amino acid sequence encoded with a total typhoid frequency less than 50%, in the manufacture of a medicament for use in a method of targeting the TOI in a human for treating or preventing a TOI-mediated disease or a TOI mediated condition, wherein the TOI occurs in humans as distinct polymorphic variants and the human comprises a TOI-encoding nucleotide sequence comprising the SNP.

Bei einem Beispiel des Liganden, des Verfahrens oder der Anwendung umfasst der Ligand eine konstante Region der schweren gamma-1-, -2-, -3- oder -4-Kette, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen zweiten SNP umfasst, und wobei der Mensch eine konstante Region der schweren gamma-1-, -2-, -3- bzw. -4-Kette umfasst, die den zweiten SNP umfasst. In one example of the ligand, method, or application, the ligand comprises a heavy gamma 1, 2, 3, or 4 heavy chain constant region encoded by a nucleotide sequence comprising a second SNP, and wherein the human comprises a gamma-1, -2, -3, or -4 heavy chain constant region comprising the second SNP.

Bei einem Beispiel des Liganden, des Verfahrens oder der Anwendung umfasst der Ligand eine variable Domäne eines humanen Antikörpers, erhalten durch die Rekombination eines humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments, wenn es sich bei den variablen Domänen um VH-Domänen handelt); und wobei das Genom des Menschen das humane V-Gensegment umfasst und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Antikörperdomänen umfassen, die sich von der Rekombination des humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments) ableiten. Die Erfindung stellt ferner die Protokolle, Liganden und Kits bereit. Beispiele einer beliebigen Konfiguration oder Beispiele, die ein beliebiges TOI betreffen, sind wie folgt:

• (i) wobei der Ligand eine VH-Domäne umfasst, erhalten durch die Rekombination eines humanen VH-Segments (z. B. humanen VH3-23*04), eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Segments, wobei das humane VH-Segment für das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 codiert und wobei der Mensch ein VH-Gensegment umfasst, das für das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 codiert, oder der Mensch VH-Domänen exprimiert, die das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 umfassen.
• (ii) wobei der Ligand eine VH-Domäne umfasst, erhalten durch die Rekombination des humanen VH-Segments IGHV3-7*01, eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Segments, und wobei der Mensch ein IGHV3-7*01-VH-Gensegment umfasst oder der Mensch VH-Domänen exprimiert, erhalten durch die Rekombination des humanen VH-Segments IGHV3-7*01, eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Segments.
• (iii) wobei der Ligand eine Vκ-Domäne umfasst, erhalten durch die Rekombination des humanen Vκ-Segments IGKV1-12*01 und eines humanen Jκ-Segments, und wobei der Mensch ein IGKV1-12*01-Vk-Gensegment umfasst oder der Mensch Vκ-Domänen exprimiert, erhalten durch die Rekombination des humanen Vκ-Segments IGKV1-12*01 und eines humanen Jκ-Segments.
• (iv) wobei der Ligand eine Vκ-Domäne umfasst, erhalten durch die Rekombination eines humanen Vκ-Segments und eines humanen Jκ-Segments, wobei das humane Vκ-Segment (i) für eine CDR3 codiert, die ein Pro in Position 7 umfasst, gezeigt in SEQ ID NO: 36, und wobei der Mensch ein Vκ-Gensegment umfasst, codierend für eine CDR3, die ein Pro in Position 7 umfasst, gezeigt in SEQ ID NO: 36, oder der Mensch Vκ-Domänen exprimiert, die eine CDR3 umfassen, die ein Pro in Position 7 umfasst, gezeigt in SEQ ID NO: 36; oder (ii) für ein FW3 codiert, das ein Ser in Position 15 umfasst, gezeigt in SEQ ID NO: 38, und wobei der Mensch ein Vκ-Gensegment umfasst, codierend für ein FW3, das ein Ser in Position 15 umfasst, gezeigt in SEQ ID NO: 38, oder der Mensch Vκ-Domänen exprimiert, die ein FW3 umfassen, das ein Ser in Position 15 umfasst, gezeigt in SEQ ID NO: 38.
• (v) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-1-Kette umfasst, die ein Asp in Position 204, gezeigt in SEQ ID NO: 4, oder ein Leu in Position 206, gezeigt in SEQ ID NO: 4, umfasst und wobei der Mensch (i) ein IGHG1*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-1-Kette umfassen, die ein Asp in Position 204, gezeigt in SEQ ID NO: 4, oder ein Leu in Position 206, gezeigt in SEQ ID NO: 4, umfassen.
• (vi) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-2-Kette umfasst, die eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Pro in Position 72, gezeigt in SEQ ID NO: 6, einem Asn in Position 75, gezeigt in SEQ ID NO: 6, einem Phe in Position 76, gezeigt in SEQ ID NO: 6, einem Val in Position 161, gezeigt in SEQ ID NO: 6, und einem Ala in Position 257, gezeigt in SEQ ID NO: 6, umfasst und wobei der Mensch (i) ein IGHG2*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-2-Kette umfassen, die das ausgewählte Pro in Position 72, gezeigt in SEQ ID NO: 6, Asn in Position 75, gezeigt in SEQ ID NO: 6, Phe in Position 76, gezeigt in SEQ ID NO: 6, Val in Position 161, gezeigt in SEQ ID NO: 6, oder Ala in Position 257, gezeigt in SEQ ID NO: 6, umfassen.
• (vii) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen kappa-Kette umfasst, die ein Val in Position 84, gezeigt in SEQ ID NO: 16, oder ein Cys in Position 87, gezeigt in SEQ ID NO: 16, umfasst und wobei der Mensch (i) ein IGKC1*01-Gensegment der konstanten Region der humanen kappa-Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen kappa-Kette umfassen, die ein Val entsprechend Position 84, gezeigt in SEQ ID NO: 16, oder ein Cys in Position 87, gezeigt in SEQ ID NO: 16, umfassen.
• (viii) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen IGLC1*01-lambda-Kette umfasst und wobei der Mensch (i) ein IGLC1*01-Gensegment der konstanten Region der humanen lambda-Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen IGLC1*01-lambda-Kette umfassen.
• (ix) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette umfasst, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfasst und wobei der Mensch (i) ein IGHG4*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-4-Kette umfassen, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfassen.
• (x) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-3-Kette umfasst, codiert durch ein erstes Gensegment IGHG3 (z. B. IGHG3*01) der humanen konstanten Regionen, und wobei der Mensch (i) das erste Gensegment der konstanten Region (z. B. ein IGHG3*01) umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-3-Kette umfassen, codiert durch das erste IGHG3-Gensegment (z. B. IGHG3*01) der konstanten Region.
• (xi) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren epsilon-Kette umfasst, codiert durch ein erstes Gensegment der konstanten Region der humanen schweren epsilon-Kette, und wobei der Mensch (i) das erste Gensegment der konstanten Region umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren epsilon-Kette umfassen, codiert durch das erste Gensegment der konstanten Region.
• (xii) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren mu-Kette umfasst, codiert durch ein erstes Gensegment der konstanten Region der humanen schweren mu-Kette, und wobei der Mensch (i) das erste Gensegment der konstanten Region umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren mu-Kette umfassen, codiert durch das erste Gensegment der konstanten Region.
• (xiii) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren alpha-Kette umfasst, codiert durch ein erstes Gensegment der konstanten Region der humanen schweren alpha-Kette, und wobei der Mensch (i) das erste Gensegment der konstanten Region umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren alpha-Kette umfassen, codiert durch das erste Gensegment der konstanten Region.
• (xiv) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren delta-Kette umfasst, codiert durch ein erstes Gensegment der konstanten Region der humanen schweren delta-Kette, und wobei der Mensch (i) das erste Gensegment der konstanten Region umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren delta-Kette umfassen, codiert durch das erste Gensegment der konstanten Region.
• (xv) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen leichten kappa-Kette umfasst, codiert durch ein erstes Gensegment der konstanten Region der humanen leichten kappa-Kette, und wobei der Mensch (i) das erste Gensegment der konstanten Region umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen leichten kappa-Kette umfassen, codiert durch das erste Gensegment der konstanten Region.
• (xvi) wobei der Ligand eine konstante Region der humanen leichten lambda-Kette umfasst, codiert durch ein erstes Gensegment der konstanten Region der humanen leichten lambda-Kette, und wobei der Mensch (i) das erste Gensegment der konstanten Region umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen leichten lambda-Kette umfassen, codiert durch das erste Gensegment der konstanten Region.

• (i) wherein the ligand comprises a VH domain obtained by the recombination of a human VH segment (e.g., human VH3-23 * 04), a human D gene segment, and a human JH segment, wherein the human VH Segment for backbone 1 of SEQ ID NO: 40, and wherein the human comprises a VH gene segment coding for backbone 1 of SEQ ID NO: 40 or the human expressing VH domains comprising backbone 1 of SEQ ID NO: 40 include.
• (ii) wherein the ligand comprises a VH domain obtained by recombining the human VH segment IGHV3-7 * 01, a human D gene segment and a human JH segment, and wherein the human receives an IGHV3-7 * 01 VH gene segment or human VH domains expressed by recombination of the human VH segment IGHV3-7 * 01, a human D gene segment and a human JH segment.
• (iii) wherein the ligand comprises a Vκ domain obtained by the recombination of the human Vκ segment IGKV1-12 * 01 and a human Jκ segment, and wherein the human comprises an IGKV1-12 * 01 Vk gene segment or the Human Vκ domains expressed by recombination of the human Vκ segment IGKV1-12 * 01 and a human Jκ segment.
• (iv) wherein the ligand comprises a Vκ domain obtained by the recombination of a human Vκ segment and a human Jκ segment, wherein the human Vκ segment (i) encodes a CDR3 comprising a pro in position 7, shown in SEQ ID NO: 36, and wherein the human comprises a Vκ gene segment encoding a CDR3 comprising a pro in position 7 shown in SEQ ID NO: 36, or the human expressing Vκ domains containing a CDR3 comprising a Pro in position 7 shown in SEQ ID NO: 36; or (ii) encodes a FW3 comprising a Ser at position 15 shown in SEQ ID NO: 38, and wherein the human comprises a Vκ gene segment encoding a FW3 comprising a Ser at position 15 shown in SEQ ID NO: 38, or the human expressing Vκ domains comprising an FW3 comprising a Ser in position 15 shown in SEQ ID NO: 38.
• (v) wherein the ligand comprises a human gamma-1 heavy chain constant region comprising an Asp at position 204 shown in SEQ ID NO: 4 or a Leu at position 206 shown in SEQ ID NO: 4 and wherein the human comprises (i) an IGHG1 * 01 human heavy chain constant region gene segment, or human expressing antibodies comprising human gamma 1 heavy chain constant regions comprising an Asp at position 204 shown in SEQ ID NO: 4, or a Leu at position 206 shown in SEQ ID NO: 4.
• (vi) wherein the ligand comprises a human heavy gamma 2 chain constant region comprising an amino acid selected from the group consisting of a pro in position 72 shown in SEQ ID NO: 6, an Asn in position 75 shown in SEQ ID NO: 6, a Phe in position 76, shown in SEQ ID NO: 6, a Val in position 161, shown in SEQ ID NO: 6, and an Ala in position 257, shown in SEQ ID NO: 6 and wherein the human comprises (i) an IGHG2 * 01 human heavy chain constant region gene segment, or human expressing antibodies comprising human gamma 2 heavy chain constant regions containing the selected pro in position 72 shown in SEQ ID NO: 6, Asn in position 75, shown in SEQ ID NO: 6, Phe in position 76, shown in SEQ ID NO: 6, Val in position 161, shown in SEQ ID NO: 6, or Ala in position 257 shown in SEQ ID NO: 6.
• (vii) wherein the ligand comprises a human kappa chain constant region comprising a Val at position 84 shown in SEQ ID NO: 16, or a Cys at position 87 shown in SEQ ID NO: 16, and wherein Human (i) comprises an IGKC1 * 01 human kappa chain constant region gene segment, or human expressing antibodies comprising human kappa chain constant regions comprising a Val corresponding to position 84 shown in SEQ ID NO: 16, or a Cys at position 87 shown in SEQ ID NO: 16.
• (viii) wherein the ligand comprises a human IGLC1 * 01 lambda chain human constant region and wherein human (i) comprises a human lambda chain constant region IGLC1 * 01 gene segment or human expresses antibodies, the constant regions of the human IGLC1 * 01 lambda chain.
• (ix) wherein the ligand comprises a human gamma 4 heavy chain constant region comprising a Leu at position 189 shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg at position 289 shown in SEQ ID NO: 73 and wherein the human comprises (i) an IGHG4 * 01 human heavy chain constant region gene segment, or human expressing antibodies comprising human gamma 4 heavy chain constant regions comprising a Leu at position 189 shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg at position 289, shown in SEQ ID NO: 73.
• (x) wherein the ligand comprises a human gamma 3 heavy chain constant region encoded by a first gene segment IGHG3 (e.g., IGHG3 * 01) of the human constant regions, and wherein human (i) is the first gene segment of the human or human expressing antibodies comprising human gamma-3 heavy chain constant regions encoded by the first IGHG3 gene segment (eg, IGHG3 * 01) of the constant Region.
• (xi) said ligand comprising a human heavy epsilon chain constant region encoded by a first human heavy epsilon heavy chain constant region gene, and wherein human (i) comprises the first constant region gene segment or human antibody comprising constant regions of the human heavy epsilon chain encoded by the first constant region gene segment.
• (xii) wherein the ligand comprises a human heavy mu chain constant region encoded by a first human heavy mu chain constant region gene, and wherein human comprises (i) the first constant region gene segment or human antibody expressing human heavy mu chain constant regions encoded by the first constant region gene segment.
• (xiii) wherein the ligand comprises a human heavy alpha chain constant region encoded by a first human heavy alpha chain constant region gene segment and wherein the human comprises (i) the first constant region gene segment or human antibodies comprising human heavy alpha chain constant regions encoded by the first constant region gene segment.
• (xiv) wherein said ligand comprises a human heavy delta chain constant region encoded by a first human heavy delta chain constant region gene segment, and wherein said human comprises (i) said first constant region gene segment or said human antibody expressing human heavy delta chain constant regions encoded by the first constant region gene segment.
• (xv) wherein said ligand comprises a human kappa light chain constant region encoded by a first human kappa light chain constant region gene segment and wherein said human comprises (i) said first constant region gene segment or said human antibody comprising human kappa light chain constant regions encoded by the first constant region gene segment.
• (xvi) wherein the ligand comprises a human lambda light chain constant region encoded by a first human lambda light chain constant region gene segment, and wherein human (i) comprises the first constant region gene segment or human antibodies expressing human lambda light chain constant regions encoded by the first constant region gene segment.

Gemäß einigen Ausführungsformen wird der Ligand (z. B. Antikörper oder Antikörperfragment) durch Inhalation oder intravenöse oder subkutane Verabreichung verabreicht und/oder ist in einer inhalierbaren oder injizierbaren Zubereitung enthalten.According to some embodiments, the ligand (eg antibody or antibody fragment) is administered by inhalation or intravenous or subcutaneous administration and / or is included in an inhalable or injectable preparation.

Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst die konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette des Liganden die Aminosäuresequenz von SEQ ID NO: 73 oder eine ADCC-inaktivierte Version davon.In some embodiments, the human gamma 4 heavy chain constant region of the ligand comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73 or an ADCC-inactivated version thereof.

Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst die konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette 228P und 235E.In some embodiments, the human gamma 4 heavy chain constant region comprises 228P and 235E.

Gegebenenfalls ist bei der vorliegenden Erfindung das TOI aus der aus den folgenden humanen TOIs bestehenden Gruppe ausgewählt: PCSK9, IL6R, IL4Ra, VEGF-A, Plazentawachstumsfaktor (Placental Growth Factor, PGF), PDGF-B, PDGFR-B, Ang-2, Nav1.7, Nav1.8, Nav1.9, PD-1, PD-L1, ICOS, BMP6, Hämojuvelin, Ferroportin, TMPRSS6, Transferrin, humanes Hämochromatoseprotein (HFE) und Sklerostin.Optionally, in the present invention, the TOI is selected from the group consisting of the following human TOIs: PCSK9, IL6R, IL4Ra, VEGF-A, placental growth factor (PGF), PDGF-B, PDGFR-B, Ang-2, Nav1.7, Nav1.8, Nav1.9, PD-1, PD-L1, ICOS, BMP6, hemojuvelin, ferroportin, TMPRSS6, transferrin, human hemochromatosis protein (HFE) and sclerostin.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um PCSK9. The TOI is, for example, PCSK9.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um IL6R.For example, the TOI is IL6R.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um IL4Ra.The TOI is for example IL4Ra.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um VEGF-A.The TOI is, for example, VEGF-A.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um Plazentawachstumsfaktor (Placental Growth Factor, PGF).The TOI is, for example, Placental Growth Factor (PGF).

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um PDGF-B.The TOI is, for example, PDGF-B.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um PDGFR-B.The TOI is, for example, PDGFR-B.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um Ang-2.The TOI is, for example, Ang-2.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um Nav1.7.For example, the TOI is Nav1.7.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um Nav1.8.For example, the TOI is Nav1.8.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um Nav1.9.For example, the TOI is Nav1.9.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um PD-1.The TOI is for example PD-1.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um PD-L1.The TOI is, for example, PD-L1.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um ICOS.The TOI is, for example, ICOS.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um BMP6.The TOI is for example BMP6.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um Hämojuvelin.The TOI is, for example, hemojuvelin.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um Ferroportin.The TOI is, for example, ferroportin.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um TMPRSS6.The TOI is, for example, TMPRSS6.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um Transferrin.The TOI is for example Transferrin.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes Hämochromatoseprotein (HFE).The TOI is, for example, human hemochromatosis protein (HFE).

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um Sklerostin.The TOI is, for example, sclerostin.

Gemäß einem Aspekt, einem Beispiel, einer Ausführungsform oder einer Konfiguration der Erfindung umfasst der Anti-TOI-(z. B. PCSK9 oder IL4Ra)-Ligand (z. B. Falle, Antikörper oder Fragment) eine VH-Domäne, erhalten durch die Rekombination eines humanen VH-Segments (z. B. humanes VH3-23*04), eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Segments, wobei das humane VH-Segment für das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 codiert und wobei der Mensch ein VH-Gensegment umfasst, das für das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 codiert, oder der Mensch VH-Domänen exprimiert, die das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 umfassen. Alternativ dazu umfasst der Ligand eine VH-Domäne, die durch Rekombination eines humanen VH-Segments (z. B. humanem VH3-23*04), eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Segments erhalten wird, wobei das humane VH-Segment SNP rs56069819 umfasst und wobei der Mensch ein VH-Gensegment umfasst, das SNP rs56069819 umfasst.In one aspect, example, embodiment or configuration of the invention, the anti-TOI (e.g., PCSK9 or IL4Ra) ligand (e.g., trap, antibody, or fragment) comprises a VH domain obtained by the Recombination of a human VH segment (e.g., human VH3-23 * 04), a human D gene segment, and a human JH segment, wherein the human V H segment encodes backbone 1 of SEQ ID NO: 40; the human comprises a VH gene segment coding for backbone 1 of SEQ ID NO: 40 or the human expressing VH domains comprising backbone 1 of SEQ ID NO: 40. Alternatively, the ligand comprises a VH domain obtained by recombination of a human VH segment (e.g., human VH3-23 * 04), a human D gene segment, and a human JH segment, where the human V H is Segment SNP rs56069819 and wherein the human comprises a VH gene segment comprising SNP rs56069819.

SNP rs56069819 kommt in Menschen gemäß der 1000 Genomes Phase I-Datenbank mit einer durchschnittlichen kumulativen Häufigkeit von 11% vor, kommt jedoch in AFR- (23%), EUR- (13%), ASW- (27%), LWK- (15%), YRI- (28%), CEU- (19%) und GBR-Populationen (15%) häufiger vor; gemäß einer Ausführungsform ist der Mensch, wenn der Anti-TOI-(z. B. PCSK9 oder IL4Ra)-Antikörper bzw. das Fragment das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 umfasst oder eine VH-Domäne, erhalten durch die Rekombination eines humanen VH-Segments (z. B. humanes VH3-23*04), eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Segments, umfasst, wobei das humane VH-Segment SNP rs56069819 umfasst, von einer Abstammung ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus AFR-, EUR-, ASW-, LWK-, YRI-, CEU- und GBR-Abstammung. Der Mensch ist zum Beispiel AFR-Abstammung. Der Mensch ist zum Beispiel EUR-Abstammung. Der Mensch ist zum Beispiel ASW-Abstammung. Der Mensch ist zum Beispiel LWK-Abstammung. Der Mensch ist zum Beispiel YRI-Abstammung. Der Mensch ist zum Beispiel CEU-Abstammung. Der Mensch ist zum Beispiel GBR-Abstammung. Bei einem Beispiel ist die ausgewählte Abstammung des Menschen eine dieser aufgeführten Abstammungen und das TOI umfasst eine Aminosäurevariation (Mutation), die durch einen SNP codiert wird, der sich gemäß den 1000 Genomes auch in einer solchen menschlichen Population mit einer überdurchschnittlichen kumulativen Häufigkeit wiederfindet. Beispielsweise bindet der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) spezifisch an ein IL4R-Protein, das eine Mutation S752A umfasst, und der Mensch ist YRI-Abstammung. In diesem Fall sind sowohl die für die Mutation codierende SNP als auch die SNP rs56069819 in der YRI-Population mit einer überdurchschnittlichen kumulativen Häufigkeit vorhanden. Dieser allgemeine Aspekt der Erfindung eignet sich daher besonders zur individuellen Anpassung an die genomischen Profile von Mitgliedern einer solchen Population.SNP rs56069819 is found in humans according to the 1000 Genomes Phase I database with an average cumulative frequency of 11% but comes in AFR (23%), EUR (13%), ASW (27%), LWK ( 15%), YRI (28%), CEU (19%) and GBR populations (15%) more prevalent; According to one embodiment, when the anti-TOI (eg, PCSK9 or IL4Ra) antibody or fragment comprises backbone 1 of SEQ ID NO: 40 or a VH domain obtained by the recombination of a human VH segment (eg, human VH3-23 * 04), a human D gene segment, and a human JH gene. Segment, wherein the human VH segment comprises SNP rs56069819, of a lineage selected from the group consisting of AFR, EUR, ASW, LWK, YRI, CEU and GBR lineage. For example, humans are of AFR descent. For example, humans are EUR-descent. For example, humans are of ASW descent. For example, humans are of LWK descent. For example, the human being is of YRI descent. For example, humans are of CEU descent. For example, humans are of GBR descent. In one example, the selected lineage of the human is one of these listed lineages, and the TOI comprises an amino acid variation (mutation) encoded by an SNP that, according to the 1000 genomes, also resides in such a human population with an above-average cumulative frequency. For example, the ligand (e.g., the antibody or fragment) specifically binds to an IL4R protein comprising a S752A mutation, and the human is YRI-derived. In this case, both the mutation-encoding SNP and the SNP rs56069819 are present in the YRI population with an above-average cumulative frequency. This general aspect of the invention is therefore particularly suitable for individual adaptation to the genomic profiles of members of such a population.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an die humane PCSK9-Form f.In one example, the ligand specifically binds to the human PCSK9 form f.

Bei einem Beispiel exprimiert der Mensch eine humane PCSK9 ausgewählt aus den Formen: f, e, p und aj.In one example, human expresses a human PCSK9 selected from the forms: f, e, p and aj.

Bei einem Beispiel ist der Mensch ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung.In one example, the human is ASW, LWK, YRI, CEU, or GBR descent.

Bei einem Beispiel ist der Mensch ASW-Abstammung und der Mensch exprimiert eine humane PCSK9 ausgewählt aus den Formen: f, e, p und aj, gegebenenfalls umfasst der Ligand eine VH-Domäne erhalten durch die Rekombination von humanem VH3-23*04.In one example, the human is of ASW descent and human expresses a human PCSK9 selected from the forms: f, e, p and aj, optionally the ligand comprises a VH domain obtained by the recombination of human VH3-23 * 04.

Bei einem Beispiel ist der Mensch LWK-Abstammung und der Mensch exprimiert eine humane PCSK9 ausgewählt aus den Formen: f, e, p und aj, gegebenenfalls umfasst der Ligand eine VH-Domäne erhalten durch die Rekombination von humanem VH3-23*04.In one example, the human is of LWK descent and the human expresses a human PCSK9 selected from the forms: f, e, p and aj, optionally the ligand comprises a VH domain obtained by the recombination of human VH3-23 * 04.

Bei einem Beispiel ist der Mensch YRI-Abstammung und der Mensch exprimiert eine humane PCSK9 ausgewählt aus den Formen: f, e, p und aj, gegebenenfalls umfasst der Ligand eine VH-Domäne erhalten durch die Rekombination von humanem VH3-23*04.In one example, the human is of YRI descent and the human expresses a human PCSK9 selected from the forms: f, e, p and aj, optionally the ligand comprises a VH domain obtained by the recombination of human VH3-23 * 04.

Bei einem Beispiel ist der Mensch CEU-Abstammung und der Mensch exprimiert eine humane PCSK9 ausgewählt aus den Formen: f, e, p und aj, gegebenenfalls umfasst der Ligand eine VH-Domäne erhalten durch die Rekombination von humanem VH3-23*04.In one example, the human is of CEU descent and the human expresses a human PCSK9 selected from the forms: f, e, p and aj, optionally the ligand comprises a VH domain obtained by the recombination of human VH3-23 * 04.

Bei einem Beispiel ist der Mensch GBR-Abstammung und der Mensch exprimiert eine humane PCSK9 ausgewählt aus den Formen: f, e, p und aj, gegebenenfalls umfasst der Ligand eine VH-Domäne erhalten durch die Rekombination von humanem VH3-23*04.In one example, the human is of GBR descent and the human expresses a human PCSK9 selected from the forms: f, e, p and aj, optionally the ligand comprises a VH domain obtained by the recombination of human VH3-23 * 04.

Bei einem Beispiel umfasst das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29, 32, 34 und 36, wobei der Antikörper bzw. das Fragment spezifisch an eine humane PCSK9 ausgewählt aus den Formen: f, e, p beziehungsweise aj, wobei der Antikörper oder das Fragment eine VH-Domäne umfasst, erhalten durch die Rekombination eines humanen VH-Gensegments, eines humanen D-Gensegments und eines human JH-Gensegments, wobei das VH-Gensegment eine Nukleotidsequenz umfasst, die SEQ ID NO: 39 oder deren Komplement umfasst. Gegebenenfalls handelt es sich bei dem VH-Gensegment um VH3-23*04 (SEQ ID NO: 38).In one example, the human genome comprises a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29, 32, 34, and 36, wherein the antibody or fragment specifically belongs to a human PCSK9 selected from the forms: f, e, p or aj, wherein the antibody or fragment comprises a VH domain obtained by the recombination of a human VH gene segment, a human D gene segment and a human JH gene segment, wherein the VH gene segment comprises a nucleotide sequence comprising SEQ ID NO: 39 or its complement. Optionally, the VH gene segment is VH3-23 * 04 (SEQ ID NO: 38).

KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGENBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

Die vorliegende Patent- bzw. Anmeldungsdatei enthält wenigstens eine in Farbe ausgeführte Zeichnung. Kopien dieser Patent- bzw. Patentanmeldungsveröffentlichung mit farbiger Zeichnung/farbigen Zeichnungen werden auf Anforderung und nach Zahlung der erforderlichen Gebühr vom Amt zur Verfügung gestellt.The present application file contains at least one drawing executed in color. Copies of this patent or patent application publication with colored drawing / colored drawings will be provided by the Office upon request and after payment of the required fee.

1 zeigt ein Computermodell von PCSK9-Oberflächenrestenvarianten. 1 shows a computer model of PCSK9 surface residue variants.

2 zeigt die kumulative Allelhäufigkeitsverteilung über die Datenbank des 1000 Genomes Project von humanen VH3-23-Allelen, die SNP rs56069819 umfassen (wobei solche Allele als ”C” bezeichnet werden und das am häufgsten vorkommende Allel (das diesen SNP nicht umfasst) als ”A” bezeichnet wird). Aus der Figur geht hervor, dass die VH3-23-Allele, die SNP rs56069819 umfassen, mit einer kumulativen Häufigkeit von 11% über alle humanen ethnischen Populationen zusammen genommen vorkommen, während bei bestimmten speziellen humanen ethnischen Unterpopulationen (ASW, LWK, YRI, CEU und GBR) solche Allele mit einer überdurchschnittlichen kumulativen Häufigkeit vorkommen. Angezeigt in der Figur sind die Formvarianten von humaner PCSK9 (als ”Varianten” gekennzeichnet), die sich in verschiedenen Unterpopulationen mit überdurchschnittlichem Auftreten von humanen VH3-23-Allelen mit SNP rs56069819 finden. 2 Figure 12 shows the cumulative allele frequency distribution across the database of the 1000 Genome Project of human VH3-23 alleles comprising SNP rs56069819 (where such alleles are referred to as "C") and the most common allele (which does not include this SNP) is called "A"). The figure shows that the VH3-23 alleles comprising SNP rs56069819 occur at a cumulative frequency of 11% across all human ethnic populations taken together, while in certain specific human ethnic subpopulations (ASW, LWK, YRI, CEU and GBR) such alleles with an above-average cumulative frequency occur. Shown in the figure are the variant forms of human PCSK9 (designated as "variants") found in various subpopulations with above-average occurrence of human VH3-23 alleles with SNP rs56069819.

3 zeigt Grundgerüste und CDRs, die von aus der IMGT-Datenbank (verfügbar im World Wide Web unter www.IMGT.org) erhaltenem VH3-23*04 codiert werden. 3 offenbart die Nukleotidsequenzen als SEQ ID NOS 117, 117, 117, 119, 119, 119, 120, 122, 124, 39 beziehungsweise 125, in der Reihenfolge ihres Auftretens. 3 offenbart die codierten Aminosäuresequenzen als SEQ ID NOS 118, 118, 118, 118, 118, 118, 121, 123, 123, 38 beziehungsweise 126, in der Reihenfolge ihres Auftretens. 3 shows skeletons and CDRs encoded by VH3-23 * 04 obtained from the IMGT database (available from the World Wide Web at www.IMGT.org). 3 discloses the nucleotide sequences as SEQ ID NOS 117, 117, 117, 119, 119, 119, 120, 122, 124, 39 and 125, respectively, in order of appearance. 3 discloses the encoded amino acid sequences as SEQ ID NOS 118, 118, 118, 118, 118, 118, 121, 123, 123, 38 and 126, respectively, in order of appearance.

4 zeigt Sequenzen von VH3-23*04. Der Abschnitt von VH3-23*04, der die Änderung des FW1-Rests von rs56069819 umfasst, ist gezeigt (SEQ ID NO: 38). Der Abschnitt der Nukleinsäuresequenz, die für rs56069819 codiert, ist gezeigt (SEQ ID NO: 39). Das durch VH3-23*04 codierte FW1 ist gezeigt (SEQ ID NO: 40). 4 shows sequences of VH3-23 * 04. The section of VH3-23 * 04 comprising the change of the FW1 residue of rs56069819 is shown (SEQ ID NO: 38). The portion of the nucleic acid sequence encoding rs56069819 is shown (SEQ ID NO: 39). The FW1 encoded by VH3-23 * 04 is shown (SEQ ID NO: 40).

AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNGDETAILED DESCRIPTION

Dem Fachmann wird bekannt sein, dass SNPs oder andere Veränderungen, die zu Aminosäurevariationen translatiert werden, bei den anzusprechenden humanen Targets eine Variabilität bei der Konformation oder Aktivität zur Folge haben können. Dies hat zu einem großen Interesse bei der individuell abgestimmten Medizin geführt, bei der man sich zur effizienteren Anpassung von Medikamenten und Diagnosen an Patienten der Genotypisierung und des Wissens um Protein- und Nukleotidvariabilität bedient. Die vorliegende Erfindung stellt maßgeschneiderte Pharmazeutika und Tests, die speziell seltenere Formen eines humanen Target of Interest (TOI) ansprechen, bereit.It will be appreciated by those skilled in the art that SNPs or other alterations that are translated into amino acid variations may result in conformation or activity variability in the human targets to be targeted. This has led to a great deal of interest in personalized medicine using more efficient drug adaptation and diagnostics to genotyping patients and understanding protein and nucleotide variability. The present invention provides tailored pharmaceuticals and assays that specifically address more rare forms of a human target of interest (TOI).

Die vorliegende Erfindung macht die Leistungsfähigkeit der humanen genetischen Variationsanalyse und der rationell konzipierten Sequenzselektion nutzbar. Die technischen Anwendungen dieser Ansätze gemäß der vorliegenden Erfindung leisten einen Beitrag zur besseren Behandlung, Prophylaxe und Diagnose in Menschen und stellen einen Nutzen für den Patienten dar, indem sie Alternativen bereitstellen und individuell abgestimmte Medikamente und Therapien ermöglichen. Hierdurch werden Vorteile einer besseren Verschreibungspraxis, einer geringen Verschwendung von Medikamenten und verbesserten Chancen einer Wirksamkeit von Arzneimitteln sowie einer besseren Diagnose von Patienten bereitgestellt. Als Bezugsquellen für Daten zu genomischen Sequenzvariationen wird sich der Fachmann der verfügbaren Datenbanken und Quellen (einschließlich Updates davon) bewusst sein, die von den Folgenden bereitgestellt werden:

• 1. HapMap ( The International HapMap Consortium. 2003; verfügbar im World Wide Web unter hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/index.html.en ). Das HapMap Project ist ein internationales Projekt, dessen Ziel es ist, die genetischen Sequenzen verschiedener Individuen zum Identifizieren chromosomaler Regionen mit gemeinsamen genetischen Varianten miteinander zu vergleichen. Die HapMap-www-Website stellt Werkzeuge zum Identifizieren chromosomaler Regionen und der Varianten darin bereit, wobei die Möglichkeit besteht, Häufigkeitsdaten auf dem Populationsniveau gründlich zu recherchieren.
• 2. 1000 Genomes Project ( The 1000 Genomes Project Consortium 2010; verfügbar im World Wide Web unter 1000genomes.org/ ). Diese Quelle stellt vollständige genomische Sequenzen von wenigstens 2500 nicht identifizierten Individuen aus einer von 25 unterschiedlichen Bevölkerungsgruppen bereit.
• 3. Japanese SNP Database ( H. Haga et al. 2002; verfügbar im World Wide Web unter snp.ims.utokyo.ac.jp/index.html ). Basiert auf einer Studie, in der 190562 humane genetische Varianten identifiziert wurden.

• 1. HapMap ( The International HapMap Consortium. 2003; Available on the World Wide Web at hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/index.html.en ). The HapMap Project is an international project whose goal is to compare the genetic sequences of different individuals to identify chromosomal regions with common genetic variants. The HapMap www website provides tools for identifying chromosomal regions and variants therein, with the ability to thoroughly search frequency data at the population level.
• 2. 1000 Genomes Project ( The 1000 Genomes Project Consortium 2010; available on the World Wide Web at 1000genomes.org/ ). This source provides complete genomic sequences of at least 2,500 unidentified individuals from one of 25 different population groups.
• 3. Japanese SNP Database ( H. Haga et al. 2002; Available on the World Wide Web at snp.ims.utokyo.ac.jp/index.html ). Based on a study in which 190562 human genetic variants were identified.

Bei der vorliegenden Erfindung geht es unter anderem um die Identifizierung und Katalogisierung natürlich vorkommender humaner genomischer Zielsequenzvarianten einschließlich der Varianten, die man mit relativ geringer Häufigkeit antrifft bzw. die selten sind, die man isoliert in speziellen humanen ethnischen Populationen und vielen einzelnen Menschen antrifft.Inter alia, the present invention is concerned with the identification and cataloging of naturally occurring human genomic target sequence variants, including the variants that are found at relatively low frequencies, or are rare, that one encounters in isolation in particular human ethnic populations and many individuals.

Ein Aspekt der Erfindung beruht auf einer rationell konzipierten Sequenzselektion, mit der die Erwünschtheit einer Anpassung von Medikamenten und Diagnostika an seltenere, jedoch immer noch signifikante Gruppen menschlicher Individuen, die an einer durch das interessierende Target vermittelten bzw. damit assoziierten Krankheit oder einem solchen Leiden leiden, bzw. bei denen die Möglichkeit besteht, dass sie daran leiden werden (d. h. bei denen ein solches Risiko besteht), angesprochen wird. Beim Entwurf dieses rationellen Konzepts des vorliegenden Aspekts der Erfindung bezog der Erfinder Betrachtungen zur Bandbreite der Häufigkeit natürlich vorkommender Targetsequenzvarianten über mehrere verschiedene humane ethnische Populationen sowie die Wichtigkeit des Ansprechens solcher Populationen, bei denen es wahrscheinlich ist, dass viele Individuen einen Genotyp und/oder Phänotyp einer oder mehrerer der analysierten Varianten aufweisen, mit ein. Als Teil dieses Konzepts ersah es der Erfinder als wichtig, die im Stand der Technik anerkannte Klassifizierung humaner ethnischer Populationen anzunehmen, und in dieser Hinsicht basierte der Erfinder die Analyse und das Konzept auf den anerkannten humanen ethnischen Populationen, die von dem 1000 Genomes Project angenommen wurden, da es sich hierbei um eine Quelle handelt, die von der wissenschaftlichen und medizinischen Gemeinschaft weithin angenommen wurde und dies ferner wird.One aspect of the invention is based on a rationally designed sequence selection, with the desirability of adapting drugs and diagnostics to rarer, but still significant, groups of human individuals suffering from a disease or disease mediated by the target of interest or who are likely to suffer from it (ie where such a risk exists). When designing this In accordance with the rational concept of the present aspect of the invention, the inventor has considered the range of frequencies of naturally occurring target sequence variants across several different human ethnic populations and the importance of responding to such populations where it is likely that many individuals will have one or more genotypes and / or phenotypes of the analyzed variants, with a. As part of this concept, the inventor considered it important to adopt the art recognized classification of human ethnic populations, and in this regard, the inventor based the analysis and concept on the recognized human ethnic populations adopted by the 1000 Genomes Project because it is a source that has been widely accepted by the scientific and medical community and is becoming more so.

Gemäß diesem Aspekt der Erfindung konzipierte der Erfinder die folgenden Sequenzvarianten-Auswahlkriterien, wobei es sich hierbei um Kriterien handelt, von denen der Erfinder festgestellt hat, dass sie wertvolle, auf die Bedürfnisse in der menschlichen Bevölkerung zugeschnittene Arzneimittel und Diagnostika liefern würden.In accordance with this aspect of the invention, the inventor designed the following sequence variant selection criteria, which are criteria that the inventor has determined to provide valuable drugs and diagnostics tailored to the needs of the human population.

Auswahlkriterienselection criteria

Drei oder vier der folgenden:

• • natürlich vorkommende humane Target-Sequenzvarianten mit einer kumulativen humanen Allelhäufigkeit von 35% oder weniger;
• • natürlich vorkommende humane Target-Sequenzvarianten mit einer humanen Genotypgesamthäufigkeit von 40% oder weniger;
• • natürlich vorkommende humane Target-Sequenzvarianten, die sich in vielen verschiedenen humanen ethnischen Populationen finden (unter Anwendung der Standardkategorisierung des 1000 Genomes Project; siehe Tabelle 4 unten); und
• • natürlich vorkommende humane Target-Sequenzvarianten, die sich in vielen Individuen verteilt über solche vielen verschiedenen ethnischen Populationen finden.

• Naturally occurring human target sequence variants with a cumulative human allele frequency of 35% or less;
• Naturally occurring human target sequence variants with a total human genome frequency of 40% or less;
• • naturally occurring human target sequence variants found in many different human ethnic populations (using the standard categorization of the 1000 Genome Project, see Table 4 below); and
• • naturally occurring human target sequence variants found in many individuals across such many different ethnic populations.

Die Auswahl des Erfinders schloss, als Erwägung, die Auswahl von Nukleotidvariation, die zu Aminosäurevariation in den entsprechenden TOI-Formen führte (d. h. nicht-synonyme Variationen), im Gegensatz zu stummen Variationen, bei denen sich die Aminosäurereste im Zielprotein nicht ändern, ein.The inventor's selection included, as a consideration, the selection of nucleotide variation that resulted in amino acid variation in the corresponding TOI forms (i.e., non-synonymous variations) as opposed to silent variations in which the amino acid residues in the target protein do not change.

Gemäß einer Ausführungsform beträgt die kumulative humane Allelhäufigkeit 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 20% oder 1 bis 15% oder 1 bis 10%.In one embodiment, the cumulative human allele frequency is 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 20% or 1 to 15% or 1 to 10%.

Gemäß einer Ausführungsform beträgt die humane Genotypgesamthäufigkeit 35, 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 25%, 1 bis 20%, 1 bis 15%, 1 bis etwa 15%, 1 bis 10%, 1 bis etwa 10% oder 1 bis 5% oder 1 bis etwa 5%.In one embodiment, the total human genotype is 35, 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 25%, 1 to 20%, 1 to 15%, 1 to about 15%, 1 to 10%, 1 to about 10% or 1 to 5% or 1 to about 5%.

Gemäß einer Ausführungsform finden sich die natürlich vorkommenden humanen Targetsequenzvarianten in wenigstens 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 oder 20 verschiedenen humanen ethnischen Populationen (unter Anwendung der Standardkategorisierung des 1000 Genomes Project).In one embodiment, the naturally occurring human target sequence variants are found in at least 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 different human ethnic populations (using the standard categorization of the 1000 Genome Project).

Gemäß einer Ausführungsform finden sich die natürlich vorkommenden humanen Targetsequenzvarianten in wenigstens 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 130, 140 oder 150 Individuen verteilt über solche vielen verschiedenen ethnischen Populationen.In one embodiment, the naturally occurring human target sequence variants are found in at least 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 130, 140 or 150 individuals spread across such many different ethnic populations.

Bei einem Beispiel werden die folgenden Kriterien angewendet:

• • natürlich vorkommende humane Target-Sequenzvarianten mit einer kumulativen humanen Allelhäufigkeit von 15% oder weniger;
• • natürlich vorkommende humane Target-Sequenzvarianten mit einer humanen Genotypgesamthäufigkeit von 20% oder weniger;
• • natürlich vorkommende humane Target-Sequenzvarianten, die sich in wenigstens 5 verschiedenen humanen ethnischen Populationen finden (unter Anwendung der Standardkategorisierung des 1000 Genomes Project); und
• • natürlich vorkommende humane Target-Sequenzvarianten, die sich in vielen Individuen verteilt über solche vielen verschiedenen ethnischen Populationen finden.

• Naturally occurring human target sequence variants with a cumulative human allele frequency of 15% or less;
• Naturally occurring human target sequence variants having a total human genotyping frequency of 20% or less;
• • naturally occurring human target sequence variants found in at least 5 different human ethnic populations (using the standard categorization of the 1000 Genome Project); and
• • naturally occurring human target sequence variants found in many individuals across such many different ethnic populations.

Bei einem Beispiel werden die Kriterien in Bezug auf eine oder mehrere wie hier beschriebene humane genomische Sequenzdatenbanken angewendet. Die Kriterien sind beispielsweise die, wie sie auf die 1000-Genomes-Datenbank angewendet werden. In one example, the criteria are applied to one or more human genomic sequence databases as described herein. For example, the criteria are those as applied to the 1000 Genomes database.

Beispielsweise bei einem beliebigen Aspekt, einem beliebigen Beispiel, einer beliebigen Ausführungsform oder einer beliebigen Konfiguration der Erfindung die 1000-Genomes-Datenbank Version 13. Beispielsweise die 1000-Genomes-Datenbank in ihrer jüngsten Version, Stand 1. Oktober 2013.For example, in any aspect, example, embodiment, or configuration of the invention, the 1000 Genomes database is version 13. For example, the 1000 Genomes database in its most recent version, as of October 1, 2013.

Gegebenenfalls kann man auch weitere Sequenzanalysen und 3D-Computermodelle (siehe z. B. 1) als zusätzliches Auswahlkriterium heranziehen: Varianten, deren Aminosäurerestevarianten (verglichen mit der häufigsten Form des humanen TOI) auf dem Target oberflächenexponiert sind, sind für die Auswahl wünschenswert, da der Erfinder erkannt hat, dass diese zur Festlegung der Topographie auf dem Target beitragen und möglicherweise dazu beitragen, wie und wo es auf dem Target zu einer Ligandenbindung kommt.If necessary, you can also use further sequence analyzes and 3D computer models (see eg 1 Variants whose amino acid residue variants (as compared to the most common form of human TOI) are surface exposed on the target are desirable for selection, as the inventor has recognized that these contribute to the determination of the topography on the target, and possibly contribute to how and where ligand binding occurs on the target.

Mit dem folgenden Bioinformatik-Protokoll sollten sich humane Sequenzen für eine Verwendung in der vorliegenden Erfindung identifizieren lassen:

• (a) Identifizieren einer genomischen Region mit einer interessierenden Targetsequenz ('genomische Targetregion') und Berechnen der genomischen Koordinaten unter Anwendung von Koordinaten, die der Sequenz-Assembly entsprechen, die entweder unter Verwendung des 1000 Genomes Projekts oder des International HapMap Projekts (oder einer anderen ausgewählten humanen Gendatenbank erster Wahl) erstellt wurde.
• (b) Identifizieren genomischer Varianten, die sich auf der Karte der zuvor in (a) identifizierten genomischen Region befinden. Abrufen der Allelhäufigkeiten für Varianten für jede Superpopulation und vorzugsweise Unterpopulation, wenn solche Daten verfügbar sind. Für diesen Schritt kann man sich des VWC-Tools für das 1000 Genomes Project bedienen.
• (c) Durchfiltern der Liste genomischer Varianten aus einer genomischen Targetregion, so dass sie nur Varianten enthält, die entweder als 'nicht synonyme' Einzelnukleotid-Polymorphismen (Single Nucleotide Polymorphisms, SNPs) oder genomische 'nsertionen oder Deletionen' (Indels) klassifiziert werden. Weiteres Durchfiltern, so dass sie nur die einschließt, die in exonischen Sequenzen vorhanden sind. ”Nicht synonym” bezieht sich auf eine Nukleotidvariation, die zu einer Aminosäurevariation führt (d. h. ausschließlich stummen Mutationen).
• (d) Korrelieren der Populationshäufigkeitsdaten jeder der identifizierten Varianten für jede der Superpopulationen (zum Beispiel 'europäischer Abstammung', 'ostasiatischer Abstammung', 'westafrikanischer Abstammung', 'Amerika' und 'südasiatischer Abstammung') zum Identifizieren der Varianten, die mit weniger als zwei Superpopulationen segregieren. Ferner Korrelieren aller identifizierten Varianten mit jeder der Unterpopulationen (so könnte zum Beispiel die Superpopulation 'europäischer Abstammung' in Gruppen wie 'CEU – Einwohner von Utah mit nord- oder westeuropäischer Abstammung', 'TSI Toskana in Italien' und Britisch aus England und Schottland' unterteilt werden) und Erstellen einer zweiten Bewertung der Seltenheit von Varianten innerhalb einer Superpopulation.
• (e) Sammeln einer oder mehrerer Sequenzen, die auf spezielle Unterpopulationen beschränkt sind, zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung, z. B. gemäß den wie hier beschriebenen Auswahlkriterien.

• (a) identifying a genomic region having a target genome of interest ('genomic target region') and computing the genomic coordinates using coordinates corresponding to the sequence assembly generated using either the 1000 Genome Project or the International HapMap Project (or a other selected human gene database of first choice).
• (b) identifying genomic variants that are on the map of the genomic region previously identified in (a). Retrieving allele frequencies for variants for each superpopulation, and preferably subpopulation if such data is available. For this step you can use the VWC tool for the 1000 Genomes Project.
• (c) filtering the list of genomic variants from a genomic target region so that it contains only variants that are classified as either 'non-synonymous' single nucleotide polymorphisms (SNPs) or genomic 'insertions or deletions' (indels). Further filtering so that it includes only those present in exonic sequences. "Non-synonymous" refers to a nucleotide variation that results in an amino acid variation (ie, only silent mutations).
• (d) correlating the population frequency data of each of the identified variants for each of the superpopulations (e.g., 'European descent', 'East Asian descent', 'West African descent', 'Americas' and 'South Asian descent') to identify variants associated with fewer than segregate two superpopulations. Further, correlating all identified variants with each of the subpopulations (for example, the 'European descent' superpopulation could be grouped into groups such as' CEU - Residents of North and West European Descent ',' TSI Tuscany in Italy 'and British from England and Scotland' and to make a second assessment of the rarity of variants within a superpopulation.
• (e) collecting one or more sequences restricted to specific subpopulations for use in the present invention, e.g. B. according to the selection criteria as described herein.

Humane PopulationenHuman populations

Die ethnischen Populationen sind gegebenenfalls aus den in der 1000-Genomes-Project-Datenbank identifizierten ausgewählt. In dieser Hinsicht siehe Tabelle 4, die genauere Angaben zu den ethnischen Populationen enthält, auf denen die 1000-Genomes-Project-Datenbank basiert.The ethnic populations may be selected from those identified in the 1000 Genomes Project database. In this regard, see Table 4, which gives more detail on the ethnic populations on which the 1000 Genomes Project database is based.

N A Rosenberg et al (Science 20. Dezember 2002: Band 298 Nr. 5602 2342–2343 ) untersuchten die genetische Struktur humaner Populationen unterschiedlicher geographischer Abstammung. Insgesamt wurden Proben von 52 Populationen untersucht, wobei es sich hierbei um Populationen mit: NA Rosenberg et al (Science December 20, 2002: Vol. 298 No. 5602 2342-2343 ) investigated the genetic structure of human populations of different geographical origins. In total, samples from 52 populations were examined, these being populations with:

afrikanischer Abstammungof African descent

• (Mbuti-Pygmäen, Biaka-Pygmäen, San-Völker und Sprechende der Niger-Kordofanian-Sprachen (Bantu-, Yoruba- und Mandenka-Populationen),(Mbuti pygmies, Biaka pygmies, San peoples and speakers of the Niger Kordofanian languages (Bantu, Yoruba and Mandenka populations),

eurasischer Abstammung of Eurasian descent

• (europäischer Abstammung (Orkadianer, Adygejer, Basken, Franzosen, Russen, Italiener, Sardinier, Toskaner),(of European descent (Orcadian, Adygejer, Basques, French, Russians, Italians, Sardinians, Tuscans),
• nahöstlicher Abstammung (Mosabiten, Beduinen, Drusen, Palestinenser),Middle Eastern descent (Mosabites, Bedouins, Druze, Palestinians),
• zentral-/südasiatischer Abstammung (Belutschen, Brahul, Mahrani, Siddi, Sindhi, Paschtunen, Burusho, Hazara, Uiguren, Kalasha)),Central / South Asian descent (Baluch, Brahul, Mahrani, Siddi, Sindhi, Pashtun, Burusho, Hazara, Uighurs, Kalasha)),

ostasiatischer AbstammungEast Asian descent

• (Han, Dal, Daur, Hezhen, Lahu, Miao, Oroqen, She, Tujia, Tu, Xibo, Yi, Mongolen, Naxi, Kambodschaner, Japaner, Vakuten), ozeanischer Abstammung (Melanesier, Papuaner); oder(Han, Dal, Daur, Hezhen, Lahu, Miao, Oroqen, She, Tujia, Tu, Xibo, Yi, Mongols, Naxi, Cambodians, Japanese, Vakuten), oceanic descent (Melanesian, Papuan); or

amerikanischer AbstammungAmerican descent

• (Karitiana, Surui, Kolombianer, Maya, Pima), handelt.(Karitiana, Surui, Kolombian, Maya, Pima).

In The International HapMap Project, Nature, 18. Dez. 2003;426(6968):789–96 , wird das Ziel des HapMap-Projekts offenbart: Bestimmen der gemeinsamen Muster von DNA-Sequenzvariationen im humanen Genom durch Bestimmen der Genotypen von einer Million oder mehr Sequenzvarianten, deren Häufigkeit und des Ausmaßes der Assoziation zwischen ihnen in DNA-Proben aus Populationen mit Vorfahren aus Teilen von Afrika, Asien und Europa. Die relevanten humanen Populationen unterschiedlicher geographischer Abstammung schließen Yoruba-, japanische, chinesische, nord- und westeuropäische Populationen ein. Genauer gesagt:
Population von Utah mit nord- oder westeuropäischer Abstammung (Proben gesammelt 1980 vom Centre d'Etude du Polymorphisme Humain (CEPH));
Population mit Abstammung von den Yoruba aus Ibadan, Nigeria;
Population mit japanischer Anstammung; und
Population mit Abstammung von den Han-Chinesen aus China.In The International HapMap Project, Nature, Dec. 18, 2003; 426 (6968): 789-96 , the goal of the HapMap project is disclosed: determining the common patterns of DNA sequence variations in the human genome by determining the genotypes of one million or more sequence variants, their abundance and the extent of association between them in DNA samples from ancestral populations Sharing Africa, Asia and Europe. The relevant human populations of different geographical origins include Yoruba, Japanese, Chinese, Northern and Western European populations. More precisely:
Utah population of North or West European descent (samples collected in 1980 by the Center d'Etude du Polymorphisme Humain (CEPH));
Population of the Yoruba from Ibadan, Nigeria;
Population with Japanese ancestry; and
Population of Han Chinese origin from China.

Die Autoren weisen unter Anführung früherer Publikationen darauf hin, dass die Abstammungsgeographie eine vertretbare Basis für die Stichprobenentnahme aus humanen Populationen ist.The authors point out, based on earlier publications, that pedigree geography is a reasonable basis for sampling from human populations.

Eine in der vorliegenden Erfindung verwendete geeignete Stichprobe aus humanen Populationen ist wie folgt:

• (a) Europäische Abstammung
• (b) nordeuropäische Abstammung; westeuropäische Abstammung; toskanische Abstammung; britische Abstammung; finnische Abstammung oder iberische Abstammung.
• (c) Genauer gesagt die Population der Bewohner von Utah mit nord- und/oder westeuropäischer Abstammung; die Toskana-Population in Italien; die britische Population in England und/oder Schottland; die finnische Population in Finnland; oder die iberische Population in Spanien.
• (a) ostasiatischer Abstammung
• (b) japanische Abstammung; chinesische Abstammung oder vietnamesische Abstammung.
• (c) Genauer gesagt die japanische Population in Toyko, Japan; die Population der Han-Chinesen in Peking, China; die chinesische Dai-Population in Xishuangbanna; die Kinh-Population in Ho-Chi-Minh-Stadt, Vietnam; oder die chinesische Population in Denver, Colorado, USA.
• (a) Westafrikanische Abstammung
• (b) Yoruba-Abstammung; Luhya-Abstammung; gambische Abstammung; oder malawische Abstammung.
• (c) Genauer gesagt die Yoruba-Population in Ibadan, Nigeria; die Luhya-Population in Webuye, Kenya; die gambische Population in der Western Division, Gambia; oder die malawische Population in Blantyre, Malawi.
• (a) Population des amerikanischen Doppelkontinents
• (b) uramerikanische Abstammung; afrokaribische Abstammung; mexikanische Abstammung; puertorikanische Abstammung; kolumbianische Abstammung; oder peruanische Abstammung.
• (c) Genauer gesagt die Population afrikanischer Abstammung im Südwesten der USA; die afroamerikanische Population in Jackson, MS; die afrokaribische Population in Barbados; die Population mexikanischer Abstammung in Los Angeles, CA; die puertorikanische Population in Puerto Rico; die kolumbianische Population in Medellin, Kolumbien; oder die peruanische Population in Lima, Peru.
• (a) Südasiatische Abstammung
• (b) Ahom-Abstammung; Kayadtha-Abstammung; Reddy-Abstammung; Maratha; oder Punjabi-Abstammung.
• (c) Genauer gesagt die Ahom-Population im Staat Assam, Indien; die Kayadtha-Population in Kalkutta, Indien; die Reddy-Population in Hyderabad, Indien; die Maratha-Population in Bombay, Indien; oder die Punjabi-Population in Lahore, Pakistan.

• (a) European descent
• (b) Northern European descent; Western European descent; Tuscan descent; British descent; Finnish descent or Iberian descent.
• (c) Specifically, the population of the inhabitants of Utah of North and / or West European descent; the Tuscany population in Italy; the British population in England and / or Scotland; the Finnish population in Finland; or the Iberian population in Spain.
• (a) East Asian descent
• (b) Japanese descent; Chinese descent or Vietnamese descent.
• (c) More specifically, the Japanese population in Toyko, Japan; the Han Chinese population in Beijing, China; the Chinese Dai population in Xishuangbanna; the Kinh population in Ho Chi Minh City, Vietnam; or the Chinese population in Denver, Colorado, USA.
• (a) West African descent
• (b) Yoruba descent; Luhya descent; Gambian descent; or Malawian descent.
• (c) Specifically, the Yoruba population in Ibadan, Nigeria; the Luhya population in Webuye, Kenya; the Gambian population in the Western Division, Gambia; or the Malawian population in Blantyre, Malawi.
• (a) Population of the American double continent
• (b) American descent; Afro-Caribbean descent; Mexican descent; Puerto Rican descent; Columbian descent; or Peruvian descent.
• (c) Specifically, the population of African descent in the southwestern United States; the African American population in Jackson, MS; the Afro-Caribbean population in Barbados; the population of Mexican descent in Los Angeles, CA; the Puerto Rican population in Puerto Rico; the Colombian population in Medellin, Colombia; or the Peruvian population in Lima, Peru.
• (a) South Asian descent
• (b) Ahom lineage; Kayadtha lineage; Reddy lineage; Maratha; or Punjabi descent.
• (c) More specifically, the Ahom population in the state of Assam, India; the Kayadtha population in Calcutta, India; the Reddy population in Hyderabad, India; the Maratha population in Bombay, India; or the Punjabi population in Lahore, Pakistan.

Bei einer beliebigen Konfiguration der Erfindung ist die humane Population bei einer Ausführungsform jeweils aus einer oben mit ”(a)” markierten Form ausgewählt.In any configuration of the invention, in one embodiment, the human population is selected from a form marked "(a)" above.

Bei einer beliebigen Konfiguration der Erfindung ist die humane Population bei einer anderen Ausführungsform jeweils aus einer oben mit ”(b)” markierten Form ausgewählt.In an arbitrary configuration of the invention, in another embodiment, each human population is selected from a form marked "(b)" above.

Bei einer beliebigen Konfiguration der Erfindung ist die humane Population bei einer anderen Ausführungsform jeweils aus einer oben mit ”(c)” markierten Form ausgewählt.In an arbitrary configuration of the invention, in another embodiment, each human population is selected from a form marked "(c)" above.

Bei einer Ausführungsform sind die ethnischen Populationen ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einer ethnischen Population mit europäischer Abstammung, einer ethnischen Population mit ostasiatischer, einer ethnischen Population mit westafrikanischer Abstammung, einer ethnischen Population mit amerikanischer Abstammung und einer ethnischen Population mit südasiatischer Abstammung.In one embodiment, the ethnic populations are selected from the group consisting of an ethnic population of European descent, an ethnic population of East Asian, an ethnic population of West African descent, an ethnic population of American descent and an ethnic population of South Asian descent.

Gemäß einer Ausführungsform sind die ethnischen Populationen ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einer ethnischen Population mit nordeuropäischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit westeuropäischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit toskanischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit britischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit isländischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit finnischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit iberischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit japanischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit chinesischer Abstammung; oder einer ethnischen Population vietnamesischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit Yoruba-Abstammung; oder einer ethnischen Population mit Luhya-Abstammung; oder einer ethnischen Population mit gambischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit malawischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit uramerikanischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit afrokaribischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit mexikanischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit puertorikanischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit kolumbianischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit peruanischer Abstammung; oder einer ethnischen Population mit Ahom-Abstammung; oder einer ethnischen Population mit Kayadtha-Abstammung; oder einer ethnischen Population mit Reddy-Abstammung; oder einer ethnischen Population mit Maratha; oder einer ethnischen Population mit Punjabi-Abstammung.In one embodiment, the ethnic populations are selected from the group consisting of an ethnic population of northern European descent; or an ethnic population of Western European descent; or an ethnic population of Tuscan descent; or an ethnic population of British descent; or an ethnic population of Icelandic descent; or an ethnic population of Finnish descent; or an ethnic population of Iberian descent; or an ethnic population of Japanese descent; or an ethnic population of Chinese descent; or an ethnic population of Vietnamese descent; or an ethnic population of Yoruba descent; or an ethnic population of Luhya descent; or an ethnic population of Gambian descent; or an ethnic population of Malawian descent; or an ethnic population of native American descent; or an ethnic population of Afro-Caribbean descent; or an ethnic population of Mexican descent; or an ethnic population of Puerto Rican descent; or an ethnic population of Colombian descent; or an ethnic population of Peruvian descent; or an ethnic population with Ahom ancestry; or an ethnic population with kayadtha lineage; or an ethnic population with Reddy descent; or an ethnic population with maratha; or an ethnic population of Punjabi descent.

Anti-Target-LigandenAnti-targeting ligand

Die Erfindung stellt wertvolle Anti-Target-Liganden für Menschen bereit, die an einer durch das TOI vermittelten oder damit assoziierten Krankheit bzw. einem solchen Leiden leiden oder bei denen ein Risiko einer solchen Krankheit bzw. eines solchen Leidens besteht. Zum Beispiel bindet der Ligand spezifisch an die TOI-Variante wie gemäß der Erfindung. Der Ligand kann die Aktivität des Targets inhibieren oder antagonisieren; z. B. kann der Ligand das Target neutralisieren. Dem Fachmann wird mit dem Neutralisieren von Liganden im Allgemeinen, wie Antikörpern oder Antikörperfragmenten, vertraut sein und wird leicht geeignete Liganden für eine spezifische Bindung und/oder das Neutralisieren eines Targets in vitro oder in einem In-vivo-Assay testen können.The invention provides valuable anti-target ligands to humans who suffer from or are at risk for, or at risk of, a TOI-mediated or associated disease or condition. For example, the ligand specifically binds to the TOI variant as in the invention. The ligand may inhibit or antagonize the activity of the target; z. For example, the ligand can neutralize the target. One skilled in the art will be familiar with neutralizing ligands in general, such as antibodies or antibody fragments, and will be able to easily test suitable ligands for specific binding and / or neutralizing a target in vitro or in an in vivo assay.

Ein Antikörper ”fragment” umfasst einen Teil eines intakten Antikörpers, vorzugsweise die antigenbindende und/oder die variable Region des intakten Antikörpers. Beispiele für Antikörperfragmente schließen dAb-, Fab-, Fab'-, F(ab')2- und Fv-Fragmente; Diabodies; lineare Antikörper; Einzelkettenantikörpermoleküle und aus Antikörperfragmenten gebildete multispezifische Antikörper ein.An antibody "fragment" comprises a portion of an intact antibody, preferably the antigen binding and / or the variable region of the intact antibody. Examples of antibody fragments include dAb, Fab, Fab ', F (ab') 2 and Fv fragments; diabodies; linear antibodies; Single chain antibody molecules and multispecific antibodies formed from antibody fragments.

Gemäß einer Ausführungsform ist oder umfasst der erfindungsgemäße Ligand ein(en) Antikörper oder ein Antikörperfragment, zum Beispiel ein(en) Antikörper oder Antikörperfragment, der bzw. das humane variable Regionen (und gegebenenfalls auch humane konstante Regionen) umfasst. Anti-TOI- oder TOI-bindende oder auf das TOI zielende Antikörper und Fragmente lassen sich nach einem beliebigen bekannten Verfahren herstellen, z. B. unter Anwendung von transgenen Mäusen (z. B. der Kymouse^TM oder Velocimouse^TM, oder Omnimouse^TM, Xenomouse^TM, HuMab Mouse^TM oder MeMo Mouse^TM), Ratten (z. B. der Omnirat^TM), Kameliden, Haifischen, Kaninchen, Hühnern oder anderen nicht menschlichen Tieren, die mit dem TOI immunisiert wurden, gegebenenfalls gefolgt von Humanisierung der konstanten Regionen und/oder der variablen Regionen unter Herstellung humaner oder humanisierter Antikörper. Bei einem Beispiel kann man Display-Technologien einsetzen, wie Hefe-, Phagen- oder Ribosomen-Display, wie dem Fachmann bekannt sein wird. Standardaffinitätsreifung, z. B. unter Anwendung von Display-Technologie, lässt sich in einem weiteren Schritt nach Isolieren eines Antikörper-Leitmotivs aus einem transgenen Tier, einer Phagen-Display-Bibliothek oder einer anderen Bibliothek durchführen. Repräsentative Beispiele geeigneter Technologien sind in der US20120093818 (Amgen, Inc) beschrieben, die hiermit durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird, z. B. die in den Absätzen [0309] bis [0346] erläuterten Methoden. Wenngleich dies im Hinblick auf PCSK9 ist, können die antikörpererzeugenden Methoden auf andere TOIs wie gemäß den weitgefasstesten Schutzbereichen der vorliegenden Erfindung angewendet werden.According to one embodiment, the ligand according to the invention is or comprises an antibody or an antibody fragment, for example an antibody or antibody fragment, which comprises human variable regions (and optionally also human constant regions). Anti-TOI or TOI binding or TOI targeting antibodies and fragments may be prepared by any known method, e.g. Using transgenic mice (eg the Kymouse ^™ or Velocimouse ^™ , or Omnimouse ^™ , Xenomouse ^™ , HuMab Mouse ^™ or MeMo Mouse ^™ ), rats (eg the Omnirat ^™ ), camelids, sharks, Rabbits, chickens or other non-human animals immunized with the TOI optionally followed by humanization of the constant regions and / or the variable regions to produce human or humanized antibodies. In one example, one can use display technologies, such as yeast, phage or ribosome display, as will be known to those skilled in the art. Standard affinity maturation, e.g. Example, using display technology, can be carried out in a further step after isolating an antibody motif from a transgenic animal, a phage display library or other library. Representative examples of suitable technologies are in the US20120093818 (Amgen, Inc), which is hereby incorporated by reference into the present application, e.g. B. the methods described in paragraphs [0309] to [0346]. Although this is with respect to PCSK9, the antibody-generating methods may be applied to other TOIs as in the broadest scope of the present invention.

Im Allgemeinen kann man eine VELOCIMMUNE^TM oder eine andere Maus mit dem Antigen von Interesse provozieren und aus der Maus antikörperexprimierende Lymphzellen (wie B-Zellen) gewinnen. Die Lymphzellen können mit einer Myelomzelllinie fusioniert werden, wodurch man unsterbliche Hybridomzelllinien erhält, und solche Hybridomzelllinien werden durchmustert und so ausgewählt, dass man Hybridomzelllinien erhält, die spezifische Antikörper gegen das interessierende Antigen produzieren. Man kann DNA isolieren, die für die variablen Regionen der schweren Kette und der leichten Kette codiert, und diese mit gewünschten isotypischen konstanten Regionen der schweren und der leichten Kette verbinden. Ein solches Antikörperprotein kann in einer Zelle wie einer CHO-Zelle produziert werden. Alternativ dazu kann man DNA, die für die antigenspezifischen chimären Antikörper oder die variablen Domänen der leichten und schweren Ketten codiert, direkt aus antigenspezifischen Lymphozyten isolieren.In general, one can provoke a VELOCIMMUNE ^™ or other mouse with the antigen of interest and obtain from the mouse antibody-expressing lymphoid cells (such as B cells). The lymphoid cells can be fused with a myeloma cell line to obtain immortal hybridoma cell lines, and such hybridoma cell lines are screened and selected to obtain hybridoma cell lines that produce specific antibodies against the antigen of interest. One can isolate DNA encoding the heavy chain and light chain variable regions and link them to desired isotypic heavy and light chain constant regions. Such an antibody protein can be produced in a cell such as a CHO cell. Alternatively, one can isolate DNA encoding the antigen-specific chimeric antibodies or the light and heavy chain variable domains directly from antigen-specific lymphocytes.

Zunächst werden hochaffine chimäre Antikörper mit einer humanen variablen Region und einer konstanten Region der Maus isoliert. Wie unten beschrieben werden die Antikörper charakterisiert und auf wünschenswerte Charakteristika einschließlich Affinität, Selektivität, Epitop usw. selektiert. Die konstanten Regionen aus der Maus werden durch eine gewünschte humane konstante Region ersetzt, wodurch man den erfindungsgemäßen komplett humanen Antikörper erhält, zum Beispiel Wildtyp- oder modifiziertes IgG1 oder IgG4 (zum Beispiel SEQ ID NO: 751, 752, 753 in US2011/0065902 , wobei diese Sequenzen durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung zur Verwendung in den Liganden der vorliegenden Erfindung werden). Während die gewählte konstante Region je nach spezifischer Anwendung variieren kann, residieren die hochaffine Antigenbindung und die Target-Spezifität in der variablen Region.First, high affinity chimeric antibodies having a human variable region and a mouse constant region are isolated. As described below, the antibodies are characterized and selected for desirable characteristics including affinity, selectivity, epitope, etc. The murine constant regions are replaced with a desired human constant region to yield the fully human antibody of the invention, for example, wild-type or modified IgG1 or IgG4 (for example, SEQ ID NO: 751, 752, 753 in US2011 / 0065902 these sequences being incorporated by reference into the present application for use in the ligands of the present invention). While the chosen constant region may vary depending on the specific application, the high affinity antigen binding and the target specificity reside in the variable region.

Bei einem Beispiel ist oder umfasst der erfindungsgemäße Ligand eine Nukleinsäure, z. B. RNA, z. B. siRNA, die unter stringenten Bedingungen mit der TOI-Sequenzvariante hybridisiert, z. B. mit einer Nukleotidsequenz hybridisiert, die ein oder mehrere Nukleotide umfasst, bei denen es sich um Varianten (im Vergleich zur am häufigsten vorkommenden TOI-Sequenz, z. B. in Bezug auf die 1000-Genomes-Project-Datenbank) handelt.In one example, the ligand of the invention is or comprises a nucleic acid, e.g. B. RNA, z. B. siRNA, which hybridizes under stringent conditions with the TOI sequence variant, z. G., Hybridized to a nucleotide sequence comprising one or more nucleotides, which are variants (as compared to the most abundant TOI sequence, eg, in relation to the 1000 Genomes Project database).

Target-Bindungsfähigkeit, Spezifität und Affinität (Kd, K_off und/oder K_on) lassen sich nach einem beliebigen Routineverfahren aus dem Stand der Technik bestimmen, z. B. durch Oberflächenplasmonresonanz (Surface Plasmon Resonance, SPR). Der Begriff ”Kd” soll sich, so wie er hier verwendet wird, auf die Gleichgewichtsdissoziationskonstante einer bestimmten Antikörper-Antigen-Wechselwirkung beziehen.Target binding ability, specificity and affinity (Kd, K _off and / or K _on ) can be determined by any routine method known in the art, e.g. By surface plasmon resonance (SPR). The term "Kd" as used herein is intended to refer to the equilibrium dissociation constant of a particular antibody-antigen interaction.

Gemäß einer Ausführungsform wird die Oberflächenplasmonresonanz (SPR) bei 25°C durchgeführt. Gemäß einer anderen Ausführungsform wird die SPR bei 37°C durchgeführt.In one embodiment, surface plasmon resonance (SPR) is performed at 25 ° C. In another embodiment, the SPR is performed at 37 ° C.

Gemäß einer Ausführungsform wird die SPR bei einem physiologischen pH-Wert wie etwa pH 7 oder bei pH 7,6 durchgeführt (z. B. unter Verwendung von Hepes-gepufferter Kochsalzlösung bei pH 7,6 (auch als HBS-EP bezeichnet)).In one embodiment, the SPR is performed at a physiological pH, such as pH 7, or at pH 7.6 (eg, using Hepes buffered saline at pH 7.6 (also referred to as HBS-EP)).

Gemäß einer Ausführungsform wird die SPR bei einer physiologischen Salzkonzentration, z. B. 150 mM NaCl, durchgeführt.According to one embodiment, the SPR is at a physiological salt concentration, z. B. 150 mM NaCl performed.

Gemäß einer Ausführungsform wird die SPR bei einer Tensidkonzentration von nicht mehr als 0,05 Vol.-%, z. B. in Gegenwart von P20 (Polysorbat 20; z. B. Tween-20^TM) bei 0,05% und 3 mM EDTA durchgeführt.In one embodiment, the SPR is at a surfactant concentration of not more than 0.05 vol .-%, z. In the presence of P20 (polysorbate 20, eg Tween-20 ^™ ) at 0.05% and 3 mM EDTA.

Bei einem Beispiel wird die SPR bei 25°C oder 37°C in einem Puffer bei einem pH-Wert von 7,6, 150 mM NaCl, 0,05% Tensid (z. B. P20) und 3 mM EDTA durchgeführt. Der Puffer kann 10 mM Hepes enthalten. Bei einem Beispiel wird die SPR bei 25°C oder 37°C in HBS-EP durchgeführt. HBS-EP ist von Teknova Inc (Kalifornien; Katalognummer H8022) erhältlich.In one example, the SPR is performed at 25 ° C or 37 ° C in a buffer at pH 7.6, 150 mM NaCl, 0.05% surfactant (eg P20) and 3 mM EDTA. The buffer may contain 10 mM Hepes. In one example, the SPR is performed at 25 ° C or 37 ° C in HBS-EP. HBS-EP is available from Teknova Inc (California, catalog number H8022).

Bei einem Beispiel wird die Affinität des Liganden (z. B. Antikörpers) unter Anwendung von SPR bestimmt, durch

• 1. Kuppeln von Anti-Maus-(oder einer anderen relevanten konstanten Region eines Antikörpers eines Menschen, einer Ratte oder eines nicht menschlichen Wirbeltieres artabgestimmt)IgG (z. B. Biacore^TM BR-1008-38) an einen Biosensor-Chip (z. B. GLM-Chip) wie z. B. durch primäre Aminkupplung;
• 2. Exponieren des Anti-Maus-IgG (bzw. des anderen artabgestimmten Antikörpers) gegenüber einem Test-IgG-Antikörper zum Einfangen von Testantikörper auf dem Chip;
• 3. Leiten des Testantigens über die Einfangoberfläche des Chips in einer Konzentration von 1024 nM, 256 nM, 64 nM, 16 nM, 4 nM mit einem 0 nM (d. h. nur Puffer); und
• 4. Bestimmen der Bindungsaffinität des Testantikörpers zu Testantigen durch Oberflächenplasmonresonanz, z. B. unter einer oben diskutierten SPR-Bedingung (z. B. bei 25°C in physiologischem Puffer). Die SPR kann unter Verwendung eines beliebigen Standard-SPR-Geräts wie von Biacore^TM oder unter Verwendung des ProteOn XPR36^TM (Bio-Rad^®) durchgeführt werden.

• 1. Coupling of anti-mouse (or other relevant constant region of an antibody of a human, rat, or non-human vertebrate species-matched) IgG (e.g., Biacore ^™ BR-1008-38) to a biosensor chip (e.g. B. GLM chip) such. By primary amine coupling;
• 2. exposing the anti-mouse IgG (or other art-matched antibody) to a test IgG antibody for capturing test antibody on the chip;
• 3. Passing the test antigen across the capture surface of the chip at a concentration of 1024 nM, 256 nM, 64 nM, 16 nM, 4 nM with a 0 nM (ie only buffer); and
• 4. Determine the binding affinity of the test antibody to test antigen by surface plasmon resonance, e.g. Under a SPR condition discussed above (eg at 25 ° C in physiological buffer). The SPR can be performed using any standard SPR device, such as by Biacore ^™ or using the XPR36 PROTEON ^TM (Bio-Rad ^®).

Die Regeneration der Einfangoberfläche kann mit 10 mM Glycin bei einem pH-Wert von 1,7 erfolgen. Hierdurch wird der eingefangene Antikörper entfernt und die Oberfläche kann für eine andere Wechselwirkung verwendet werden. Die Bindungsdaten können unter Anwendung von Standardverfahren an ein inhärentes 1:1-Modell angepasst werden, z. B. unter Anwendung eines der ProteOn XPR36^TM-Analyse-Software inhärenten Modells.The regeneration of the capture surface can be done with 10 mM glycine at a pH of 1.7. This removes the captured antibody and allows the surface to be used for another interaction. The binding data can be adapted to an inherent 1: 1 model using standard techniques, e.g. Using an inherent model of the ProteOn XPR36 ^™ analysis software.

Bei einem Beispiel befindet sich der erfindungsgemäße Ligand in einem medizinischen Behältnis, z. B. einer Ampulle, einer Spritze, einem IV-Behältnis oder einem Injektionsgerät (z. B. einem intraokularen oder intravitrealen Injektionsgerät). Bei einem Beispiel ist der Ligand in vitro, z. B. in einem sterilen Behältnis. Bei einem Beispiel stellt die Erfindung ein Kit bereit, das den erfindungsgemäßen Liganden, die Verpackung und Instruktionen zur Verwendung bei der Behandlung oder Prävention oder Diagnose einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens in einem Menschen umfasst. Bei einem Beispiel geht aus den Instruktionen hervor, dass der Mensch vor der Verabreichung des Liganden an den Menschen auf eine TOI-Sequenzvariante genotypisiert werden sollte. Bei einem Beispiel geht aus den Instruktionen hervor, dass der Mensch vor der Verabreichung des Liganden an den Menschen auf eine TOI-Variante phänotypisiert werden sollte. Bei einem Beispiel ist der Mensch chinesischer Ethnizität (z. B. Han), und die Instruktionen sind in Chinesisch (z. B. Mandarin). Bei einem Beispiel umfassen die Instruktionen Anweisungen zur Verabreichung von Alirocumab oder Evolocumab an diesen Menschen.In one example, the ligand of the invention is in a medical container, e.g. An ampoule, a syringe, an IV container or an injection device (eg an intraocular or intravitreal injection device). In one example, the ligand is in vitro, e.g. B. in a sterile container. In one example, the invention provides a kit comprising the ligand of the invention, packaging, and instructions for use in the treatment or prevention or diagnosis of TOI-mediated disease or TOI-mediated disease in a human. In one example, the instructions indicate that human should be genotyped to a TOI sequence variant prior to administration of the ligand to humans. In one example, the instructions indicate that human should be phenotyped for a TOI variant prior to administration of the ligand to humans. In one example, the person is of Chinese ethnicity (eg, Han), and the instructions are in Chinese (eg, Mandarin). In one example, the instructions include instructions for administering alirocumab or evolocumab to this human.

Die Erfindung betrifft die in den folgenden Aspekten ausgeführten Konzepte.

• 1. Einen gegen das Target of Interest (TOI) gerichteten Liganden zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens bei einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch das TOI vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen in verschiedenen polymorphen Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst, wobei der Ligand spezifisch an eine TOI-Variante bindet, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP (ersten SNP) mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst; wobei der Mensch eine TOI-codierende Nukleotidsequenz umfasst, die die SNP umfasst.
• 2. Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens bei einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen in verschiedenen polymorphen Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden an den Menschen umfasst, wobei der Ligand spezifisch an eine TOI-Variante bindet, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP (ersten SNP) mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst; wobei der Mensch eine TOI-codierende Nukleotidsequenz umfasst, die die SNP umfasst.
• 3. Die Verwendung eines Anti-Target-of-Interest-(TOI)-Liganden, der spezifisch an eine humane TOI-Variante bindet, welches eine durch eine einen SNP (ersten SNP) umfassende TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in einem Verfahren zum Targeting des TOI in einem Menschen zur Behandlung oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorkommt und der Mensch eine TOI-codierende Nukleotidsequenz umfasst, die den SNP umfasst.
• 4. Der Ligand, das Verfahren oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand eine konstante Region der schweren gamma-1-, -2-, -3- oder -4-Kette umfasst, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen zweiten SNP umfasst, und wobei der Mensch eine konstante Region der schweren gamma-1-, -2-, -3- bzw. -4-Kette umfasst, die den zweiten SNP umfasst.
• 5. Der Ligand, das Verfahren oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand eine variable Domäne eines humanen Antikörpers umfasst, erhalten durch die Rekombination eines humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments, wenn es sich bei den variablen Domänen um VH-Domänen handelt); und wobei das Genom des Menschen das humane V-Gensegment umfasst und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Antikörperdomänen umfassen, die sich von der Rekombination des humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments) ableiten.
• 6. Der Ligand, das Verfahren oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei jeder SNP für eine nicht-synonyme Aminosäurevariation codiert und/oder wobei jeder SNP für eine Aminosäure codiert, die auf dem Target oberflächenexponiert ist.
• 7. Der Ligand, das Verfahren oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei es sich bei dem Liganden um einen Antikörper oder ein Antikörperfragment handelt; oder wobei es sich bei dem Liganden um eine Falle handelt.
• 8. Der Ligand, das Verfahren oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei das Verfahren die Feststellung umfasst, dass der Mensch positiv für die TOI-Variante ist, wobei der Schritt der Feststellung gegebenenfalls die Feststellung umfasst, dass der Mensch positiv für eine Nukleotidvariante ist, die für die TOI-Variante codiert.
• 9. Der Ligand, das Verfahren oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand dazu fähig ist, spezifisch zwei oder mehr verschiedene TOI-Varianten zu binden, die jeweils durch eine Nukleotidsequenz codiert werden, die einen SNP mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst.
• 10. Der Ligand, das Verfahren oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei festgestellt wurde oder wird, dass die TOI-Variante in wenigstens zwei verschiedenen human ethnischen Populationen vorhanden ist.
• 11. Der Ligand, das Verfahren oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei es sich bei der kumulativen Humanallelhäufigkeit um die Häufigkeit in einer Datenbank natürlich vorkommender Sequenzen von wenigstens 15 verschiedenen human ethnischen Populationen handelt, die wenigstens 1000 Sequenzen umfasst.
• 12. Ein Kit zur Behandlung oder Prävention eines Leidens oder einer Krankheit, die durch ein wie in einem der vorhergehenden Aspekte angeführten TOI vermittelt wird, wobei das Kit den Liganden umfasst, wobei sich der erste SNP in wenigstens 2 verschiedenen ethnischen Populationen findet; und gegebenenfalls in Kombination mit einem Etikett oder einer Gebrauchsanleitung, zur Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens bei einem Menschen; wobei das Etikett bzw. die Anleitung gegebenenfalls eine durch eine Zulassungsbehörde erteilte Arzneimittelzulassungsnummer umfasst; wobei das Kit gegebenenfalls einen Injektionsstift oder ein IV-Behältnis umfasst, der bzw. das den Liganden umfasst.
• 13. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand eine humane CH1-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH1-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH1-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH1-Domäne umfassen.
• 14. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand eine humane CH2-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH2-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH2-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH2-Domäne umfassen.
• 15. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand eine humane CH3-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH3-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH3-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH3-Domäne umfassen.
• 16. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand eine humane CH4-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH4-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH4-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH4-Domäne umfassen.
• 17. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand eine humane Fc-Region einer schweren gamma-Kette codiert durch eine Fc-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der Fc-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-Fc-Region umfassen.
• 18. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der Aspekte 13 bis 17, wobei der Mensch als positiv für die Nukleotidsequenz der konstanten Region der schweren Kette genotypisiert wurde oder wird.
• 19. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der Aspekte 13 bis 18, wobei der Mensch als positiv für die konstante Domäne, CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc der schweren gamma-Kette phänotypisiert wurde oder wird.
• 20. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand eine konstante IGHG1*01-Region der humanen schweren gamma-1-Kette oder eine konstante IGHG2*01-Region der humanen schweren gamma-1-Kette umfasst.
• 21. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand Folgendes umfasst a) eine konstante Region der humanen schweren gamma-1-Kette, die ein Asp in Position 204, gezeigt in SEQ ID NO: 4, oder ein Leu in Position 206, gezeigt in SEQ ID NO: 4, umfasst und wobei der Mensch ein IGHG1*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-1-Kette umfassen, die ein Asp in Position 204, gezeigt in SEQ ID NO: 4, oder ein Leu in Position 206, gezeigt in SEQ ID NO: 4, umfassen; oder b) eine konstante Region der humanen schweren gamma-2-Kette, die eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Pro in Position 72, gezeigt in SEQ ID NO: 6, einem Asn in Position 75, gezeigt in SEQ ID NO: 6, einem Phe in Position 76, gezeigt in SEQ ID NO: 6, einem Val in Position 161, gezeigt in SEQ ID NO: 6, und einem Ala in Position 257, gezeigt in SEQ ID NO: 6, umfasst und wobei der Mensch ein IGHG2*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-2-Kette umfassen, die das ausgewählte Pro in Position 72, gezeigt in SEQ ID NO: 6, Asn in Position 75, gezeigt in SEQ ID NO: 6, Phe in Position 76, gezeigt in SEQ ID NO: 6, Val in Position 161, gezeigt in SEQ ID NO: 6, oder Ala in Position 257, gezeigt in SEQ ID NO: 6, umfassen; oder c) eine konstante Region der humanen schweren gamma-3-Kette, codiert durch ein IGHG3*01-Gensegment der konstanten Region, und wobei der Mensch ein IGHG3*01-Gensegment der konstanten Region umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-3-Kette umfassen, codiert durch das IGHG3*01-Gensegment der konstanten Region; oder (i) eine konstante Region der humanen schweren gamma-4-Kette, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfasst und wobei der Mensch ein IGHG4*01-Gensegment der konstanten Region der humanen schweren Kette umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen schweren gamma-4-Kette umfassen, die ein Leu in Position 189, gezeigt in SEQ ID NO: 73, oder ein Arg in Position 289, gezeigt in SEQ ID NO: 73, umfassen, und wobei die zweite Domäne von der konstanten Region der schweren gamma-4-Kette des Liganden umfasst ist.
• 22. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung oder das Kit nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei das TOI ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus den humanen TOIs: a) PCSK9 (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus einer Lipidstörung, Hyperlipoproteinämie, Hyperlipidämie; Dyslipidämie; Hypercholesterinämie, einem Herzanfall, einem Schlaganfall, koronarer Herzkrankheit, Atherosklerose, periphärer Gefäßkrankheit, Klaudikation (z. B. mit erhöhtem Cholesterin assoziierte Klaudikation), Typ-II-Diabetes, Bluthochdruck und einer Herz-Kreislauf-Krankheit oder einem Herz-Kreislauf-Leiden). b) IL6R (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus einer entzündlichen Krankheit oder einem entzündlichen Leiden, einer chronisch-entzündlichen Darmerkrankung (Inflammatory Bowel Disease, IBD), Morbus Crohn, rheumatoider Arthritis, Psoriasis, Bronchiolitis, Gingivitis, Transplantatabstoßung, allogener Transplantatabstoßung, Transplantat-gegen-Wirt-Reaktion (Graft-versus-Host Disease, GvHD), Asthma, Atemnotsyndrom des Erwachsenen (Adult Respiratory Distress Syndrome, ARDS), septischem Schock, Colitis ulcerosa, Sjögren-Syndrom, einer Entzündung der Atemwege, Morbus Castleman, Parodontitis, atopischer Dermatitis, systemischem Lupus erythematodes und koronarer Herzkrankheit), c) IL4Ra (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Asthma, COPD, einer chronisch-entzündlichen Darmerkrankung, einem fibrotischen Leiden, Allergie, Transplantatabstoßung, Überempfindlichkeitsreaktion vom Spättyp, Kontaktüberempfindlichkeit, Nasenpolypen und Sinusitis), d) VEGF-A (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus einem Augenleiden, Krebs; Angiogenese, Neovaskularisierung, diabetischer Retinopathie (DR), altersbedingter Makuladegeneration (Age-related Macular Degeneration, AMD), polypoidaler choroidaler Vaskulopathie (PCV), retinaler angiomatöser Proliferation (RAP), diabetischem Makulaödem (Diabetic Macular Edema, DME), venösem retinalem Gefäßverschluss (Retinal-Vein Occlusion, RVO) und Frühgeborenen-Retinopathie (Retinopathy of Prematurity, ROP)), e) PDGF-B (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus einem Augenleiden, Krebs; Angiogenese, Neovaskularisierung, diabetischer Retinopathie (DR), altersbedingter Makuladegeneration (Age-related Macular Degeneration, AMD), polypoidaler choroidaler Vaskulopathie (PCV), retinaler angiomatöser Proliferation (RAP), diabetischem Makulaödem (Diabetic Macular Edema, DME), venösem retinalem Gefäßverschluss (Retinal-Vein Occlusion, RVO) und Frühgeborenen-Retinopathie (Retinopathy of Prematurity, ROP)), f) PDGFR-B (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus einem Augenleiden, Krebs; Angiogenese, Neovaskularisierung, diabetischer Retinopathie (DR), altersbedingter Makuladegeneration (Age-related Macular Degeneration, AMD), polypoidaler choroidaler Vaskulopathie (PCV), retinaler angiomatöser Proliferation (RAP), diabetischem Makulaödem (Diabetic Macular Edema, DME), venösem retinalem Gefäßverschluss (Retinal-Vein Occlusion, RVO) und Frühgeborenen-Retinopathie (Retinopathy of Prematurity, ROP)), g) Angiopoietin (z. B. Ang-2) (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus einem Augenleiden, Krebs; Angiogenese, Neovaskularisierung, diabetischer Retinopathie (DR), altersbedingter Makuladegeneration (Age-related Macular Degeneration, AMD), polypoidaler choroidaler Vaskulopathie (PCV), retinaler angiomatöser Proliferation (RAP), diabetischem Makulaödem (Diabetic Macular Edema, DME), venösem retinalem Gefäßverschluss (Retinal-Vein Occlusion, RVO) und Frühgeborenen-Retinopathie (Retinopathy of Prematurity, ROP)), h) Nav1.7 (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Schmerzen, Juckreiz oder einer Kanalopathie, z. B. chronischen Schmerzen, neuropathischen Schmerzen, schmerzhafter diabetischer Neuropathie (Painful Diabetic Neuropathy, PDN), postherpetischer Neuropathie (Post-herpetic Neuropathy, PHN), Trigeminusneuralgie (Trigeminal Neuralgia, TN), von einer Rückenmarksverletzung herrührenden Schmerzen, von multipler Sklerose herrührenden Schmerzen, Phantomschmerzen, Schmerzen nach einem Schlaganfall, chronischen Rückenschmerzen, Osteoarthritisschmerzen, krebsassoziierten Schmerzen, mit HIV assoziierten Schmerzen, entzündlichen Schmerzen, primärer Erythromelalgie (Primary Erytheromelalgia, PE), Krankheit mit extremen paroxysmalen Schmerzen (Paroxysmal Extreme Pain Disorder, PEPD) oder kanalopathieassoziierter Schmerzunempfindlichkeit (Channelopathy-associated Insensitivity to Pain, CIP)), i) PD-L1 (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Krebs, einer Autoimmunkrankheit oder einem Autoimmunleiden, einer Virusinfektion und einer entzündlichen Krankheit oder einem entzündlichen Leiden, z. B. einem festen Tumor, Brustkrebs, Lungenkrebs (z. B. nicht-kleinzelligem Lungenkrebs), Dickdarmkrebs, Eierstockkrebs, Melanom (z. B. Melanom im Stadium IV), Blasenkrebs, Leberkrebs (z. B. hepatozellulärem Karzinom), Nierenkrebs, Speicheldrüsenkrebs, Magenkrebs, Gliom, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Schilddrüsenkrebs, Speicheldrüsenepithelzellenkrebs, Kopfkrebs und/oder Halskrebs, multiplem Melanom, T-Zellen-Lymphom, Hodgkin-Lymphom, Nierenzellkarzinom, Gebärmutterhalskrebs, Kolorektalkrebs, einem hämotologischen Neoplasma, metastatischem Kolorektalkrebs, Gebärmutter- oder Gebärmutterhalskrebs, einer Leukämie (z. B. akuter myeloischer Leukämie), diffusem großzelligem B-Zellen-Lymphom, Follikelzentrumslymphom, Prostatakrebs, Merkelzellkarzinom, einer HIV-Infektion, einer Hepatitis-C-Infektion oder einer Ebola-Infektion). j) PD-1 (wobei es sich bei der Krankheit bzw. dem Leiden gegebenenfalls um eine Krebserkrankung handelt, z. B. ausgewählt aus Nierenzellkarzinom; hämatologischem Neoplasma; Melanom im Stadium IV; nicht-kleinzelligem Lungenkrebs; metastatischem Magenkrebs; Brustkrebs; einem festen Tumor; Blasenkrebs; Kopf- und Halskrebs, Kolorektalkrebs, Glioblastom, Magenkrebs, Non-Hodgkin-Lymphom, Hodgkin-Lymphom, einem follikulären Lymphom, Gebärmutterhalskrebs, myeloischer Leukämie (z. B. akuter myeloischer Leukämie und chronischer myeloischer Leukämie), k) BMP6 (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Anämie; Eisenmangel; Anämie bei chronischer Entzündung (Anaemia of Chronic Inflammation, ACI); Anämie bei chronischer Erkrankung (Anaemia of Chronic Disease, ACD); krebsassoziierter Anämie, einem Nierenleiden oder GvHD; Hämochromatose und eisenrefraktärer Eisenmangelanämie (Iron-Refractory Iron Deficiency Anaemia, IRIDA)), l) Hämojuvelin (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Anämie; Eisenmangel; Anämie bei chronischer Entzündung (Anaemia of Chronic Inflammation, ACI); Anämie bei chronischer Erkrankung (Anaemia of Chronic Disease, ACD); krebsassoziierter Anämie, einem Nierenleiden oder GvHD; Hämochromatose und eisenrefraktärer Eisenmangelanämie (Iron-Refractory Iron Deficiency Anaemia, IRIDA)), m) Hepcidin (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Anämie; Eisenmangel; Anämie bei chronischer Entzündung (Anaemia of Chronic Inflammation, ACI); Anämie bei chronischer Erkrankung (Anaemia of Chronic Disease, ACD); krebsassoziierter Anämie, einem Nierenleiden oder GvHD; Hämochromatose und eisenrefraktärer Eisenmangelanämie (Iron-Refractory Iron Deficiency Anaemia, IRIDA)), n) Ferroportin (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Anämie; Eisenmangel; Anämie bei chronischer Entzündung (Anaemia of Chronic Inflammation, ACI); Anämie bei chronischer Erkrankung (Anaemia of Chronic Disease, ACD); krebsassoziierter Anämie, einem Nierenleiden oder GvHD; Hämochromatose und eisenrefraktärer Eisenmangelanämie (Iron-Refractory Iron Deficiency Anaemia, IRIDA)), o) TMPRSS6 (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Anämie; Eisenmangel; Anämie bei chronischer Entzündung (Anaemia of Chronic Inflammation, ACI); Anämie bei chronischer Erkrankung (Anaemia of Chronic Disease, ACD); krebsassoziierter Anämie, einem Nierenleiden oder GvHD; Hämochromatose und eisenrefraktärer Eisenmangelanämie (Iron-Refractory Iron Deficiency Anaemia, IRIDA)), p) Transferrin (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Anämie; Eisenmangel; Anämie bei chronischer Entzündung (Anaemia of Chronic Inflammation, ACI); Anämie bei chronischer Erkrankung (Anaemia of Chronic Disease, ACD); krebsassoziierter Anämie, einem Nierenleiden oder GvHD; Hämochromatose und eisenrefraktärer Eisenmangelanämie (Iron-Refractory Iron Deficiency Anaemia, IRIDA)) und q) hereditäre-Hämochromatose-Protein (Human Hemochromatosis Protein, HFE) (wobei die Krankheit bzw. das Leiden gegebenenfalls ausgewählt ist aus Anämie; Eisenmangel; Anämie bei chronischer Entzündung (Anaemia of Chronic Inflammation, ACI); Anämie bei chronischer Erkrankung (Anaemia of Chronic Disease, ACD); krebsassoziierter Anämie, einem Nierenleiden oder GvHD; Hämochromatose und eisenrefraktärer Eisenmangelanämie (Iron-Refractory Iron Deficiency Anaemia, IRIDA)).

• A target of interest (TOI) directed ligand for use in a method of treating or preventing a disease or condition in a human, wherein the disease or condition is mediated by the TOI, wherein the TOI is administered to humans in humans various polymorphic variants, the method comprising administering the ligand to a human, wherein the ligand specifically binds to a TOI variant encoded by a nucleotide sequence encoding an SNP (first SNP) having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or with a total cumulative frequency of less than 50%; wherein the human comprises a TOI-encoding nucleotide sequence comprising the SNP.
• 2. A method of treating or preventing a disease or condition in a human, wherein the disease is mediated by a target of interest (TOI), wherein the TOI is present in humans in various polymorphic variants, wherein the method the administration of an anti-TOI ligand to a human, wherein the ligand binds specifically to a TOI variant encoded by a nucleotide sequence containing an SNP (first SNP) with a cumulative human all-time less than 50% and / or with a total cumulative frequency of less than 50%; wherein the human comprises a TOI-encoding nucleotide sequence comprising the SNP.
• 3. The use of an anti-target-of-interest (TOI) ligand that specifically binds to a human TOI variant comprising a TOI nucleotide sequence comprising a SNP (first SNP) with a cumulative human allele frequency of less than In the manufacture of a medicament for use in a method of targeting the TOI in a human for treating or preventing a TOI-mediated disease or a TOI-mediated amino acid sequence, which comprises at least 50% and / or less than 50% total typhoid In the past, the TOI exists in humans as distinct polymorphic variants and the human comprises a TOI-encoding nucleotide sequence comprising the SNP.
• 4. The ligand, method or use of any one of the preceding aspects wherein the ligand comprises a gamma-1, -2, -3 or -4 heavy chain constant region which is replaced by a Nucleotide sequence comprising a second SNP, and wherein the human comprises a gamma-1, -2, -3, or -4 heavy chain constant region comprising the second SNP.
• 5. The ligand, method or use of any one of the preceding aspects, wherein the ligand comprises a human antibody variable domain obtained by the recombination of a human V gene segment and a human J gene segment (and optionally a human D gene segment if the variable domains are VH domains); and wherein the human genome comprises the human V gene segment and / or human expressing antibodies comprising antibody variable domains resulting from recombination of the human V gene segment and a human J gene segment (and optionally a human D gene segment) derived.
• 6. The ligand, method or use of any one of the preceding aspects, wherein each SNP encodes a non-synonymous amino acid variation and / or wherein each SNP encodes an amino acid surface-exposed on the target.
• 7. The ligand, method or use of any one of the preceding aspects, wherein the ligand is an antibody or an antibody fragment; or wherein the ligand is a trap.
• The ligand, method or use of any one of the preceding aspects, the method comprising determining that the human is positive for the TOI variant, wherein the step of determining optionally comprises determining that the human is positive for a TOI variant Nucleotide variant that codes for the TOI variant.
• The ligand, method or use of any of the preceding aspects, wherein the ligand is capable of specifically binding two or more different TOI variants, each encoded by a nucleotide sequence encoding an SNP having a cumulative human allele frequency less than 50% and / or with a total cumulative typhus of less than 50%.
• 10. The ligand, method or use of any one of the preceding aspects, wherein it has been found or believed that the TOI variant is present in at least two different human ethnic populations.
• 11. The ligand, method or use of any one of the preceding aspects, wherein the cumulative human all-time frequency is the frequency in a database of naturally occurring sequences from at least 15 different human ethnic populations comprising at least 1000 sequences.
• A kit for the treatment or prevention of a disease or disease mediated by a TOI as recited in any preceding aspect, wherein the kit comprises the ligand, wherein the first SNP is found in at least two distinct ethnic populations; and optionally in combination with a label or instructions for use, for the treatment and / or prevention of the disease or condition in a human; where appropriate, the label or instruction includes a drug approval number issued by an approval authority; wherein the kit optionally comprises an injection pen or an IV container comprising the ligand.
• 13. The ligand, method, application or kit of any one of the preceding aspects, wherein the ligand comprises a human gamma heavy chain CH1 domain encoded by a CH1 nucleotide sequence; and wherein the human genome is a nucleotide sequence of a constant region a heavy gamma chain identical to the CH1 nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH1 domain.
• 14. The ligand, method, application or kit of any one of the preceding aspects, wherein the ligand comprises a human heavy Gamma CH2 domain encoded by a CH2 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH2 nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH2 domain.
• 15. The ligand, method, application or kit of any one of the preceding aspects, wherein the ligand comprises a human heavy Gamma CH3 domain encoded by a CH3 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH3 nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH3 domain.
• 16. The ligand, method, application or kit of any one of the preceding aspects, wherein the ligand comprises a human gamma heavy CH4 domain encoded by a CH4 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH4 nucleotide sequence, and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH4 domain.
• 17. The ligand, method, application or kit of any one of the preceding aspects, wherein the ligand comprises a human Gamma heavy chain Fc region encoded by an Fc nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the Fc nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma Fc region.
• 18. The ligand, method, application or kit of any one of aspects 13 to 17, wherein the human is or has been genotyped as positive for the nucleotide sequence of the heavy chain constant region.
• 19. The ligand, method, application or kit of any one of aspects 13 to 18, wherein the human is or has been phenotyped as positive for the gamma heavy chain constant domain, CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc.
• 20. The ligand, method, application or kit of any one of the preceding aspects, wherein the ligand comprises a human heavy gamma-1 heavy chain constant IGHG1 * 01 region or a human heavy gamma constant human IgHG2 * 01 region. 1 chain includes.
• 21. The ligand, method, application or kit of any one of the preceding aspects, wherein the ligand comprises a) a human gamma-1 heavy chain constant region containing an Asp at position 204 shown in SEQ ID NO 4, or a Leu at position 206 shown in SEQ ID NO: 4, and wherein the human comprises a human heavy chain constant region IGHG1 * 01 gene segment or human expresses antibodies, the human heavy gamma constant regions 1 chain comprising an Asp at position 204 shown in SEQ ID NO: 4 or a Leu at position 206 shown in SEQ ID NO: 4; or b) a human heavy gamma-2 heavy chain constant region comprising an amino acid selected from the group consisting of a pro in position 72 shown in SEQ ID NO: 6, an asn in position 75 shown in SEQ ID NO: 6, a Phe in position 76, shown in SEQ ID NO: 6, a Val in position 161, shown in SEQ ID NO: 6, and an Ala in position 257, shown in SEQ ID NO: 6, and wherein human comprises a human heavy chain constant region IGHG2 * 01 gene segment or expressing antibodies comprising human heavy gamma 2 chain constant regions containing the selected pro in position 72 shown in SEQ ID NO: 6, Asn in position 75, shown in SEQ ID NO: 6, Phe in position 76, shown in SEQ ID NO: 6, Val in position 161, shown in SEQ ID NO: 6, or Ala in position 257, shown in SEQ ID NO: 6, include; or c) a human gamma-3 heavy chain constant region encoded by an IgHG3 * 01 constant region gene segment, and wherein the human comprises an IgHG3 * 01 constant region gene segment or human expresses antibodies, the constant regions human heavy gamma-3 chain encoded by the constant region IGHG3 * 01 gene segment; or (i) a human gamma 4 heavy chain constant region comprising a Leu at position 189 shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg at position 289 shown in SEQ ID NO: 73, and wherein Human comprises a human heavy chain constant region IGHG4 * 01 gene segment or human expressing antibodies comprising human gamma 4 heavy chain constant regions comprising a leu of position 189 shown in SEQ ID NO: 73, or an Arg at position 289 shown in SEQ ID NO: 73, and wherein the second domain is comprised of the gamma 4 heavy chain constant region of the ligand.
• 22. The ligand, method, application or kit of any one of the preceding aspects, wherein the TOI is selected from the group consisting of the human TOIs: a) PCSK9 (wherein the disease or condition is optionally selected from a lipid disorder , Hyperlipoproteinemia, hyperlipidemia, dyslipidemia, hypercholesterolemia, heart attack, stroke, coronary heart disease, atherosclerosis, peripheral vascular disease, claudication (eg, hypercholesterolemia associated with cholesterol), type II diabetes, hypertension and cardiovascular disease or a cardiovascular disease). b) IL6R (the disease or condition being optionally selected from an inflammatory disease or an inflammatory condition, inflammatory bowel disease (IBD), Crohn's disease, rheumatoid arthritis, psoriasis, bronchiolitis, gingivitis, transplant rejection, allograft rejection, graft-versus-host disease (GvHD), asthma, adult respiratory distress syndrome (ARDS), septic shock, ulcerative colitis, Sjögren syndrome, respiratory tract inflammation, Castleman's disease, periodontitis, atopic dermatitis, systemic lupus erythematosus and coronary heart disease); c) IL4Ra (wherein the disease or condition is optionally selected from asthma, COPD, a chronic inflammatory bowel disease, a fibrotic disorder, allergy, graft rejection, hypersensitivity reaction late type, contact hypersensitivity, nasal poi lypen and sinusitis), d) VEGF-A (wherein the disease or condition is optionally selected from an eye condition, cancer; Angiogenesis, neovascularization, diabetic retinopathy (DR), age-related macular degeneration (AMD), polypoidal choroidal vasculopathy (PCV), retinal angiomatous proliferation (RAP), diabetic macular edema (DME), venous retinal vein occlusion (RVO) and retinopathy of prematurity (ROP)), e) PDGF-B (wherein the disease or condition is optionally selected from an eye disorder, cancer, angiogenesis, neovascularization, diabetic Retinopathy (DR), age-related macular degeneration (AMD), polypoidal choroidal vasculopathy (PCV), retinal angiomatous proliferation (RAP), diabetic macular edema (DME), venous retinal vascular occlusion (retinal vein occlusion, RVO) and Retinopathy of Prematurity (ROP), f) PDGFR-B (the disease or condition being optionally selected from an eye disorder, cancer, angiogenesis, neovascularization, diabetic retinopathy (DR), age-related macular degeneration ( Age-related macular degeneration, AMD), polypoidal choroidal vasculopathy (PCV), retinal angiomatous proliferation (RAP), diabetic macular edema (DME), venous retinal vascular occlusion (RVO) and retinopathy of prematurity (ROP)), g) angiopoietin (e.g. Ang-2) (the disease or condition being optionally selected from eye disorder, cancer, angiogenesis, neovascularization, diabetic retinopathy (DR), age-related macular degeneration (AMD), polypoidal choroidal vasculopathy (PCV ), Retinal Angiomatous Proliferation (RAP), Diabetic Macular Edema (DME), Retinal Vein Occlusion (RVO), Retinopathy of Prematurity (ROP), h) Nav1.7 (where the disease or condition is optionally selected from pain, itching, or ductopathy, e.g., chronic pain, neuropathic pain, painful diabetic neuropathy (PDN), postherpetic neuropathy (PHN), trigeminal neuralgia (Trigeminal Neuralgia, TN), spinal cord injury pain, multiple sclerosis derived limb pain, post-stroke pain, chronic back pain, osteoarthritis pain, cancer-associated pain, HIV-associated pain, inflammatory pain, primary erythromelalgia (PE), extreme paroxysmal pain (PEPD), or analgesia associated with analgesia (Channelopathy-associated Insensitivity to Pain, CIP); i) PD-L1 (wherein the disease or condition is optionally selected from cancer, an autoimmune disease or an autoimmune disease, a viral infection and an inflammatory disease or an inflammatory condition, e.g. A solid tumor, breast cancer, lung cancer (e.g., non-small cell lung cancer), colon cancer, ovarian cancer, melanoma (e.g., stage IV melanoma), bladder cancer, liver cancer (e.g., hepatocellular carcinoma), kidney cancer, Salivary gland cancer, gastric cancer, glioma, pancreatic cancer, thyroid cancer, salivary gland epithelial cancer, head cancer and / or cervical cancer, multiple melanoma, T-cell lymphoma, Hodgkin's lymphoma, renal cell carcinoma, cervix cancer, colorectal cancer, a hematological neoplasm, metastatic colorectal cancer, cervical or cervical cancer Leukemia (eg, acute myeloid leukemia), diffuse large B-cell lymphoma, follicular center lymphoma, prostate cancer, Merkel cell carcinoma, HIV infection, hepatitis C infection, or Ebola infection). j) PD-1 (where the disease is possibly a cancer, eg selected from renal cell carcinoma, haematological neoplasm, stage IV melanoma, non-small cell lung cancer, metastatic gastric cancer, breast cancer; Tumor, bladder cancer, head and neck cancer, colorectal cancer, glioblastoma, gastric cancer, non-Hodgkin's lymphoma, Hodgkin's lymphoma, follicular lymphoma, cervical cancer, myeloid leukemia (eg acute myeloid leukemia and chronic myeloid leukemia), k) BMP6 (the disease or condition being optionally selected from anemia, iron deficiency, anemia of chronic inflammation (ACI), anemia of chronic disease (ACD), cancer-associated anemia, a kidney disease or GvHD; Haemochromatosis and iron-refractory iron deficiency anemia (IRIDA)), l) hemojuvelin (the disease or condition being optionally selected from anemia, iron deficiency, anemia of chronic inflammation (ACI), anemia in Anemia of Chronic Disease (ACD), cancer-associated anemia, kidney disease or GVHD, hemochromatosis and iron-refractory iron deficiency anemia (IRIDA)), m) hepcidin (where the disease or condition is optionally selected from Anemia; iron deficiency; anemia of chronic inflammation (ACI); anemia of chronic disease (ACD); cancer-associated anemia, kidney disease or GVHD; hemochromatosis and iron refractory iron deficiency anemia (Iron-Refractory Iron Deficiency Anemia, IRIDA)), n) ferroportin (the disease or the suffering ge optionally selected from anemia; Iron deficiency; Anemia of Chronic Inflammation (ACI); Anemia in Chronic Disease (ACD); cancer-associated anemia, kidney disease or GvHD; Hemochromatosis and Iron-Refractory Iron Deficiency Anemia (IRIDA)), o) TMPRSS6 (the disease or condition being optionally selected from anemia, iron deficiency, anemia of chronic inflammation (ACI), anemia in Anemia of Chronic Disease (ACD), cancer-associated anemia, kidney disease or GVHD, hemochromatosis and iron-refractory iron deficiency anemia (IRIDA), p) transferrin (where the disease or condition is selected if appropriate) Anemia; iron deficiency; anemia of chronic inflammation (ACI); anemia of chronic disease (ACD); cancer-associated anemia, kidney disease or GVHD; hemochromatosis and iron refractory iron deficiency anemia (Iron-Refractory Iron Deficiency Anemia, IRIDA)) and q) hereditary hemochromatosis protein (Human Hemochr omatosis protein, HFE) (the disease or condition being optionally selected from anemia; Iron deficiency; Anemia of Chronic Inflammation (ACI); Anemia in Chronic Disease (ACD); cancer-associated anemia, kidney disease or GvHD; Hemochromatosis and Iron Refractory Iron Deficiency Anemia (IRIDA)).

Die Erfindung betrifft die in den folgenden Klauseln ausgeführten Konzepte.The invention relates to the concepts set out in the following clauses.

Klausel 1 Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst:

• a. Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden an den Menschen zum Targeting einer TOI-Variante in dem Menschen und zur Behandlung oder Prävention (z. B. um wenigstens 40, 50, 60, 70, 80, 90 oder 95%) der Krankheit bzw. des Leidens, wobei das TOI in dem Menschen durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% codiert wird und/oder wobei das TOI in dem Menschen durch eine Nukleotidsequenz mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird; wobei der Mensch vor Schritt (a) als positiv für die Nukleotidsequenz genotypisiert wurde oder wird oder als positiv für die TOI-Variante genotypisiert wurde oder wird oder das Verfahren vor Schritt (a) die Genotypisierung des Menschen als positiv für die Nukleotidsequenz oder die Phänotypisierung des Menschen als positiv für die TOI-Variante umfasst.

• a. Administering an anti-TOI ligand to a human for targeting a TOI variant in the human and treating or preventing (eg, by at least 40, 50, 60, 70, 80, 90 or 95%) the disease or the condition wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence having a total total sexuality of less than 50%; wherein the human was or is genotyped positive for the nucleotide sequence prior to step (a) or is or will be genotyped as positive for the TOI variant or the method prior to step (a) human genotyping as positive for the nucleotide sequence or phenotyping of the human Includes people as positive for the TOI variant.

Gemäß einem beliebigen Aspekt, einer beliebigen Konfiguration, einem beliebigen Beispiel, einer beliebigen Ausführungsform, einer beliebigen Klausel oder einem beliebigen Konzept lassen sich hier Häufigkeiten unter Anwendung der Bioinformatik bestimmen.According to any aspect, configuration, example, embodiment, clause, or concept, frequencies may be determined using bioinformatics.

Gemäß einem beliebigen Aspekt, einer beliebigen Konfiguration, einem beliebigen Beispiel, einer beliebigen Ausführungsform, einer beliebigen Klausel oder einem beliebigen Konzept lassen sich hier Häufigkeiten unter Bezug auf eine Datenbank mit wenigstens 1000 oder 2000 humanen Sequenzen bestimmen.In accordance with any aspect, configuration, example, embodiment, clause, or concept, frequencies may be determined with reference to a database having at least 1000 or 2000 human sequences.

Gemäß einem beliebigen Aspekt, einer beliebigen Konfiguration, einem beliebigen Beispiel, einer beliebigen Ausführungsform, einer beliebigen Klausel oder einem beliebigen Konzept bedeutet ”heterozygote humane Genotyphäufigkeit” hier die kumulative Häufigkeit aller Genotypen in der Probe oder Datenbank oder in Menschen, bei denen die seltene Allelvariante einmal vorkommt und ein anderes Allel einmal vorkommt (heterozygoter Zustand), z. B. Genotyp in der 1000-Genomes-Datenbank.According to any aspect, configuration, example, embodiment, clause, or concept, "heterozygous human genotyping" herein means the cumulative frequency of all genotypes in the sample or database or in humans where the rare allelic variant once occurs and another allele occurs once (heterozygous state), z. B. Genotype in the 1000 Genomes Database.

Gemäß einem beliebigen Aspekt, einer beliebigen Konfiguration, einem beliebigen Beispiel, einer beliebigen Ausführungsform, einer beliebigen Klausel oder einem beliebigen Konzept bedeutet ”homozygote humane Genotyphäufigkeit” hier die kumulative Häufigkeit von zwei Vorkommen der Allelvariante (homozygoter Zustand), z. B. Genotyp in der 1000-Genomes-Project-Datenbank. According to any aspect, configuration, example, embodiment, clause, or concept, "homozygous human genotype frequency" herein means the cumulative frequency of two occurrences of the allelic variant (homozygous state), e.g. B. Genotype in the 1000 Genomes Project Database.

Gemäß einem beliebigen Aspekt, einer beliebigen Konfiguration, einem beliebigen Beispiel, einer beliebigen Ausführungsform, einer beliebigen Klausel oder einem beliebigen Konzept bedeutet ”humane Genotypgesamthäufigkeit” hier die Gesamthäufigkeit heterozygoter plus homozygoter humaner Genotypen.According to any aspect, configuration, example, embodiment, clause, or concept, "total human genotype" herein means the total abundance of heterozygous plus homozygous human genotypes.

Gemäß einem beliebigen Aspekt, einer beliebigen Konfiguration, einem beliebigen Beispiel, einer beliebigen Ausführungsform, einer beliebigen Klausel oder einem beliebigen Konzept bedeutet ”kumulative humane Allelhäufigkeit” hier die Gesamtzahl aller Vorkommen der Allelvariante (z. B. SNP) in der Probe oder Datenbank oder in Menschen, z. B. in der 1000-Genomes-Project-Datenbank.According to any aspect, configuration, example, embodiment, clause, or concept, "cumulative human allele frequency" here means the total number of alleles of the allelic variant (e.g., SNP) in the sample or database or in humans, e.g. In the 1000 Genomes Project database.

Klausel 2: Das Verfahren nach Klausel 1, wobei vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur Bindung an die TOI-Variante fähig ist, z. B. mit einer unten offenbarten Affinität (Kd).Clause 2: The method of clause 1, wherein prior to step (a), it has been or is determined that the ligand is capable of binding to the TOI variant, e.g. With an affinity (Kd) disclosed below.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden um eine das TOI neutralisierende Substanz (bzw. er wurde als eine solche bestimmt). Bei einem Beispiel erfolgt die Bestimmung in einem Menschen (z. B. in einer klinischen Studie). Bei einem Beispiel erfolgt die Bestimmung in einem nicht menschlichen Lebewesen, z. B. in einer Maus, einer Ratte, einem Kaninchen, einem Schwein, einem Hund, einem Schaf oder einem nicht menschlichen Primaten (z. B. einem Javaneraffen, einem Rhesusaffen oder einem Pavian).In one example, the ligand is (or was determined to be) the TOI neutralizing substance. In one example, the determination is in a human (eg, in a clinical trial). In one example, the determination is in a non-human animal, e.g. In a mouse, a rat, a rabbit, a pig, a dog, a sheep, or a non-human primate (e.g., a cynomolgus monkey, a rhesus monkey, or a baboon).

Klausel 3: Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst:

• a. die Verabreichung eines auf eine TOI-Variante in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden und die Behandlung oder Prävention dieser Krankheit bzw. dieses Leidens (z. B. um wenigstens 40, 50, 60, 70, 80, 90 oder 95%), wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz codiert wird, die eine kumulative humane Allelhäufigkeit von weniger als 50% hat und/oder wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird; wobei
• b. vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur Bindung an die TOI-Variante fähig ist, z. B. mit einer unten offenbarten Affinität (Kd).

• a. the administration of an anti-TOI ligand targeting a TOI variant in humans and the treatment or prevention of that disease or condition (e.g., by at least 40, 50, 60, 70, 80, 90 or 95%) wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence having a total typhoid frequency of less than 50%; in which
• b. prior to step (a), it has been or is determined that the ligand is capable of binding to the TOI variant, e.g. With an affinity (Kd) disclosed below.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden um eine das TOI neutralisierende Substanz (bzw. er wurde als eine solche bestimmt). Bei einem Beispiel erfolgt die Bestimmung in einem Menschen (z. B. in einer klinischen Studie). Bei einem Beispiel erfolgt die Bestimmung in einem nicht menschlichen Lebewesen, z. B. in einer Maus, einer Ratte, einem Kaninchen, einem Schwein, einem Hund, einem Schaf oder einem nicht menschlichen Primaten (z. B. einem Javaneraffen, einem Rhesusaffen oder einem Pavian).In one example, the ligand is (or was determined to be) the TOI neutralizing substance. In one example, the determination is in a human (eg, in a clinical trial). In one example, the determination is in a non-human animal, e.g. In a mouse, a rat, a rabbit, a pig, a dog, a sheep, or a non-human primate (e.g., a cynomolgus monkey, a rhesus monkey, or a baboon).

Klausel 4: Das Verfahren nach Klausel 3, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz umfasst, die für die TOI-Variante codiert; und vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass die Nukleotidsequenz eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% aufweist.Clause 4: The method of clause 3, wherein the human genome comprises a nucleotide sequence encoding the TOI variant; and prior to step (a), it has been or is determined that the nucleotide sequence has a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%.

Die TOI-Variante ist nicht die, die am häufigsten vorkommt.The TOI variant is not the one that occurs most often.

Klausel 5: Das Verfahren nach Klausel 3 or 4, wobei der Mensch vor Schritt (a) als positiv für die Nukleotidsequenzvariante genotypisiert wurde oder wird oder das Verfahren vor Schritt (a) die Genotypisierung des Menschen als positiv für die Nukleotidsequenzvariante umfasst.Clause 5: The method of clause 3 or 4, wherein the human was or is genotyped positive for the nucleotide sequence variant prior to step (a) or the method prior to step (a) comprises human genotyping as positive for the nucleotide sequence variant.

Klausel 6: Das Verfahren nach einer der vorhergehenden Klauseln, wobei der Mensch vor Schritt (a) als positiv für die TOI-Variante phänotypisiert wurde oder wird oder das Verfahren vor Schritt (a) die Phänotypisierung des Menschen als positiv für die Nukleotidsequenzvariante umfasst.Clause 6: The method of any one of the preceding clauses, wherein the human was or is phenotyped positive for the TOI variant prior to step (a) or the method prior to step (a) comprises human phenotyping as positive for the nucleotide sequence variant.

Klausel 7: Das Verfahren nach einer der vorhergehenden Klauseln, wobei die Häufigkeit unter 10 oder 15% (z. B. von 1 bis 10%) beträgt.Clause 7: The method of any preceding clause, wherein the frequency is less than 10 or 15% (eg, from 1 to 10%).

Gemäß einer Ausführungsform beträgt die kumulative humane Allelhäufigkeit 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 20% oder 1 bis 15% oder 1 bis 10%.In one embodiment, the cumulative human allele frequency is 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 20% or 1 to 15% or 1 to 10%.

Gemäß einer Ausführungsform beträgt die humane Genotypgesamthäufigkeit 35, 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 25%, 1 bis 20%, 1 bis 15%, 1 bis etwa 15%, 1 bis 10%, 1 bis etwa 10% oder 1 bis 5% oder 1 bis etwa 5%.In one embodiment, the total human genotype is 35, 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 25%, 1 to 20%, 1 to 15%, 1 to about 15%, 1 to 10%, 1 to about 10% or 1 to 5% or 1 to about 5%.

Klausel 8: Das Verfahren nach einer der vorhergehenden Klauseln, wobei der Ligand dazu fähig ist, zwei oder mehr verschiedene TOI-Varianten zu binden, die jeweils durch eine Nukleotidsequenz codiert werden, die eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% (z. B. von 1 bis 10%) und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% (z. B. von 1 bis 20%) aufweisen. Clause 8: The method of any one of the preceding clauses, wherein the ligand is capable of binding two or more different TOI variants, each encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% (e.g. from 1 to 10%) and / or have a total total lotus frequency of less than 50% (eg, from 1 to 20%).

Gemäß einer Ausführungsform beträgt die kumulative humane Allelhäufigkeit der TOI-Variante jeweils 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 20% oder 1 bis 15% oder 1 bis 10%.In one embodiment, the cumulative human allele frequency of the TOI variant is 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 20% or 1 to 15% or 1 to 10%.

Gemäß einer Ausführungsform beträgt die humane Genotypgesamthäufigkeit der TOI-Variante jeweils 35, 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 25%, 1 bis 20%, 1 bis 15%, 1 bis etwa 15%, 1 bis 10%, 1 bis etwa 10% oder 1 bis 5% oder 1 bis etwa 5%.In one embodiment, the total human genotype of the TOI variant is 35, 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 25%, 1 to 20%, 1 to 15%, 1 to about 15%, 1 to 10%, 1 to about 10% or 1 to 5% or 1 to about 5%.

Klausel 9: Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst:

• a. die Verabreichung eines auf eine TOI-Variante in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden und die Behandlung oder Prävention (z. B. um wenigstens 40, 50, 60, 70, 80, 90 oder 95%) dieser Krankheit bzw. dieses Leidens, wobei es sich bei dem TOI in dem Menschen um eine Variante handelt, die von einer Nukleotidsequenz codiert wird, die eine kumulative humane Allelhäufigkeit von mehr als 50% (d. h. die höchste Häufigkeit) hat und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von mehr als 50% (d. h. die höchste Häufigkeit) hat; wobei
• b. der Mensch vor Schritt (a) als negativ für eine Nukleotidsequenzvariante mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird; oder als negativ für eine durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte TOI-Variante phänotypisiert wurde oder wird; oder das Verfahren vor Schritt (a) die Genotypisierung des Menschen als negativ für eine Nukleotidsequenzvariante mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder die Phänotypisierung des Menschen als negativ für die durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte TOI-Variante umfasst.

• a. the administration of an anti-TOI ligand targeting a TOI variant in humans and the treatment or prevention (eg, by at least 40, 50, 60, 70, 80, 90, or 95%) of that disease or condition in which the TOI in the human is a variant encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of greater than 50% (ie the highest frequency) and / or a total typhoid frequency greater than 50% ( ie the highest frequency); in which
• b. the human was or is genotyped prior to step (a) as negative for a nucleotide sequence variant having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total total sexuality of less than 50%; or has been phenotyped as being negative for a TOI variant encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or having a total heterogeneity frequency of less than 50%; or the method prior to step (a) human genotyping as negative for a nucleotide sequence variant having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or total totalotic typhus less than 50%, or human phenotyping negative for that by a nucleotide sequence a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or with a total typhus totality of less than 50% encoded TOI variant.

Gemäß einer Ausführungsform beträgt in (a) die kumulative Humanallelhäufigkeit 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 oder 90 oder mehr, jedoch weniger als 95, 96, 97, 98, 99 oder 100% (z. B. im Bereich von 51 bis 80%).In one embodiment, in (a), the cumulative human all-time frequency is 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 or 90 or more but less than 95, 96, 97, 98, 99 or 100% (e.g. Range from 51 to 80%).

Gemäß einer Ausführungsform beträgt in (a) die Gesamthumangenotyphäufigkeit 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 oder 90 oder mehr, jedoch weniger als 95, 96, 97, 98, 99 oder 100% (z. B. im Bereich von 51 bis 80%).In one embodiment, in (a) the total cumulative typhus is 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, or 90 or greater, but less than 95, 96, 97, 98, 99, or 100% (e.g., in the from 51 to 80%).

Gemäß einer Ausführungsform beträgt in (b) die kumulative Humanallelhäufigkeit 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 20% oder 1 bis 15% oder 1 bis 10%.In one embodiment, in (b), the cumulative human all-time frequency is 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 20% or 1 to 15% or 1 to 10%.

Gemäß einer Ausführungsform beträgt in (b) die humane Genotypgesamthäufigkeit 35, 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 25%, 1 bis 20%, 1 bis 15%, 1 bis etwa 15%, 1 bis 10%, 1 bis etwa 10% oder 1 bis 5% oder 1 bis etwa 5%.In one embodiment, in (b), the total human genotype is 35, 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 25%, 1 to 20%, 1 to 15%, 1 to about 15%, 1 to 10%, 1 to about 10% or 1 to 5% or 1 to about 5%.

Klausel 10: Das Verfahren nach Klausel 9, wobei vor Schritt (a) der Mensch als positiv für die häufigste TOI-Variante phänotypisiert oder für die Nukleotidsequenz davon genotypisiert wurde oder wird.Clause 10: The method of clause 9, wherein before step (a) the human is phenotyped as positive for the most common TOI variant or genotyped for the nucleotide sequence thereof.

Gemäß einer Ausführungsform wurde oder wird der Mensch vor Schritt (a) als positiv für die TOI-Nukleotidsequenzvariante mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 oder 90 oder mehr, jedoch weniger als 95, 96, 97, 98, 99 oder 100% (z. B. im Bereich von 51 bis 80%) genotypisiert oder für die TOI-Variante davon phänotypisiert.In one embodiment, prior to step (a), the human was or becomes positive for the TOI nucleotide sequence variant having a cumulative human all-time frequency of 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 or 90 or greater, but less than 95, 96, 97, 98, 99 or 100% (eg in the range of 51 to 80%) genotyped or phenotyped for the TOI variant thereof.

Gemäß einer Ausführungsform wurde oder wird der Mensch vor Schritt (a) als positiv für die TOI-Nukleotidsequenzvariante mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 oder 90 oder mehr, jedoch weniger als 95, 96, 97, 98, 99 oder 100% (z. B. im Bereich von 51 bis 80%) genotypisiert oder für die TOI-Variante davon phänotypisiert.In one embodiment, prior to step (a), the human was or becomes positive for the TOI nucleotide sequence variant with a total total sexual frequency of 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 or 90 or greater but less than 95, 96, 97 , 98, 99 or 100% (eg in the range of 51 to 80%) genotyped or phenotyped for the TOI variant thereof.

Klausel 11: Das Verfahren nach Klausel 9 oder 10, wobei vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur Bindung an die häufigste TOI-Variante fähig ist. Clause 11: The method of clause 9 or 10, wherein prior to step (a), it was or is determined that the ligand is capable of binding to the most abundant TOI variant.

Klausel 12: Das Verfahren nach Klausel 9, 10 oder 11, wobei vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand im Wesentlichen unfähig zur Neutralisierung oder Inhibierung der in Schritt (b) angeführten TOI-Variante ist.Clause 12: The method of clause 9, 10 or 11, wherein prior to step (a), it has been or is determined that the ligand is substantially incapable of neutralizing or inhibiting the TOI variant recited in step (b).

”Im Wesentlichen unfähig zur Neutralisierung oder Inhibierung” soll bedeuten: Neutralisation oder Inhibierung von weniger als 50, 25, 10, 5 oder 0,5% Inhibierung oder Neutralisation der häufigsten TOI-Variante."Substantially incompetent for neutralization or inhibition" shall mean neutralization or inhibition of less than 50, 25, 10, 5 or 0.5% inhibition or neutralization of the most common TOI variant.

Klausel 13: Das Verfahren nach einer der Klauseln 9 bis 12, wobei der Ligand zur Bindung an die häufigste TOI-Variante fähig ist.Clause 13: The method of any of clauses 9-12, wherein the ligand is capable of binding to the most common TOI variant.

Klausel 14: Das Verfahren nach einer der Klauseln 9 bis 13, wobei der Ligand zur Bindung an zwei oder mehr verschiedene TOI-Varianten fähig ist, die jeweils durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von mehr als 50% fähig sind.Clause 14: The method of any one of clauses 9 to 13, wherein the ligand is capable of binding to two or more different TOI variants each capable of a nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency greater than 50%.

Gemäß einer Ausführungsform wird jede TOI-Variante durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 oder 90 oder mehr, jedoch weniger als 95, 96, 97, 98, 99 oder 100% (z. B. im Bereich von 51 bis 80%) codiert.In one embodiment, each TOI variant is characterized by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 or 90 or greater but less than 95, 96, 97, 98, 99 or 100% ( eg in the range of 51 to 80%).

Gemäß einer Ausführungsform wird jede TOI-Variante durch eine Nukleotidsequenz mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 oder 90 oder mehr, jedoch weniger als 95, 96, 97, 98, 99 oder 100% (z. B. im Bereich von 51 bis 80%) codiert.In one embodiment, each TOI variant is characterized by a nucleotide sequence having a total cumulative typhus of 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 or 90 or greater, but less than 95, 96, 97, 98, 99 or 100% (e.g. B. in the range of 51 to 80%) encoded.

Klausel 15: Das Verfahren nach einer der vorhergehenden Klauseln, wobei festgestellt wurde oder wird, dass die in Schritt (a) angeführte Nukleotidsequenzvariante in wenigstens 2 verschiedenen humanen ethnischen Populationen, z. B. wenigstens 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 oder 9 verschiedenen humanen ethnischen Populationen in Tabelle 4, vorhanden ist.Clause 15: The method of any one of the preceding clauses, wherein it has been or is determined that the nucleotide sequence variant cited in step (a) is present in at least 2 different human ethnic populations, e.g. At least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 or 9 different human ethnic populations in Table 4.

Klausel 16: Das Verfahren nach einer der vorhergehenden Klauseln, wobei es sich bei der Humanhäufigkeit um die Häufigkeit in einer Datenbank natürlich vorkommender Sequenzen von wenigstens 15, 20 oder 25 verschiedenen human ethnischen Populationen handelt, die wenigstens 1000 Sequenzen umfasst. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei der Datenbank um die wie hier beschriebene 1000 Genomes Project Datenbank.Clause 16: The method of any one of the preceding clauses, wherein the human frequency is the frequency in a database of naturally occurring sequences of at least 15, 20 or 25 different human ethnic populations comprising at least 1000 sequences. In one embodiment, the database is the 1000 Genomes Project database as described herein.

Klausel 17: Einen Antihuman-TOI-Liganden zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens in einem Menschen, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist und wobei das Genom des Menschen eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.Clause 17: An anti-human TOI ligand for use in a method of treating and / or preventing a TOI-mediated disease or TOI-mediated disease in a human, wherein the TOI is present in humans as a distinct polymorphic variant and wherein the human genome has a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, which method comprises administering the ligand to a human.

Alternativ dazu stellt Klausel 17 einen anti-humanen TOI-Liganden zur Verwendung in einem Verfahren gemäß einer der Klauseln 1 bis 16 bereit, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.Alternatively, clause 17 provides an anti-human TOI ligand for use in a method according to any of clauses 1-16, which method comprises administering the ligand to a human.

Gemäß einer Ausführungsform beträgt die kumulative humane Allelhäufigkeit 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 20% oder 1 bis 15% oder 1 bis 10%.In one embodiment, the cumulative human allele frequency is 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 20% or 1 to 15% or 1 to 10%.

Gemäß einer Ausführungsform beträgt die humane Genotypgesamthäufigkeit 35, 30, 25, 20, 15, 10 oder 5% oder weniger, z. B. im Bereich von 1 bis 25%, 1 bis 20%, 1 bis 15%, 1 bis etwa 15%, 1 bis 10%, 1 bis etwa 10% oder 1 bis 5% oder 1 bis etwa 5%.In one embodiment, the total human genotype is 35, 30, 25, 20, 15, 10 or 5% or less, e.g. In the range of 1 to 25%, 1 to 20%, 1 to 15%, 1 to about 15%, 1 to 10%, 1 to about 10% or 1 to 5% or 1 to about 5%.

Klausel 18: Der Ligand nach Klausel 17, wobei festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur Bindung an das durch die Nukleotidsequenz codierte humane TOI fähig ist.Clause 18: The ligand of clause 17, wherein it has been or is determined that the ligand is capable of binding to the human TOI encoded by the nucleotide sequence.

Alternativ dazu stellt Klausel 18 einen Liganden bereit, der an ein humanes TOI bindet, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, zur Verwendung in einem Verfahren, welches den Schritt der Verwendung des Liganden zum Targeting des TOI in einem Menschen zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens umfasst, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.Alternatively, clause 18 provides a ligand that binds to a human TOI that comprises an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid genotype of less than 50% Use in a method comprising the step of using the ligand to target the TOI in a human for the treatment and / or prevention of a TOI mediated disease or a TOI mediated disease, the method comprising administering the ligand to a human includes.

Klausel 19: Einen Liganden, der an ein humanes TOI bindet, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, zur Verwendung in einem Verfahren gemäß einer der Klauseln 1 bis 16, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.Clause 19: A ligand that binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total total sexuality less than 50%, for use in a method according to any one of clauses 1-16, which method comprises administering the ligand to a human.

Klausel 20: Der Ligand nach einer der Klauseln 17 bis 19, wobei der Mensch als positiv für die TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird.Clause 20: The ligand of any one of clauses 17 to 19, wherein the human was or is genotyped as positive for the TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50%.

Der Ligand nach einer der Klauseln 17 bis 19, wobei der Mensch als positiv für die TOI-Nukleotidsequenz mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird.The ligand of any one of clauses 17-19, wherein the human is or has been genotyped as positive for the TOI nucleotide sequence having a total typhoid frequency of less than 50%.

Klausel 21: Der Ligand nach einer der Klauseln 17 bis 20, wobei der Mensch als positiv für ein durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiertes TOI phänotypisiert wurde oder wird.Clause 21: The ligand of any one of clauses 17 to 20, wherein the human has been or is being phenotyped for a TOI encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total syntactic frequency of less than 50%.

Klausel 22: Der Ligand nach einer der Klauseln 17 bis 21, wobei der Mensch als heterozygot für eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird; wobei der Mensch gegebenenfalls als eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von mehr als 50% (z. B. mit der höchsten kumulativen Humanallelhäufigkeit) und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von mehr als 50% (z. B. mit der höchsten Gesamthumangenotyphäufigkeit) umfassend genotypisiert wurde oder wird.Clause 22: The ligand of any of clauses 17 to 21, wherein the human has been or is genotyped as heterozygous for a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total syntactic frequency of less than 50%; wherein the human optionally acts as a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and a TOI nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of greater than 50% (e.g., the highest cumulative human allele frequency) and / or with a total cumulative genotype of has been or will be comprehensively genotyped more than 50% (eg, having the highest total total typhoid frequency).

Klausel 23: Der Ligand nach einer der Klauseln 17 bis 22, wobei das Genom des Menschen als homozygot für eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird.Clause 23: The ligand of any one of clauses 17 to 22, wherein the human genome has been or is being homozygous for a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total syntactic frequency of less than 50%.

Klausel 24: Der Ligand nach einer der Klauseln 17 bis 23, wobei der Ligand eine Antikörperbindungsstelle umfasst, die ein humanes TOI bindet, das eine Aminosäuresequenz umfasst, die durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird; und von dem gegebenenfalls festgestellt wurde oder wird, dass er zu einer solchen Bindung fähig ist.Clause 24: The ligand according to any one of clauses 17 to 23, wherein the ligand comprises an antibody binding site that binds a human TOI comprising an amino acid sequence represented by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or with a total cumulative typhus frequency of less than 50% is encoded; and which has been or may be determined to be capable of such binding.

Klausel 25: Der Ligand nach Klausel 24, wobei es sich bei dem Liganden um einen Antikörper oder ein Antikörperfragment handelt.Clause 25: The ligand of clause 24, wherein the ligand is an antibody or an antibody fragment.

Klausel 26: Der Ligand nach einer der Klauseln 17 bis 23, wobei der Ligand eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer TOI-Nukleotidsequenz hybridisiert, die eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, oder ein RNA-Transkript davon; und/oder der Ligand eine Nukleotidsequenz umfasst, die wenigstens 10 aufeinanderfolgende Nukleotide einer Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder eine Antisense-Sequenz davon umfasst.Clause 26: The ligand of any one of clauses 17 to 23, wherein the ligand comprises a nucleotide sequence that specifically hybridizes to a TOI nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or a total syntactic frequency of less than 50%, or an RNA transcript thereof; and / or the ligand comprises a nucleotide sequence comprising at least 10 consecutive nucleotides of a nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or having a total total sexuality less than 50%, or an antisense sequence thereof.

Gemäß einer Ausführungsform umfasst der Ligand eine Nukleotidsequenz, die wenigstens 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 oder 100 aufeinanderfolgende Nukleotide einer Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst oder eine Antisense-Sequenz davon ist.According to one embodiment, the ligand comprises a nucleotide sequence comprising at least 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 or 100 consecutive nucleotides of a nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50 % and / or with a total cumulative genotype of less than 50% or an antisense sequence thereof.

Klausel 27: Der Ligand nach einer der Klauseln 17 bis 26, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% umfasst und sich die Sequenz in wenigstens 2 verschiedenen ethnischen Populationen findet (z. B. in wenigstens 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 oder 20 verschiedenen humanen ethnischen Populationen findet (zum Beispiel gemäß der Populationen in Tabelle 4)). Bei einem Beispiel sind die Zahlen unter Bezug auf die 1000 Genomes Project Datenbank.Clause 27: The ligand of any one of clauses 17 to 26, wherein the human genome comprises a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and the sequence is found in at least 2 different ethnic populations (e.g., in at least 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 different human ethnic populations (for example according to the populations in Table 4)). In one example, the numbers are referring to the 1000 Genomes Project database.

Der Ligand nach einer der Klauseln 17 bis 26, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% umfasst und sich die Sequenz in wenigstens 20 Individuen verteilt über wenigstens 2 der verschiedenen ethnischen Populationen findet (z. B. in wenigstens 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 130, 140 oder 150 Individuen verteilt über so viele verschiedene ethnische Populationen findet). Bei einem Beispiel sind die Zahlen unter Bezug auf die 1000 Genomes Project Datenbank.The ligand of any one of clauses 17 to 26, wherein the human genome comprises a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and the sequence is found in at least 20 individuals distributed over at least 2 of the various ethnic populations (e.g. at least 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 130, 140 or 150 individuals about so many different ethnic populations). In one example, the numbers are referring to the 1000 Genomes Project database.

Klausel 28: Eine pharmazeutische Zusammensetzung oder ein Kit zur Behandlung oder Prävention eines Leidens oder einer Krankheit, die durch ein wie in einer der vorhergehenden Klauseln angeführten TOI vermittelt wird, wobei die Zusammensetzung bzw. das Kit den Liganden nach einer der Klauseln 17 bis 27 umfasst; und gegebenenfalls in Kombination mit einem Etikett oder einer Gebrauchsanleitung, zur Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens bei einem Menschen; wobei das Etikett bzw. die Anleitung gegebenenfalls eine durch eine Zulassungsbehörde erteilte Arzneimittelzulassungsnummer umfasst (z. B. eine FDA- oder EMA-Zulassungsnummer); wobei das Kit gegebenenfalls einen Injektionsstift oder ein IV-Behältnis umfasst, der bzw. das den Liganden umfasst.Clause 28: A pharmaceutical composition or kit for the treatment or prevention of a condition or illness mediated by a TOI as recited in any preceding clause, the composition or kit comprising the ligand according to any of clauses 17 to 27 ; and optionally in combination with a label or instructions for use, for the treatment and / or prevention of the disease or condition in a human; the label or instruction may include a drug approval number issued by an approval authority (eg, an FDA or EMA approval number); wherein the kit optionally comprises an injection pen or an IV container comprising the ligand.

Bei einem Beispiel deckt das Etikett bzw. die Anleitung die Verwendung für einen eine durch die in Klausel 17 angeführte Nukleotidsequenz codierte TOI-Variante umfassenden Menschen ab oder beschreibt diese.In one example, the label or instruction covers or describes the use of a human comprising a TOI variant encoded by the nucleotide sequence set forth in clause 17.

Klausel 29: Ein Verfahren zur Herstellung einer Bindungsstelle für einen Antikörper gegen ein humanes TOI, wobei das Verfahren die Gewinnung einer Mehrzahl von Anti-TOI-Antikörperbindungsstellen, das Screening der Antikörperbindungsstellen auf Bindung an TOI umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, oder an ein Peptid davon umfassend eine Aminosäurevariation von der entsprechenden Sequenz codiert durch die TOI-codierende Nukleotidsequenz mit der höchsten kumulativen Humanallelhäufigkeit und/oder der höchsten Gesamthumangenotyphäufigkeit, und das Isolieren einer in dem Screening-Schritt bindenden Antikörperbindungsstelle umfasst.Clause 29: A method for producing a binding site for an antibody to a human TOI, the method comprising obtaining a plurality of anti-TOI antibody binding sites, screening the antibody binding sites for binding to TOI comprising an amino acid sequence encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency less than 50% and / or less than 50% total totalotic typhus, or a peptide thereof comprising an amino acid variation of the corresponding sequence encoded by the TOI coding nucleotide sequence having the highest cumulative human allele frequency and / or highest total typhus frequency, and isolating comprising an antibody binding site binding in the screening step.

Gemäß einer Ausführungsform eines beliebigen Aspekts ist der erfindungsgemäße Antikörper, das erfindungsgemäße Fragment oder die erfindungsgemäße Bindungsstelle rekombinant.According to one embodiment of any aspect, the antibody according to the invention, the fragment according to the invention or the binding site according to the invention is recombinant.

Alternativ dazu stellt Klausel 29 Folgendes bereit: Ein Verfahren zur Herstellung eines Antikörpers gegen ein humanes TOI, wobei das Verfahren die Immunisierung eines nicht humanen Wirbeltieres (z. B. einer Maus oder Ratte) mit einem TOI umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, oder an ein Peptid davon, das eine Aminosäurevariation von der entsprechenden durch die TOI-codierende Nukleiotidsequenz mit der höchsten kumulativen Humanallelhäufigkeit und/oder der höchsten Gesamthumangenotyphäufigkeit codierten Sequenz umfasst, und das Isolieren eines Antikörpers, der an ein TOI bindet, das eine Aminosäuresequenz umfasst, die durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird, und gegebenenfalls die Herstellung eines TOI-bindenden Fragments oder Derivats des isolierten Antikörpers umfasst.Alternatively, clause 29 provides: A method of producing an antibody to a human TOI, the method comprising immunizing a non-human vertebrate (e.g., a mouse or rat) with a TOI comprising an amino acid sequence encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%; or a peptide thereof comprising an amino acid variation of the corresponding sequence encoded by the TOI coding nucleotide sequence having the highest cumulative human allele frequency and / or highest total typhus frequency and isolating an antibody which binds to a TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelicity of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, and optionally the preparations development of a TOI-binding fragment or derivative of the isolated antibody.

Der Begriff „isoliert” in Bezug aus einen Liganden, einen Antikörper oder ein Protein, zum Beispiel gemäß einem Aspekt, einer Konfiguration, einem Beispiel oder einer Ausführungsform, bedeutet, dass ein in Rede stehender Ligand, ein in Rede stehender Antikörper, ein in Rede stehendes Protein usw. (1) frei ist von wenigstens einigen anderen Proteinen, mit denen man es normalerweise finden würde, (2) im Wesentlichen frei ist von anderen Proteinen aus der gleichen Quelle, z. B. von der selben Spezies, (3) von einer Zelle aus einer anderen Spezies exprimiert wird, (4) von wenigstens etwa 50 Prozent von Polynukleotiden, Lipiden, Kohlenhydraten oder anderen Materialien, mit denen er/es in der Natur assoziiert ist, abgetrennt wurde, (5) funktionell mit einem Polypeptid, mit dem es in der Natur nicht assoziiert ist, assoziiert ist (durch kovalente oder nicht kovalente Wechselwirkung) oder (6) nicht in der Natur vorkommt. Typischerweise macht ein „isolierter” Ligand, ein „isolierter” Antikörper, ein „isoliertes” Protein usw. wenigstens etwa 5%, wenigstens etwa 10%, wenigstens etwa 25% oder wenigstens etwa 50% einer gegebenen Probe aus. Genomische DNA, cDNA, mRNA oder andere RNA synthetischen Ursprungs oder eine beliebige Kombination davon kann für einen solchen isolierten Liganden, einen solchen isolierten Antikörper, ein solches isoliertes Protein usw. codieren. Vorzugsweise ist der isolierte Ligand, der isolierte Antikörper, das isolierte Protein usw. im Wesentlichen frei von Proteinen oder Polypeptiden oder anderen Verunreinigungen, die sich in seiner natürlichen Umgebung finden und die seine therapeutische, diagnostische, prophylaktische, Forschungs- oder andere Verwendung beeinträchtigen würden.The term "isolated" in reference to a ligand, an antibody or a protein, for example, in one aspect, configuration, example or embodiment, means that a subject ligand, a subject antibody, is in question standing protein, etc. (1) is free of at least some other proteins with which it would normally be found, (2) is substantially free of other proteins from the same source, e.g. (4) of at least about 50 percent of polynucleotides, lipids, carbohydrates, or other materials with which it is associated in nature is separated was (5) functionally associated with a polypeptide with which it is not associated in nature (by covalent or noncovalent interaction) or (6) does not occur naturally. Typically, an "isolated" ligand, an "isolated" antibody, an "isolated" protein, etc. will constitute at least about 5%, at least about 10%, at least about 25%, or at least about 50% of a given sample. Genomic DNA, cDNA, mRNA or other RNA of synthetic origin or any combination thereof may encode such isolated ligand, such isolated antibody, such isolated protein, etc. Preferably, the isolated ligand, the isolated antibody, the isolated protein, etc., are substantially free of proteins or polypeptides or other contaminants that are in their native environment and which would affect its therapeutic, diagnostic, prophylactic, research or other uses.

Ein ”isolierter” Antikörper beispielsweise ist einer, der aus einer Komponente seiner Produktionsumgebung (z. B. natürlich oder rekombinant) identifiziert, abgetrennt und/oder wiedergewonnen wurde. Vorzugsweise ist das isolierte Polypeptid frei von einer Assoziation mit allen anderen Komponenten aus seiner Produktionsumgebung, z. B. so dass der Antikörper zu einem FDA-zulassungsfähigen oder zugelassenen Standard isoliert wurde. Kontaminierende Komponenten seiner Produktionsumgebung so wie die von rekombinanten transfizierten Zellen herrührenden sind Materialien, die typischerweise Forschungs-, diagnostische oder therapeutische Anwendungen des Antikörpers beeinträchtigen würden und können Enzyme, Hormone und andere proteinartige oder nicht proteinartige gelöste Stoffe einschließen. Gemäß bevorzugten Ausführungsformen wird das Polypeptid aufgereinigt: (1) auf mehr als 95 Gew.-% des Antikörpers, zum Beispiel bestimmt nach der Lowry-Methode, und bei einigen Ausführungsformen zu mehr als 99 Gew.-%; (2) zu einem Grad, der ausreicht, um wenigstens 15 Reste einer N-terminalen oder internen Aminosäuresequenz durch Anwendung eines ”Spinning Cup Sequenator” zu erhalten oder (3) zur Homogenität durch SDS-PAGE unter nicht reduzierenden oder reduzierenden Bedingungen mit Coomassieblau- oder vorzugsweise Silberanfärbung. Isolierte Antikörper schließen den Antikörper in situ innerhalb rekombinanter Zellen ein, da wenigstens eine Komponente aus der natürlichen Umgebung des Antikörpers nicht vorhanden sein wird. Gewöhnlich wird ein isoliertes Polypeptid oder ein isolierter Antikörper durch wenigstens einen Aufreinigungsschritt hergestellt.For example, an "isolated" antibody is one that has been identified, separated and / or recovered from a component of its production environment (eg, natural or recombinant). Preferably, the isolated polypeptide is free of association with all other components of its production environment, e.g. B. so that the antibody has been isolated to an FDA approved or approved standard. Contaminating components of its production environment, such as those derived from recombinant transfected cells, are materials that would typically interfere with research, diagnostic or therapeutic applications of the antibody, and may include enzymes, hormones and other proteinaceous or non-proteinaceous solutes. According to preferred embodiments, the polypeptide is purified: (1) more than 95% by weight of the antibody, for example as determined by the Lowry method, and in some embodiments more than 99% by weight; (2) to a degree sufficient to obtain at least 15 residues of an N-terminal or internal amino acid sequence by application of a Spinning Cup Sequenator; or (3) homogeneity by SDS-PAGE under non-reducing or reducing conditions with Coomassie blue. or preferably silver staining. Isolated antibodies include the antibody in situ within recombinant cells because at least one component will not be present in the natural environment of the antibody. Usually, an isolated polypeptide or isolated antibody is prepared by at least one purification step.

Immunkonjugateimmunoconjugates

Die Erfindung umfasst den Liganden (z. B. Antikörper) konjugiert an eine therapeutische Gruppierung (”Immunkonjugat”) wie ein Zytotoxin, ein Chemotherapeutikum, ein Immunsuppressivum oder ein Radioisotop. Zytotoxische Mittel schließen alle Mittel ein, die Zellen schädigen. Beispiele für geeignete zytotoxische Mittel und Chemotherapeutika zum Bilden von Immunkonjugaten sind im Stand der Technik bekannt, siehe zum Beispiel WO 05/103081 .The invention encompasses the ligand (eg, antibody) conjugated to a therapeutic moiety ("immunoconjugate") such as a cytotoxin, a chemotherapeutic agent, an immunosuppressant, or a radioisotope. Cytotoxic agents include all agents that damage cells. Examples of suitable cytotoxic agents and chemotherapeutic agents for forming immunoconjugates are known in the art, see, for example WO 05/103081 ,

Bispezifische AntikörperBispecific antibodies

Die Antikörper der vorliegenden Erfindung können monospezifisch, bispezifisch oder multispezifisch sein. Multispezifische mAbs können für verschiedene Epitope auf einem Target-Polypeptid spezifisch sein oder antigenbindende Domänen enthalten, die für mehr als ein Target-Polypeptid spezifisch sind. Siehe z. B. Tutt et al. (1991) J. Immunol. 147:60–69 ). Die humanen Anti-TOI-(z. B. Anti-PCSK9-)mAbs können mit einem anderen funktionellen Molekül, z. B. einem anderen Peptid oder Protein, verbunden sein oder damit zusammen exprimiert werden. Ein Antikörper oder ein Fragment davon kann beispielsweise funktionell (z. B. durch chemische Kopplung, genetische Fusion, nicht kovalente Assoziation oder auf andere Weise) mit einer oder mehreren anderen molekularen Einheiten wie einem anderen Antikörper oder Antikörperfragment verbunden sein, wodurch man einen bispezifischen oder einen multispezifischen Antikörper mit einer zweiten Bindungsspezifität erhält.The antibodies of the present invention may be monospecific, bispecific or multispecific. Multispecific mAbs may be specific for different epitopes on a target polypeptide or contain antigen binding domains specific for more than one target polypeptide. See, for example, B. Tutt et al. (1991) J. Immunol. 147: 60-69 ). The human anti-TOI (e.g., anti-PCSK9) mAbs may be linked to another functional molecule, e.g. Another peptide or protein, or be expressed together. For example, an antibody or fragment thereof may be operably linked (eg, by chemical coupling, genetic fusion, non-covalent association, or otherwise) with one or more other molecular entities, such as another antibody or antibody fragment, to produce a bispecific or receives a multispecific antibody with a second binding specificity.

Bei einem beispielhaften bispezifischen Antikörperformat, das im Rahmen der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden kann, verwendet man eine erste Immunglobulin-(Ig)-CH3-Domäne und eine zweite Ig-CH3-Domäne, wobei die erste und die zweite Ig-CH3-Domäne sich in wenigstens einer Aminosäure voneinander unterscheiden, und wobei wenigstens ein Aminosäureunterschied die Bindung des bispezifischen Antikörpers an Protein A im Vergleich zu einem bispezifischen Antikörper, dem der Aminosäureunterschied fehlt, reduziert. Gemäß einer Ausführungsform bindet die erste Ig-CH3-Domäne Protein A und die zweite Ig-CH3-Domäne enthält eine Mutation, die die Protein-A-Bindung reduziert oder abstellt, wie eine H95R-Modifikation (gemäß IMGT-Exon-Nummerierung; H435R gemäß EU-Nummerierung). Die zweite CH3 kann ferner eine Y96F-Modifikation umfassen (gemäß IMGT; Y436F gemäß EU). Weitere Modifikationen, die sich in der zweiten CH3 anfinden lassen, schließen die folgenden ein: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M und V821 (gemäß IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M und V422I gemäß EU) im Fall von IgG1-Antikörpern; N44S, K52N und V82I (IMGT; N384S, K392N und V422I gemäß EU) im Fall von IgG2-Antikörpern; und Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q und V82I (gemäß IMGT; Q355R, N3845, K392N, V397M, R409K, E419Q und V422I gemäß EU) im Fall von IgG4-Antikörpern. Variationen des oben beschriebenen bispezifischen Antikörperformats werden im Schutzbereich der vorliegenden Erfindung in Betracht gezogen.In an exemplary bispecific antibody format that can be used in the present invention, a first immunoglobulin (Ig) CH3 domain and a second Ig CH3 domain are used wherein the first and second Ig CH3 domains are in at least one amino acid, and wherein at least one amino acid difference reduces the binding of the bispecific antibody to protein A as compared to a bispecific antibody lacking the amino acid difference. In one embodiment, the first Ig CH3 domain binds protein A and the second Ig CH3 domain contains a mutation that reduces or eliminates protein A binding, such as an H95R modification (according to IMGT exon numbering; H435R according to EU numbering). The second CH3 may further comprise a Y96F modification (according to IMGT; Y436F according to EU). Other modifications that can be found in the second CH3 include the following: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, and V821 (according to EU, IMGT, D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, and V422I) in the case of IgG1 antibodies; N44S, K52N and V82I (IMGT; N384S, K392N and V422I according to EU) in the case of IgG2 antibodies; and Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q and V82I (according to IMGT, Q355R, N3845, K392N, V397M, R409K, E419Q and V422I in the EU) in the case of IgG4 antibodies. Variations of the bispecific antibody format described above are contemplated within the scope of the present invention.

Klausel 30: Das Verfahren nach Klausel 29, welches den Schritt der Gewinnung einer Nukleinsäure umfasst, die für den Antikörper, das Fragment, das Derivat oder die Bindungsstelle codiert, und gegebenenfalls Insertieren der Nukleinsäure in einem Expressionsvektor.Clause 30: The method of clause 29, comprising the step of recovering a nucleic acid encoding the antibody, fragment, derivative or binding site, and optionally inserting the nucleic acid into an expression vector.

Klausel 31: Ein Kit zum TOI-Genotypisieren, wobei das Kit eine Nukleinsäure umfasst, die eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer TOI-Nukleotidsequenz hybridisiert, die so ausgewählt ist, dass sie eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, oder ein RNA-Transkript davon; und/oder die Nukleinsäure eine Nukleotidsequenz umfasst, die wenigstens 10 (z. B. 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 oder 100) aufeinanderfolgende Nukleotide einer TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder eine Antisense-Sequenz davon umfasst. Clause 31: A kit for TOI genotyping, wherein the kit comprises a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that specifically hybridizes to a TOI nucleotide sequence selected to have a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or one Total typhoid frequency less than 50%, or an RNA transcript thereof; and / or the nucleic acid comprises a nucleotide sequence which comprises at least 10 (eg 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 or 100) successive nucleotides of a TOI Nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or a total cumulative typhus of less than 50% or an antisense sequence thereof.

Zum Beispiel hybridisiert die Nukleinsäure mit einer Region, die einem Nukleotid unmittellbar benachbart ist, bei dem es sich um eine Variante im Vergleich zum entsprechenden Nukleotid der TOI-Nukleotidsequenz mit der höchsten kumulativen humanen Allelhäufigkeit und/oder der höchsten humanen Genotypgesamthäufigkeit handelt. Bei einem Beispiel hybridisiert die Nukleinsäure mit zwei oder mehr solcher Nukleotidvarianten.For example, the nucleic acid hybridizes to a region that is immediately adjacent to a nucleotide that is variant to the corresponding nucleotide of the TOI nucleotide sequence having the highest cumulative human allele frequency and / or the highest human genotype total frequency. In one example, the nucleic acid hybridizes to two or more of such nucleotide variants.

Eine spezifische Hybridisierung erfolgt unter stringenten Bedingungen, was dem Fachmann bekannt sein wird, z. B. Bedingungen von 5 × SSC, 5 × Denhardt-Reagenz und 0,5% SDS bei 65°C.Specific hybridization occurs under stringent conditions, which will be known to those skilled in the art, e.g. B. Conditions of 5x SSC, 5x Denhardt's reagent and 0.5% SDS at 65 ° C.

Klausel 32: Ein Kit zur TOI-Genotypisierung oder -Phänotypisierung eines Menschen, wobei das Kit einen Liganden gemäß einer der Klauseln 17 bis 27 oder einen Antikörper, ein Fragment oder ein Derivat produziert durch das Verfahren nach einer der Klauseln 29 bis 31 umfasst.Clause 32: A kit for human TOI genotyping or phenotyping, wherein the kit comprises a ligand according to any of clauses 17 to 27 or an antibody, fragment or derivative produced by the method of any of clauses 29 to 31.

Zum Beispiel bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop, welches eine Aminosäure umfasst, bei dem es sich um eine Variante im Vergleich zur entsprechenden Aminosäure des durch eine Nukleotidsequenz mit der höchsten kumulativen humanen Allelhäufigkeit und/oder der höchsten humanen Genotypgesamthäufigkeit codierten TOI handelt. Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop, das zwei oder mehr solcher Aminosäurevarianten umfasst. Bei einem Beispiel bedeutet spezifische Bindung Bindung mit einer Affinität (Kd) von 1 mM, 100 nM, 10 nM oder 1 nM oder weniger, z. B. bestimmt mittels SPR.For example, the ligand specifically binds to an epitope comprising an amino acid that is a variant compared to the corresponding amino acid of the TOI encoded by a nucleotide sequence having the highest cumulative human allele frequency and / or the highest human genotype total frequency. In one example, the ligand specifically binds to an epitope comprising two or more such amino acid variants. In one example, specific binding means binding with an affinity (Kd) of 1 mM, 100 nM, 10 nM or 1 nM or less, e.g. B. determined by means of SPR.

Der Begriff ”Epitop” ist eine Region eines Antigens, die von einem Antikörper gebunden wird. Epitope können als strukturell oder funktionell definiert sein. Funktionelle Epitope sind im Allgemeinen eine Untergruppe der strukturellen Epitope und weisen die Reste auf, die direkt zur Affinität der Wechselwirkung beitragen. Epitope können auch konformationell sein, das heißt aus nicht linearen Aminosäuren aufgebaut sein. Bei bestimmten Ausführungsformen können Epitope Determinanten einschließen, bei denen es sich um chemisch aktive Oberflächengruppierungen von Molekülen wie Aminosäuren, Zucker-Seitenketten, Phosphorylgruppen oder Sulfonylgruppen handelt, und die bei bestimmten Ausführungsformen spezielle dreidimensionale Strukturcharakteristika und/oder spezielle Ladungscharakteristika aufweisen können.The term "epitope" is a region of an antigen bound by an antibody. Epitopes can be defined as structurally or functionally. Functional epitopes are generally a subset of the structural epitopes and have the residues that directly contribute to the affinity of the interaction. Epitopes may also be conformational, that is, constructed of non-linear amino acids. In certain embodiments, epitopes may include determinants that are chemically active surface moieties of molecules such as amino acids, sugar side chains, phosphoryl groups, or sulfonyl groups, and in certain embodiments may have specific three-dimensional structural characteristics and / or charge characteristics.

Klausel 33: Die Verwendung eines Anti-TOI-Liganden, der ein humanes TOI bindet, umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens bei einem Menschen, dessen Genom eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst.Clause 33: The use of an anti-TOI ligand that binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% in production of a medicament for the treatment and / or prevention of a TOI-mediated disease or a TOI-mediated condition in a human whose genome has a TOI nucleotide sequence with a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or less than 50% cumulative total sexuality includes.

Klausel 34: Die Verwendung eines Anti-TOI-Liganden, der an ein humanes TOI bindet, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, bei der Herstellung eines Medikaments zum Targeting des TOI in einem Menschen zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens.Clause 34: The use of an anti-TOI ligand which binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total syntactic frequency of less than 50% in the manufacture of a medicament for targeting the TOI in a human for the treatment and / or prevention of a TOI mediated disease or a TOI mediated condition.

Die Verwendung nach Klausel 33 oder 34, wobei der Ligand, der Mensch, die Krankheit oder das Leiden gemäß einer der Klauseln 1 bis 27 ist.The use of clause 33 or 34, wherein the ligand, human, disease or condition is in accordance with any one of clauses 1 to 27.

Klausel 35: Ein Verfahren zum Targeting eines TOI zur Behandlung und/oder Prävention einer TOI-vermittelten Krankheit oder eines TOI-vermittelten Leidens bei einem Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden an einen Menschen umfasst, der eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst, wobei das Target ein TOI ist, das durch die Nukleotidsequenz codiert wird.Clause 35: A method for targeting a TOI for the treatment and / or prevention of a TOI-mediated disease or a TOI-mediated condition in a human, the method comprising administering an anti-TOI ligand to a human having a TOI Nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total cumulative typhus of less than 50%, wherein the target is a TOI encoded by the nucleotide sequence.

Klausel 36: Das Verfahren nach Klausel 35, wobei das Verfahren das Targeting eines humanen TOI umfasst, das eine Aminosäuresequenz mit dem Ligand zur Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens in dem Menschen umfasst, wobei die Aminosäuresequenz durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird. Clause 36: The method of clause 35, wherein the method comprises targeting a human TOI comprising an amino acid sequence with the ligand for the treatment and / or prevention of the disease in humans, wherein the amino acid sequence is linked to a nucleotide sequence cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total cumulative typhus of less than 50%.

Klausel 37: Ein Verfahren zum TOI-Genotypisieren einer Nukleinsäureprobe eines Menschen, wobei das Verfahren das Identifizieren des Vorhandenseins einer TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% in der Probe umfasst.Clause 37: A method of TOI genotyping a nucleic acid sample of a human, the method comprising identifying the presence of a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% in the sample.

Bei einem Beispiel umfasst das Verfahren die Gewinnung einer TOI-Nukleinsäureprobe aus dem Menschen und die anschließende Durchführung des Identifizierungsschritts.In one example, the method comprises recovering a human TOI nucleic acid sample and then performing the identifying step.

Klausel 38: Ein Verfahren zum TOI-Typisieren einer Proteinprobe eines Menschen, wobei das Verfahren das Identifizieren des Vorhandenseins einer TOI-Aminosäuresequenz codiert durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% in der Probe umfasst.Clause 38: A method for TOI typing of a protein sample of a human, the method comprising identifying the presence of a TOI amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or a total cumulative typhus of less than 50%. in the sample.

Bei einem Beispiel umfasst das Verfahren die Gewinnung einer TOI-Proteinprobe aus dem Menschen und die anschließende Durchführung des Identifizierungsschritts.In one example, the method comprises recovering a human TOI protein sample and then performing the identification step.

Klausel 39: Das Verfahren nach Klausel 37 oder 38, bei dem man eine Serum-, Blut-, Kot-, Haar-, Urin- oder Speichelprobe von einem Menschen gewinnt, wobei die Nukleinsäure- oder Proteinprobe zur Verwendung in dem Schritt zur Identifizierung der Sequenz gewonnen wird.Clause 39: The method of clause 37 or 38 of obtaining a serum, blood, faeces, hair, urine or saliva sample from a human, wherein the nucleic acid or protein sample is for use in the step of identifying the human Sequence is won.

Klausel 40: Das Verfahren nach einer der Klauseln 37 bis 39, bei dem man einen Liganden gemäß einer der Klauseln 17 bis 27 zur Durchführung des Identifikationsschrittes verwendet.Clause 40: The method of any one of clauses 37 to 39, wherein a ligand according to any of clauses 17 to 27 is used to perform the identification step.

Klausel 41: Ein diagnostisches Kit, umfassend einen Liganden, der zur Bindung an ein humanes TOI fähig ist, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, und eine Anleitung zum Durchführen des Verfahrens nach Klausel 38 oder 39.Clause 41: A diagnostic kit comprising a ligand capable of binding to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% , and instructions for carrying out the procedure under clause 38 or 39.

Klausel 42: Ein diagnostisches Kit, umfassend eine Nukleinsäuresonde, die eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder einem RNA-Transkript davon hybridisiert, und eine Anleitung zum Durchführen des Verfahrens nach Klausel 38 oder 39.Clause 42: A diagnostic kit comprising a nucleic acid probe comprising a nucleotide sequence that specifically hybridizes to a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelicity of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% or an RNA transcript thereof, and instructions for carrying out the procedure under clause 38 or 39.

Klausel 43: Das Verfahren, der Ligand, die Zusammensetzung, das Kit oder die Anwendung nach einer der vorhergehenden Klauseln, wobei das TOI durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von 1 bis 10% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von 1 bis etwa 15% oder von 1 bis 15% codiert wird.Clause 43: The method, ligand, composition, kit or application of any one of the preceding clauses, wherein the TOI is represented by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of 1 to 10% and / or a total typhoid frequency of 1 to about 15% or from 1 to 15%.

Klausel 44: Das Verfahren, der Ligand, die Zusammensetzung, das Kit oder die Anwendung nach einer der vorhergehenden Klauseln, wobei es sich bei dem TOI um ein humanes TOI ausgewählt aus Tabelle 5 handelt; gegebenenfalls zur Behandlung und/oder Prävention einer entsprechenden Krankheit oder eines entsprechenden Leidens, wie in Tabelle 5 ausgeführt.Clause 44: The method, ligand, composition, kit or application of any one of the preceding clauses, wherein the TOI is a human TOI selected from Table 5; optionally for the treatment and / or prevention of a corresponding disease or condition, as set out in Table 5.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humane PCSK9, z. B. eine reife, gespaltene, autokatalysierte oder aktive PCSK9. Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Krankheit um eine Herz-Kreislauf-Krankheit wie Hyperlipidämie.The TOI is, for example, human PCSK9, e.g. A mature, cleaved, autocatalyzed or active PCSK9. In one example, the disease is a cardiovascular disease such as hyperlipidemia.

Erfindungsgemäße Liganden eignen sich zum Beispiel für Assays zur spezifischen Bindung, zum Genotypisieren oder Phänotypisieren von Menschen, zur Affinitätsaufreinigung des TOI und für Durchmusterungsassays zum Identifizieren anderer Antagonisten der TOI-Aktivität. Einige der erfindungsgemäßen Liganden eignen sich zum Inhibieren der Bindung des TOI an einen verwandten humanen Rezeptor oder ein solches Protein, oder zum Inhibieren von durch das TOI vermittelten Aktivitäten.Ligands of the invention are useful, for example, in assays for specific binding, genotyping or phenotyping of humans, for affinity purification of the TOI, and for screening assays for identifying other antagonists of TOI activity. Some of the ligands of the present invention are useful for inhibiting the binding of the TOI to a related human receptor or protein, or for inhibiting TOI-mediated activities.

Die Erfindung umfasst Anti-TOI-(z. B. PCSK9)-Antikörperliganden mit einem modifizierten Glykosylierungsmuster. Bei einigen Anwendungen kann eine Modifikation zum Entfernen unerwünschter Glykosylierungsstellen von Nutzen sein, oder z. B. das Entfernen einer Fucosegruppierung zur Erhöhung der antikörperabhängigen zellvermittelten Zytotoxizität (Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity, ADCC) (siehe Shield et al. (2002) JBC 277:26733). Bei anderen Anwendungen kann die Galactosylierung modifiziert werden, um die komplementabhängige Zytotoxizität (Complement-Dependent Cytotoxicity, CDC) zu modifizieren. The invention includes anti-TOI (e.g., PCSK9) antibody ligands having a modified glycosylation pattern. In some applications, modification to remove unwanted glycosylation sites may be useful, or e.g. For example, the removal of a fucose moiety to enhance antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) (see Shield et al., (2002) JBC 277: 26733). In other applications, galactosylation can be modified to modify complement-dependent cytotoxicity (CDC).

Bei einem Beispiel ist die Erfindung durch eine pharmazeutische Zusammensetzung gekennzeichnet, die einen erfindungsgemäßen Liganden, wobei der Ligand einen rekombinanten humanen Antikörper oder ein Fragment davon, der bzw. das das TOI (z. B. eine hier beschriebene seltene Variante) spezifisch bindet, ist bzw. daraus besteht, und einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger umfasst. Gemäß einer Ausführungsform ist die Erfindung durch eine Zusammensetzung gekennzeichnet, bei der es sich um eine Kombination eines erfindungsgemäßen Antikörperliganden oder eines erfindungsgemäßen antigenbindenden Fragments eines Antikörpers und eines zweiten therapeutischen Mittels handelt. Bei dem zweiten therapeutischen Mittel kann es sich um ein entzündungshemmendes Mittel, ein Antiangiogenesemittel, ein schmerzstillendes Mittel, ein Diuretikum, ein Chemotherapeutikum, ein Antikrebsmittel, einen Vasodilator, einen Vasokonstriktor, ein Statin, einen Betablocker, einen Nährstoff, ein Adjuvans, ein Antiobesitasmittel und ein Antidiabetikum handeln.In one example, the invention is characterized by a pharmaceutical composition comprising a ligand of the invention wherein the ligand is a recombinant human antibody or a fragment thereof that specifically binds the TOI (eg, a rare variant described herein) or consists thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier. In one embodiment, the invention is characterized by a composition which is a combination of an antibody ligand of the invention or an antigen-binding fragment of an antibody of the invention and a second therapeutic agent of the invention. The second therapeutic agent may be an antiinflammatory, antiangiogenic, analgesic, diuretic, chemotherapeutic, anticancer, vasodilator, vasoconstrictor, statin, beta-blocker, nutrient, adjuvant, antiobesity agent, and an antidiabetic act.

”Pharmazeutisch unbedenklich” bezieht sich auf zur Anwendung in Tieren einschließlich Menschen durch eine Zulassungsbehörde der Bundesregierung oder einer staatlichen Regierung der USA zugelassen oder zulassungsfähig oder in der US-Pharmakopöe oder einer anderen allgemein anerkannten Pharmakopöe aufgeführt. Ein ”pharmazeutisch unbedenklicher Träger, pharmazeutisch unbedenklicher Exzipient oder pharmazeutisch unbedenkliches Adjuvans” bezieht sich auf einen Träger, einen Exzipienten bzw. ein Adjuvans, der bzw. das einem Subjekt zusammen mit einem Mittel, z. B. einem beliebigen hier beschriebenen Antikörper oder einer beliebigen hier beschriebenen Antikörperkette, verabreicht werden kann und die pharmakologische Aktivität davon nicht zerstört und bei einer Verabreichung in Dosen, die zur Verabreichung einer therapeutischen Menge des Mittels ausreichen, nicht toxisch ist."Pharmaceutically acceptable" refers to the use in animals including humans by a federal or US state government approved or eligible or listed in the US Pharmacopoeia or any other generally recognized pharmacopeia. A "pharmaceutically acceptable carrier, pharmaceutically acceptable excipient, or pharmaceutically acceptable adjuvant" refers to a carrier, excipient or adjuvant which is administered to a subject together with an agent, e.g. , Any of the antibodies described herein or any of the antibody chains described herein, and which does not disrupt the pharmacological activity thereof and is non-toxic when administered at doses sufficient to administer a therapeutic amount of the agent.

Bei einem Beispiel stellt die Erfindung ein Verfahren zur Inhibierung der TOI-Aktivität unter Einsatz des erfindungsgemäßen Anti-TOI-Liganden (z. B. eines Antikörpers oder eines antigenbindenden Teils des erfindungsgemäßen Antikörpers) bereit, wobei das therapeutische Verfahren die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge einer den Liganden umfassenden pharmazeutischen Zusammensetzung umfasst. Bei der behandelten Erkrankung handelt es sich um eine beliebige Krankheit oder ein beliebiges Leiden, die bzw. das durch das Entfernen, das Inhibieren oder die Reduzierung der TOI-Aktivität verbessert, gelindert, gehemmt oder verhindert wird.In one example, the invention provides a method of inhibiting TOI activity using the anti-TOI ligand of the invention (eg, an antibody or antigen-binding portion of the antibody of the present invention), wherein the therapeutic method comprises administering a therapeutically effective amount a pharmaceutical composition comprising the ligand. The disease being treated is any disease or condition that is improved, alleviated, inhibited or prevented by removing, inhibiting or reducing TOI activity.

Mit dem Ausdruck ”therapeutisch wirksame Menge” ist eine Menge gemeint, die die gewünschte Wirkung hervorruft, für die sie verabreicht wird. Die genaue Menge hängt vom Zweck der Behandlung ab und lässt sich vom Fachmann unter Anwendung bekannter Techniken feststellen (siehe zum Beispiel Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding ).By the term "therapeutically effective amount" is meant an amount that produces the desired effect for which it is administered. The exact amount depends on the purpose of the treatment and can be determined by those skilled in the art using known techniques (see for example Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding ).

Der Begriff ”spezifisch bindet” oder dergleichen bedeutet, dass ein Ligand, z. B. ein Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment davon einen Komplex mit einem Antigen bildet, der unter physiologischen Bedingungen relativ stabil ist. Spezifisch bindend kann als eine Gleichgewichtsdissoziationskonstante von wenigstens etwa 1 × 10^–6 M oder weniger charakterisiert werden (ein kleinerer KD z. B. bezeichnet eine festere Bindung). Methoden, mit denen festgestellt werden kann, ob zwei Moleküle spezifisch binden, sind im Stand der Technik gut bekannt und schließen zum Beispiel Gleichgewichtsdialyse, Oberflächenplasmonresonanz und dergleichen ein. Ein isolierter Antikörper, der ein humanes TOI spezifisch bindet, kann jedoch Kreuzreaktivität mit anderen Antigenen wie einem TOI-Molekül aus anderen Arten zeigen. Außerdem werden multispezifische Antikörper (z. B. bispezifische), die an ein humanes TOI und ein oder mehrere zusätzliche Antigene binden, nichtsdestotrotz als Antikörper angesehen, die das TOI ”spezifisch binden”, so wie der Begriff hier verwendet wird.The term "specifically binds" or the like means that a ligand, e.g. For example, an antibody or antigen-binding fragment thereof forms a complex with an antigen which is relatively stable under physiological conditions. Specific binding may be characterized as an equilibrium dissociation constant of at least about 1 x 10 ^-6 M or less (a smaller KD, for example, denotes a more rigid binding). Methods for determining whether two molecules bind specifically are well known in the art and include, for example, equilibrium dialysis, surface plasmon resonance, and the like. However, an isolated antibody that specifically binds a human TOI may show cross-reactivity with other antigens such as a TOI molecule of other species. In addition, multispecific antibodies (eg, bispecific) that bind to a human TOI and one or more additional antigens are nonetheless considered to be antibodies that "specifically bind" the TOI, as the term is used herein.

Genotypisierung und PhänotypisierungGenotyping and phenotyping

Der Fachmann wird mit Techniken, die sich zur genauen Genotypisierung und Anwendung der Erfindung einsetzen lassen, vertraut sein. Hierzu zählen die folgenden.

• 1 Verfahren auf Hybridisierungsbasis
• 1.1 Dynamische allelspezifische Hybridisierung
• 1.2 ”Molecular Beacons”
• 1.3 SNP-Mikroarrays
• 2 Verfahren auf Enzymbasis
• 2.1 Restriktionsfragmentlängenpolymorphismus
• 2.2 Verfahren auf PCR-Basis
• 2.3 Flap-Endonuklease
• 2.4 Primer-Erweiterung
• 2.5 5'-Nuklease
• 2.6 Oligonukleotidligationsassay
• 3 Andere auf physikalischen Eigenschaften von DNA basierende Post-Amplifizierungs-Methoden
• 3.1 Einzelstrang-Konformations-Polymorphismus
• 3.2 Temperaturgradienten-Gelelektrophorese
• 3.3 Denaturierende Hochleistungsflüssigchromatographie
• 3.4 Hochauflösendes Schmelzen des gesamten Amplikons
• 3.5 Anwendung von DNA-fehlpaarungsbindenden Proteinen
• 3.6 SNPlex (SNPlex^TM ist eine von Applied Biosystems vertriebene geschützte Genotypisierungs-Plattform).

• 1 method based on hybridization
• 1.1 Dynamic allele-specific hybridization
• 1.2 "Molecular Beacons"
• 1.3 SNP microarrays
• 2 Enzyme-based methods
• 2.1 Restriction fragment length polymorphism
• 2.2 PCR-based methods
• 2.3 Flap endonuclease
• 2.4 primer extension
• 2.5 5'-nuclease
• 2.6 oligonucleotide ligation assay
• 3 Other post-amplification methods based on physical properties of DNA
• 3.1 single-stranded conformational polymorphism
• 3.2 Temperature gradient gel electrophoresis
• 3.3 Denaturing High Performance Liquid Chromatography
• 3.4 High-resolution melting of the entire amplicon
• 3.5 Application of DNA mismatch-binding proteins
• 3.6 SNPlex (SNPlex ^™ is a proprietary genotyping platform distributed by Applied Biosystems).

Sequenzierungstechnologien der nächsten Generation wie Pyrosequenzieren ist ebenfalls von Nutzen.Next generation sequencing technologies such as pyrosequencing is also useful.

Verwiesen sei auch auf GB2444410A und das darin offenbarte Genotypisierungsverfahren, das durch Verweis in seiner Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird.Reference is also made to GB2444410A and the genotyping method disclosed therein, which is incorporated herein by reference in its entirety.

Miniaturisierungsassays wie Mikroarrays mit auf kleinen Oberflächen immobilisierten Oligonukleotidreagentien werden häufig für die Mutationsanalyse im Großmaßstab und die Hochdurchsatz-Genotypisierung vorgeschlagen ( Large-scale identification, mapping, and genotyping of single-nucleotide polymorphisms in the human genome (Wang DG, Fan JB, Siao CJ, Berno A, Young P, Sapolsky R, Ghandour G, Perkins N, Winchester E, Spencer J, Kruglyak L, Stein L, Hsie L, Topaloglou T, Hubbell E, Robinson E, Mittmann M, Morris MS, Shen N, Kilburn D, Rioux J, Nusbaum C, Rozen S, Hudson TJ, Lipshutz R, Chee M, Lander ES, Science. 15. Mai 1998; 280(5366):1077–82 ). Andere Hochdurchsatz-Methoden unterscheiden zwischen Allelen anhand differentieller Hybridisierung, Primer-Erweiterung, Ligation und Spaltung einer allelspezifischen Sonde ( Review Accessing genetic variation: genotyping single nucleotide polymorphisms, Syvänen AC, Nat Rev Genet. Dez. 2001; 2(12):930–42; Review Techniques patents for SNP genotyping, Twyman RM, Primrose SB, Pharmacogenomics. Jan. 2003; 4(1):67–79 ).Miniaturization assays, such as microarrays with small surface area immobilized oligonucleotide reagents, are frequently proposed for large scale mutation analysis and high throughput genotyping ( Large-scale identification, mapping, and genotyping of single-nucleotide polymorphisms in the human genome (Wang DG, Fan JB, Siao CJ, Berno A, Young P, Sapolsky R, Ghandour G, Perkins N, Winchester E, Spencer J, Kruglyak L, Stein L, Hsie L, Topaloglou T, Hubbell E, Robinson E, Mittmann M, Morris MS, Shen N, Kilburn D, Rioux J, Nusbaum C, Rozen S, Hudson TJ, Lipshutz R, Chee M, Lander ES, Science, May 15, 1998; 280 (5366): 1077-82 ). Other high-throughput methods differentiate between alleles by differential hybridization, primer extension, ligation and cleavage of an allele-specific probe ( Reviewing Accessing genetic variation: genotyping single nucleotide polymorphisms, Syvänen AC, Nat Rev Genet. Dec. 2001; 2 (12): 930-42; Review Techniques patents for SNP genotyping, Twyman RM, Primrose SB, Pharmacogenomics. Jan. 2003; 4 (1): 67-79 ).

Ein Ansatz für eine vollautomatische SNP-Analyse im Großmaßstab ist der ”homogene” Assay, d. h. ein Einphasenassay ohne Trennungsschritte, der eine kontinuierliche Überprüfung während der Amplifikation ermöglicht. Der TaqMan^TM-Assay (Applied Biosystems), der ursprünglich für die quantitative Echtzeit-PCR entwickelt wurde, ist ein homogener, einstufiger Assay, der bei der Bestimmung des Mutationsstatus von DNA zur Anwendung kommt (siehe z. B. A.A. Komar (Hrsg.), Single Nucleotide Polymorphisms, Methods in Molecular Biology 578, DOI 10.1007/978-1-60327-411-L19, Humana Press, Teil der Springer Science+Business Media, LLC ; und Single Nucleotide Polymorphisms, Methods in Molecular BiologyTM Band 578, 2009, S. 293–306, The TaqMan Method for SNP Genotyping, Gong-Qing Shen et al ). Beim TaqMan SNP Genotyping Assay nutzt man die 5'-Exonukleaseaktivität von AmpliTaq Gold^TM DNA-Polymerase zum Spalten einer doppelt markierten Sonde, die mit der SNP enthaltenden Sequenz von ssDNA hybridisiert ist. Durch die Spaltung wird ein 5'-Fluorophor von einem 3'-Quencher abgetrennt, was zu einem nachweisbaren Fluoreszenzsignal führt. Die Verwendung von zwei allelspezifischen Sonden, die unterschiedliche Fluorophore tragen, erlaubt die SNP-Bestimmung im gleichen Röhrchen ohne Post-PCR-Prozessierung. Der Genotyp wird aus dem Verhältnis der Intensitäten der beiden fluoreszierenden Proben am Ende der Amplifikation bestimmt. Somit werden, statt den ganzen Satz von Echtzeit-PCR-Daten zu nutzen wie in quantitativen Studien, lediglich die Endpunktdaten verwendet.One approach to large-scale, fully automatic SNP analysis is the "homogeneous" assay, that is, a single phase assay with no separation steps that allows for continuous validation during amplification. The TaqMan ^™ Assay (Applied Biosystems), originally developed for quantitative real-time PCR, is a homogeneous, single-step assay used in determining the mutational status of DNA (see, eg, AA Komar (ed.), Single Nucleotide Polymorphisms, Methods in Molecular Biology 578, DOI 10.1007 / 978-1-60327-411-L19, Humana Press, part of Springer Science + Business Media, LLC ; and Single Nucleotide Polymorphisms, Methods in Molecular Biology, Volume 578, 2009, pp. 293-306, The TaqMan Method for SNP genotyping, Gong-Qing Shen et al ). The TaqMan SNP Genotyping Assay utilizes the 5 'exonuclease activity of AmpliTaq Gold ^™ DNA polymerase to cleave a doubly labeled probe hybridized to the SNP-containing sequence of ssDNA. The cleavage separates a 5 'fluorophore from a 3' quencher, resulting in a detectable fluorescent signal. The use of two allele-specific probes carrying different fluorophores allows SNP determination in the same tube without post-PCR processing. The genotype is determined from the ratio of the intensities of the two fluorescent samples at the end of the amplification. Thus, instead of using the full set of real-time PCR data as in quantitative studies, only the endpoint data is used.

Die TaqMan-SNP-Genotypisierung in automatisierter Weise mit hohem Durchsatz wird durch den Einsatz von validierten Pre-made TaqMan^®-Genotypisierungsassays erleichtert, man kann jedoch auch Custom TaqMan^®-Assays verwenden ( Genotypisierung mit hohem Durchsatz mit Einzelnukleotidpolymorphismen, Ranade K, Chang MS, Ting CT, Pei D, Hsiao CF, Olivier M, Pesich R, Hebert J, Chen YD, Dzau VJ, Curb D, Olshen R, Risch N, Cox DR, Botstein D, Genome Res. Juli 2001; 11(7):1262-8 ; Assessment of two flexible and compatible SNP genotyping platforms: TaqMan SNP Genotyping Assays and the SNPlex Genotyping System, De la Vega FM, Lazaruk KD, Rhodes MD, Wenz MH, Mutat Res. 3. Juni 2005; 573(1-2):111–35 ). Die Ergebnisse des Assays lassen sich automatisch durch mit den Echtzeit-Thermozyklern gelieferte Genotypisierungs-Software (z. B. IQ-Software von Bio-Rad, Sequence Detection Software von Applied Biosystems) bestimmen.Automated high-throughput TaqMan SNP genotyping is facilitated by the use of validated pre-made TaqMan ^® genotyping assays, but Custom TaqMan ^® assays can also be used ( High throughput genotyping with single nucleotide polymorphisms, Ranade K, Chang MS, Ting CT, Pei D, Hsiao CF, Olivier M, Pesich R, Hebert J, Chen YD, Dzau VJ, Curb D, Olshen R, Risch N, Cox DR, Botstein D, Genome Res. July 2001; 11 (7): 1262-8 ; Assessment of two flexible and compatible SNP Genotyping Platforms: TaqMan SNP Genotyping Assays and the SNPlex Genotyping System, De la Vega FM, Lazaruk KD, Rhodes MD, Wenz MH, Mutat Res. 3 June 2005; 573 (1-2): 111-35 ). The Results of the assay can be automatically determined by genotyping software supplied with the real-time thermal cycler (eg Bio-Rad's IQ software, Sequence Detection Software by Applied Biosystems).

Einzelnukleotidpolymorphismen (Single Nucleotide Polymorphisms, SNPs) lassen sich mit TaqMan^TM-Echtzeit-PCR-Assays (Applied Biosystems) und kommerzieller Software, die Genotypen basierend auf Reportersondensignalen am Ende der Amplifikation zuordnet, bestimmen. Ein Algorithmus für automatisches Genotype-Calling von SNPs unter Anwendung der gesamten gesammelten TaqMan-Echtzeitdaten steht zur Verfügung ( A. Callegaro et al, Nucleic Acids Res. 2006; 34(7): e56, online veröffentlicht am 14. April 2006. doi: 10.1093/nar/gk1185, PMCID: PMC1440877 ). Der Algorithmus ist einzigartig, indem er Proben nach dem Verhalten von Leerwerten (keine DNA-Proben), die Cluster mit heterozygoten Proben bilden, klassifiziert. Durch dieses Klassifizierungsverfahren wird die Erfordernis von positiven Kontrollen eliminiert und ein genaues Genotypisieren selbst in Abwesenheit einer Genotypklasse, zum Beispiel wenn ein Allel selten ist, ermöglicht.Single nucleotide polymorphisms (SNPs) can be determined with TaqMan ^™ real-time PCR assays (Applied Biosystems) and commercial software that maps genotypes based on reporter probe signals at the end of the amplification. An algorithm for automatic genotype calling of SNPs using all the collected TaqMan real-time data is available ( Callegaro et al, Nucleic Acids Res. 2006; 34 (7): e56, published online on April 14, 2006. doi: 10.1093 / nar / gk1185, PMCID: PMC1440877 ). The algorithm is unique in that it classifies samples according to the behavior of blank (no DNA samples) forming clusters of heterozygous samples. This classification procedure eliminates the need for positive controls and allows for accurate genotyping even in the absence of a genotype class, for example, when an allele is rare.

Der Fachmann wird mit Techniken, die sich zur genauen Phänotypisierung und Anwendung der Erfindung einsetzen lassen, vertraut sein. Hierzu zählen der Einsatz von Aminosäuresequenzierung des isolierten Zielproteins und der Vergleich der Sequenzen verschiedener Varianten (z. B. mit der am häufigsten vorkommenden Variante). Zum Identifizieren einer bestimmten Variante kann man sich auch eines Antikörpers bedienen, der unter stringenten Bedingungen spezifisch und selektiv in der Region eines SNP bindet. Bei einem anderen Verfahren wird der Genotyp bestimmt und eine entsprechende Aminosäuresequenz (Phänotyp) bestimmt, z. B. durch Computertranslation.Those skilled in the art will be familiar with techniques that can be used to accurately phenotype and practice the invention. These include the use of amino acid sequencing of the isolated target protein and the comparison of the sequences of different variants (eg with the most frequently occurring variant). To identify a particular variant, one can also make use of an antibody which binds under stringent conditions specifically and selectively in the region of an SNP. In another method, the genotype is determined and a corresponding amino acid sequence (phenotype) determined, for. By computer translation.

Therapeutische Verabreichung und FormulierungenTherapeutic administration and formulations

Die Erfindung stellt therapeutische Zusammensetzungen bereit, die die Anti-TOI-Liganden, z. B. Antikörper oder antigenbindende Fragmente davon der vorliegenden Erfindung umfassen. Die Verabreichung von erfindungsgemäßen therapeutischen Zusammensetzungen wird mit geeigneten Trägern, Exzipienten und anderen Mitteln, die in Formulierungen eingearbeitet werden, um einen besseren Transfer, eine bessere Zuführung, eine bessere Toleranz und dergleichen bereitzustellen, verabreicht. Eine Vielzahl geeigneter Formulierungen findet sich in der allen pharmazeutischen Chemikern bekannten Formulierungssammlung: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Esston, Pa. Diese Formulierungen schließen zum Beispiel Pulver, Pasten, Salben, Gelees, Wachse, Öle, Lipide, (kationische oder anionische) Lipide enthaltende Vesikel (wie LIPOFECTINT^TM), DNA-Konjugate, wasserfreie Resorptionspasten, Öl-in-Wasser- und Wasser-in-Öl-Emulsionen, Emulsions-Carbowax (Polyethylenglykole unterschiedlicher Molekulargewichte), halbfeste Gele und halbfeste Mischungen, die Carbowax enthalten, ein. Siehe auch Powell et al. ”Compendium of excipients for parenteral formulations” PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238–311 .The invention provides therapeutic compositions containing the anti-TOI ligands, e.g. Antibodies or antigen-binding fragments thereof of the present invention. The administration of therapeutic compositions of the invention is administered with suitable carriers, excipients, and other agents incorporated in formulations to provide better transfer, delivery, tolerance, and the like. A variety of suitable formulations are found in the formulation collection known to all pharmaceutical chemists: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Esston, Pa. These formulations include, for example, powders, pastes, ointments, jellies, waxes, oils, lipids, (cationic or anionic) lipid-containing vesicles (such as LIPOFECTINT ^™ ), DNA conjugates, anhydrous resorptive pastes, oil-in-water, and water-in Oil emulsions, emulsion carbowax (polyethyleneglycols of different molecular weights), semi-solid gels and semi-solid mixtures containing Carbowax. See also Powell et al. "Compendium of Excipients for Parenteral Formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52: 238-311 ,

Die Dosis kann in Abhängigkeit vom Alter und der Größe eines Subjekts, bei dem die Verabreichung erfolgen soll, der Zielkrankheit, den Bedingungen, der Verabreichungsroute und dergleichen schwanken. Verwendet man den Liganden, z. B. Antikörper, der vorliegenden Erfindung zur Behandlung verschiedener Leiden und Krankheiten, die mit dem TOI assoziiert sind, bei einem erwachsenen Patienten, so ist es vorteilhaft, den Antikörper der vorliegenden Erfindung intravenös zu verabreichen, normalerweise in einer Einzeldosis von etwa 0,01 bis etwa 20 mg/kg Körpergewicht, besonders bevorzugt etwa 0,02 bis etwa 7, etwa 0,03 bis etwa 5, oder etwa 0,05 bis etwa 3 mg/kg Körpergewicht. Häufigkeit und Dauer der Behandlung können entsprechend dem Schweregrad des Leidens eingestellt werden.The dose may vary depending on the age and size of a subject to be administered, the target disease, the conditions, the route of administration, and the like. If one uses the ligand, z. For example, antibodies of the present invention for the treatment of various conditions and diseases associated with the TOI in an adult patient, it is advantageous to administer the antibody of the present invention intravenously, usually at a single dose of about 0.01 to about 20 mg / kg of body weight, more preferably about 0.02 to about 7, about 0.03 to about 5, or about 0.05 to about 3 mg / kg of body weight. Frequency and duration of treatment can be adjusted according to the severity of the condition.

Es sind verschiedene Verabreichungssysteme bekannt, die zur Verabreichung des erfindungsgemäßen Liganden oder der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung angewendet werden können, zum Beispiel ein Ligand, der durch z. B. durch Einkapseln in Liposomen, Mikropartikeln, Mikrokapseln, rekombinanten Zellen, die zur Expression der mutierten Viren fähig sind, rezeptorvermittelter Endozytose (siehe z. B. Wu et al. (1987) J. Biol. Chem. 262:4429–4432 ) bereitgestellt wird. Verfahren zur Einführung schließen, wobei dies nicht einschränkend ist, intradermale, intramuskuläre, intraperitoneale, intravenöse, subkutane, intranasale, epidurale und orale Routen ein. Der Ligand bzw. die Zusammensetzung kann auf eine beliebige zweckmäßige Route verabreicht werden, zum Beispiel durch Infusion oder Bolusinjektion, durch Resorption über Epithel- oder Schleimhautauskleidungen (z. B. Mundschleimhaut, rektale und intestinale Schleimhaut usw.) und kann zusammen mit anderen biologisch aktiven Mitteln verabreicht werden. Die Verabreichung kann systemisch oder lokal sein.Various delivery systems are known which can be used to administer the ligand or pharmaceutical composition of the present invention, for example a ligand obtained by e.g. By encapsulation in liposomes, microparticles, microcapsules, recombinant cells capable of expressing the mutant viruses, receptor-mediated endocytosis (see e.g. Wu et al. (1987) J. Biol. Chem. 262: 4429-4432 ) provided. Methods of introduction include, but are not limited to, intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, intranasal, epidural, and oral routes. The ligand or composition may be administered by any convenient route, for example by infusion or bolus injection, by absorption through epithelial or mucosal linings (e.g., oral mucosa, rectal and intestinal mucosa, etc.) and may be co-administered with other biologically active ones Be administered. The administration may be systemic or local.

Der Ligand b zw. die pharmazeutische Zusammensetzung kann auch in einem Vesikel, insbesondere einem Liposom, verabreicht werden (siehe Langer (1990) Science 249:1527–1533 ; Treat et al. (1989) in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez Berestein und Fidler (Hrsg.), Liss, New York, S. 353–365 ; Lopez-Berestein, ibid., S. 317–327 ; siehe allgemein ibid.).The ligand b between the pharmaceutical composition can also be administered in a vesicle, in particular a liposome (see Langer (1990) Science 249: 1527-1533 ; Treat et al. (1989) in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez Berestein and Fidler (Eds.), Liss, New York, pp. 353-365 ; Lopez-Berestein, ibid., Pp. 317-327 ; see general ibid.).

In bestimmten Situationen kann der Ligand bzw. die pharmazeutische Zusammensetzung in einem System mit kontrollierter Freisetzung verabreicht werden. Gemäß einer Ausführungsform kann eine Pumpe zum Einsatz kommen (siehe Langer, oben; Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 ). Gemäß einer anderen Ausführungsform kann man polymere Materialien verwenden; siehe Medical Applications of Controlled Release, Langer und Wise (Hrsg.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974) . Gemäß noch einer anderen Ausführungsform kann man ein System mit kontrollierter Freisetzung in der Nähe des Ziels der Zusammensetzung platzieren, wodurch noch ein Bruchteil der systemischen Dosis erforderlich ist (siehe z. B. Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, oben, Band 2, S. 115–138, 1984 ).In certain situations, the ligand or pharmaceutical composition may be administered in a controlled release system. According to one embodiment, a pump may be used (see Langer, above; Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Closely. 14: 201 ). In another embodiment, one may use polymeric materials; please refer Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (ed.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974) , In yet another embodiment, a controlled release system may be placed near the target of the composition, thereby still requiring a fraction of the systemic dose (see, e.g. Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138, 1984 ).

Die injizierbaren Zubereitungen können Dosierungsformen für intravenöse, subkutane, intrakutane und intramuskuläre Injektionen, Tropfinfusionen usw. einschließen. Diese injizierbaren Zubereitungen können durch öffentlich bekannte Verfahren hergestellt werden. Die injizierbaren Zubereitungen lassen sich zum Beispiel herstellen, indem man z. B. den oben beschriebenen Antikörper oder sein Salz in einem sterilen wässrigen Medium oder einem öligen Medium, welches herkömmlicherweise für Injektionen verwendet wird, löst, suspendiert oder emulgiert. Als wässriges Medium für Injektionen gibt es zum Beispiel physiologische Kochsalzlösung, eine isotonische, Glucose und andere Hilfsstoffe enthaltende Lösung, usw., die in Kombination mit einem entsprechenden Solubilisierungsmittel wie einem Alkohol (z. B. Ethanol), einem Polyalkohol (z. B. Propylenglykol, Polyethylenglykol), einem nicht ionischen Tensid [z. B. Polysorbat 80, HCO-50 (Polyoxyethylen (50 mol) Addukt von hydriertem Rizinusöl)], usw. verwendet werden kann. Als öliges Medium werden z. B. Sesamöl, Sojabohnenöl usw. eingesetzt, die in Kombination mit einem Solubilisierungsmittel wie Benzoesäurenbenzylester, Benzylalkohol usw. eingesetzt werden können. Die auf diese Weise zubereitete Injektion wird vorzugsweise in eine entsprechende Ampulle gefüllt. Eine pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann subkutan oder intravenös mit einer Standardnadel und -spritze verabreicht werden. Darüber hinaus wird in Hinblick auf eine subkutane Verabreichung bei der Verabreichung einer pharmazeutischen Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung gerne ein stiftförmiges Verabreichungsgerät eingesetzt. Solch ein stiftförmiges Verabreichungsgerät ist wiederverwendbar oder für die einmalige Verwendung. Bei einem wiederverwendbaren stiftförmigen Verabreichungsgerät wird im Allgemeinen eine austauschbare Kartusche verwendet, die eine pharmazeutische Zusammensetzung enthält. Nachdem die gesamte pharmazeutische Zusammensetzung in der Kartusche verabreicht wurde und die Kartusche leer ist, kann die leere Kartusche leicht entsorgt und durch eine neue, die pharmazeutische Zusammensetzung enthaltende Kartusche ersetzt werden. Das stiftförmige Verabreichungsgerät kann dann wiederverwendet werden. Bei einem stiftförmigen Einweg-Verabreichungsgerät gibt es keine austauschbare Kartusche. Vielmehr wird das stiftförmige Einweg-Verabreichungsgerät vorgefüllt mit der pharmazeutischen Zusammensetzung, die sich in einem Reservoir im Gerät befindet, geliefert. Nachdem die pharmazeutische Zusammensetzung aus dem Reservoir geleert wurde, wird das gesamte Gerät entsorgt.The injectable preparations may include dosage forms for intravenous, subcutaneous, intracutaneous and intramuscular injections, drip infusions, etc. These injectable preparations can be prepared by publicly known methods. The injectable preparations can be prepared, for example, by z. For example, the antibody described above or its salt may be dissolved, suspended or emulsified in a sterile aqueous medium or oily medium conventionally used for injections. As the aqueous medium for injection there are, for example, physiological saline, an isotonic solution containing glucose and other excipients, etc., which are used in combination with a corresponding solubilizing agent such as an alcohol (e.g., ethanol), a polyhydric alcohol (e.g. Propylene glycol, polyethylene glycol), a nonionic surfactant [e.g. Polysorbate 80, HCO-50 (polyoxyethylene (50 moles) adduct of hydrogenated castor oil), etc., can be used. As an oily medium z. As sesame oil, soybean oil, etc., which can be used in combination with a solubilizing agent such as benzyl benzoate, benzyl alcohol, etc. The injection prepared in this way is preferably filled into a corresponding ampoule. A pharmaceutical composition of the present invention can be administered subcutaneously or intravenously with a standard needle and syringe. Moreover, from the viewpoint of subcutaneous administration in the administration of a pharmaceutical composition of the present invention, a pen-shaped administering device is often used. Such a stick-shaped administering device is reusable or for single use. A reusable stick-shaped delivery device generally uses a replaceable cartridge containing a pharmaceutical composition. After the entire pharmaceutical composition in the cartridge has been administered and the cartridge is empty, the empty cartridge can be easily discarded and replaced with a new cartridge containing the pharmaceutical composition. The pen-shaped administering device can then be reused. In a pen-shaped disposable delivery device, there is no replaceable cartridge. Rather, the pen-shaped disposable delivery device is prefilled with the pharmaceutical composition residing in a reservoir in the device. After the pharmaceutical composition has been emptied from the reservoir, the entire device is discarded.

Zahlreiche wiederverwendbare Stift- und Autoinjektor-Verabreichungsgeräte finden Anwendung bei der subkutanen Verabreichung eines Liganden bzw. einer pharmazeutischen Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung. Beispiele schließen, wobei dies bestimmt keine Einschränkung darstellt, AUTOPEN^TM (Owen Mumford, Inc., Woodstock, GB), DISETRONIC^TM pen (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Schweiz), HUMALOG MIX 75/25^TM pen, HUMALOG^TM pen, HUMALIN 70/30^TM pen (Eli Lilly and Co., Indianapolis, Ind., USA), NOVOPEN^TMI, II and III (Novo Nordisk, Kopenhagen, Dänemark), NOVOPEN JUNIOR^TM (Novo Nordisk, Kopenhagen, Dänemark), BD^TM pen (Becton Dickinson, Franklin Lakes, N.J., USA), OPTIPENT^TM, OPTIPEN PRO^TM, OPTIPEN STARLET^TM, and OPTICLIKT^TM (sanofi-aventis, Frankfurt, Deutschland) ein, um nur einige zu nennen. Beispiele für stiftförmige Einweg-Verabreichungsgeräte mit Anwendungen bei der subkutanen Verabreichung einer pharmazeutischen Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung schließen, wobei dies bestimmt keine Einschränkung darstellt, den SOLOSTAR^TM-Stift (sanofiaventis), den FLEXPEN^TM (Novo Nordisk) und den KWIKPEN^TM (Eli Lilly) ein.Numerous reusable pen and autoinjector delivery devices find application in the subcutaneous administration of a ligand or pharmaceutical composition of the present invention. Examples include, but are not limited to, AUTOPEN ^™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC ^™ pen (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25 ^™ pen, HUMALOG ^™ pen, HUMALIN 70/30 ^™ pen (Eli Lilly and Co., Indianapolis, Ind., USA), NOVOPEN ^™ I, II and III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR ^™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD ^™ pen (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA), OPTIPENT ^™ , OPTIPEN PRO ^™ , OPTIPEN STARLET ^™ , and OPTICLIKT ^™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany), to name a few. Examples of single-use pen-shaped delivery devices including subcutaneous administration of a pharmaceutical composition of the present invention include, but are not limited to, the SOLOSTAR ^™ pen (sanofiaventis), the FLEXPEN ^™ (Novo Nordisk), and the KWIKPEN ^™ (Eli Lilly ) one.

Vorteilhafterweise werden die oben beschriebenen pharmazeutischen Zusammensetzungen für die orale oder parenterale Anwendung als Dosierungsformen in einer Einheitsdosis, die sich dafür eignet, eine Dosis des/der Liganden aufzunehmen, hergestellt. Solche Dosierungsformen in einer Einheitsdosis schließen zum Beispiel Tabletten, Pillen, Kapseln, Injektionspräparate (Ampullen), Zäpfchen usw. ein. Die Menge an oben erwähntem Antikörper beträgt im Allgemeinen etwa 5 bis etwa 500 mg pro Dosierungsform in einer Einheitsdosis; insbesondere bei einer Form für die Injektion ist der oben erwähnte Antikörper vorzugsweise in einer Menge von etwa 5 bis etwa 100 mg enthalten, und bei den anderen Dosierungsformen in einer Menge von etwa 10 bis etwa 250 mg.Advantageously, the above-described pharmaceutical compositions for oral or parenteral use are prepared as dosage forms in a unit dose suitable for receiving a dose of the ligand (s). Such dosage forms in a unit dose include, for example, tablets, pills, capsules, injection preparations (ampoules), suppositories, etc. The amount of antibody mentioned above is generally about 5 to about 500 mg per dosage form in a unit dose; in particular, in one form for injection, the above-mentioned antibody is preferably contained in an amount of about 5 to about 100 mg, and in the other dosage forms in an amount of about 10 to about 250 mg.

Beispielhafte TOI Exemplary TOI

Bei einer beliebigen Konfiguration, einem beliebigen Aspekt, einem beliebigen Konzept, einem beliebigen Beispiel oder einer beliebigen Konfiguration der Erfindung sind der bzw. die TOI jeweils ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus ABCF1; ACVR1; ACVR1B; ACVR2; ACVR2B; ACVRL1; ADORA2A; Aggrecan; AGR2; AICDA; AWI; AIG1; AKAP1; AKAP2; AIYIH; amyloid-beta; AMHR2; ANGPTI; ANGPT2; ANGPTL3; ANGPTL4; ANPEP; APC; APOC1; AR; Axl; AZGP1 (Zink-a-Glykoprotein); B7.1; B7.2; BAD; BAFF; BAG1; BAI1; BCL2; BCL6; BDNF; BLNK; BLR1 (MDR15); B1yS; BMP1; BMP2; BMP3B (GDF1O); BMP4; BMP6; BMPB; BMPRIA; BMPR16; BMPR2; BPAG1 (Plectin); BRCA1; C19orf10 (IL27w); C3; C4A; C5; C5R1; CANT1; CASP1; CASP4; CAV1; CB1; CCBP2 (D6/JAB61); CCL1 (I-309); CCL11 (Eotaxin); CCL13 (MCP-4); CCL15 (MIP-id); CCL16 (HCC-4); CCL17 (TARC); CCL18 (PARC); CCL19 (MIP-3b); CCL2 (MCP-1); MCAF; CCL2O (MIP-3a); CCL21 (MIP-2); SLC; Exodus-2; CCL22 (MDC/STC-1); CCL23 (MPIF-1); CCL24 (MPIF-2 I Eotaxin-2); CCL25 (TECK); CCL26 (Eotaxin-3); CCL27 (CTACK/ILC); CCL28; CCL3 (MIP-1a); CCL4 (MIP-1b); CCL5 (RANTES); CCL7 (MCP-3); CCL8 (mcp-2); CCNA1; CCNA2; CCND1; CCNE1; CCNE2; CCR1 (CKR1/HM145); CCR2 (mcp-1RB/RA);CCR3 (CKR3/CMKBR3); CCR4; CCR5 (CMKBR5/ChemR13); CCR6 (CMKBR6/CKR-L3/STRL22/DRY6); CCR7 (CKR7/EBI1); CCR8 (CMKBR8/TER1/CKR-L1); CCR9 (GPR-9-6); CCRL1 (VSHK1); CCRL2 (L-CCR); CD7, CD164; CD19; CD1C; CD2O; CD200; CD-22; CD24; CD28; CD3; CD37; CD38; CD3E; CD3G; CD3Z; CD4; CD4O; CD40L; CD44; CD45RB; CD52; CD69; CD72; CD74; CD79A; CD79B; CD8; CD8O; CD81; CD83; CD86; CD96; CD207; CDH1 (E-Cadherin); CDH10; CDH12; CDH13; CDH18; CDH19; CDH2O; CDHS; CDH7; CDHB; CDH9; CDK2; CDK3; CDK4; CDKS; CDK6; CDK7; CDK9; CDKNIA (p21Wap1/Cip1); CDKNIB (p27Kip1); CDKNIC; CDKN2A (p161NK4a); CDKN2B; CDKN2C; CDKN3; CEBPB; CELSR3; CER1; CHGA; CHGB; Chitinase; CHRNG; CHST10; CKLFSF2; CKLFSF3; CKLFSF4; CKLFSFS; CKLFSF6; CKLFSF7; CKLFSFB; CLDN3; CLDN7 (Claudin-7); CLN3; CLU (Clusterin); CMKLRI; CMKORI (RDC1); CNR1; COL18A1; COL1A1; C0L4A3; COL6A1; CR2; CRP; CSF1 (M-CSF); CRLF2; CSF2 (GM-CSF); CSF3 (GCSF); CTLA4; CTNNBI (b-Catenin); CTSB (Cathepsin B); CX3CL1 (SCYDi); CX3CR1 (V28); CXCR6; CXCL1 (GR01); CXCL1O (IP-10); CXCL11 (I-TAC/IP-9); CXCL12 (SDF1); CXCL13; CXCL14; CXCL16; CXCL2 (GR02); CXCL3 (GR03); CXCL5 (ENA-78 I LIX); CXCL6 (GCP-2); CXCL9 (MIG); CXCR3 (GPR9/CKR-L2); CXCR4; CXCR6 (TYMSTR ISTRL33 I Bonzo); CYBS; CYC1; CYSLTRI; DAB2IP; DANDS; DES; DKFZp451J0118; DNCL1; DPP4; E2F1; ECGF1; EDG1; EFNAI; EFNA3; EFNB2; EGF; EGFR; ELAC2; ENG; ENO1; EN02; EN03; EphA4; EPHB4; EPO; ERBB2 (Her-2); EREG; ERKB; ESR1; ESR2; F3 (TF); FADD; FasL; FASN; FCERIA; FCER2; FCGR3A; FCRL4; FGF; FGF1 (aFGF); FGF1O; FGF11; FGF12; FGF12B; FGF13; FGF14; FGF16; FGF17; FGF18; FGF19; FGF2 (bFGF); FGF2O; FGF21; FGF22; FGF23; FGF3 (int-2); FGF4 (HST); FGF5; FGF6 (HST-2); FGF7 (KGF); FGF8; FGF9; FGFR3; FIGF (VEGFD); FIL1 (EPSILON); FIL1 (ZETA); FLJ12584; FLJ25530; FLRT1 (Fibronectin); FLT1; FOS; FOSL1 (FRA-1); FY (DARC); GABRP (GABAa); GAGE61; GAGECI; Galectin-3; GALNAC4S-65T; GATA3; GDF5; GFI1; GGT1; GHR; GM-CSF; GNAS1; GNRH1; GPR2 (CCR1O); GPR31; GPR44; GPR81 (FKSG80); GPR87; GPR137C; GRCC10 (C10); GRP; GSN (Gelsolin); GSTP1; HAVCRI; HAVCR2; HDAC4; EDACS; HDAC7A; HDAC9; Hepcidin; Hämojuvelin; HGF; HIF1A; HIP1; Histamin und Histaminrezeptoren; HLA-A; HLA-DRA; HM74; HMOX1; HUMCYT2A; ICEBERG; ICOS; 1D2; IFN-a; IFNA1; IFNA2; IFNA4; IFNAS; IFNA6; IFNA7; IFNB1; IFNgamma; TFNW1; IGBP1; IGF1; IGF1R; IGF2; IGFBP2; IGFBP3; IGFBP6; IL-1; IL10; IL10RA; IL10RB; IL11; IL11RA; IL-12; IL12A; IL12B; IL12RB1; IL12RB2; 1L13; IL13RA1; IL13RA2; 1L14; 1L15; IL15RA; IL16; 1L17; IL17B; IL17C; IL17R; 1L18; IL18BP; IL18R1; IL18RAP; 1L19; IL1A; IL1B; IL1F1O; IL1F5; IL1F6; IL1F7; IL1F8; IL1F9; IL1HY1; IL1R1; IL1R2; IL1RAP; IL1RAPLI; IL1RAPL2; IL1RL1;IL1RL2 IL1RN; 1L2; 1L20; IL2ORA; IL21R; 1L22; 1L22R; 1L22RA2; IL23; IL24; IL25; IL26; IL27; 1L28A; 1L28B; IL29; IL2RA; IL2RB; IL2RG; IL3; IL30; IL3RA; IL4; IL4R; IL5; IL5RA; IL6; IL6-Rezeptor; IL6ST (Glykoprotein 130); IL7; TL7R; IL8; IL8RA; IL8RB; IL8RB; IL9; IL9R; ILK; INHA; INHBA; INSL3; INSL4; IRAK1; IRAK2; ITGA1; ITGA2; 1TGA3; ITGA6 (a6-Integrin); ITGAV; ITGB3; ITGB4 (b 4 integrin); JAG1; JAK1; JAK3; JUN; K6HF; KAI1; KDR; MTLG; KLF5 (GC Box BP); KLF6; KLK10; KLK12; KLK13; KLK14; KLK15; KLK3; KLK4; KLK5; KLK6; KLK9; KRT1; KRT19 (Keratin 19); KRT2A; KRTHB6 (haarspezifisches Typ-II-Keratin); LAG3; LAMA5; LEP (leptin); LIGHT; Lingo-p75; Lingo-Troy; LPS; LRP5; LTA (TNF-b); LTB; LTB4R (GPR16); LTB4R2; LTBR; MACMARCKS; MAG oder Omgp; MAP2K7 (c-Jun); MDK; MIB1; midkine; MIF; MIP-2; MK167 (Ki-67); MMP2; MMP9; MS4A1; MSMB; MT3 (Metallothionectin-ifi); MISS 1; MUC 1 (Mucin); MYC; MYD88; NCK2; Neurocan; Na_v1.7; Na_v1.8; NFKB 1; NFKB2; NGFB (NGF); NGFR; NgR-Lingo; NgR-Nogo66 (Nogo); NgR-p75; NgR-Troy; NME1 (NM23A); NOX5; NPPB; NROB1; NROB2; NR1D1; NR1D2; NR1H2; NR1H3; NR1H4; NR1I2; NR1I3; NR2C1; NR2C2; NR2E1; NR2E3; NR2F1; NR2F2; NR2F6; NR3C1; NR3C2; NR4A1; NR4A2; NR4A3; NR5A1; NR5A2; NR6A1; NRP1; NRP2; NT5E; NTN4; ODZ1; OPG; OPRD1; OX40L; OX40; P2RX7; PAP; PART1; PATE; PAWR; PCA3; PCNA; PCSK9, PD-1, PD-L1; PDGFA; PDGFB; PECAM1; PF4 (CXCL4); PGF; PGR; Phosphacan; PIAS2; Placental Growth Factor (PIGF); PIK3CG; PLAU (uPA); PLG; PLXDC1; PPBP (CXCL7); PPID; PR1; PRKCQ; PRKD1; PRL; PROC; PROK2; PSAP; PSCA; PTAFR; PTEN; PTGS2 (COX-2); PTN; RAC2 (p21Rac2); RARB; RGS1; RGS13; RGS3; RNF11O (ZNF144); ROBO2; ROR1; S100A2; SCGB1D2 (Lipophilin B); SCGB2A1 (Mammaglobin 2); SCGB2A2 (Mammaglobin 1); SCYE1 (endotheliales monozytenaktivierendes Zytokin); SDF2; SERPINA1; SERPINIA3; SERPINB5 (Maspin); SERPINE1 (PAT-i); SERPINF1; SHBG; SLA2; SLC2A2; SLC33A1; SLC43A1; SLIT2; SPP1; SPRR1B (Spri); ST6GAL1; STAB1; STAT6; STEAP; STEAP2; TB4R2; TBX21; TCP1O; TDGF1; TEK; TGFA; TGFB1; TGFB1I1; TGFB2; TGFB3; TGFBI; TGFBR1; TGFBR2; TGFBR3; TH1L; THBS1 (Thrombospondin-1); THBS2; THBS4; THPO; TIE (Tie-i); TIM3; TMP3; Gewebefaktor; TLR1O; TLR2; TLR3; TLR4; TLR5; TLR6; TLR7; TLR8; TLR9; TMPRSS6; TNF; TNF-a; TNFAIP2 (B94); TNFAIP3; TNFRSF1 1A; TNFRSF1A; TNFRSF1B; TNFRSF21; TNFRSF5; TNFRSF6 (Fas); TNFRSF7; TNFRSF8; TNFRSF9; TNFSF1O (TRAIL); TNFSF1 1 (TRANCE); TNFSF12 (APO3L); TNFSF13 (April); TNFSF13B; TNFSF14 (HVEM-L); TNFSF1 5 (VEGI); TNFSF1 8; TNFSF4 (0X40-Ligand); TNFSF5 (CD40-Ligand); TNFSF6 (FasL); TNFSF7 (CD27-Ligand); TNFSF8 (CD30-Ligand); TNFSF9 (4-1BB-Ligand); TOLLIP; Toll-like receptors; TOP2A (Topoisomerase lia); TP53; TPM1; TPM2; TRADD; TRAF1; TRAF2; TRAF3; TRAF4; TRAFS; TRAF6; TRAIL; TREM1; TREM2; TRPC6; TSLP; TWEAK; VEGFA; VEGFB; VEGFC; Versican; VHL C5; VLA-4; Wnt7A; XCL1 (Lymphotactin); XCL2 (SCM-Ib); XCR1 (GPR5/CCXCR1); YY1; und ZFPM2.In any configuration, aspect, concept, example, or configuration of the invention, the TOI (s) are each selected from the group consisting of ABCF1; ACVR1; ACVR1B; ACVR2; ACVR2B; ACVRL1; ADORA2A; aggrecan; AGR2; AICDA; AWI; AlG1; AKAP1; AKAP2; AIYIH; amyloid-beta; AMHR2; ANGPTI; ANGPT2; ANGPTL3; ANGPTL4; ANPEP; APC; APOC1; AR; Axl; AZGP1 (zinc a-glycoprotein); B7.1; B7.2; BATH; BAFF; BAG1; BAI1; BCL2; BCL6; BDNF; BLNK; BLR1 (MDR15); B1yS; BMP1; BMP2; BMP3B (GDF10); BMP4; BMP-6; BMPB; BMPRIA; BMPR16; BMPR2; BPAG1 (plectin); BRCA1; C19orf10 (IL27w); C3; C4A; C5; C5R1; CANT1; CASP1; CASP4; CAV1; CB1; CCBP2 (D6 / JAB61); CCL1 (I-309); CCL11 (eotaxin); CCL13 (MCP-4); CCL15 (MIP ID); CCL16 (HCC-4); CCL17 (TARC); CCL18 (PARC); CCL19 (MIP-3b); CCL2 (MCP-1); MCAF; CCL2O (MIP-3a); CCL21 (MIP-2); SLC; Exodus 2; CCL22 (MDC / STC-1); CCL23 (MPIF-1); CCL24 (MPIF-2 I eotaxin-2); CCL25 (TECK); CCL26 (eotaxin-3); CCL27 (CTACK / ILC); CCL28; CCL3 (MIP-1a); CCL4 (MIP-1b); CCL5 (RANTES); CCL7 (MCP-3); CCL8 (mcp-2); CCNA1; CCNA2; CCND1; CCNE1; CCNE2; CCR1 (CKR1 / HM145); CCR2 (mcp-1RB / RA); CCR3 (CKR3 / CMKBR3); CCR4; CCR5 (CMKBR5 / ChemR13); CCR6 (CMKBR6 / CKR-L3 / STRL22 / DRY6); CCR7 (CKR7 / EBI1); CCR8 (CMKBR8 / TER1 / CKR-L1); CCR9 (GPR-9-6); CCRL1 (VSHK1); CCRL2 (L-CCR); CD7, CD164; CD19; cd1c; CD2O; CD200; CD-22; CD24; CD28; CD3; CD37; CD38; CD3E; CD3G; CD3z; CD4; CD4O; CD40L; CD44; CD45RB; CD52; CD69; CD72; CD74; CD79A; CD79B; CD8; CD8O; CD81; CD83; CD86; CD96; CD207; CDH1 (E-cadherin); CDH10; CDH12; CDH13; CDH18; CDH19; CDH2O; CDHS; CDH7; CDHB; CDH9; CDK2; CDK3; CDK4; CDKs; CDK6; CDK7; CDK9; CDKNIA (p21Wap1 / Cip1); CDKNIB (p27Kip1); CDKNIC; CDKN2A (p161NK4a); CDKN2B; CDKN2C; CDKN3; CEBPB; CELSR3; cer1; CHGA; CHGB; chitinase; CHRNG; CHST10; CKLFSF2; CKLFSF3; CKLFSF4; CKLFSFS; CKLFSF6; CKLFSF7; CKLFSFB; CLDN3; CLDN7 (Claudin-7); CLN3; CLU (clusterin); CMKLRI; CMKORI (RDC1); CNR1; COL18A1; COL1A1; C0L4A3; COL6A1; CR2; CRP; CSF1 (M-CSF); CRLF2; CSF2 (GM-CSF); CSF3 (GCSF); CTLA4; CTNNBI (b-catenin); CTSB (Cathepsin B); CX3CL1 (SCYDi); CX3CR1 (V28); CXCR6; CXCL1 (GR01); CXCL10 (IP-10); CXCL11 (I-TAC / IP-9); CXCL12 (SDF1); CXCL13; CXCL14; CXCL16; CXCL2 (GR02); CXCL3 (GR03); CXCL5 (ENA-78 I LIX); CXCL6 (GCP-2); CXCL9 (MIG); CXCR3 (GPR9 / CKR-L2); CXCR4; CXCR6 (TYMSTR ISTRL33 I Bonzo); CYBS; CYC1; CYSLTRI; DAB2IP; DANDS; OF; DKFZp451J0118; DNCL1; DPP4; E2F1; ECGF1; EDG1; EFNAI; EFNA3; EFNB2; EGF; EGFR; ELAC2; CLOSELY; ENO1; EN02; EN03; EphA4; EphB4; EPO; ERBB2 (Her-2); EREG; ERKB; ESR1; ESR2; F3 (TF); FADD; FasL; FASN; FCERIA; FCER2; FCGR3A; FCRL4; FGF; FGF1 (aFGF); FGF1O; FGF11; FGF12; FGF12B; FGF13; FGF14; FGF16; FGF17; FGF18; FGF19; FGF2 (bFGF); FGF2O; FGF21; FGF22; FGF23; FGF3 (int-2); FGF4 (HST); FGF5; FGF6 (HST-2); FGF7 (KGF); FGF8; FGF9; FGFR3; FIGF (VEGFD); FIL1 (EPSILON); FIL1 (ZETA); FLJ12584; FLJ25530; FLRT1 (fibronectin); FLT1; FOS; FOSL1 (FRA-1); FY (DARC); GABRP (GABAa); GAGE61; GAGECI; Galectin-3; GALNAC4S-65T; GATA3; GDF5; GFI1; GGT1; GHR; GM-CSF; GNAS1; GNRH1; GPR2 (CCR10); GPR31; GPR44; GPR81 (FKSG80); GPR87; GPR137C; GRCC10 (C10); GRP; GSN (gelsolin); GSTP1; HAVCRI; HAVCR2; HDAC4; EDACS; HDAC7A; HDAC9; Hepcidin; Hemojuvelin; HGF; HIF1A; HIP1; Histamine and histamine receptors; HLA-A; HLA-DRA; HM74; HMOX1; HUMCYT2A; ICE BERG; ICOS; 1D2; IFN-a; IFNA1; IFNA2; IFNA4; IFNAS; IFNA6; IFNA7; IFNB1; IFNgamma; TFNW1; IGBP1; IGF1; IGF1R; IGF2; IGFBP2; IGFBP3; IGFBP6; IL-1; IL10; IL10RA; IL10RB; IL-11; IL11RA; IL-12; IL12A; IL12B; IL12RB1; IL12RB2; 1L13; IL13RA1; IL13RA2; 1L14; 1L15; IL15RA; IL16; 1L17; IL17B; IL17C; IL-17R; 1L18; 18BP; IL18R1; IL18RAP; 1L19; IL1A; IL-1B; IL1F1O; IL1F5; IL1F6; IL1F7; IL1F8; IL1F9; IL1HY1; IL-1R1; IL1R2; IL1RAP; IL1RAPLI; IL1RAPL2; IL1RL1; IL1RL2 IL1RN; 1L2; 1L20; IL2ORA; IL21R; 1L22; 1L22R; 1L22RA2; IL23; IL24; IL25; IL26; IL27; 1L28A; 1L28B; IL29; IL2RA; IL2RB; IL2RG; IL3; IL30; IL3RA; IL4; IL-4R; IL-5; IL5RA; IL6; IL6 receptor; IL6ST (glycoprotein 130); il7; TL7R; IL8; IL8RA; IL8RB; IL8RB; IL9; IL-9R; ILK; CONTENTS; INHBA; INSL3; INSL4; IRAK1; IRAK2; ITGA1; ITGA2; 1TGA3; ITGA6 (a6 integrin); ITGAV; ITGB3; ITGB4 (b 4 integrin); JAG1; JAK1; JAK3; June; K6HF; KAI1; KDR; middle long; KLF5 (GC Box BP); KLF6; KLK10; KLK12; KLK13; KLK14; KLK15; KLK3; KLK4; KLK5; KLK6; KLK9; KRT1; KRT19 (keratin 19); KRT2A; KRTHB6 (Hair Type II Keratin); LAG-3; LAMA5; LEP (leptin); LIGHT; Lingo-p75; Lingo Troy; LPS; LRP5; LTA (TNF-b); LTB; LTB4R (GPR16); LTB4R2; LTBR; MACMARCKS; MAG or Omgp; MAP2K7 (c-Jun); MDK; MIB1; midkine; MIF; MIP-2; MK167 (Ki-67); MMP2; MMP9; MS4A1; MSMB; MT3 (metallothionectin-ifi); MISS 1; MUC 1 (mucin); MYC; MYD88; NCK2; neurocan; Na _v 1.7; Na _v 1.8; NFKB 1; NFKB2; NGFB (NGF); NGFR; NgR Lingo; NgR-Nogo66 (Nogo); NgR p75; NgR-Troy; NME1 (NM23A); NOX5; NPPB; NROB1; NROB2; NR1D1; NR1D2; NR1H2; NR1H3; NR1H4; NR1I2; NR1I3; NR2C1; NR2C2; NR2E1; NR2E3; NR2F1; NR2F2; NR2F6; NR3C1; NR3C2; NR4A1; NR4A2; NR4A3; NR5A1; NR5A2; NR6A1; NRP1; NRP2; NT5E; NTN4; ODZ1; OPG; OPRD1; OX40L; OX40; P2RX7; PAP; PART1; PATE; PAWR; PCA3; PCNA; PCSK9, PD-1, PD-L1; PDGFA; PDGFB; PECAM1; PF4 (CXCL4); PGF; PGR; phosphacan; PIAS2; Placental Growth Factor (PIGF); PIK3CG; PLAU (uPA); PLG; PLXDC1; PPBP (CXCL7); PPID; PR1; PRKCQ; PRKD1; PRL; PROC; PROK2; PSAP; PSCA; PTAFR; PTEN; PTGS2 (COX-2); PTN; RAC2 (p21Rac2); RARB; RGS1; RGS13; RGS3; RNF11O (ZNF144); robo2; ROR1; S100A2; SCGB1D2 (Lipophilin B); SCGB2A1 (Mammaglobin 2); SCGB2A2 (Mammaglobin 1); SCYE1 (endothelial monocyte-activating cytokine); SDF2; SERPINA1; SERPINIA3; SERPINB5 (maspin); SERPINE1 (PAT-i); SERPINF1; SHBG; SLA2; SLC2A2; SLC33A1; SLC43A1; SLIT2; SPP1; SPRR1B (Spri); ST6GAL1; STAB1; STAT6; STEAP; STEAP2; TB4R2; TBX21; TCP1O; TDGF1; TEK; TGFA; TGFB1; TGFB1I1; TGFb2; TGFB3; TGFBI; TGFBR1; TGFBR2; TGFBR3; TH1L; THBS1 (thrombospondin-1); THBS2; THBS4; THPO; TIE (Tie-i); TIM3; TMP3; Tissue factor; TLR1O; TLR2; TLR3; TLR4; TLR5; TLR6; TLR7; TLR8; TLR9; TMPRSS6; TNF; TNF-a; TNFAIP2 (B94); TNFAIP3; TNFRSF1 1A; TNFRSF1A; TNFRSF1B; TNFRSF21; TNFRSF5; TNFRSF6 (Fas); TNFRSF7; TNFRSF8; TNFRSF9; TNFSF1O (TRAIL); TNFSF1 1 (TRANCE); TNFSF12 (APO3L); TNFSF13 (April); TNFSF13B; TNFSF14 (HVEM-L); TNFSF1 5 (VEGI); TNFSF1 8; TNFSF4 (0X40 ligand); TNFSF5 (CD40 ligand); TNFSF6 (FasL); TNFSF7 (CD27 ligand); TNFSF8 (CD30 ligand); TNFSF9 (4-1BB ligand); Tollip; Toll-like receptors; TOP2A (topoisomerase lia); TP53; TPM1; TPM2; TRADD; TRAF1; TRAF2; TRAF3; TRAF4; TRAF; TRAF6; TRAIL; TREM1; TREM2; TRPC6; TSLP; TWEAK; VEGFA; VEGFB; VEGF; versican; VHL C5; VLA-4; Wnt7a; XCL1 (lymphotactin); XCL2 (SCM-Ib); XCR1 (GPR5 / CCXCR1); YY1; and ZFPM2.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um ein humanes, aus Table 5 ausgewähltes TOI.In one example, the TOI is a human TOI selected from Table 5.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um OX40-Ligand.In one example, the TOI is OX40 ligand.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um OX40.In one example, the TOI is OX40.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um PCSK9.In one example, the TOI is PCSK9.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um den IL6-Rezeptor (IL-6R).In one example, the TOI is the IL6 receptor (IL-6R).

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um LIGHT.In one example, the TOI is LIGHT.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um VEGF-A.In one example, the TOI is VEGF-A.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um TNF-alpha.In one example, the TOI is TNF-alpha.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um PIGF.In one example, the TOI is PIGF.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um IGF1R.In one example, the TOI is IGF1R.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um OPG.In one example, the TOI is OPG.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um ICOS.In one example, the TOI is ICOS.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um NGF.In one example, the TOI is NGF.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um BMP6.In one example, the TOI is BMP6.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um Ferroportin.In one example, the TOI is ferroportin.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um TMPRSS6.In one example, the TOI is TMPRSS6.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um Hämojuvelin.In one example, the TOI is hemojuvelin.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um den VEGF-Rezeptor.In one example, the TOI is the VEGF receptor.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um den PDGF-Rezeptor.In one example, the TOI is the PDGF receptor.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um den Stammzellenfaktor-Rezeptor.In one example, the TOI is the stem cell factor receptor.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um Hepcidin.In one example, the TOI is hepcidin.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um den IL-4-Rezeptor alpha.In one example, the TOI is the IL-4 receptor alpha.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um Sclerostin. In one example, the TOI is sclerostin.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um den IL-13-Rezeptor.In one example, the TOI is the IL-13 receptor.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um CD7.In one example, the TOI is CD7.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um den delta-like Liganden-4 (Dll4).In one example, the TOI is the delta-like ligand-4 (Dll4).

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um HGF.In one example, the TOI is HGF.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um Angiopoietin-2 (Ang2).In one example, the TOI is Angiopoietin-2 (Ang2).

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um GDF8.In one example, the TOI is GDF8.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um ERBB3.In one example, the TOI is ERBB3.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um den IL-17-Rezeptor.In one example, the TOI is the IL-17 receptor.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um CD40.In one example, the TOI is CD40.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um CD40-Liganden.In one example, the TOI is CD40 ligand.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem TOI um EGFR.In one example, the TOI is EGFR.

Bei einem Beispiel umfasst das TOI eine wie hier beschriebene Mutation für das TOI oder ist codiert durch eine Nukleotidsequenz, die einen wie hier für das TOI beschriebenen SNP umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende TOI; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende TOI codiert.In one example, the TOI comprises a mutation for the TOI as described herein or encoded by a nucleotide sequence comprising an SNP as described herein for the TOI. Optionally, the human additionally comprises the mutant TOI; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the TOI mutant.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humane PCSK9, und es umfasst eine Mutation I474, E670G, N425S oder Q619P in SEQ ID NO: 1. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich die die Mutation umfassende PCSK9; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für die die Mutation umfassende PCSK9 codiert. Bei einer Alternative, zum Beispiel hier, wenn angegeben wird, dass eine PCSK9 eine bestimmte ”Form”, z. B. Form f, c, r, p, e, h, aj oder q, hat, handelt es sich bei der Alternative bei der PCSK9 um eine humane PCSK9, die eine Mutation ausgewählt aus R46L, A53V, N425S, A443T, I474V, Q619P und E670G (z. B. eine Mutation I474, E670G, N425S oder Q619P) in SEQ ID NO: 1 umfasst; beispielsweise umfasst die PCSK9 I474V in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 E670G in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 Q619P in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 N425S in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 R46L in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Erhöhung von Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 A53V in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Erhöhung von Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 A443T in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Erhöhung von Cholesterin im Menschen) handelt. The TOI is, for example, human PCSK9 and it comprises a mutation I474, E670G, N425S or Q619P in SEQ ID NO: 1. Optionally, the human additionally comprises the mutant PCSK9; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant PCSK9. In an alternative, for example, here when it is stated that a PCSK9 has a particular "form", e.g. , Form f, c, r, p, e, h, aj, or q, the alternative in PCSK9 is a human PCSK9 that has a mutation selected from R46L, A53V, N425S, A443T, I474V, Q619P and E670G (eg, a mutation I474, E670G, N425S, or Q619P) in SEQ ID NO: 1; For example, PCSK9 comprises I474V in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises E670G in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises Q619P in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises N425S in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, PCSK9 comprises R46L in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , eg the increase of cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises A53V in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , eg the increase of cholesterol in humans); For example, PCSK9 comprises A443T in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , eg the increase of cholesterol in humans).

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanen IL6R, und es umfasst eine Mutation D358A oder V385I in SEQ ID NO: 78. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich den die Mutation umfassenden IL6R; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für den die Mutation umfassenden IL6R codiert.The TOI is, for example, human IL6R and comprises a mutation D358A or V385I in SEQ ID NO: 78. Optionally, the human additionally comprises the mutant IL6R; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant IL6R.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanen IL4Ra, und es umfasst eine Mutation ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R und S752A in SEQ ID NO: 67. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich den die Mutation umfassenden IL4Ra; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für den die Mutation umfassenden IL4Ra codiert.The TOI is, for example, human IL4Ra and comprises a mutation selected from the group consisting of I75V, E400A, C431R, S503P, Q576R and S752A in SEQ ID NO: 67. Optionally, the human additionally comprises the mutation IL4Ra; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant IL4Rα.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes Nav1.7, und es umfasst eine Mutation ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F, 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 328X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um Y handelt), 395K, 459X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um S handelt), 693X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um E handelt), 767X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um I handelt), 830X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 897X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 1200L, 1235L, 1488X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um R handelt), 1659X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um K handelt), 1689X (wobei X für eine Aminosäure steht, bei der es sich nicht um W handelt), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W und 1919G, z. B. ist die Mutation 1161W. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende Nav1.7; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende Nav1.7 codiert.The TOI is, for example, human Nav1.7 and includes a mutation selected from the group consisting of 136I, 216S, 241T, 395K, 848T, 858H, 858F, 863P, 1449V, 996C, 1298F, 1298D, 1299F , 1461T, 1462V, 1464I, 1627K, 277X (where X is an amino acid other than R), 328X (where X is an amino acid other than Y), 395K, 459X (where X is an amino acid other than S), 693X (where X is an amino acid other than E), 767X (where X is an amino acid which is itself not I), 830X (where X is an amino acid other than R), 897X (where X is an amino acid other than W), 1200L, 1235L, 1488X ( where X is an amino acid other than R), 1659X (where X is an amino acid other than K), 1689X (where X is an amino acid other than R) r is an amino acid other than W), 422D, 490N, 943L, 1002L, 1161W and 1919G, e.g. For example, the mutation is 1161W. Optionally, the human additionally includes the mutant Nav1.7; or the human comprises a nucleotide sequence coding for the mutant Nav1.7.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanen VEGF-A, und es wird codiert durch eine VEGF-A-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus rs699947, rs833061, rs2010963, rs3025039, rs699946, rs2146323, rs1413711, rs833068, rs833069, rs3025000 und rs1570360 umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich den die Mutation umfassenden VEGF-A; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für den die Mutation umfassenden VEGF-A codiert.The TOI is, for example, human VEGF-A, and it is encoded by a VEGF-A nucleotide sequence containing an SNP selected from the group consisting of rs699947, rs833061, rs2010963, rs3025039, rs699946, rs2146323, rs1413711, rs833068 , rs833069, rs3025000 and rs1570360. Optionally, the human additionally includes the mutant VEGF-A; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant VEGF-A.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanen PDGF-B, und es wird codiert durch eine PDGF-B-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus rs142404523 (d. h. einem C entsprechend Position –776) und einem C in der Position von rs1800818 (d. h. einem C entsprechend Position –735) umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich den die Mutation umfassenden PDGF-B; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für den die Mutation umfassenden PDGF-B codiert.The TOI is, for example, human PDGF-B, and it is encoded by a PDGF-B nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of rs142404523 (ie, a C corresponding to position -776) and a C in the Position of rs1800818 (ie, a C corresponding to position -735). Optionally, the human additionally comprises the mutant PDGF-B; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant PDGF-B.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanen PDGFR-B, und es wird codiert durch eine PDGFR-B-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus rs246395 (d. h. einem G entsprechend Position 2601) und rs74943037 (d. h. einem T entsprechend Position 1391) umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich den die Mutation umfassenden PDGFR-B; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für den die Mutation umfassenden PDGFR-B codiert.The TOI is, for example, human PDGFR-B, and it is encoded by a PDGFR-B nucleotide sequence containing an SNP selected from the group consisting of rs246395 (ie, a G corresponding to position 2601) and rs74943037 (ie, a T according to heading 1391). Optionally, the human additionally comprises the mutant PDGFR-B; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant PDGFR-B.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes PD-L1, und es wird codiert durch eine PD-L1-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten PD-L1-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende PD-L1; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende PD-L1 codiert.The TOI is, for example, human PD-L1, and it is encoded by a PD-L1 nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the PD-L1 SNPs recited herein. Optionally, the human additionally comprises the mutant PD-L1; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant PD-L1.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes PD-1, und es wird codiert durch eine PD-L1-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten PD-I-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende PD-1; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende PD-1 codiert.The TOI is, for example, human PD-1 and it is encoded by a PD-L1 nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the PD-I SNPs recited herein. Optionally, the human additionally comprises the mutant PD-1; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant PD-1.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes Angiopoietin (z. B. Ang-2), und es wird codiert durch eine Angiopoietin-(z. B. Ang-2)-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten Angiopoietin-(z. B. Ang-2)-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende Angiopoietin (z. B. Ang-2); oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende Angiopoietin (z. B. Ang-2) codiert.The TOI is, for example, human angiopoietin (e.g., Ang-2) and is encoded by an angiopoietin (e.g., Ang-2) nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the angiopoietin (e.g., Ang-2) listed herein Includes SNPs. Optionally, the human additionally comprises the mutant angiopoietin (eg, Ang-2); or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant angiopoietin (e.g., Ang-2).

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes BMP6, und es wird codiert durch eine BMP6-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten BMP6-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende BMP6; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende BMP6 codiert.The TOI is, for example, human BMP6 and it is encoded by a BMP6 nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the BMP6 SNPs recited herein. Optionally, the human additionally includes the mutant BMP6; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant BMP6.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes Hämojuvelin, und es wird codiert durch eine Hämojuvelin-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten Hämojuvelin-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende Hämojuvelin; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende Hämojuvelin codiert.The TOI is, for example, human hemojuvelin, and it is encoded by a hemojuvelin nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the hemojuvelin SNPs recited herein. Optionally, the human additionally comprises the mutant hemojuvelin; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant hemojuvelin.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes Hepcidin, und es wird codiert durch eine Hepcidin-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten Hepcidin-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende Hepcidin; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende Hepcidin codiert.The TOI is, for example, human hepcidin and is encoded by a hepcidin nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the hepcidin SNPs recited herein. Optionally, the human additionally comprises the hepcidin comprising the mutation; or the human comprises a nucleotide sequence coding for the mutant hepcidin.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes Ferroportin, und es wird codiert durch eine Ferrportin-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten Ferroportin-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende Ferroportin; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende Ferroportin codiert.The TOI is, for example, human ferroportin and is encoded by a ferrportin nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the ferroportin SNPs listed herein. Optionally, the human additionally comprises the mutant ferroportin; or the human comprises a nucleotide sequence coding for the mutant ferroportin.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes TMPRSS6, und es wird codiert durch eine TMPRSS6-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten TMPRSS6-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende TMPRSS6; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende TMPRSS6 codiert.The TOI is, for example, human TMPRSS6 and it is encoded by a TMPRSS6 nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the TMPRSS6 SNPs listed herein. Optionally, the human additionally includes the mutant TMPRSS6; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutation comprising TMPRSS6.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes Transferrin, und es wird codiert durch eine Transferrin-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten Transferrin-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende Transferrin; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende Transferrin codiert.The TOI is, for example, human transferrin and is encoded by a transferrin nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the transferrin SNPs listed herein. Optionally, the human additionally comprises the mutant comprehensive transferrin; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant transferrin.

Bei dem TOI handelt es sich zum Beispiel um humanes Hämochromatoseprotein (HFE), und es wird codiert durch eine HFE-Nukleotidsequenz, die einen SNP ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den hier angeführten HFE-SNPs umfasst. Gegebenenfalls umfasst der Mensch zusätzlich das die Mutation umfassende HFE; oder der Mensch umfasst eine Nukleotidsequenz, die für das die Mutation umfassende HFE codiert.The TOI is, for example, human hemochromatosis protein (HFE) and is encoded by an HFE nucleotide sequence comprising an SNP selected from the group consisting of the HFE-SNPs recited herein. Optionally, the human additionally comprises the mutant HFE; or the human comprises a nucleotide sequence encoding the mutant HFE.

Zur Vereinfachung sind unten die Bedeutungen einiger der in der Beschreibung, den Beispielen und den angefügten Ansprüchen verwendeten Begriffe und Ausdrücke aufgeführt. Wenn nicht anders angegeben oder aus dem Zusammenhang ersichtlich ist, schließen die folgenden Begriffe und Ausdrücke die unten aufgeführten Bedeutungen ein. Die Definitionen werden bereitgestellt, um bei der Beschreibung bestimmter Ausführungsformen zu helfen, und sollen die beanspruchte Erfindung nicht einschränken, da der Schutzbereich der Erfindung ausschließlich durch die Ansprüche eingeschränkt wird. Wenn nicht anders definiert haben alle hier verwendeten technischen und wissenschaftlichen Begriffe die gleiche Bedeutung, wie sie gewöhnlich vom Durchschnittsfachmann auf dem Gebiet, zu dem die vorliegende Erfindung zählt, verstanden wird. Sollte es eine scheinbare Diskrepanz zwischen der Weise, in der ein Begriff im Stand der Technik verwendet wird, und den hier gegebenen Definitionen geben, so soll der in der Beschreibung bereitgestellten Definition der Vorrang gegeben werden.For convenience, the meanings of some of the terms and terms used in the specification, examples, and appended claims are listed below. Unless otherwise stated or obvious from the context, the following terms and expressions include the meanings listed below. The definitions are provided to aid in the description of particular embodiments, and are not intended to limit the claimed invention, as the scope of the invention is limited only by the claims. Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. Should there be an apparent discrepancy between the manner in which a term is used in the art and the definitions given herein, the definition provided in the description should be given precedence.

Zur Vereinfachung sind hier bestimmte hier, in der Beschreibung, den Beispielen und den angefügten Ansprüchen verwendete Begriffe gesammelt.For convenience, certain terms used herein, in the description, examples and appended claims, are collected here.

Die Begriffe ”vermindern”, ”reduziert” oder ”Reduzierung” werden hier alle zur Bezeichnung einer Verminderung um eine statistisch signifikante Menge verwendet. Gemäß einigen Ausführungsformen bedeutet ”reduzieren”, ”Reduzierung” bzw. ”Verminderung” typischerweise eine Verminderung um wenigstens 10% im Vergleich zum Vergleichsspiegel (z. B. der Abwesenheit einer gegebenen Behandlung) und kann zum Beispiel eine Verminderung um wenigstens etwa 10%, wenigstens etwa 20%, wenigstens etwa 25%, wenigstens etwa 30%, wenigstens etwa 35%, wenigstens etwa 40%, wenigstens etwa 45%, wenigstens etwa 50%, wenigstens etwa 55%, wenigstens etwa 60%, wenigstens etwa 65%, wenigstens etwa 70%, wenigstens etwa 75%, wenigstens etwa 80%, wenigstens etwa 85%, wenigstens etwa 90%, wenigstens etwa 95%, wenigstens etwa 98%, wenigstens etwa 99% oder mehr einschließen. So wie hier verwendet schließt ”Reduzierung” nicht eine vollständige Reduzierung im Vergleich zu einem Vergleichsspiegel ein. Eine Verminderung erfolgt vorzugsweise hinunter auf einen Spiegel, von dem anerkannt ist, dass er für ein Individuum ohne eine gegebene Erkrankung im Normalbereich liegt. Für die Zwecke der Absenkung bzw. Reduzierung des Cholesterinspiegels beispielsweise kann eine Reduzierung von etwa 5–10 Punkten als eine ”Verminderung” oder ”Reduzierung” angesehen werden.The terms "reduce", "reduce" or "reduce" are all used herein to refer to a decrease by a statistically significant amount. In accordance with some embodiments, reducing, reducing or decreasing typically means a reduction of at least 10% compared to the comparison level (e.g., the absence of a given treatment) and may, for example, be reduced by at least about 10%, at least about 20%, at least about 25%, at least about 30%, at least about 35%, at least about 40%, at least about 45%, at least about 50%, at least about 55%, at least about 60%, at least about 65%, at least about 70%, at least about 75%, at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, at least about 99% or more. As used herein, "reduction" does not include a complete reduction compared to a comparison mirror. A reduction is preferably made down to a level that is recognized to be within the normal range for an individual without a given disease. For example, for purposes of lowering or reducing cholesterol, a reduction of about 5-10 points may be considered a "reduction" or "reduction."

Bei bestimmten Aspekten aller Ausführungsformen der Erfindung wird der Begriff ”Inhibierung” verwendet. Inhibierung bezieht und bezieht sich auf eine Verminderung um wenigstens 10% im Vergleich zu einem Vergleichsspiegel (z. B. die Abwesenheit einer gegebenen Behandlung) und kann zum Beispiel eine Verminderung um wenigstens etwa 10%, wenigstens etwa 20%, wenigstens etwa 25%, wenigstens etwa 30%, wenigstens etwa 35%, wenigstens etwa 40%, wenigstens etwa 45%, wenigstens etwa 50%, wenigstens etwa 55%, wenigstens etwa 60%, wenigstens etwa 65%, wenigstens etwa 70%, wenigstens etwa 75%, wenigstens etwa 80%, wenigstens etwa 85%, wenigstens etwa 90%, wenigstens etwa 95%, wenigstens etwa 98%, wenigstens etwa 99% oder mehr einschließlich 100% Inhibierung im Vergleich zu einem Vergleichsspiegel einschließen. ”Vollständige Inhibierung” bezieht sich auf eine 100%ige Inhibierung im Vergleich zu einem Vergleichsspiegel.In certain aspects of all embodiments of the invention, the term "inhibition" is used. Inhibition refers to and refers to a reduction of at least 10% compared to a comparative level (e.g., the absence of a given treatment) and may, for example, be reduced by at least about 10%, at least about 20%, at least about 25%, at least about 30%, at least about 35%, at least about 40%, at least about 45%, at least about 50%, at least about 55%, at least about 60%, at least about 65%, at least about 70%, at least about 75%, at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, at least about 99%, or more including 100% inhibition compared to a comparison level. "Complete inhibition" refers to a 100% inhibition compared to a comparison level.

Die Begriffe ”erhöht”, ”Erhöhung”, ”verstärken” oder ”aktivieren” werden hier alle zur Bezeichnung einer Erhöhung um eine statistisch signifikante Menge verwendet. Gemäß einigen Ausführungsformen können die Begriffe ”erhöht”, ”Erhöhung”, ”verstärken” oder ”aktivieren” eine Erhöhung von wenigstens 10% im Vergleich zu einem Vergleichsspiegel, zum Beispiel eine Erhöhung von wenigstens etwa 20%, oder wenigstens etwa 30%, oder wenigstens etwa 40%, oder wenigstens etwa 50%, oder wenigstens etwa 60%, oder wenigstens etwa 70%, oder wenigstens etwa 80%, oder wenigstens etwa 90% oder bis zu und einschließlich einer 100%igen Erhöhung oder eine Erhöhung zwischen 10–100% im Vergleich zu einem Vergleichsspiegel, oder wenigstens etwa eine 2-fache, oder wenigstens etwa eine 3-fache, oder wenigstens etwa eine 4-fache, oder wenigstens etwa eine 5-fache oder wenigstens etwa eine 10-fache Erhöhung, oder eine beliebige Erhöhung zwischen 2-fach und 10-fach oder mehr im Vergleich zu einem Vergleichsspiegel, bedeuten. Im Zusammenhang mit einem Marker oder Symptom ist eine ”Erhöhung” eine statistisch signifikanten Erhöhung eines solchen Spiegels.The terms "increased", "increase", "enhance" or "activate" are all used herein to refer to an increase by a statistically significant amount. According to some embodiments, the terms "increased," "increase," "enhance," or "activate" may include an increase of at least 10% compared to a comparison level, for example, an increase of at least about 20%, or at least about 30%, or at least about 40%, or at least about 50%, or at least about 60%, or at least about 70%, or at least about 80%, or at least about 90% or up to and including a 100% increase or an increase between 10 100% compared to a comparative mirror, or at least about 2 times, or at least about 3 times, or at least about 4 times, or at least about 5 times, or at least about 10 times, increasing any increase between 2-fold and 10-fold or more compared to a comparison mirror mean. In the context of a marker or symptom, an "increase" is a statistically significant increase in such a level.

So, wie der Begriff hier verwendet wird, bezieht sich ”im Wesentlichen” auf die qualitative Bedingung, dass ein vollständiges oder nahezu vollständiges Ausmaß bzw. ein solcher Grad eines interessierenden Charakteristikums oder einer Eigenschaft gezeigt wird. Dem Durchschnittsfachmann auf dem Gebiet der Biologie wird bewusst sein, dass biologische und chemische Phänomene selten, wenn überhaupt, vollständig ablaufen und/oder bis zur Vollständigkeit verlaufen oder ein absolutes Ergebnis erreichen oder vermeiden. Mit dem Begriff ”im Wesentlichen” soll daher hier das mögliche Fehlen von Vollständigkeit, das vielen biologischen und chemischen Phänomenen eigen ist, ausgedrückt werden. Um Zweifel zu vermeiden: ”im Wesentlichen” kann sich hier auf ein Ausmaß oder einen Grad eines interessierenden Charakteristikums oder einer interessierenden Eigenschaft von wenigstens 90%, z. B. wenigstens 90%, wenigstens 92%, wenigstens 95%, wenigstens 98%, wenigstens 99% oder mehr beziehen.As the term is used herein, "substantially" refers to the qualitative condition that a complete or nearly complete degree or degree of feature or feature of interest is shown. It will be appreciated by those of ordinary skill in the biology arts that biological and chemical phenomena rarely, if ever, are complete and / or exhaustive, or achieve or avoid an absolute result. The term "essentially" is therefore intended to express the possible lack of completeness peculiar to many biological and chemical phenomena. To avoid doubts, "substantially" may here refer to a degree or degree of interest characteristic or property of at least 90%, e.g. At least 90%, at least 92%, at least 95%, at least 98%, at least 99% or more.

So, wie der Begriff hier verwendet wird, bezeichnet ”Subjekt” einen Menschen oder ein Tier. Gewöhnlich handelt es sich bei dem Tier um ein Wirbeltier wie einen Primaten, ein Nagetier, ein Haustier oder ein Jagdwild. Zu den Primaten zählen Schimpansen, Javaneraffen, Klammeraffen und Makaken, z. B. Rhesusaffen. Zu den Nagetieren zählen Mäuse, Ratten, Waldmurmeltiere, Frettchen, Kaninchen und Hamster. Gemäß einigen Ausführungsformen handelt es sich bei dem Subjekt um ein Säugetier, z. B. einen Primaten, z. B. einen Menschen. Die Begriffe ”Individuum”, ”Patient” und ”Subjekt” werden hier austauschbar verwendet. Gemäß einigen Ausführungsformen kann es sich bei dem Subjekt um ein nicht menschliches Wirbeltier handeln, z. B. einen Primaten, ein Nagetier, eine Maus, eine Ratte, ein Schwein, ein Schaf, einen Zebrafisch, einen Frosch usw.As the term is used herein, "subject" refers to a human or an animal. Usually, the animal is a vertebrate, such as a primate, a rodent, a pet, or a game bird. The primates include chimpanzees, Javaaner monkeys, spider monkeys and macaques, eg. B. rhesus monkeys. The rodents include mice, rats, woodchucks, ferrets, rabbits and hamsters. According to some embodiments, the subject is a mammal, e.g. B. a primate, z. For example, a human. The terms "individual", "patient" and "subject" are used interchangeably herein. According to some embodiments, the subject may be a non-human vertebrate, e.g. A primate, a rodent, a mouse, a rat, a pig, a sheep, a zebrafish, a frog, etc.

Das Subjekt ist vorzugsweise ein Säugetier. Bei dem Säugetier kann es sich um einen Menschen, einen nicht menschlichen Primaten, eine Maus, eine Ratte, einen Hund, eine Katze, ein Pferd oder eine Kuh handeln, wobei diese Beispiele nicht einschränkend sind. Säugetiere, bei denen es sich nicht um Menschen handelt, lassen sich vorteilhaft als Subjekte einsetzen, die Tiermodelle einer Krankheit bzw. eines Leidens, z. B. eines Herz-Kreislauf-Leidens, darstellen. Ein Subjekt kann männlich oder weiblich sein.The subject is preferably a mammal. The mammal may be a human, a nonhuman primate, a mouse, a rat, a dog, a cat, a horse or a cow, these examples being non-limiting. Non-human mammals may be advantageously used as subjects having animal models of a disease or condition, e.g. As a cardiovascular disease represent. A subject can be male or female.

Ein Subjekt kann eines sein, bei dem zuvor diagnostiziert bzw. festgestellt wurde, dass es an einem Leiden leidet bzw. dieses hat, das einer Behandlung bedarf, oder eine oder mehrere Komplikationen, die mit einem solchen Leiden in Zusammenhang stehen, und die sich gegebenenfalls schon einer Behandlung für das Leiden oder die eine oder die mehreren mit dem Leiden in Zusammenhang stehenden Komplikationen unterzogen haben. Alternativ dazu kann es sich bei dem Subjekt auch um eines handeln, bei dem das Leiden oder die eine oder die mehreren mit dem Leiden in Zusammenhang stehenden Komplikationen bisher noch nicht diagnostiziert wurden. Beispielsweise kann es sich bei dem Subjekt um eines handeln, das einen oder mehrere Risikofaktoren für das Leiden oder die eine oder die mehreren mit dem Leiden in Zusammenhang stehenden Komplikationen aufweist, oder ein Subjekt, das keine Risikofaktoren aufweist.A subject may be one who has previously been diagnosed or found to be suffering from or has a condition requiring treatment, or one or more complications associated with such a condition, and who may be already a treatment for the suffering or have undergone one or more complications associated with the condition. Alternatively, the subject may also be one who has not yet been diagnosed with the condition or the one or more complications associated with the condition. For example, the subject may be one having one or more risk factors for the condition or the one or more complications associated with the condition, or a subject having no risk factors.

Bei einem einer Behandlung eines bestimmten Leidens ”bedürftigen Subjekt” oder ”bedürftigen Menschen” kann es sich um ein Subjekt handeln, das dieses Leiden, wie z. B. erhöhte Cholesterinspiegel, hat, bei dem ein solches Leiden diagnostiziert wurde oder bei dem das Risiko des Auftretens des Leidens besteht.A subject in need of treatment for a particular affliction or "needy person" may be a subject suffering from such a disease, such as a patient. B. has elevated cholesterol levels, in which such a condition has been diagnosed or in which there is a risk of the occurrence of the disease.

So wie hier verwendet werden die Begriffe ”Protein” und ”Polypeptid” austauschbar zur Bezeichnung einer Reihe von Aminosäureresten, die durch Peptidbindungen zwischen den alpha-Amino- und Carboxylgruppen benachbarter Reste miteinander verbunden sind, verwendet. Die Begriffe ”Protein” und ”Polypeptid” beziehen sich auf ein Polymer von Aminosäuren mit natürlichen Aminosäuren. Wenn auf ”modifizierte Polypeptide” Bezug genommen wird, so bezieht sich dies auf Polypeptide, die modifizierte Aminosäuren (z. B. phosphorylierte, glykierte, glykosylierte usw.) und Aminosäureanaloga einschließen, unabhängig von ihrer Größe oder Funktion. ”Protein” und ”Polypeptid” werden häufig in Bezug auf relativ große Polypeptide verwendet, wärend der Begriff ”Peptid” häufig in Bezug auf kleine Polypeptide verwendet wird, aber der Gebrauch dieser Begriffe im Stand der Technik überlappt sich. Die Begriffe ”Protein” und ”Polypeptid” werden hier austauschbar verwendet, wenn auf ein Genprodukt und Fragmente davon Bezug genommen wird. Beispielhafte Polypeptide oder Proteine schließen somit Genprodukte, natürlich vorkommende Proteine mit der angegebenen Sequenz ein. Man kann auch Peptidhomologe, Peptidorthologe, Peptideparaloge, Peptidfragmente und andere Äquivalente, Varianten, Fragmente und Analoga der Peptide verwenden, da der Durchschnittsfachmann mit diesen Begriffen vertraut ist.As used herein, the terms "protein" and "polypeptide" are used interchangeably to refer to a series of amino acid residues joined together by peptide bonds between the alpha-amino and carboxyl groups of adjacent residues. The terms "protein" and "polypeptide" refer to a polymer of amino acids with natural amino acids. When referring to "modified polypeptides", it refers to polypeptides that include modified amino acids (e.g., phosphorylated, glycated, glycosylated, etc.) and amino acid analogs, regardless of their size or function. "Protein" and "polypeptide" are often used in reference to relatively large polypeptides, while the term "peptide" is often used in reference to small polypeptides, but the use of these terms in the prior art overlaps. The terms "protein" and "polypeptide" are used interchangeably herein when referring to a gene product and fragments thereof. Exemplary polypeptides or proteins thus include gene products, naturally occurring proteins of the indicated sequence. One can also use peptide homologs, peptide-tortohols, peptide paralogues, peptide fragments, and other equivalents, variants, fragments, and analogs of the peptides, as one of ordinary skill in the art will be familiar with these terms.

So, wie er hier verwendet wird, bezieht sich der Begriff ”Nukleinsäure” oder ”Nukleinsäuresequenz” auf ein beliebiges Molekül, vorzugsweise ein polymeres Molekül, das Einheiten von Ribonukleinsäure, Desoxyribonukleinsäure umfasst. Die Nukleinsäure kann entweder einzelsträngig oder doppelsträngig sein. Bei einer einzelsträngigen Nukleinsäure kann es sich um einen Nukleinsäurestrang einer denaturierten doppelsträngigen DNA handeln. Alternativ dazu kann es sich um eine einzelsträngige Nukleinsäure handeln, die sich nicht von einer doppelsträngigen DNA ableitet. Gemäß einem Aspekt kann es sich bei der Nukleinsäure um DNA handeln. Gemäß einem anderen Aspekt kann es sich bei der Nukleinsäure um RNA handeln. Geeignete Nukleinsäuremoleküle sind DNA einschließlich genomischer DNA oder cDNA. Andere geeignete Nukleinsäuremoleküle sind RNA einschließlich mRNA. Gemäß einigen Aspekten kann man auch Analoga von Nukleinsäuren verwenden.As used herein, the term "nucleic acid" or "nucleic acid sequence" refers to any molecule, preferably a polymeric molecule comprising units of ribonucleic acid, deoxyribonucleic acid. The nucleic acid can be either single-stranded or double-stranded. A single-stranded nucleic acid may be a nucleic acid strand of a denatured double-stranded DNA. Alternatively, it may be a single-stranded nucleic acid that does not derive from a double-stranded DNA. In one aspect, the nucleic acid may be DNA. In another aspect, the nucleic acid may be RNA. Suitable nucleic acid molecules are DNA including genomic DNA or cDNA. Other suitable nucleic acid molecules are RNA, including mRNA. In some aspects, one can also use analogs of nucleic acids.

So, wie er hier verwendet wird, bezieht sich der Begriff ”Nukleinsäuresonde” auf ein isoliertes Oligonukleotidmolekül mit einer Nukleinsäuresequenz, die mit einer Target-Nukleinsäuresequenz hybridiseren kann, z. B. spezifisch mit der Targetsequenz hybridisiert. Gemäß einigen Ausführungsformen kann eine Nukleinsäuresonde ferner einen nachweisbaren Marker umfassen. Gemäß einigen Ausführungsformen kann eine Nukleinsäuresonde an einer festen Oberfläche gebunden sein. Gemäß einigen Ausführungsformen hat eine Nukleinsäure eine Länge von etwa 5 nt bis etwa 100 nt.As used herein, the term "nucleic acid probe" refers to an isolated oligonucleotide molecule having a nucleic acid sequence capable of hybridizing to a target nucleic acid sequence, e.g. B. specifically hybridized with the target sequence. In some embodiments, a nucleic acid probe may further comprise a detectable marker. According to some embodiments, a nucleic acid probe may be bound to a solid surface. In some embodiments, a nucleic acid has a length of about 5 nt to about 100 nt.

So, wie er hier verwendet wird, bezieht sich der Begriff ”siRNA” auf eine Nukleinsäure, die ein RNA-Molekül bildet, das zwei einzelne RNA-Stränge umfasst, die im Wesentlichen komplementär zueinander sind. Typischerweise hat die siRNA eine Länge von wenigstens etwa 15–40 Nukleotiden (z. B. haben die komplementären Sequenzen der doppelsträngigen siRNA jeweils eine Länge von etwa 15–40 Nukleotiden und die doppelsträngige siRNA hat eine Länge von etwa 15–40 Rasenpaaren, vorzugsweise etwa 19–25 Basennukleotiden, z. B. mit einer Länge von 19, 20, 21, 22, 23, 24 oder 25 Nukleotiden). Gemäß einigen Ausführungsformen kann eine siRNA abgestumpfte Enden aufweisen. Gemäß einigen Ausführungsformen kann eine siRNA auf den einzelnen Strängen einen 3'- und/oder 5'-Überhang mit einer Länge von etwa 0, 1, 2, 3, 4 oder 5 Nukleotiden aufweisen. Die Länge des Überhangs ist zwischen den beiden Strängen unabhängig, d. h. die Länge des Überhangs an dem einen Strang hängt nicht von der Länge des Überhangs an dem zweiten Strang ab. Die siRNA-Moleküle können auch eine 3'-Hydroxygruppe umfassen. Gemäß einigen Ausführungsformen kann die siRNA eine 5'-Phosphatgruppe umfassen. Eine siRNA hat die Fähigkeit, die Expression eines Gens oder einer Target-RNA zu reduzieren oder inhibieren, wenn die siRNA in der gleichen Zelle wie das Target-Gen, z. B. die Target-RNA, vorliegt oder darin exprimiert wird. Beim siRNA-anhängigen posttranskriptionalen Silencing der Genexpression wird das Target-RNA-Molekül an einer Stelle geführt durch die siRNA geschnitten.As used herein, the term "siRNA" refers to a nucleic acid that forms an RNA molecule comprising two distinct RNA strands that are substantially complementary to each other. Typically, the siRNA is at least about 15-40 nucleotides in length (e.g., the complementary sequences of the double-stranded siRNA are each about 15-40 nucleotides in length, and the double-stranded siRNA is about 15-40 troughs in length, preferably about 19-25 base nucleotides, e.g., 19, 20, 21, 22, 23, 24, or 25 nucleotides in length). According to some embodiments, an siRNA may have truncated ends. In some embodiments, an siRNA on the individual strands may have a 3 'and / or 5' overhang of about 0, 1, 2, 3, 4, or 5 nucleotides in length. The length of the overhang is independent between the two strands, d. H. the length of the overhang on the one strand does not depend on the length of the overhang on the second strand. The siRNA molecules may also include a 3'-hydroxy group. According to some embodiments, the siRNA may comprise a 5'-phosphate group. An siRNA has the ability to reduce or inhibit the expression of a gene or target RNA when the siRNA is in the same cell as the target gene, e.g. As the target RNA, is present or expressed therein. In siRNA-dependent post-transcriptional silencing of gene expression, the target RNA molecule is cut at one site through the siRNA.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”PCSK9” oder ”Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9” auf eine Serinprotease, die an der Regulierung der Konzentrationen des Rezeptorproteins für das Lipoprotein niederer Dichte (Low Density Lipoprotein Receptor, LDLR) beteiligt ist ( Horton et al., 2007; Seidah and Prat, 2007 ). Es wurde gezeigt, dass PCSK9 in direkte Wechselwirkung mit dem LDLR-Protein tritt, zusammen mit dem LDLR endozytosiert wird und beim Durchlaufen des endosomalen Pfades gemeinsam mit dem LDLR immunfluoresziert ( Lagace et al., 2006 ). PCSK9 ist eine Prohormon-Proprotein-Konvertase aus der Subtilisin-(S8)-Familie der Serinproteasen ( Seidah et al., 2003 ). Die Sequenz von PCSK9 verschiedener Arten ist bekannt, z. B. humane PCSK9 (NCBI Gene ID No: 255738). Nukleotid- und Polypeptidsequenzen für eine Reihe von PCSK9-Isoformen werden hier bereitgestellt, z. B. SEQ ID NO: 1-37.As used herein, "PCSK9" or "Proprotein Convertase Subtilisin / Kexin Type 9" refers to a serine protease involved in the regulation of receptor protein levels for the lipoprotein Low Density Lipoprotein Receptor (LDLR) is involved ( Horton et al., 2007; Seidah and Prat, 2007 ). It has been shown that PCSK9 interacts directly with the LDLR protein, is endocytosed together with the LDLR, and is immunofluoresced with the LDLR along the endosomal pathway ( Lagace et al., 2006 ). PCSK9 is a prohormone proprotein convertase from the subtilisin (S8) family of serine proteases ( Seidah et al., 2003 ). The sequence of PCSK9 of various types is known, e.g. B. human PCSK9 (NCBI Gene ID No: 255738). Nucleotide and polypeptide sequences for a variety of PCSK9 isoforms are provided herein, e.g. SEQ ID NO: 1-37.

PCSK9 existiert sowohl als eine Pro-Form als auch als eine reife Form. Zu einer Autokatalyse der PCSK9-Proform kommt es zwischen Gln152 und Ser153 (VFAQ|SIP (SEQ ID NO: 116)) ( Naureckiene et al., 2003 ), und es wurde gezeigt, dass diese für ihre Sezernierung aus Zellen erforderlich ist ( Seidah et al., 2003 ). Die inaktive Form vor dieser Spaltung kann hier als ”inaktive”, ”Pro-Form” oder ”nicht prozessierte” Form von PCSK9 bezeichnet werden. Das durch das Autokatalyseereignis erzeugte C-terminale Fragment kann hier als ”reife”, ”gespaltene”, ”prozessierte” oder ”aktive” PCSK9 bezeichnet werden. Beispiele für Pro-Form- und reife PCSK9-Isoformen werden hier bereitgestellt, siehe z. B. SEQ ID NO: 1-27.PCSK9 exists both as a pro form and as a mature form. Autocatalysis of the PCSK9 proform occurs between Gln152 and Ser153 (VFAQ | SIP (SEQ ID NO: 116)) ( Naureckiene et al., 2003 ), and has been shown to be required for its secretion from cells ( Seidah et al., 2003 ). The inactive form prior to this cleavage may be referred to herein as "inactive,""pro-form," or "unprocessed" form of PCSK9. The C-terminal fragment generated by the autocatalysis event may be referred to herein as "mature", "cleaved", "processed" or "active" PCSK9. Examples of pro-form and mature PCSK9 isoforms are provided herein, see e.g. SEQ ID NO: 1-27.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”katalytische Domäne” von PCSK9 auf den Abschnitt eines PCSK9-Polypeptids, der den Positionen 153 bis 449 von PCSK9 entspricht, z. B. von SEQ ID NO: 1. So, wie hier verwendet, bezieht sich ”C-terminale Domäne” von PCSK9 auf den Abschnitt eines PCSK9-Polypeptids, der den Positionen 450–692 von PCSK9 entspricht, z. B. von SEQ ID NO: 1.As used herein, "catalytic domain" of PCSK9 refers to the portion of a PCSK9 polypeptide corresponding to positions 153 to 449 of PCSK9, e.g. SEQ ID NO: 1. As used herein, "C-terminal domain" of PCSK9 refers to the portion of a PCSK9 polypeptide corresponding to positions 450-692 of PCSK9, e.g. From SEQ ID NO: 1.

So, wie hier verwendet, bezieht sich eine ”durch PCSK9 vermittelte” Krankheit bzw. ein solches Leiden auf eine Krankheit bzw. ein Leiden, welches durch eine Veränderung der PCSK9 verursacht oder charakterisiert ist, z. B. eine Veränderung beim Expressionsniveau, eine Veränderung bei der Aktivität und/oder das Vorliegen einer Variante oder Mutation von PCSK9. Nicht einschränkende Beispiele für solche Krankheiten oder Leiden können zum Beispiel eine Lipidstörung, Hyperlipoproteinämie, Hyperlipidämie; Dyslipidämie; Hypercholesterinämie, einen Herzanfall, einen Schlaganfall, koronare Herzkrankheit, Atherosklerose, periphäre Gefäßkrankheit, Klaudikation (z. B. mit erhöhtem Cholesterin assoziierte Klaudikation), Typ-II-Diabetes, Bluthochdruck und eine Herz-Kreislauf-Krankheit oder ein Herz-Kreislauf-Leiden einschließen. Ein anderes Beispiel ist akutes Koronarsyndrom. Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Krankheit oder dem Leiden um eine entzündliche oder Autoimmunkrankheit oder ein solches Leiden. Verfahren zum Identifizieren und/oder Diagnostizieren solcher Krankheiten und Leiden sind dem Durchschnittsfachmann auf dem Gebiet der Medizin gut bekannt.As used herein, a "PCSK9 mediated" disease refers to a disease or condition caused or characterized by a change in PCSK9, e.g. A change in the level of expression, a change in activity and / or the presence of a variant or mutation of PCSK9. Non-limiting examples of such diseases or conditions may include, for example, lipid disorder, hyperlipoproteinemia, hyperlipidemia; dyslipidemia; Hypercholesterolemia, heart attack, stroke, coronary heart disease, atherosclerosis, peripheral vascular disease, claudication (eg, hypercholesterolemia associated with cholesterol), type II diabetes, hypertension and cardiovascular disease, or cardiovascular disease lock in. Another example is acute coronary syndrome. In one example, the disease or condition is an inflammatory or autoimmune disease or condition. Methods for identifying and / or diagnosing such diseases and conditions are well known to those of ordinary skill in the medical arts.

Ein Subjekt, bei dem ein Risiko eines Vorliegens oder Auftretens einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines solchen Leidens besteht, kann ein Subjekt sein, das eines oder mehrere Zeichen oder Symptome einer solchen Krankheit oder eines solchen Leidens zeigt oder bei dem ein oder mehrere Risikofaktoren für eine solche Krankheit oder ein solches Leiden vorliegen, z. B. Übergewicht, erhöhter Cholesterinspiegel, ein oder mehrere genetische Polymorphismen, von denen bekannt ist, dass sie für die Krankheit bzw. das Leiden prädisponieren, z. B. erhöhter Cholesterinspiegel, wie das Aufweisen einer Mutation im LDLR-Gen (das für den Rezeptor für das Lipoprotein niederer Dichte codiert) oder APOB-Gen (das für Apolipoprotein B codiert) oder im PCSK9-Gen und/oder mit einer Familienvorgeschichte einer solchen Krankheit oder eines solchen Leidens.A subject at risk for the presence or onset of a PCSK9 mediated disease or condition may be a subject who exhibits one or more signs or symptoms of such a disease or condition, or one or more risk factors for such a disease or condition is present, e.g. Obesity, elevated cholesterol levels, one or more genetic polymorphisms known to predispose them to the disease or condition, e.g. Elevated cholesterol levels, such as having a mutation in the LDLR gene (encoding the low density lipoprotein receptor) or APOB gene (encoding apolipoprotein B) or in the PCSK9 gene and / or having a family history thereof Illness or disease.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Ligand” auf ein Molekül, das an ein zweites Molekül bzw. einen Rezeptor binden, z. B. spezifisch binden kann. Gemäß einigen Ausführungsformen kann es sich bei einem Liganden z. B. um einen Antikörper, ein Antikörperfragment, einen Teil eines Antikörpers und/oder einen Affibody handeln.As used herein, "ligand" refers to a molecule that binds to a second molecule or receptor, e.g. B. can specifically bind. In some embodiments, a ligand may be z. Example, an antibody, an antibody fragment, a part of an antibody and / or an affibody act.

Der Begriff ”Variante” bezieht sich, so wie er hier verwendet wird, auf ein Peptid oder eine Nukleinsäure, das bzw. die sich von dem Polypeptid bzw. der Nukleinsäure (z. B. der in Menschen am häufigsten vorkommenden, z. B. der in einer wie hier offenbarten Datenbank wie der 1000 Genomes Project-Datenbank häufigsten) durch eine oder mehrere Aminosäure- bzw. Nukleinsäuredeletionen, -additionen unterscheidet, jedoch eine oder mehrere spezielle Funktionen oder biologische Aktivitäten des natürlich vorkommenden Moleküls beibehält. Aminosäuresubstitutionen schließen Veränderungen ein, bei denen eine Aminosäure durch einen anderen natürlich vorkommenden Aminosäurerest ersetzt wird. Solche Substitutionen können als ”konservativ” bezeichnet werden, wobei in diesem Fall ein in einem Polypeptid enthaltener Aminosäurerest durch eine andere natürlich vorkommende Aminosäure ähnlichen Charakters in Bezug auf Polarität, Seitenkettenfunktionalität oder Größe ersetzt wird. Solche konservativen Substitutionen sind im Stand der Technik gut bekannt Von der vorliegenden Erfindung umfasste Substitutionen können auch ”nicht konservativ” sein, wobei ein in einem Peptid vorhandener Aminosäurerest durch eine Aminosäure mit anderen Eigenschaften wie eine natürlich vorkommende Aminosäure aus einer anderen Gruppe ersetzt wird (wobei z. B. eine geladene oder hydrophobe Aminosäure durch Alanin ersetzt wird) oder alternativ dazu eine natürlich vorkommende Aminosäure durch eine nicht konventionelle Aminosäure ersetzt wird. Gemäß einigen Ausführungsformen sind Aminosäuresubstitutionen konservativ. Ebenfalls umfasst vom Begriff Variante bei einer Verwendung in Bezug auf ein Polynukleotid oder Polypeptid bezieht sich auf ein Polynukleotid oder Polypeptid, dessen Primär-, Sekundär- oder Tertiärstruktur von einem Vergleichspolynukleotid bzw. -polypeptid abweichen kann (z. B. im Vergleich zu einem Wildtyp-Polynukleotid oder -Polypeptid).The term "variant" as used herein refers to a peptide or nucleic acid derived from the polypeptide or nucleic acid (e.g., the most abundant in humans, e.g. which differs in one such database as disclosed herein, such as the 1000 Genomes Project database) by one or more amino acid deletions, additions, but retains one or more specific functions or biological activities of the naturally occurring molecule. Amino acid substitutions include changes in which one amino acid is replaced by another naturally occurring amino acid residue. Such substitutions may be termed "conservative", in which case an amino acid residue contained in a polypeptide is replaced by another naturally occurring amino acid of similar character in terms of polarity, side-chain functionality or size. Such conservative substitutions are well known in the art. Substitutions encompassed by the present invention may also be "non-conservative" in which an amino acid residue present in a peptide is replaced by an amino acid having other properties, such as amino acids naturally occurring amino acid from another group is replaced (eg, a charged or hydrophobic amino acid is replaced by alanine) or, alternatively, a naturally occurring amino acid is replaced by a non-conventional amino acid. In some embodiments, amino acid substitutions are conservative. Also encompassed by the term variant when used in reference to a polynucleotide or polypeptide refers to a polynucleotide or polypeptide whose primary, secondary or tertiary structure may differ from a comparative polynucleotide or polypeptide (eg, as compared to a wild-type Polynucleotide or polypeptide).

Varianten von PCSK9 werden hier an anderer Stelle bereitgestellt. Varianten von PCSK9 können die hier als a, f, c, r, p, m, e h, aj und q beschriebenen Formen einschließen. Sequenzen dieser Varianten werden hier bereitgestellt, siehe z. B. SEQ ID NO:1–27 und in Tabellen 1, 2 bzw. 6.Variants of PCSK9 are provided elsewhere. Variants of PCSK9 may include the forms described herein as a, f, c, r, p, m, e h, a j and q. Sequences of these variants are provided here, see e.g. SEQ ID NO: 1-27 and Tables 1, 2 and 6 respectively.

Gemäß einigen Aspekten kann man ”synthetische Varianten”, ”rekombinante Varianten” oder ”chemisch modifizierte” Polynukleotidvarianten oder Polypeptidvarianten unter Anwendung von im Stand der Technik gut bekannten Methoden isolieren oder erzeugen. ”Modifizierte Varianten” können konservative oder nicht konservative, wie unten beschriebene Aminosäureveränderungen einschließen. Polynukleotidveränderungen können zu Aminosäuresubstitutionen, -additionen, -deletionen, -fusionen und -kürzungen im durch die Vergleichssequenz codierten Polypeptid führen. Einige Aspekte schließen Insertionsvarianten, Deletionsvarianten oder substituierte Varianten mit Substitutionen von Aminosäuren einschließlich Insertionen und Substitutionen von Aminosäuren und anderen Molekülen ein, die normalerweise nicht in der Peptidsequenz, die die Basis für die Variante darstellt, vorkommen, zum Beispiel, wobei dies nicht einschränkend ist, die Insertion von Ornithin, das normalerweise nicht in menschlichen Proteinen vorkommt. Bei der Beschriebung eines Polypeptids bezieht sich der Begriff ”konservative Substitution” auf eine Veränderung in der Aminosäurezusammensetzung des Polypeptids, durch die sich die Aktivität des Polypeptids nicht wesentlich ändert. Eine konservative Substitution bezieht sich zum Beispiel auf den Austausch eines Aminosäurerests gegen einen anderen Aminosäurerest mit ähnlichen chemischen Eigenschaften. Konservative Aminosäuresubstitutionen schließen den Austausch eines Leucins gegen ein Isoleucin oder Valin, eines Aspartats gegen ein Glutamat oder eines Threonins gegen ein Serin ein.In some aspects, one can isolate or generate "synthetic variants", "recombinant variants" or "chemically modified" polynucleotide variants or polypeptide variants using methods well known in the art. "Modified variants" may include conservative or non-conservative amino acid changes as described below. Polynucleotide changes may result in amino acid substitutions, additions, deletions, fusions and truncations in the polypeptide encoded by the comparison sequence. Some aspects include, but are not limited to, insertion variants, deletion variants, or substituted variants with substitutions of amino acids, including insertions and substitutions of amino acids and other molecules that are not normally present in the peptide sequence that is the basis for the variant, for example. the insertion of ornithine, which does not normally occur in human proteins. When referring to a polypeptide, the term "conservative substitution" refers to a change in the amino acid composition of the polypeptide that does not significantly alter the activity of the polypeptide. Conservative substitution, for example, refers to the replacement of one amino acid residue for another amino acid residue of similar chemical properties. Conservative amino acid substitutions include the replacement of a leucine for an isoleucine or valine, an aspartate for a glutamate or a threonine for a serine.

”Konservative Aminosäuresubstitutionen” rühren vom Austausch einer Aminosäure gegen eine andere mit ähnlichen strukturellen und/oder chemischen Eigenschaften wie den Austausch eines Leucins gegen ein Isoleucin oder Valin, eines Aspartats gegen ein Glutamat oder eines Threonins gegen ein Serin her. Eine ”konservative Substitution” einer bestimmten Aminosäuresequenz bezieht sich somit auf die Substitution der Aminosäuren, die für die Polypeptidaktivität nicht entscheidend sind, oder auf die Substitution von Aminosäuren gegen andere Aminosäuren mit ähnlichen Eigenschaften (z. B. sauer, basisch, positiv oder negativ geladen, polar oder unpolar usw.), so dass selbst die Substitution kritischer Aminosäuren die Aktivität des Peptids (d. h. die Fähigkeit des Peptids zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke (Blond Brain Barrier, BBB)) nicht vermindert. Tabellen für konservative Substitutionen, die funktionell ähnliche Aminosäuren bereitstellen, sind im Stand der Technik gut bekannt. Die folgenden sechs Gruppen beispielsweise enthalten jeweils Aminosäuren, die konservative Substitutionen füreinander darstellen: 1) Alanin (A), Serin (S), Threonin (T); 2) Asparaginsäure (D), Glutaminsäure (E); 3) Asparagin (N), Glutamin (Q); 4) Arginin (R), Lysin (K); 5) Isoleucin (I), Leucin (L), Methionin (M), Valin (V); und 6) Phenylalanin (F), Tyrosin (Y), Tryptophan (W). (Siehe auch Creighton, Proteins, W. H. Freeman and Company (1984) , die hiermit durch Verweis in ihrer Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird.) Gemäß einigen Ausführungsformen lassen sich auch einzelne Substitutionen, Deletionen oder Additionen, bei denen eine einzelne Aminosäure oder ein kleiner Prozentsatz von Aminosäuren verändert, addiert oder deletiert wird, als ”konservative Substitutionen” ansehen, wenn durch die Veränderung die Aktivität des Peptids nicht reduziert wird. Insertionen oder Deletionen liegen typischerweise im Bereich von etwa 1 bis 5 Aminosäuren. Die Wahl an konservativen Aminosäuren kann auf der Position der zu ersetzenden Aminosäure im Peptid basieren, zum Beispiel wenn sich die Aminosäure außen auf dem Peptid befindet und gegenüber Lösungsmitteln exponiert ist oder sich im Inneren befindet und Lösungsmitteln nicht zugänglich ist."Conservative amino acid substitutions" result from the replacement of one amino acid for another with similar structural and / or chemical properties as the replacement of a leucine with an isoleucine or valine, an aspartate with a glutamate or a threonine with a serine. Thus, a "conservative substitution" of a particular amino acid sequence refers to the substitution of the amino acids that are not critical for polypeptide activity, or the substitution of amino acids for other amino acids with similar properties (eg, acidic, basic, positive or negative , polar or nonpolar, etc.) so that even the substitution of critical amino acids does not diminish the activity of the peptide (ie, the ability of the peptide to cross the blood brain barrier (BBB)). Tables for conservative substitutions that provide functionally similar amino acids are well known in the art. For example, the following six groups each contain amino acids that are conservative substitutions for each other: 1) alanine (A), serine (S), threonine (T); 2) aspartic acid (D), glutamic acid (E); 3) asparagine (N), glutamine (Q); 4) arginine (R), lysine (K); 5) isoleucine (I), leucine (L), methionine (M), valine (V); and 6) phenylalanine (F), tyrosine (Y), tryptophan (W). (See also Creighton, Proteins, WH Freeman and Company (1984) , which is hereby incorporated herein by reference in its entirety.) In accordance with some embodiments, individual substitutions, deletions or additions in which a single amino acid or a small percentage of amino acids is altered, added or deleted may also be considered "conservative substitutions.""If the change does not reduce the activity of the peptide. Insertions or deletions typically range from about 1 to 5 amino acids. The choice of conservative amino acids can be based on the position of the amino acid to be replaced in the peptide, for example, if the amino acid is on the outside of the peptide and exposed to solvents or is inside and not accessible to solvents.

Bei alternativen Ausführungsformen kann man die Aminosäure, die eine vorhandene Aminosäure ersetzt, basierend auf der Position der vorhandenen Aminosäure, d. h. ihrer Exposition gegenüber Lösungsmitteln, auswählen (d. h. wenn die Aminosäure gegenüber Lösungsmitteln exponiert ist oder auf der äußeren Oberfläche des Peptids oder Polypeptids vorhanden ist, im Gegensatz zu Aminosäuren, die sich im Innern befinden und Lösungsmitteln nicht zugänglich sind). Die Auswahl solcher konservativen Aminosäuresubstitutionen sind im Stand der Technik gut bekannt, wie zum Beispiel in Dordo et al, J. MoI Biol, 1999, 217, 721–739 and Taylor et al, J. Theor. Biol. 119(1986);205–218 und S. French and B. Robson, J. MoI. Evol. 19(1983)171 . Dementsprechend kann man konservative Aminosäuresubstitutionen auswählen, die sich für Aminosäuren auf der Außenseite eines Proteins oder Peptids eignen (d. h. Aminosäuren, die gegenüber einem Lösungsmittel exponiert sind); zum Beispiel, wobei dies nicht einschränkend ist, kann man die folgenden Substitutionen durchführen: Austausch von Y gegen F, T gegen S oder K, P gegen A, E gegen D oder Q, N gegen D oder G, R gegen K, G gegen N oder A, T gegen S oder K, D gegen N oder E, I gegen L oder V, F gegen Y, S gegen T oder A, R gegen K, G gegen N oder A, K gegen R, A gegen S, K oder P.In alternative embodiments, one can select the amino acid that replaces an existing amino acid based on the position of the amino acid present, ie its exposure to solvents (ie, when the amino acid is exposed to solvents or is present on the outer surface of the peptide or polypeptide, unlike amino acids that are inside and not accessible to solvents). The selection of such conservative amino acid substitutions are well known in the art, such as in U.S. Pat Dordo et al., J. MoI Biol. 1999, 217, 721-739 and Taylor et al, J. Theor. Biol. 119 (1986); 205-218 and S. French and B. Robson, J. MoI. Evol. 19 (1983) 171 , Accordingly, one can select conservative amino acid substitutions that are suitable for amino acids on the outside of a protein or peptide (ie, amino acids that are opposite to one another) Solvent exposed); For example, but not by way of limitation, substitutions of Y for F, T for S or K, P for A, E for D or Q, N for D or G, R for K, G for N or A, T to S or K, D to N or E, I to L or V, F to Y, S to T or A, R to K, G to N or A, K to R, A to S, K or P.

Bei alternativen Ausführungsformen kann man auch konservative Aminosäuresubstitutionen auswählen, die solche einschließen, die für Aminosäuren im Inneren eines Proteins oder Peptids geeignet sind, zum Beispiel kann man geeignete konservative Substitutionen für Aminosäuren durchführen, die sich im Innern eines Proteins oder Peptids befinden (d. h. die Aminosäuren sind nicht dem Lösungsmittel ausgesetzt), zum Beispiel, wobei dies nicht einschränkend ist, kann man die folgenden konservativen Substitutionen durchführen: wo Y gegen F ausgetauscht wird, T gegen A oder S, I gegen L oder V, W gegen Y, M gegen L, N gegen D, G gegen A, T gegen A oder S, D gegen N, I gegen L oder V, F gegen Y oder L, S gegen A oder T und A gegen S, G, T oder V. Gemäß einigen Ausführungsformen fallen auch nicht konservative Aminosäuresubstitutionen unter den Begriff Varianten.In alternative embodiments, conservative amino acid substitutions may also be selected, including those suitable for amino acids within a protein or peptide, for example, one may make appropriate conservative substitutions for amino acids located within a protein or peptide (ie, the amino acids are not solvent exposed), for example, but not by way of limitation, the following conservative substitutions can be made: where Y is replaced by F, T to A or S, I to L or V, W to Y, M to L , N to D, G to A, T to A or S, D to N, I to L or V, F to Y or L, S to A or T and A to S, G, T or V. According to some embodiments not even conservative amino acid substitutions fall under the term variants.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ein ”Antikörper” auf IgG-, IgM-, IgA-, IgD- oder IgE-Moleküle oder antigenspezifische Fragmente davon (einschließlich, jedoch nicht darauf beschränkt, einem Fab, F(ab')₂, Fv, Disulfid-gebundenem Fv, scFv, Einzeldomänenantikörper, multispezifischen Antikörper mit geschlossener Konformation, Disulfid-gebundenem scfv, Diabody), ob abgeleitet von einer Art, die einen Antikörper natürlich produziert, oder erzeugt durch rekombinante DNA-Technologie; ob isoliert aus Serum, B-Zellen, Hybridomen, Transfektomen, Hefe oder Bakterien. Antikörper lassen sich durch Routineverfahren humanisieren.As used herein, an "antibody" refers to IgG, IgM, IgA, IgD or IgE molecules or antigen-specific fragments thereof (including, but not limited to, a Fab, F (ab ') ₂ , Fv, disulfide-linked Fv, scFv, single domain antibody, closed-conformation multispecific antibody, disulfide-linked scfv, diabody), whether derived from a species naturally producing an antibody, or produced by recombinant DNA technology; whether isolated from serum, B cells, hybridomas, transfectomas, yeast or bacteria. Antibodies can be humanized by routine methods.

So wie hier beschrieben ist ein ”Antigen” ein Molekül, das von einer Bindungsstelle auf einem Antikörpermittel gebunden wird. Typischerweise werden Antigene von Antikörperliganden gebunden und sind dazu in der Lage, in vivo eine Antikörperreaktion auszulösen. Bei einem Antigen kann es sich um ein Polypeptid, ein Protein, eine Nukleinsäure oder ein anderes Molekül oder einen Teil davon handeln. Der Begriff ”antigene Determinante” bezieht sich auf ein Epitop auf dem Antigen, das von einem antigenbindenden Molekül, genauer gesagt der Antigenbindungsstelle des Moleküls, erkannt wird.As described herein, an "antigen" is a molecule bound by a binding site on an antibody agent. Typically, antigens are bound by antibody ligands and are capable of eliciting an antibody response in vivo. An antigen can be a polypeptide, a protein, a nucleic acid or another molecule or a part thereof. The term "antigenic determinant" refers to an epitope on the antigen recognized by an antigen-binding molecule, more specifically, the antigen-binding site of the molecule.

So, wie der Begriff hier verwendet wird, bezieht sich ”Antikörperfragment” auf ein Polypeptid, das wenigstens eine variable Immunglobulindomäne oder variable Immunglobulindomänensequenz einschließt und spezifisch an ein gegebenes Antigen bindet. Ein Antikörperfragment kann einen Antikörper oder ein Polypeptid, das eine antigenbindende Domäne eines Antikörpers umfasst, umfassen. Gemäß einigen Ausführungsformen kann ein Antikörperfragment einen monoklonalen Antikörper oder ein Polypeptid, das eine antigenbindende Domäne eines monoklonalen Antikörpers umfasst, umfassen. Beispielsweise kann ein Antikörper eine variable Region einer schweren (Heavy, H) Kette (hier abgekürzt als VH) und eine variable Region einer leichten (L) Kette (hier abgekürzt als VL) einschließen. Gemäß einem anderen Beispiel schließt ein Antikörper zwei variable Regionen einer schweren (H) Kette und zwei variable Regionen einer leichten (L) Kette ein. Der Begriff ”Antikörperfragment” umfasst antigenbindende Fragmente von Antikörpern (z. B. Einzelkettenantikörper, Fab- und sFab-Fragmente, F(ab')2, Fd-Fragmente, Fv-Fragmente, scFv und Domänenantikörper-(dAb)-Fragmente (siehe z. B. de Wildt et al., Eur J. Immunol. 1996; 26(3):629–39 ; das durch Verweis in seiner Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird)) sowie vollständige Antikörper. Ein Antikörper kann die strukturellen Merkmale von IgA, IgG, IgE, IgD, IgM (sowie Untertypen und Kombinationen davon) aufweisen. Antikörper können aus einer beliebigen Quelle einschließlich Maus, Kaninchen, Schwein, Ratte und Primat (menschlicher und nicht menschlicher Primat) und primatisierten Antikörpern stammen. Antikörper schließen außerdem Midibodies, humanisierte Antikörper, chimere Antikörper und dergleichen ein.As used herein, "antibody fragment" refers to a polypeptide that includes at least one immunoglobulin variable domain or immunoglobulin variable domain sequence and specifically binds to a given antigen. An antibody fragment may comprise an antibody or a polypeptide comprising an antigen-binding domain of an antibody. According to some embodiments, an antibody fragment may comprise a monoclonal antibody or a polypeptide comprising an antigen binding domain of a monoclonal antibody. For example, an antibody may include a heavy (H) heavy chain variable region (abbreviated as VH herein) and a light (L) chain variable region (abbreviated as VL herein). In another example, an antibody includes two heavy (H) chain variable regions and two light (L) chain variable regions. The term "antibody fragment" includes antigen-binding fragments of antibodies (e.g., single chain antibodies, Fab and sFab fragments, F (ab ') 2, Fd fragments, Fv fragments, scFv, and domain antibody (dAb) fragments (see eg de Wildt et al., Eur. J. Immunol. 1996; 26 (3): 629-39 ; which is incorporated herein by reference in its entirety) as well as complete antibodies. An antibody may have the structural features of IgA, IgG, IgE, IgD, IgM (as well as subtypes and combinations thereof). Antibodies can be from any source including mouse, rabbit, pig, rat and primate (human and non-human primate) and primed antibodies. Antibodies also include midibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies and the like.

So, wie hier verwendet. bezieht sich ”variable Domäne eines Antikörpers” auf die Abschnitte der leichten und schweren Ketten von Antikörpermolekülen, die Aminosäuresequenzen von hypervariablen Regionen (Complementarity Determining Regions, CDRs; d. h. CDR1, CDR2 und CDR3) und Gerüstregionen (Framework Regions, FRs) einschließen. VH bezieht sich auf die variable Domäne der schweren Kette. VL bezieht sich auf die variable Domäne der leichten Kette. Gemäß den in der vorliegenden Erfindung angewandten Methoden lassen sich die den CDRs und FRs zugeordneten Aminosäurepositionen gemäß Kabat (Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991)) oder gemäß der IMGT-Nomenklatur definieren.As used here. "Variable domain of an antibody" refers to the sections of the light and heavy chains of antibody molecules that include amino acid sequences of complementarity determining regions (CDRs, ie CDR1, CDR2 and CDR3) and framework regions (FRs). VH refers to the variable domain of the heavy chain. VL refers to the variable domain of the light chain. According to the methods used in the present invention, the amino acid positions assigned to the CDRs and FRs can be determined according to Kabat (Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991)) or according to the IMGT nomenclature.

D-Domäne oder -Region bezieht sich auf die Diversitätsdomäne bzw. -region (D = Diversity) einer Antikörperkette. J-Domäne oder -Region bezieht sich auf die Verbindungsdomäne bzw. -region (3 = Joining) einer Antikörperkette.D domain or region refers to the diversity domain or region (D = diversity) of an antibody chain. J domain or region refers to the junction domain (3 = Joining) of an antibody chain.

Ein Antikörper”gensegment”, z. B. ein VH-Gensegment, D-Gensegment oder JH-Gensegment, bezieht sich auf ein Oligonukleotid mit einer Nukleinsäuresequenz, die für diesen Abschnitt eines Antikörpers codiert, ein VH-Gensegment z. B. ist ein Oligonukleotid, das eine Nukleinsäuresequenz umfasst, die für eine Polypeptid-VH-Domäne codiert. An antibody "gene segment", z. A VH gene segment, D gene segment or JH gene segment, refers to an oligonucleotide having a nucleic acid sequence encoding that portion of an antibody, a VH gene segment, e.g. B. is an oligonucleotide comprising a nucleic acid sequence encoding a polypeptide VH domain.

Die VH- und VL-Regionen können weiter in Hypervariabilitätsregionen, die als ”Complementarity Determining Regions” (”CDR”) bezeichnet werden, zwischen denen sich stärker konservierte Regionen befinden, die als ”Framework Regions” (”FR”) bezeichnet werden, unterteilt werden. Das Ausmaß der Grundgerüstregion und der CDRs wurde exakt definiert (siehe IMGT oder Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication Nr. 91-3242 , und Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901–917 ; die durch Verweis in ihrer Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden). Jede VH und VL besteht typischerweise aus drei CDRs und vier FR, die vom Aminoterminus zum Carboxyterminus in der folgenden Reihenfolge angeordnet sind: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.The VH and VL regions can be further subdivided into hypervariability regions called "Complementarity Determining Regions"("CDR"), between which are more conserved regions called "Framework Regions"("FR") become. The extent of the backbone region and the CDRs was precisely defined (see IMGT or Kabat, EA, et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 , and Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917 ; which by reference in their entirety become part of the present application). Each VH and VL typically consists of three CDRs and four FR located from the amino terminus to the carboxy terminus in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

Mit den Begriffen ”antigenbindendes Fragment” oder ”antigenbindende Domäne”, die hier austauschbar verwendet werden, bezeichnet man ein oder mehrere Fragmente eines ungekürzten Antikörpers, bei denen die Fähigkeit zur spezifischen Bindung an das interessierende Ziel erhalten geblieben sind. Beispiele für Bindungsfragmente, die unter den Begriff ”antigenbindendes Fragment” eines ungekürzten Antikörpers fallen, schließen (i) ein Fab-Fragment, ein einwertiges Fragment, das aus den VL-, VH-, CL- und CH1-Domänen besteht; (ii) ein F(ab')2-Fragment, ein zweiwertiges Fragment, das die beiden über eine Disulfidbrücke in der Gelenkregion (Hinge Region) verbundenen Fab-Fragmente einschließt; (iii) ein Fd-Fragment, das aus den VH- und CH1-Domänen besteht; (iv) ein Fv-Fragment, das aus den VL- und VH-Domänen eines einzelnen Arms eines Antikörpers besteht, (v) ein dAb-Fragment ( Ward et al., (1989) Nature 341:544–546 ; die durch Verweis in ihrer Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird), die aus einer VH- oder VL-Domäne besteht; und (vi) eine isolierte Hypervariabilitätsregion (Complementarity Determining Region, CDR), bei der die spezifische antigenbindende Funktionalität erhalten geblieben ist, ein.By the terms "antigen-binding fragment" or "antigen-binding domain" used interchangeably herein is meant one or more fragments of an unabridged antibody which retain the ability to bind specifically to the target of interest. Examples of binding fragments that fall within the term "antigen-binding fragment" of an unabridged antibody include (i) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL, and CH1 domains; (ii) an F (ab ') 2 fragment, a bivalent fragment which includes the two Fab fragments linked via a disulfide bridge in the hinge region; (iii) an Fd fragment consisting of the VH and CH1 domains; (iv) an Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody, (v) a dAb fragment ( Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546 ; which is incorporated herein by reference in its entirety) consisting of a VH or VL domain; and (vi) an isolated complementarity determining region (CDR) in which the specific antigen-binding functionality has been preserved.

So, wie er hier verwendet wird, bezeichnet der Begriff ”Antikörperbindungsstelle” ein Polypeptid oder eine Domäne, das/die eine oder mehrere CDRs eines Antikörpers umfasst und zur Bindung eines Antigens fähig ist. Beispielsweise umfasst das Polypeptid eine CDR3 (z. B. HCDR3). Das Polypeptid umfasst zum Beispiel CDRs 1 und 2 (z. B. HCDR1 und 2) oder CDRs 1–3 einer variablen Domäne eines Antikörpers (z. B. HCDRs1–3). Bei einem Beispiel wird die Antikörperbindungsstelle von einer einzelnen variablen Domäne (z. B. einer VH- oder VL-Domäne) bereitgestellt. Bei einem anderen Beispiel umfasst die Bindungsstelle ein VH/VL-Paar oder zwei oder mehr solcher Paare.As used herein, the term "antibody binding site" refers to a polypeptide or domain that comprises one or more CDRs of an antibody and is capable of binding an antigen. For example, the polypeptide comprises a CDR3 (eg, HCDR3). The polypeptide includes, for example, CDRs 1 and 2 (e.g., HCDR1 and 2) or CDRs 1-3 of a variable domain of an antibody (e.g., HCDRs1-3). In one example, the antibody binding site is provided by a single variable domain (e.g., a VH or VL domain). In another example, the binding site comprises a VH / VL pair or two or more such pairs.

So, wie der Begriff ”spezifische Bindung” hier verwendet wird, bezieht er sich auf eine chemische Wechselwirkung zwischen zwei Molekülen, Verbindungen, Zellen und/oder Partikeln, wobei das erste Gebilde mit größerer Spezifität und Affinität an das zweite Target-Gebilde bindet, als es an ein drittes Gebilde bindet, bei dem es sich um ein Nicht-Target handelt. Bei einem diagnostischen Test beispielsweise kann durch die spezifische Bindung eines Liganden zwischen zwei wie hier beschriebenen PCSK9-Proteinvarianten unterschieden werden. Gemäß einigen Ausführungsformen kann sich spezifische Bindung auf eine Affinität des ersten Gebildes zum zweiten Gebilde, die wenigstens 10-fach, wenigstens 50-fach, wenigstens 100-fach, wenigstens 500-fach, wenigstens 1000-fach oder mehr als die Affinität zum dritten Nicht-Target-Gebilde ist, beziehen. Im Rahmen von Oligonukleotidsträngen, die über Hybridisierung miteinander Wechselwirken, kann eine spezifische Bindung eine ”spezifische Hybridisierung” sein.As used herein, the term "specific binding" refers to a chemical interaction between two molecules, compounds, cells and / or particles wherein the first entity binds to the second target entity with greater specificity and affinity than binds it to a third entity, which is a non-target. For example, in a diagnostic test, the specific binding of a ligand can distinguish between two PCSK9 protein variants as described herein. According to some embodiments, specific binding may have an affinity of the first entity to the second entity that is at least 10-fold, at least 50-fold, at least 100-fold, at least 500-fold, at least 1000-fold, or greater than the affinity for the third -Target structure is refer. In the context of oligonucleotide strands that interact via hybridization, a specific binding may be a "specific hybridization".

Darüber hinaus und wie hier beschrieben kann ein rekombinanter humaner/humanisierter Antikörper ferner so optimiert werden, dass eine mögliche Immunogenität reduziert wird, während die funktionelle Aktivität für die Therapie bei Menschen erhalten bleibt. In dieser Hinsicht bedeutet funktionelle Aktivität ein Polypeptid, das dazu in der Lage ist, eine oder mehrere der funktionellen Aktivitäten, die mit einem wie hier beschriebenen rekombinanten Antikörper oder Antikörperreagenz davon assoziiert sind, zu zeigen. Solche funktionellen Aktivitäten schließen zum Beispiel die Fähigkeit zur Bindung eines Target-Moleküls ein.In addition, and as described herein, a recombinant human / humanized antibody can be further optimized to reduce potential immunogenicity while maintaining functional activity for human therapy. In this regard, functional activity means a polypeptide capable of exhibiting one or more of the functional activities associated with a recombinant antibody or antibody reagent thereof as described herein. Such functional activities include, for example, the ability to bind a target molecule.

Der Begriff ”Immunisieren” bezieht sich auf den Schritt oder die Schritte der Verabreichung eines oder mehererer Antigene an ein Tier, so dass in dem Tier Antikörper gebildet werden. Im Allgemeinen umfasst eine Immunisierung die Injektion des Antigens oder der Antigene in das Tier. Bei einer Immunisierung kann das Antigen bzw. die Antigene einmal oder mehrmals verabreicht werden. Geeignete Methoden sind die dem Fachmann bekannten Prime-Boost- und RIMMS-Methoden.The term "immunizing" refers to the step or steps of administering one or more antigens to an animal to form antibodies in the animal. In general, immunization involves injecting the antigen or antigens into the animal. In an immunization, the antigen or antigens can be administered once or several times. Suitable methods are the known in the art Prime Boost and RIMMS methods.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Affibody” auf ein relativ kleines synthetisches Proteinmolekül, das eine hohe Bindungsaffinität für ein Target-Protein (z. B. für PCSK9 oder eine Variante davon) hat. Affibodies setzen sich aus einer Drei-Helix-Bündeldomäne zusammen, die sich von der IgG-bindenden Domäne des Proteins A aus Staphylokokken ableiten. Die Proteindomäne besteht aus einer Sequenz von 58 Aminosäuren mit 13 randomisierten Aminosäuren, wodurch man verschiedene Affibodyvarianten erhält. Obwohl sie wesentlich kleiner sind als ein Antikörper (ein Affibody wiegt etwa 6 kDa, während ein Antikörper gewöhnlich etwa 150 kDa wiegt), funktioniert ein Affibody-Molekül wie ein Antikörper, da dessen Bindungsstelle, was die Oberfläche betrifft, der Bindungsstelle eines Antikörpers ungefähr äquivalent ist. As used herein, "affibody" refers to a relatively small synthetic protein molecule that has high binding affinity for a target protein (eg, for PCSK9 or a variant thereof). Affibodies are composed of a three-helix bundle domain derived from the IgA-binding domain of protein A from staphylococci. The protein domain consists of a sequence of 58 amino acids with 13 randomized amino acids, resulting in different affibody variants. Although they are significantly smaller than an antibody (an affibody weighs about 6 kDa, while an antibody usually weighs about 150 kDa), an affibody molecule functions like an antibody because its binding site, in terms of surface area, is approximately equivalent to the binding site of an antibody is.

So, wie hier verwendet, bezieht sich „VH3-23*04” auf eine humane VH-Domänenvariante, die die Polypeptidsequenz von SEQ ID NO: 38 umfasst. Im Gegensatz zur Vergleichsequenz hat VH3-23*04 einen Valinrest anstelle eines Leucinrests (siehe 3 und 4; L24V, die Nummerierung schließt die Signalsequenz ein; Valin in Position 5 ist in 4 gezeigt) als Resultat des Vorhandenseins der rs56069819-SNP in der für die VH-Domäne codierenden Nukleinsäuresequenz. So, wie hier verwendet, bezieht sich ”rs56069819” auf eine Mutation oder Variante in einem VH-Gensegment von Adenosin zu Cytosin (oder Thymin zu Guanin, je nachdem, welchen Strang der DNA man abliest), was zu der für VH3-23*04 codierenden VH-Domäne führt. Rs56069819 ist in 4 und SEQ ID NO: 39 gezeigt, aus der die T->G-Mutation hervorgeht (es sei angemerkt, dass der dbSNP-Eintrag für RS5606819 den anderen Strang zeigt, der die A->C-Mutation umfasst). Ferner findet sich eine Beschreibung von VH3-23*04 z. B. in der US-Patentveröffentlichung 2013/0071405 ; die durch Verweis in ihrer Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird.As used herein, "VH3-23 * 04" refers to a human VH domain variant comprising the polypeptide sequence of SEQ ID NO: 38. In contrast to the control sequence, VH3-23 * 04 has a valine residue instead of a leucine residue (see 3 and 4 ; L24V, the numbering includes the signal sequence; Valine in position 5 is in 4 shown) as a result of the presence of rs56069819 SNP in the VH domain-encoding nucleic acid sequence. As used herein, "rs56069819" refers to a mutation or variant in a VH gene segment from adenosine to cytosine (or thymine to guanine, depending on which strand of the DNA is read), resulting in VH3-23 * 04 coding VH domain leads. Rs56069819 is in 4 and SEQ ID NO: 39 showing the T-> G mutation (note that the dbSNP entry for RS5606819 shows the other strand comprising the A> C mutation). Furthermore, there is a description of VH3-23 * 04 z. B. in the U.S. Patent Publication 2013/0071405 ; which is incorporated herein by reference in its entirety.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”bestimmen” oder ”Bestimmung” auf eine Feststellung, z. B. durch eine quantitative oder qualitative Analyse. So, wie hier verwendet, kann sich ”wurde bestimmt” auf eine Feststellung auf der Grundlage einer zuvor erhaltenen Information oder einer gleichzeitig erhaltenen Information beziehen.As used herein, "determining" or "determining" refers to a determination, e.g. B. by a quantitative or qualitative analysis. As used herein, "determined" may refer to a determination based on previously obtained information or concurrently obtained information.

Gemäß einigen Aspekten aller Ausführungsformen der Erfindung kann eine Auswahl eine Automatisierung wie ein computerimplementiertes Software-Programm umfassen, das bei Eingabe der relevanten Daten wie Ethnizität oder einer Abfolge von SNP-Daten die Bestimmung auf der Basis der hier hinterlegten Anweisungen vornehmen kann.In accordance with some aspects of all embodiments of the invention, a selection may include automation such as a computer-implemented software program that may make the determination based on the instructions deposited here upon input of the relevant data such as ethnicity or a sequence of SNP data.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Durchführung eines Assays” auf die Untersuchung, Bewertung, Quantifizierung, Messung bzw. Charakterisierung eines Analyten, z. B. das Messen des Spiegels eines Analyten in einer Probe, die Identifizierung eines Analyten oder den Nachweis des Vorhandenseins oder der Abwesenheit eines Analyten in einer Probe. Gemäß einigen Ausführungsformen bezieht sich Durchführung eines Assays auf den Nachweis des Vorhandenseins oder der Abwesenheit des interessierenden Analyten. Gemäß einigen Ausführungsformen bezieht sich Durchführung eines Assays auf die Quantifizierung der Menge eines Analyten, z. B. das Bereitstellen der Konzentration oder des Häufigkeitsgrades eines Analyten. Gemäß einigen Ausführungsformen bezieht sich Durchführung eines Assays auf das Auszählen der Anzahl von Molekülen eines in einer Probe und/oder einem Prüfkörper vorhandenen Analyten, z. B. zur Bestimmung der Kopienzahl eines Analyten.As used herein, "performing an assay" refers to the analysis, evaluation, quantification, measurement or characterization of an analyte, e.g. Measuring the level of an analyte in a sample, identifying an analyte, or detecting the presence or absence of an analyte in a sample. In some embodiments, performing an assay refers to detecting the presence or absence of the analyte of interest. In accordance with some embodiments, performing an assay refers to quantifying the amount of an analyte, e.g. B. providing the concentration or frequency of an analyte. In accordance with some embodiments, performing an assay refers to counting the number of molecules of an analyte present in a sample and / or specimen, e.g. For determining the copy number of an analyte.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Multiplex” auf die gleichzeitige Durchführung einer Methode oder eines Verfahrens mit zwei oder mehr, typischerweise drei oder mehr, verschiedenen Target-Sequenzen, z. B. mit zwei oder mehr Isoformen von PCSK9 oder PCSK9 und einem weiteren Target, im gleichen Reaktionsgefäß. Eine Multiplex-Analyse schließt typischerweise die Analyse von 10–50; 10–100; 10–1000, 10–5000, 10–10000 Reaktionen in einem Multiplex-Format wie einer Multiwall-, einer Array- oder einer Multichannel-Reaktion ein.As used herein, "multiplexing" refers to the simultaneous performance of a method or process having two or more, typically three or more, different target sequences, e.g. With two or more isoforms of PCSK9 or PCSK9 and another target, in the same reaction vessel. Multiplex analysis typically includes analysis of 10-50; 10-100; 10-1000, 10-5000, 10-10000 reactions in a multiplex format such as a multiwall, array or multichannel response.

Häufig erfolgt die Analyse oder Multiplex-Analyse auch automatisch mit Robotern und typischerweise durch einen Computer aufgeführter Software und kann eine Handhabung von Proben durch einen Roboter, eine automatische oder durch einen Roboter getätigte Auswahl von positiven oder negativen Resultaten, eine Prüfung auf das Vorhandensein oder die Abwesenheit eines Targets wie eines Nukleinsäurepolymorphismus oder einer Proteinvariante einschließen.Often, the analysis or multiplex analysis is also done automatically with robots and software typically performed by a computer and may involve handling of samples by a robot, automatic or robotic selection of positive or negative results, presence or absence testing Absence of a target such as a nucleic acid polymorphism or a protein variant.

Der Begriff ”biologische Probe” oder ”Testprobe” bezeichnet, so wie er hier verwendet wird, eine aus einem biologischen Organismus entnommene bzw. isolierte Probe, z. B. eine Probe aus einem Subjekt. Beispielhafte biologische Proben schließen, wobei dies nicht einschränkend ist, eine Biofluidprobe; Serum; Plasma; Urin; Speichel; Haar, Epithelzellen, Haut, eine Tumorbiopsie und/oder Gewebeprobe usw. ein. Der Begriff schließt außerdem eine Mischung der oben erwähnten Proben ein. Der Begriff ”Testprobe” oder ”biologische Probe” schließt außerdem unbehandelte oder vorbehandelte (oder vorverarbeitete) biologische Proben ein. Zur Analyse von Nukleinsäuren sollte die biologische Probe typischerweise wenigstens eine Nukleinsäuren umfassende Zelle umfassen.The term "biological sample" or "test sample" as used herein refers to a sample taken from a biological organism, e.g. B. a sample from a subject. Exemplary biological samples include, but are not limited to, a biofluid sample; Serum; Plasma; Urine; Saliva; Hair, epithelial cells, skin, a tumor biopsy and / or tissue sample, etc. The term also includes a mixture of the above-mentioned samples. The term "test sample" or "biological Sample "also includes untreated or pretreated (or pre-processed) biological samples. For analysis of nucleic acids, the biological sample should typically comprise at least one cell comprising nucleic acids.

Die Testprobe lässt sich erhalten, indem man eine Zellprobe aus einem Subjekt entnimmt, kann jedoch auch unter Verwendung von zuvor isolierten Zellen (z. B. zu einem vorherigen Zeitpunkt isoliert und durch die gleiche oder eine andere Person isoliert) erfolgen. Darüber hinaus kann die Testprobe eine frisch entnommene oder zuvor entnommene, gekühlte, gefrorene oder anderweitig konservierte Probe sein.The test sample can be obtained by taking a cell sample from a subject, but can also be done using previously isolated cells (eg, isolated at a previous time and isolated by the same or another person). In addition, the test sample may be a freshly drawn or previously sampled, chilled, frozen or otherwise conserved sample.

Gemäß einigen Ausführungsformen kann es sich bei der Testprobe um eine unbehandelte Testprobe handeln. So, wie hier verwendet, bezieht sich ”unbehandelte Testprobe” auf eine Testprobe, die mit Ausnahme von Verdünnung und/oder Suspension in einer Lösung noch keine Probenvorbehandlung erfahren hat. Beispielhafte Methoden zur Behandlung einer Testprobe schließen, wobei dies nicht einschränkend ist, Zentrifugieren, Filtrieren, Ultraschallbehandeln, Homogenisieren, Erhitzen, Einfrieren und Auftauen und Kombinationen davon ein. Gemäß einigen Ausführungsformen kann es sich bei der Testprobe um eine eingefrorene Testprobe, z. B. ein eingefrorenes Gewebe, handeln. Die eingefrorene Probe kann vor der Anwendung der hier beschriebenen Methoden, Assyas und Systeme aufgetaut werden. Nach dem Auftauen kann eine eingefrorene Probe, bevor man sie den hier beschriebenen Methoden, Assyas und Systemen unterzieht, zentrifugiert werden. Gemäß einigen Ausführungsformen handelt es sich bei der Testprobe um eine zum Beispiel durch Zentrifugieren und Abnehmen eines die geklärte Testprobe umfassenden Überstands geklärte Testprobe. Gemäß einigen Ausführungsformen kann es sich bei einer Testprobe um eine vorbehandelte Testprobe, zum Beispiel einen von einer Behandlung ausgewählt aus der aus Zentrifugieren, Filtrieren, Auftauen, Aufreinigen und beliebigen Kombinationen davon bestehenden Gruppe erhaltenen Überstand oder ein solches Filtrat handeln. Gemäß einigen Ausführungsformen kann die Testprobe mit einem chemischen und/oder biologischen Reagenz behandelt werden. Mit chemischen und/oder biologischen Reagentien lässt sich die Stabilität der Probe einschließlich biologischer Moleküle (z. B. Nukleinsäure und Protein) darin während der Behandlung schützen und/oder aufrechterhalten. Ein beispielhaftes Reagenz ist ein Proteaseinhibitor, der im Allgemeinen eingesetzt wird, um die Stabilität von Protein während der Verarbeitung zu schützen oder aufrechtzuerhalten. Der Fachmann ist mit Methoden und Verfahren, die sich zur Vorverarbeitung von biologischen Proben eignen, die zur wie hier beschriebenen Bestimmung des Spiegels eines Expressionsprodukts benötigt werden, gut vertraut.In some embodiments, the test sample may be an untreated test sample. As used herein, "untreated test sample" refers to a test sample that has not been sample pre-treated except for dilution and / or suspension in a solution. Exemplary methods of treating a test sample include, but are not limited to, centrifuging, filtering, sonicating, homogenizing, heating, freezing and thawing, and combinations thereof. According to some embodiments, the test sample may be a frozen test sample, e.g. As a frozen tissue act. The frozen sample may be thawed prior to using the methods, assyas, and systems described herein. After thawing, a frozen sample may be centrifuged before being subjected to the methods described here, assyas, and systems. In some embodiments, the test sample is a test sample clarified by, for example, centrifuging and removing a supernatant containing the clarified test sample. In some embodiments, a test sample may be a pretreated test sample, for example a supernatant or filtrate obtained from a treatment selected from the group consisting of centrifugation, filtration, thawing, purification, and any combinations thereof. According to some embodiments, the test sample may be treated with a chemical and / or biological reagent. With chemical and / or biological reagents, the stability of the sample including biological molecules (eg, nucleic acid and protein) therein can be protected and / or maintained during treatment. An exemplary reagent is a protease inhibitor that is generally used to protect or maintain the stability of protein during processing. Those skilled in the art are well-versed in methods and procedures suitable for preprocessing biological samples needed for determination of the level of expression product as described herein.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Genotypisierung” auf ein Verfahren des Bestimmens der spezifischen Allelzusammensetzung einer Zelle und/oder eines Subjekts an einer oder mehreren Positionen im Genom, z. B. durch Bestimmen der Nukleinsäuresequenz an dieser Position. Genotypisierung bezieht sich auf eine Nukleinsäureanalyse und/oder Analyse auf dem Nukleinsäureniveau. So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Phänotypisierung” auf ein Verfahren zur Bestimmung der Identität und/oder Zusammensetzung eines Expressionsprodukts einer Zelle und/oder eines Subjekts, z. B. durch Bestimmung der Polypeptidsequenz eines Expressionsprodukts. Phenotypisierung bezieht sich auf eine Proteinanalyse und/oder Analyse auf dem Proteinniveau.As used herein, "genotyping" refers to a method of determining the specific allelic composition of a cell and / or subject at one or more positions in the genome, e.g. By determining the nucleic acid sequence at this position. Genotyping refers to nucleic acid analysis and / or analysis at the nucleic acid level. As used herein, "phenotyping" refers to a method of determining the identity and / or composition of an expression product of a cell and / or subject, e.g. By determining the polypeptide sequence of an expression product. Phenotyping refers to protein analysis and / or analysis at the protein level.

So, wie hier verwendet, bezieht sich der Begriff ”Nukleinsäureamplifikation” auf die Produktion zusätzlicher Kopien einer Nukleinsäuresequenz und wird typischerweise unter Anwendung der im Stand der Technik gut bekannten Polymerasekettenreaktions-(Polymerase Chain Reaction, PCR) oder Ligasekettenreaktions-(Ligase Chain Reaction, LCR)Technologien durchgeführt ( C. W. Dieffenbach und G. S. Dveksler (1995) PCR Primer, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Plainview, N. Y., USA ). Andere Methoden zur Amplifikation werden in Aspekten der Erfindung ebenfalls in Betracht gezogen.As used herein, the term "nucleic acid amplification" refers to the production of additional copies of a nucleic acid sequence and is typically performed using the polymerase chain reaction (PCR) or ligase chain reaction (LCR) well known in the art ) Technologies ( CW Dieffenbach and GS Dveksler (1995) PCR Primer, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Plainview, NY, USA ). Other methods of amplification are also contemplated in aspects of the invention.

Der Begriff ”allelspezifische Amplifikation” bezieht sich auf eine Reaktion (z. B. PCR-Reaktion), bei der wenigstens einer der Primer (z. B. allelspezifischen Primer) aus einer polymorphen Genregion (z. B. Einzelnukleotidpolymorphismus) ausgewählt ist, wobei sich der Polymorphismus am oder nahe des 3'-Endes des Primers befindet. Ein Fehlpaarungsprimer wird die Amplifikation nicht initiieren, während ein passender Primer die Amplifikation initiiert. Das Auftreten eines Amplifikationsprodukts ist indikativ für das Vorhandensein des Polymorphismus.The term "allele-specific amplification" refers to a reaction (eg, PCR reaction) in which at least one of the primers (eg, allele-specific primers) is selected from a polymorphic gene region (eg, single nucleotide polymorphism) the polymorphism is at or near the 3 'end of the primer. A mismatch primer will not initiate amplification while a suitable primer will initiate amplification. The appearance of an amplification product is indicative of the presence of the polymorphism.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Sequenzieren” auf die Bestimmung der genauen Ordnung der Nukleotidbasen in einem Strang DNA (Desoxyribonukleinsäure) oder RNA (Ribonukleinsäure) oder der genauen Ordnung von Aminosäureresten oder Peptiden in einem Protein. Die Nukleinsäuresequenzierung kann mittels Sanger-Sequenzierung oder Hochdurchsatz-Sequenzierung der nächsten Generation erfolgen. As used herein, "sequencing" refers to the determination of the exact order of the nucleotide bases in a strand of DNA (deoxyribonucleic acid) or RNA (ribonucleic acid) or the precise order of amino acid residues or peptides in a protein. Nucleic acid sequencing can be done by Sanger sequencing or next generation high-throughput sequencing.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Sequenzierung der nächsten Generation” auf Oligonukleotidsequenzierungstechnologien, die dazu fähig sind, Oligonukleotide mit Geschwindigkeiten zu sequenzieren, die über denen liegen, die mit herkömmlichen Sequenzierungsmethoden (z. B. Sanger-Sequenzierung) möglich sind, da Tausende bis Millionen von Sequenzierungsreaktionen gleichzeitig durchgeführt und ausgelesen werden. Nicht einschränkende Beispiele für Methoden/Plattformen zur Sequenzierung der nächsten Generation schließen Massively Parallel Signature Sequencing (Lynx Therapeutics), 454 Pyro-Sequencing (454 Life Sciences/Roche Diagnostics) und reversible Farbstoff-Terminator Sequenzierung an einer Festphase (Solexa/Illumina), die SOLiD-Technology (Applied Biosystems); Ionen-Halbleitersequenzierung (Ion Semiconductor Sequencing, ION Torrent), die DNA-Nanoball-Sequenzierung (Complete Genomics) und von Pacific Biosciences, Intelligen Bio-systems, Oxford Nanopore Technologies und Helicos Biosciences erhältliche Technologien ein. Technologien zur Sequenzierung der nächsten Generation und die Einschränkungen und Design-Parameter assoziierter Sequenzierungsprimer sind im Stand der Technik gut bekannt (siehe z. B. Shendure, et al., ”Next-generation DNA sequencing”, Nature, 2008, Band 26, Nr. 10, 1135–1145 ; Mardis, ”The impact of next-generation sequencing technology on genetics”, Trends in Genetics, 2007, Band 24, Nr. 3, S. 133–141 ; Su, et al., ”Next-generation sequencing and its applications in molecular diagnostics” Expert Rev Mol Diagn, 2011, 11(3):333–43 ; Zhang et al., ”The impact of next-generation sequencing on genomics”, J Genet Genomics, 2011, 38(3):95–109 ; ( P. Nyren et al. Anal Biochem 208: 17175 (1993); D. R. Bentley, Curr Opin Genet Dev 16:545–52 (2006) ; R. L. Strausberg et al. Drug Disc Today 13:569–77 (2008) ; US-Patentschrift Nr. 7,282,337 ; US-Patentschrift Nr. 7,279,563 ; US-Patentschrift Nr. 7,226,720 ; US-Patentschrift Nr. 7,220,549 ; US-Patentschrift Nr. 7,169,560 ; US-Patentschrift Nr. 6,818,395 ; US-Patentschrift Nr. 6,911,345 ; US-Patentschriften Nr. 2006/0252077 , 2007/0070349 und 20070070349 ; die hiermit durch Verweis in ihrer Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden).As used herein, "next generation sequencing" refers to oligonucleotide sequencing technologies that are capable of sequencing oligonucleotides at rates above those achievable with conventional sequencing methods (eg, Sanger sequencing) Thousands to millions of sequencing reactions are performed and read out simultaneously. Non-limiting examples of next-generation sequencing methods / platforms include Massively Parallel Signature Sequencing (Lynx Therapeutics), 454 Pyro-Sequencing (454 Life Sciences / Roche Diagnostics), and reversible dye-terminator sequencing on a solid phase (Solexa / Illumina) SOLiD Technology (Applied Biosystems); Ion Semiconductor Sequencing (ION Torrent), DNA Nanoball Sequencing (Complete Genomics), and technologies available from Pacific Biosciences, Intelligen Bio-systems, Oxford Nanopore Technologies, and Helicos Biosciences. Next generation sequencing technologies and the limitations and design parameters of associated sequencing primers are well known in the art (see, eg, US Pat. Shendure, et al., "Next-generation DNA sequencing", Nature, 2008, Vol. 26, No. 10, 1135-1145 ; Mardis, "The impact of next-generation sequencing technology on genetics," Trends in Genetics, 2007, Vol. 24, No. 3, pp. 133-141 ; Su, et al., "Next-generation sequencing and its applications in molecular diagnostics." Expert Rev Mol. Diagn., 2011, 11 (3): 333-43 ; Zhang et al., "The impact of next-generation sequencing on genomics," J Genet Genomics, 2011, 38 (3): 95-109 ; ( P. Nyren et al. Anal Biochem 208: 17175 (1993); DR Bentley, Curr Opin Genet Dev 16: 545-52 (2006) ; RL Strausberg et al. Drug Disc Today 13: 569-77 (2008) ; U.S. Patent No. 7,282,337 ; U.S. Patent No. 7,279,563 ; U.S. Patent No. 7,226,720 ; U.S. Patent No. 7,220,549 ; U.S. Patent No. 7,169,560 ; U.S. Patent No. 6,818,395 ; U.S. Patent No. 6,911,345 ; US Pat. No. 2006/0252077 . 2007/0070349 and 20070070349 ; which are hereby incorporated by reference in their entirety part of the present application).

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Nukleinsäurehybridisierung” auf die Paarung von komplementären RNA- und DNA-Strängen sowie die Paarung komplementärer DNA-Einzelstränge. Gemäß einigen Ausführungsformen kann sich Nukleinsäurehybridisierung auf ein Verfahren zur Bestimmung einer Nukleinsäuresequenz und/oder Identität durch Hybridisieren einer Nukleinsäureprobe mit einer Sonde, z. B. Northern-Blot- oder Southern-Blot-Analyse oder Mikroarrayanalyse, beziehen.As used herein, "nucleic acid hybridization" refers to the mating of complementary RNA and DNA strands, as well as the pairing of complementary DNA single strands. According to some embodiments, nucleic acid hybridization may be directed to a method for determining a nucleic acid sequence and / or identity by hybridizing a nucleic acid sample to a probe, e.g. Northern blot or Southern blot analysis or microarray analysis.

So, wie hier verwendet, beziehen sich die Begriffe ”behandeln”, ”Behandlung”, ”Behandeln” oder ”Verbesserung” auf therapeutische Behandlungen, deren Aufgabe es ist, das Fortschreiten oder den Schweregrad eines mit einer Krankheit oder Erkrankung assoziierten Leidens umzukehren, zu lindern, zu verbessern, zu inhibieren, zu verlangsamen bzw. zu stoppen. Der Begriff ”Behandeln” schließt das Reduzieren oder Lindern wenigstens eines abträglichen Effekts oder Symptoms eines Leidens, einer Krankheit oder einer Erkrankung ein. Eine Behandlung ist im Allgemeinen ”wirksam”, wenn ein oder mehrere Symptome oder klinische Marker reduziert sind. Alternativ dazu ist eine Behandlung ”wirksam”, wenn das Fortschreiten einer Krankheit reduziert oder aufgehalten wird. Das heißt, ”Behandlung” schließt nicht nur die Verbesserung von Symptomen oder Markern ein, sondern auch ein Abstellen oder zumindest eine Verlangsamung des Fortschreitens oder der Verschlimmerung von Symptomen im Vergleich zu dem, was in Abwesenheit einer Behandlung zu erwarten wäre, ein. Nutzbringende oder erwünschte klinische Resultate schließen, wobei dies nicht einschränkend ist, die Linderung eines oder mehrerer Symptome, die Verminderung des Ausmaßes der Krankheit, die Stabilisierung (d. h. keine Verschlimmerung) des Krankheitszustands, die Verzögerung oder Verlangsamung des Fortschreitens der Krankheit, die Verbesserung oder Linderung des Krankheitszustands, Remission (ganz oder teilweise) und/oder eine verminderte Mortalität, ob nachweisbar oder nicht, ein. Der Begriff ”Behandlung” einer Krankheit schließt auch die Bereitstellung einer Erleichterung der Symptome oder Nebenwirkungen der Krankheit (einschließlich einer palliativen Behandlung) bereit. Für eine wirksame Behandlung ist eine vollständige Heilung nicht erforderlich. Das Verfahren kann gemäß bestimmten Aspekten auch eine Heilung einschließen.As used herein, the terms "treating," "treating," "treating," or "enhancing" refer to therapeutic treatments whose purpose is to reverse the progression or severity of a disease associated with a disease or disease alleviate, improve, inhibit, slow or stop. The term "treating" includes reducing or alleviating at least one adverse effect or symptom of a disease, illness or disease. Treatment is generally "effective" if one or more symptoms or clinical markers are reduced. Alternatively, treatment is "effective" if the progression of a disease is reduced or arrested. That is, "treatment" includes not only improving symptoms or markers, but also stopping or at least slowing the progression or worsening of symptoms as compared to what would be expected in the absence of treatment. Useful or desirable clinical results include, but are not limited to, alleviating one or more symptoms, reducing the extent of the disease, stabilizing (ie not exacerbating) the disease state, delaying or slowing the progression of the disease, ameliorating or alleviating it disease status, remission (in whole or in part) and / or reduced mortality, whether detectable or not. The term "treatment" of a disease also includes providing relief of the symptoms or side effects of the disease (including palliative treatment). For effective treatment, complete healing is not required. The method may also include healing according to certain aspects.

So, wie er hier verwendet wird, bezieht sich der Begriff ”pharmazeutische Zusammensetzung” auf den Wirkstoff in Kombination mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger, z. B. einem herkömmlicherweise in der pharmazeutischen Industrie eingesetzten Träger. Der Ausdruck ”pharmazeutisch unbedenklich” wird hier in Bezug auf die Verbindungen, Materialien, Zusammensetzungen und/oder Dosierungsformen verwendet, die sich im Rahmen einer gründlichen medizinischen Beurteilung als geeignet für die Verwendung im Kontakt mit den Geweben menschlicher Lebewesen und von Tieren ohne übermäßige Toxizität, Reizungen, allergische Reaktionen oder andere Probleme oder Komplikationen eignen, mit einem angemessenen Nutzen-Risiko-Verhältnis.As used herein, the term "pharmaceutical composition" refers to the active ingredient in combination with a pharmaceutically acceptable carrier, e.g. A carrier conventionally used in the pharmaceutical industry. The term "pharmaceutically acceptable" is used herein to refer to the compounds, materials, compositions and / or dosage forms which, in the context of a thorough medical evaluation, are suitable for use in contact with the tissues of human beings and animals without excessive toxicity, Irritation, allergic reactions or other problems or complications are appropriate, with a reasonable benefit-risk balance.

So, wie hier verwendet, bezieht sich der Ausdruck ”verabreichen” auf die Platzierung einer wie hier offenbarten Verbindung in einem Subjekt mittels einer Methode oder Route, das bzw. die zu einer wenigstens teilweisen Verabreichung des Mittels an einer gewünschten Stelle führt. Die hier offenbarten Verbindungen umfassende pharmazeutische Zusammensetzungen können auf einer beliebigen geeigneten Route verabreicht werden, die bei dem Subjekt zu einer wirksamen Behandlung führt.As used herein, the term "administering" refers to the placement of a compound as disclosed herein in a subject by a method or route that results in at least partial administration of the agent at a desired location. The compounds disclosed herein Comprehensive pharmaceutical compositions can be administered by any suitable route that results in the subject of effective treatment.

Mehrfachzusammensetzungen können getrennt oder gleichzeitig verabreicht werden. Separate Verabreichung bezieht sich darauf, dass die beiden Zusammensetzungen zu unterschiedlichen Zeitpunkten verabreicht werden, z. B. im Abstand von wenigstens 10, 20, 30 oder 10–60 Minuten, oder im Abstand von 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12 Stunden. Man kann Zusammensetzungen auch im Abstand von 24 oder in sogar noch größeren Abständen verabreichen. Alternativ dazu kann man zwei oder mehr Zusammensetzungen gleichzeitig verabreichen, z. B. im Abstand von weniger als 10 oder weniger als 5 Minuten. Gleichzeitig verabreichte Zusammensetzungen können gemäß einigen Aspekten als Mischung mit oder ohne ähnliche oder unterschiedliche zeitliche Freisetzungsmechanismen für die einzelnen Komponenten verabreicht werden.Multiple compositions may be administered separately or simultaneously. Separate administration refers to administering the two compositions at different times, e.g. B. at intervals of at least 10, 20, 30 or 10-60 minutes, or at intervals of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12 hours. It is also possible to administer compositions at intervals of 24 or even more frequently. Alternatively, two or more compositions may be administered simultaneously, e.g. B. at intervals of less than 10 or less than 5 minutes. Co-administered compositions can be administered in some aspects as a mixture with or without similar or different time release mechanisms for the individual components.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”in Kontakt bringen” auf ein beliebiges geeignetes Mittel zur Verabreichung eines Mittels an einen Komplex, ein Enzym oder eine Zelle oder zum Exponieren eines Mittels gegenüber einem Komplex, einem Enzym oder einer Zelle. Beispielhafte Verabreichungsmethoden schließen, wobei dies nicht einschränkend ist, die direkte chung an Zellkulturmedium, Perfusion, Injektion oder ein anderes dem Fachmann gut bekanntes Verabreichungsverfahren ein.As used herein, "contacting" refers to any suitable means for administering an agent to a complex, enzyme or cell, or for exposing an agent to a complex, enzyme or cell. Exemplary methods of administration include, but are not limited to, direct monitoring of cell culture medium, perfusion, injection, or other method of administration well known to those skilled in the art.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Gewinnen” auf ein beliebiges Verfahren der Erwerbung, der Sicherstellung, der Beschaffung oder des Inbesitzbringens z. B. einer Probe. Das Gewinnen einer biologischen Probe von einem Subjekt kann die physikalische Entnahme einer Probe aus einem Subjekt (z. B. eine Blutentnahme oder die Entnahme einer Haar- oder Speichelprobe) mit oder ohne aktive Teilnahme des Subjekts; die Entgegennahme einer Probe von einem Subjekt (wobei das Subjekt z. B. eine Speichel- oder Haarprobe selbst sammelt und bereitstellt, z. B. in einem für den Zweck bereitgestellten Behältnis); oder die Beschaffung einer Probe aus einer Lagerungseinrichtung, einer medizinischen Einrichtung oder einem Anbieter medizinischer Leistungen umfassen. Gewinnen aus dem Menschen bzw. Subjekt bezieht sich auf einen aktiven Schritt z. B. der Blutentnahme oder der Entnahme einer Gewebe- oder Zellprobe.As used herein, "winning" refers to any method of acquiring, securing, procuring or possessing, e.g. B. a sample. Obtaining a biological sample from a subject can be the physical removal of a sample from a subject (e.g., a blood sample or a sample of hair or saliva) with or without the subject's active participation; receiving a sample from a subject (the subject, for example, collecting and providing a sample of saliva or hair, eg in a container provided for the purpose); or obtaining a sample from a storage facility, medical facility, or medical care provider. Gain from the human or subject refers to an active step z. B. the blood collection or the removal of a tissue or cell sample.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Cholesterinspiegel” auf einen Spiegel eines oder mehrerer ausgewählt aus Gesamtcholesterin, LDL-Cholesterin, HDL-Cholesterin und/oder Triglyceriden. Die Cholesterinspiegel können die Spiegel an Cholesterin im Blut eines Subjekts sein.As used herein, "cholesterol level" refers to a level of one or more selected from total cholesterol, LDL cholesterol, HDL cholesterol, and / or triglycerides. Cholesterol levels can be the levels of cholesterol in the blood of a subject.

So, wie hier im Bezug auf Cholesterinspiegel verwendet, bezieht sich ”Aufrechterhalten” darauf, dass verhindert wird, dass sich der Spiegel verschlechtert (z. B. erhöht). Gemäß einigen Ausführungsformen bezieht sich die Aufrechterhaltung eines bestimmten Spiegels auf ein Verfahren, dass dazu führt, dass der Cholesterinspiegel im Verlauf der Zeit um nicht mehr als 10% zunimmt. Aufrechterhaltung kann sich auch auf die Aufrechterhaltung eines zuvor erzielten Spiegels beziehen. Hat zum Beispiel ein Mensch eine Statinbehandlung erfahren, so kann man den durch die Anwendung der Statinbehandlung erzielten Cholesterinspiegel aufrechterhalten.As used herein with reference to cholesterol levels, "maintaining" refers to preventing the level from deteriorating (eg, increasing). In some embodiments, maintenance of a particular level refers to a method that results in the cholesterol level increasing by no more than 10% over time. Maintenance may also relate to the maintenance of a previously obtained level. For example, if a person has undergone statin treatment, one can maintain the level of cholesterol achieved through the use of statin treatment.

Gemäß einigen Ausführungsformen wurden die Cholesterinspiegel des gemäß den hier beschriebenen Verfahren behandelten Subjekts zuvor reduziert. So, wie hier verwendet, deutet ”zuvor reduziert” an, dass das Subjekt zu einem vorherigen Zeitpunkt eine Verringerung der Cholesterinspiegel erfahren hat. Die Verringerung kann auf die Verabreichung einer pharmazeutischen Zusammensetzung (z. B. die Verabreichung einer wie hier beschriebenen Zusammensetzung oder einer anderen Zusammensetzung, z. B. eines Statins) oder auf eine andere Ursache, z. B. eine Umstellung der Ernährung und/oder sportliche Betätigung zurückzuführen sein.According to some embodiments, the cholesterol levels of the subject treated according to the methods described herein have been previously reduced. As used herein, "previously reduced" indicates that the subject has previously experienced a reduction in cholesterol levels. The reduction may be due to the administration of a pharmaceutical composition (e.g., the administration of a composition as described herein or another composition, eg, a statin) or to another cause, e.g. B. a change in diet and / or exercise may be due.

Eine vorhandene Behandlung hoher Cholesterinspiegel ist die Verabreichung eines Statins. So, wie hier bezeichnet, sind ”Statine” (die auch als HMG-CoA-Reduktaseinhibitoren bekannt sind) Inhibitoren des Enzyms HMG-CoA-Reduktase, das die Cholesterinproduktion in der Leber vermittelt. Statine verhindern durch kompetitive Bindung von HMG-CoA-Reduktase die Bindung von HMG-CoA an das Enzym und hemmen somit die Aktivität der Reduktase (z. B. der Produktion von Mevalonat). Nicht einschränkende Beispiele für Statine können Atorvastatin (LIPITOR^TM), Fluvastatin (LESCOL^TM), Lovastatin (MEVACOR^TM, ALTOCOR^TM), Pitavastatin (LIVALO^TM), Pravastatin (PRAVACHOL^TM), Rosuvastatin (CRESTOR^TM) und Simvastatin (ZOCOR^TM) einschließen. Statine können in Kombination mit anderen Mitteln, z. B. der Kombination von Ezetimib und Simvastatin, verabreicht werden.An existing treatment for high cholesterol is the administration of a statin. As used herein, "statins" (also known as HMG-CoA reductase inhibitors) are inhibitors of the enzyme HMG-CoA reductase, which mediates cholesterol production in the liver. Statins prevent the binding of HMG-CoA to the enzyme by competitive binding of HMG-CoA reductase and thus inhibit the activity of reductase (eg, the production of mevalonate). Non-limiting examples of statins may include atorvastatin (LIPITOR ^™ ), fluvastatin (LESCOL ^™ ), lovastatin (MEVACOR ^™ , ALTOCOR ^™ ), pitavastatin (LIVALO ^™ ), pravastatin (PRAVACHOL ^™ ), rosuvastatin (CRESTOR ^™ ), and simvastatin (ZOCOR ^™ ). lock in. Statins may be used in combination with other agents, e.g. The combination of ezetimibe and simvastatin.

Einige Subjekte sind oder werden gegenüber einer Statinbehandlung resistent. So, wie hier verwendet, bezieht sich ”resistent gegenüber einer Statinbehandlung” oder ”reduziertes Ansprechen auf Statinbehandlung” auf ein Subjekt, das eine statistisch signifikante niedrigere Reaktion auf die Verabreichung eines Statins im Vergleich zu einem Vergleichsspiegel zeigt. Bei dem Vergleichsspiegel kann es sich z. B. um die durchschnittliche Reaktion einer Population von Subjekten oder den Spiegel des individuellen Subjekts zu einem früheren Zeitpunkt handeln. Eine Reaktion auf eine Statinbehandlung lässt sich vom Fachmann leicht messen, z. B. Messung von Cholesterinspiegeln, Veränderungen bei den Cholesterinspiegeln und/oder die HMG-CoA-Red uktase-Aktivität.Some subjects are or become resistant to statin treatment. As used herein, "resistant to statin treatment" or "reduced response to statin treatment" refers to a subject having a statistically significant lower response to the administration of a statin compared to a comparison mirror shows. In the comparison mirror, it may be z. For example, the average response of a population of subjects or the levels of the individual subject at an earlier time. A reaction to a statin treatment can be easily measured by the skilled person, z. B. Measurement of cholesterol levels, changes in cholesterol levels and / or the HMG-CoA Red uktase activity.

So, wie hier verwendet, bezieht sich der Begriff ”nachweisbarer Marker” auf ein Molekül oder eine Gruppierung, das bzw. die sich nachweisen, z. B. messen und/oder als vorhanden oder abwesent bestimmen lässt. Nachweisbare Marker können zum Beispiel einen lichtabsorbierenden Farbstoff, einen fluoreszierenden Farbstoff oder einen radioaktiven Marker umfassen. Nachweisbare Marker, Methoden zu derem Nachweis und Methoden zu deren Einbau in Reagentien (z. B. Antikörper- und Nukleinsäuresonden) sind im Stand der Technik gut bekannt.As used herein, the term "detectable label" refers to a molecule or moiety that can be detected, e.g. B. measure and / or can be determined as present or absent. Detectable markers may include, for example, a light-absorbing dye, a fluorescent dye or a radioactive marker. Detectable markers, methods for detection thereof, and methods for incorporation into reagents (eg, antibody and nucleic acid probes) are well known in the art.

Gemäß einigen Ausführungsformen können nachweisbare Marker Marker einschließen, die sich durch spektroskopische, photochemische, biochemische, immunochemische, elektromagnetische, radiochemische oder chemische Mittel wie Fluoreszenz, Chemifluoreszenz oder Chemilumineszenz oder andere geeignete Mittel nachweisen lassen. Bei den in den hier beschriebenen Methoden eingesetzten nachweisbaren Markern kann es sich um primäre Marker (bei denen der Marker eine Gruppierung umfasst, die direkt nachweisbar ist oder die eine direkt nachweisbare Gruppierung produziert) oder sekundäre Marker (bei denen der nachweisbare Marker unter Abgabe eines nachweisbaren Signals an eine andere Gruppierung bindet, wie es z. B. gewöhnlich bei der immunologischen Markierung mit sekundären und tertiären Antikörpern der Fall ist) handeln. Der nachweisbare Marker kann kovalent oder nicht kovalent an das Reagenz gebunden sein. Alternativ dazu kann ein nachweisbarer Marker als solcher gebunden sein, indem man ein Molekül direkt markiert, das über eine Ligand-Rezeptor-Bindungspaaranordnung oder andere solche spezifischen Erkennungsmoleküle eine Bindung an das Reagenz erzielt. Nachweisbare Marker können, wobei dies nicht einschränkend ist, Radioisotope, biolumineszente Verbindungen, Chromophore, Antikörper, chemilumineszente Verbindungen, fluoreszierende Verbindungen, Metallchelate und Enzyme einschließen.According to some embodiments, detectable labels may include markers that can be detected by spectroscopic, photochemical, biochemical, immunochemical, electromagnetic, radiochemical or chemical means such as fluorescence, chemiluminescence or chemiluminescence or other suitable means. The detectable markers used in the methods described herein may be primary markers (where the marker includes a moiety that is directly detectable or that produces a direct detectable moiety) or secondary markers (where the detectable marker is labeled to yield a detectable marker) Signal binds to another grouping, as is usually the case, for example, with immunological labeling with secondary and tertiary antibodies). The detectable label may be covalently or non-covalently bound to the reagent. Alternatively, a detectable label may be bound as such by direct labeling of a molecule that binds to the reagent via a ligand-receptor binding pairing or other such specific recognition molecule. Detectable markers may include, but are not limited to, radioisotopes, bioluminescent compounds, chromophores, antibodies, chemiluminescent compounds, fluorescent compounds, metal chelates, and enzymes.

Gemäß anderen Ausführungsformen kann es sich bei dem nachweisbaren Marker um eine fluoreszierende Verbindung handeln. Wird der Fluoreszenzmarker Licht der richtigen Wellenlänge ausgesetzt, so lässt sich sein Vorhandensein dann anhand der Fluoreszenz nachweisen. Gemäß einigen Ausführungsformen kann es sich bei einem nachweisbaren Marker um ein fluoreszierendes Farbstoffmolekül bzw. ein Fluorophor einschließlich, jedoch nicht darauf beschränkt, Fluorescein, Phycoerythrin, Phycocyanin, o-Phthaldehyd, Fluorescamin, Cy3^TM, Cy5^TM, Allophycocyanin, Texasrot, Peridenin-Chlorophyll, Cyanin, Tandem-Konjugate wie Phycoerythrin-Cy5^TM, grünes fluoreszierendes Protein, Rhodamin, Fluoresceinisothiocyanat (FITC) und Oregon Green^TM, Rhodamin und Derivate (z. B. Texasrot und Tetrarhodiminisothiocyanat (TRITC)), Biotin, Phycoerythrin, AMCA, CyDyes^TM, 6-Carboxythiorescein (gewöhnlich unter den Abkürzungen FAM bzw. F bekannt), 6-Carboxy-2',4',7',4,7-hexachlorfluorescein (HEX), 6-Carboxy-4',5'-dichlor-2',7'dimethoxyfluorescein (JOE bzw. J), N,N,N',N'-Tetramethyl-o-carboxyrhodamin (TAMRA bzw. T), 6-Carboxy-X-rhodamin (ROX bzw. R), 5-Carboxyrhodamin-6G (R6G5 bzw. G5), 6-Carboxyrhodamin-6G (R6G6 bzw. G6) und Rhodamin 110; Cyaninfarbstoffe, z. B. Cy3-, Cy5- und Cy7-Farbstoffe; Coumarine, z. B. Umbelliferon; Benzimidfarbstoffe, z. B. Hoechst 33258; Phenanthridinfarbstoffe, z. B. Texasrot; Ethidiumfarbstoffe; Acrid i nfa rbstoffe; Carbazolfarbstoffe; Phenoxazinfarbstoffe; Porphyrinfarbstoffe; Polymethinfarbstoffe, z. B. Cyaninfarbstoffe wie Cy3, Cy5 usw.; BODIPY-Farbstoffe und Chinolinfarbstoffe handeln. Gemäß einigen Ausführungsformen kann es sich bei einem nachweisbaren Marker um einen Radiomarker einschließlich, jedoch nicht darauf beschränkt, ³H, ¹²⁵I, ³⁵S, ¹⁴C, ³²P) und ³³P handeln. Gemäß einigen Ausführungsformen kann es sich bei einem nachweisbaren Marker um ein Enzym einschließlich, jedoch nicht darauf beschränkt, Meerrettich-Peroxidase und alkalische Phosphatase handeln. Ein enzymatischer Marker kann zum Beispiel ein chemilumineszentes Signal, ein Farbsignal oder ein fluoreszentes Signal produzieren. Enzyme, die für eine Verwendung als nachweisbarer Marker in Betracht gezogen werden, schließen, wobei dies nicht einschränkend ist, Malatdehydrogenase, Staphylokokken-Nuklease, delta-V-Steroidisomerase, Hefe-Alkoholdehydrogenase, alpha-Glycerophosphatdehydrogenase, Triosephosphatisomerase, Meerrettich-Peroxidase, alkalische Phosphatase, Asparaginase, Glucoseoxidase, beta-Galactosidase, Ribonuklease, Urease, Katalase, Glucose-VI-phosphatdehydrogenase, Glucoamylase und Acetylcholinesterase ein. Gemäß einigen Ausführungsformen handelt es sich bei einem nachweisbaren Marker um einen chemilumineszenten Marker einschließlich, jedoch nicht darauf beschränkt, Lucigenin, Luminol, Luciferin, Isoluminol, theromatische Acridiniumester, Imidazol, Acridiniumsalz und Oxalatester. Gemäß einigen Ausführungsformen kann es sich bei einem nachweisbaren Marker um einen spektralkolorimetrischen Marker einschließlich, jedoch nicht darauf beschränkt, kolloidales Gold oder Perlen aus gefärbtem Glass oder Kunststoff (z. B. Polystyrol, Polypropylen und Latex) handeln.In other embodiments, the detectable label may be a fluorescent compound. If the fluorescent marker is exposed to light of the correct wavelength, its presence can then be detected by fluorescence. According to some embodiments, a detectable label may be a fluorescent dye molecule or fluorophore including, but not limited to, fluorescein, phycoerythrin, phycocyanin, o-phthaldehyde, fluorescamine, Cy3 ^™ , Cy5 ^™ , allophycocyanin, Texas Red, peridenin chlorophyll , Cyanine, tandem conjugates such as phycoerythrin Cy5 ^™ , green fluorescent protein, rhodamine, fluorescein isothiocyanate (FITC) and Oregon Green ^™ , rhodamine and derivatives (e.g., Texas Red and tetrarhodimine isothiocyanate (TRITC)), biotin, phycoerythrin, AMCA, CyDyes ^TM , 6-Carboxythiorescein (commonly known by the abbreviations FAM and F, respectively), 6-carboxy-2 ', 4', 7 ', 4,7-hexachlorofluorescein (HEX), 6-carboxy-4', 5'-dichloro -2 ', 7'-dimethoxyfluorescein (JOE or J), N, N, N', N'-tetramethyl-o-carboxy rhodamine (TAMRA or T), 6-carboxy-X-rhodamine (ROX or R), 5-carboxyhodamine-6G (R6G5 or G5), 6-carboxyhodamine-6G (R6G6 and G6, respectively) and rhodamine 110; Cyanine dyes, e.g. Cy3, Cy5 and Cy7 dyes; Coumarins, e.g. B. umbelliferone; Benzimidfarbstoffe, z. Hoechst 33258; Phenanthridine dyes, e.g. B. Texas Red; Ethidiumfarbstoffe; Acridine dyes; Carbazolfarbstoffe; phenoxazine; porphyrin; Polymethine dyes, e.g. Cyanine dyes such as Cy3, Cy5, etc .; BODIPY dyes and quinoline dyes act. In some embodiments, a detectable label may be a radiolabel, including, but not limited to, ³ H, ¹²⁵ I, ³⁵ S, ¹⁴ C, ³² P, and ³³ P. In some embodiments, a detectable label may be an enzyme including, but not limited to, horseradish peroxidase and alkaline phosphatase. For example, an enzymatic label can produce a chemiluminescent signal, a color signal or a fluorescent signal. Enzymes contemplated for use as a detectable marker include, but are not limited to, malate dehydrogenase, staphylococcal nuclease, delta-V steroid isomerase, yeast alcohol dehydrogenase, alpha-glycerophosphate dehydrogenase, triosephosphate isomerase, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase , Asparaginase, glucose oxidase, beta-galactosidase, ribonuclease, urease, catalase, glucose-VI-phosphate dehydrogenase, glucoamylase and acetylcholinesterase. According to some embodiments, a detectable label is a chemiluminescent label including, but not limited to, lucigenin, luminol, luciferin, isoluminol, acridinium acridinium ester, imidazole, acridinium salt and oxalate ester. According to some embodiments, a detectable label may be a spectral colorimetric marker including, but not limited to, colloidal gold or colored glass or plastic beads (eg, polystyrene, polypropylene, and latex).

Gemäß einigen Ausführungsformen können Reagentien auch mit einem nachweisbaren Tag wie c-Myc, HA, VSV-G, HSV, FLAG, V5, HIS oder Biotin markiert sein. Man kann auch andere Nachweissysteme anwenden, zum Beispiel ein Biotin-Streptavidin-System. Bei diesem System sind die Antikörper, die immunoreaktiv mit (d. h. spezifisch für) dem interessierenden Biomarker sind, biotinyliert. Die Menge an an den Biomarker gebundenem biotinyliertem Antikörper wird mit einem Streptavidin-Peroxidase-Konjugat und einem chromogenen Substrat bestimmt. Solche Streptavidin-Peroxidase-Nachweiskits sind im Handel erhältlich, z. B. von DAKO; Carpinteria, CA, USA. Es ist außerdem möglich, ein Reagenz mit fluoreszenzemittierenden Metallen wie ¹⁵²Eu und anderen der Lanthanidreihe nachweisbar zu markieren. Diese Metalle lassen sich mit metallchelatisierenden Gruppen wie Diethylentriaminpentaessigsäure (DTPA) oder Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) am Reagenz anbringen. According to some embodiments, reagents may also be labeled with a detectable tag such as c-Myc, HA, VSV-G, HSV, FLAG, V5, HIS or biotin. It is also possible to use other detection systems, for example a biotin-streptavidin system. In this system, the antibodies which are immunoreactive with (ie specific for) the biomarker of interest are biotinylated. The amount of biotinylated antibody bound to the biomarker is determined with a streptavidin-peroxidase conjugate and a chromogenic substrate. Such streptavidin-peroxidase detection kits are commercially available, e.g. From DAKO; Carpinteria, CA, USA. It is also possible to detectably label a reagent with fluorescence emitting metals such as ¹⁵² Eu and others of the lanthanide series. These metals can be attached to the reagent with metal chelating groups such as diethylenetriamine pentaacetic acid (DTPA) or ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA).

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Zulassungsnummer” oder ”Arzneimittelzulassungsnummer” auf eine von einer Zulassungsbehörde bei der Feststellung der Behörde, dass ein bestimmtes medizinisches Produkt und/oder eine bestimmte medizinische Zusammensetzung in der Region, für die die Behörde zuständig ist, vermarktet bzw. zum Verkauf angeboten werden darf, herausgegebene Nummer. So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Zulassungsbehörde” auf eine der für die Prüfung, z. B. der Sicherheit und Wirksamkeit eines medizinischen Produkts und/oder einer medizinischen Zusammensetzung, und die Kontrolle des Verkaufs/der Vermarktung solcher Produkte und/oder Zusammensetzungen in einer gegebenen Region verantwortliche Behörde. Die Food and Drug Administration (FDA) in den USA und die European Medicines Agency (EPA) in Europa sind nur zwei Beispiele für solche Zulassungsbehörden. Andere nicht einschränkende Beispiele können SDA, MPA, MHPRA, IMA, ANMAT, Hong Kong Department of Health-Drug Office, CDSCO, Medsafe und KFDA einschließen.As used herein, "regulatory number" or "drug regulatory number" refers to one of a regulatory agency when determining the authority that markets a particular medical product and / or medical composition in the region for which the regulatory authority is responsible or may be offered for sale, issued number. As used herein, "regulatory authority" refers to one of the candidates for the audit, e.g. The safety and efficacy of a medical product and / or medical composition, and the control of the sale / marketing of such products and / or compositions in a given region. The Food and Drug Administration (FDA) in the US and the European Medicines Agency (EPA) in Europe are just two examples of such regulatory agencies. Other non-limiting examples may include SDA, MPA, MHPRA, IMA, ANMAT, Hong Kong Department of Health Drug Office, CDSCO, Medsafe and KFDA.

So, wie hier verwndet, bezieht sich ”Injektionsgerät” auf ein Gerät, das für die Verabreichung von Injektionen vorgesehen ist, wobei eine Injektion die Schritte einer temporären fluidischen Kupplung des Injektionsgeräts mit dem Gewebe einer Person, typischerweise dem subkutanen Gewebe, einschließt. Eine Injektion schließt ferner die Verabreichung einer Menge an flüssigem Arzneimittel in das Gewebe und die Entkupplung bzw. das Entfernen des Injektionsgeräts von/aus dem Gewebe ein. Gemäß einigen Ausführungsformen kann ein Injektionsgerät ein intravenöses Gerät bzw. IV-Gerät sein, bei dem es sich um einen Typ von Injektionsgerät handelt, das zur Anwendung kommt, wenn das Zielgewebe das Blut im Blutkreislauf ist, z. B. das Blut in einer Vene. Ein übliches, jedoch nicht einschränkendes Beispiel für ein Injektionsgerät ist eine Nadel und Spritze.As used herein, "injection device" refers to a device intended for the administration of injections, wherein an injection includes the steps of temporarily fluidly coupling the injection device to the tissue of a subject, typically the subcutaneous tissue. Injection further includes administering an amount of liquid drug to the tissue and disengaging or removing the injection device from the tissue. According to some embodiments, an injection device may be an IV device, which is a type of injection device used when the target tissue is blood in the bloodstream, e.g. B. the blood in a vein. A common but non-limiting example of an injection device is a needle and syringe.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Puffer” auf ein chemisches Mittel, das dazu fähig ist, eine gewisse Menge einer Säure oder Base aufzunehmen, ohne dass sich der pH-Wert dabei stark verändert.As used herein, "buffer" refers to a chemical agent that is capable of accepting a certain amount of an acid or base without greatly changing the pH.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Verpackung” darauf, wie die Komponenten in einer für die Verteilung und/oder Anwendung geeigneten Einheit angeordnet und/oder fixiert sind. Die Verpackung kann z. B. Boxen, Beutel, Spritzen, Ampullen, Vials, Röhrchen, aufklappbare Verpackungen, Barrieren und/oder Behälter zur Aufrechterhaltung der Sterilität, Etikettierung usw. einschließen.As used herein, "packaging" refers to how the components are arranged and / or fixed in a unit suitable for distribution and / or use. The packaging can z. As boxes, bags, syringes, ampoules, vials, tubes, hinged packaging, barriers and / or containers to maintain sterility, labeling, etc. include.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Instruktionen” auf eine Darstellung von geschriebenem, gedrucktem oder graphischem Material auf dem unmittelbaren Behälter eines Artikels, zum Beispiel das geschriebene Material, das auf einem einen pharmazeutischen Wirkstoff enthaltenden Vial dargestellt wird, oder Details zur Zusammensetzung und der Verwendung eines Produkts von Interesse, die sich in einem Kit befinden, das eine Zusammensetzung von Interesse enthält. Instruktionen erklären das Behandlungverfahren, so wie es für die Verabreichung oder Durchführung in Betracht gezogen wird.As used herein, "instructions" refers to a representation of written, printed, or graphic material on the immediate container of an article, for example, the written material displayed on a vial containing a pharmaceutical agent, or composition details, and the use of a product of interest contained in a kit containing a composition of interest. Instructions explain the treatment procedure as contemplated for administration or performance.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”feste Oberfläche” auf ein Objekt, dass sich zur Anbindung von Biomolekülen eignet. Nicht einschränkende Beispiele für eine feste Oberfläche können ein Partikel (einschließlich, jedoch nicht darauf beschränkt, einer Agarose- oder Latexperle oder eines Agarose- oder Latexpartikels oder eines magnetischen Partikels), eine Perle, ein Nanopartikel, ein Polymer, ein Substrat, ein Objektträger, ein Deckgläschen, eine Platte, ein Teller, eine Vertiefung, eine Membran und/oder ein Gitter sein. Die feste Oberfläche kann viele verschiedene Materialien einschließlich, jedoch nicht darauf beschränkt, Polymere, Kunststoffe, Harze, Polysaccharide, Silicium oder Materialien auf Siliciumdioxidbasis, Kohlenstoff, Metalle, anorganische Gläser und Membranen einschließen.As used herein, "solid surface" refers to an object that is suitable for attaching biomolecules. Non-limiting examples of a solid surface may include a particle (including, but not limited to, an agarose or latex bead or an agarose or latex particle or a magnetic particle), a bead, a nanoparticle, a polymer, a substrate, a microscope slide, a coverslip, a plate, a plate, a depression, a membrane and / or a grid. The solid surface may include many different materials including, but not limited to, polymers, plastics, resins, polysaccharides, silicon, or silica-based materials, carbon, metals, inorganic glasses, and membranes.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”Klassifizierung” eines Subjekts, z. B. Klassifizierung der Abstammung des Subjekts, auf die Feststellung, ob das Subjekt biologische Vorfahren hat, die aus einer bestimmten geographischen Region stammten, und bei denen es daher wahrscheinlich ist, dass sie bestimmte genetische Varianten aufweisen, die man in den Populationen findet, die diese Region historisch besiedelt haben. Eine Klassifizierung kann z. B. die Gewinnung von Informationen zur Familie das Subjekts, ein Interviewen des Subjekts oder eines Familienmitglieds zu ihrer biologischen Familienabstammung und/oder genetische Tests umfassen. Die Klassifizierung kann auf der für das 1000 Genomes Project, mit dem der Fachmann vertraut sein wird, verwendeten Basis erfolgen. Gemäß einigen Ausführungsformen kann das Subjekt als von einer bestimmten Abstammung klassifiziert werden, wenn wenigstens das Genom des Subjekts eine wesentliche Anzahl verschiedener Allele umfasst, die es mit anderen Menschen dieser Abstammung teilt (z. B. in Bezug auf die Datenbank des 1000 Genomes Project bestimmt), zum Beispiel wenigstens 10, 20, 30, 40, 50 oder 100 oder mehr Allele teilt. Die Abkürzungen für bestimmte Abstammungsgruppen finden sich in Tabelle 4.As used herein, "classification" of a subject, e.g. B. Classifying the descent of the subject to determine whether the subject has biological ancestors that originated from a particular geographic region and therefore is likely to have certain genetic variants found in the populations that are have colonized this region historically. A Classification can be z. For example, obtaining information about the family of the subject, interviewing the subject or a family member about their biological lineage, and / or genetic testing. The classification may be made on the basis used for the 1000 Genomes Project, which will be familiar to those skilled in the art. According to some embodiments, the subject may be classified as of a particular lineage if at least the genome of the subject comprises a substantial number of different alleles sharing it with other humans of that lineage (eg, as determined in relation to the database of the 1000 Genome Project ), for example, shares at least 10, 20, 30, 40, 50 or 100 or more alleles. Abbreviations for certain lineages can be found in Table 4.

Der Begriff ”statistisch signifikant” oder ”signifikant” bezieht sich auf statistische Signifikanz und bedeutet im Allgemeinen einen Unterschied von zwei Standardabweichungen (2SD) oder mehr.The term "statistically significant" or "significant" refers to statistical significance and generally means a difference of two standard deviations (2SD) or more.

Außer in den Ausführungsbeispielen oder wo sonst angegeben sollen alle alle Zahlen, die Mengen an Inhaltsstoffen oder hier angewandte Reaktionsbedingungen ausdrücken, so verstanden werden, dass sie jeweils durch den Begriff ”etwa” modifiziert sind. Der Begriff ”etwa” kann im Zusammenhang mit Prozentzahlen ±1% bedeuten.Except in the embodiments or where otherwise indicated, all numbers expressing amounts of ingredients or reaction conditions employed herein are to be understood to be modified by the term "about", respectively. The term "about" may mean percentages ± 1%.

So, wie er hier verwendet wird, wird der Begriff ”umfassend” oder ”umfasst” in Bezug auf Zusammensetzungen, Verfahren und die jeweilige(n) Komponente(n) davon verwendet, die wesentlich für das Verfahren bzw. die Zusammensetzung sind, jedoch offen für die Aufnahme von nicht aufgeführten Elementen, ob wesentlich oder nicht.As used herein, the term "comprising" or "comprising" is used with respect to compositions, methods and the particular component (s) thereof that are essential to the process or composition, but are open-ended for inclusion of unlisted elements, whether essential or not.

Der Begriff ”bestehend aus” bezieht sich auf Zusammensetzungen, Verfahren und die jeweilige(n) Komponente(n) davon wie hier beschrieben unter Ausschluss aller Elemente, die nicht in der Beschreibung der Ausführungsform aufgeführt sind.The term "consisting of" refers to compositions, methods, and the particular component (s) thereof as described herein to the exclusion of all elements not included in the description of the embodiment.

So, wie hier verwendet, bezieht sich ”im Wesentlichen bestehend aus” auf die Elemente, die für eine gegebene Ausführungsform erforderlich sind. Der Begriff lässt das Vorhandensein von Elementen zu, die die grundlegenden und neuen bzw. funktionellen Charakteristika der Ausführungsform nicht erheblich beeinflussen.As used herein, "consisting essentially of" refers to the elements required for a given embodiment. The term allows for the presence of elements that do not significantly affect the basic and novel or functional characteristics of the embodiment.

Die Einzahlausdrücke ”ein”, ”eine” und ”der”, ”die” und ”das” schließen, wenn aus dem Zusammenhang nicht eindeutig etwas anderes hervorgeht, Pluralbezüge ein. In ähnlicher Weise soll das Wort ”oder” ”und” einschließen, wenn aus dem Zusammenhang nicht eindeutig etwas anderes hervorgeht. Wenngleich man bei der Ausführung oder dem Testen der vorliegenden Offenbarung Verfahren und Materialien ähnlich oder äquivalent zu den hier beschriebenen einsetzen kann, werden unten geeignete Verfahren und Materialien beschrieben. Mit der Abkürzung ”z. B.” wird hier ein nicht einschränkendes Beispiel bezeichnet. Die Abkürzung ”z. B.” ist somit synonym zum Begriff ”zum Beispiel”.The singular expressions "a", "an" and "the", "the" and "the" include plural referents unless the context clearly indicates otherwise. Similarly, the word "or" should include "and" unless the context clearly dictates otherwise. While methods and materials similar or equivalent to those described herein may be used in the practice or testing of the present disclosure, suitable methods and materials are described below. With the abbreviation "z. For example, "a non-limiting example is referred to herein. The abbreviation "z. B. "is thus synonymous with the term" for example ".

Definitionen herkömmlicher Begriffe der Zellbiologie und Molekularbiologie finden sich in ”The Merck Manual of Diagnosis and Therapy”, 19. Auflage, herausgegeben von Merck Research Laborstories, 2006 (ISBN 0-911910-19-0) ; Robert S. Porter et al. (Hrsg.), The Encyclopedia of Molecular Biology, herausgegeben von Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9) ; Benjamin Lewin, Genes X, herausgegeben von Jones & Bartlett Publishing, 2009 (ISBN-10: 0763766321) ; Kendrew et al. (Hrsg.),, Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, herausgegeben von VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8) und Current Protocols in Protein Sciences 2009, Wiley Intersciences, Coligan et al., Hrsg .Definitions of conventional terms of cell biology and molecular biology can be found in "The Merck Manual of Diagnosis and Therapy," 19th Edition, Edited by Merck Research Laboratories, 2006 (ISBN 0-911910-19-0) ; Robert S. Porter et al. (Ed.), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9) ; Benjamin Lewin, Genes X, edited by Jones & Bartlett Publishing, 2009 (ISBN-10: 0763766321) ; Kendrew et al. (Ed.) "Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8) and Current Protocols in Protein Sciences 2009, Wiley Intersciences, Coligan et al., Eds ,

Wenn nicht anders angegeben, wurde die vorliegende Erfindung unter Anwendung von Standardtechniken durchgeführt, wie sie zum Beispiel in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4. Aufl.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (2012) ; Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (1995) ; oder Methods in Enzymology: Guide to Molecular Cloning Techniques Band 152, S. L. Berger und A. R. Kimmel Hrsg., Academic Press Inc., San Diego, USA (1987) ; Current Protocols in Protein Science (CPPS) (John E. Coligan, et. al., Hrsg., John Wiley and Sons, Inc.) , Current Protocols in Cell Biology (CPCB) (Juan S. Bonifacino et. al. Hrsg., John Wiley and Sons, Inc.) und Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique von R. Ian Freshney, herausgegeben von: Wiley-Liss; 5. Auflage (2005) , Animal Cell Culture Methods (Methods in Cell Biology, Band 57, Jennie P. Mather und David Barnes Hrsg., Academic Press, 1. Auflage, 1998 ) beschrieben sind, die hiermit alle durch Verweis in ihrer Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden.Unless otherwise stated, the present invention has been practiced using standard techniques, such as those described in U.S. Patent Nos. 5,496,074; Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th Ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA (2012) ; Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (1995). ; or Methods in Enzymology: Guide to Molecular Cloning Techniques Vol. 152, SL Berger and AR Kimmel ed., Academic Press Inc., San Diego, USA (1987) ; Current Protocols in Protein Science (CPPS) (John E. Coligan, et al., Ed., John Wiley and Sons, Inc.) . Current Protocols in Cell Biology (CPCB) (Juan S. Bonifacino et al., Eds., John Wiley and Sons, Inc.) and Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique by R. Ian Freshney, edited by: Wiley-Liss; 5th edition (2005) . Animal Cell Culture Methods (Methods in Cell Biology, Vol. 57, Jennie P. Mather and David Barnes eds., Academic Press, 1st Edition, 1998 ), all incorporated herein by reference in their entirety.

Andere Begriffe sind hier bei den Beschreibungen der verschiedenen Aspekte der Erfindung definiert.Other terms are defined herein in the descriptions of the various aspects of the invention.

Alle Patente und anderen Publikationen einschließlich Literaturstellen, erteilten Patenten, offengelegten Patentanmeldungen und gleichzeitig anhängigen Patentanmeldungen, die in der vorliegenden Anmeldung zitiert werden, sind durch Verweis zum Zweck der Beschriebung und Offenbarung ausdrücklich Bestandteil der vorliegenden Anmeldung; zum Beispiel könnte es sich bei den in solchen Veröffentlichungen beschriebenen Techniken um welche handeln, die in Verbindung mit der hier beschriebenen Technologie zur Anwendung kommen könnten. Diese Veröffentlichungen werden hier ausschließlich wegen ihrer Offenbarung vor dem Einreichungsdatum der vorliegenden Anmeldung bereitgestellt. In dieser Hinsicht sollte nichts als ein Eingeständnis ausgelegt werden, dass die Erfinder nicht dazu berechtigt wären, aufgrund früherer Erfindung oder aus einem anderen Grund eine solche Offenbarung vorzudatieren. Alle Angaben zu Datum oder Darstellungen zum Inhalt dieser Dokumente basieren auf den den Anmeldern zur Verfügung stehenden Informationen und stellen kein Eingeständnis zur Korrektheit der Daten oder Inhalte dieser Dokumente dar. All patents and other publications, including references, granted patents, patent applications, and co-pending patent applications cited in the present application are incorporated herein by reference for purposes of disclosure and disclosure; For example, the techniques described in such publications could be those that could be used in conjunction with the technology described herein. These publications are provided herein solely for their disclosure prior to the filing date of the present application. In this regard, nothing should be construed as an admission that the inventors are not entitled to pre-date such disclosure for the purposes of the present invention or for any other reason. All information on dates or representations on the content of these documents is based on the information available to the applicants and does not constitute an admission of the correctness of the data or contents of these documents.

Die Beschreibung der Ausführungsformen der Offenbarung soll nicht erschöpfend sein oder die Offenbarung auf die genaue offenbarte Form einschränken. Spezielle Ausführungsformen von und Beispiele für die Offenbarung werden hier zur Veranschauung beschrieben, es sind jedoch verschiedene äquivalente Modifikationen innerhalb des Schutzbereichs der Offenbarung möglich, wie dem Fachmann auf dem betreffenden Gebiet bewusst sein wird. Zum Beispiel kann man, wenn Verfahrensschritte oder Funktionen in einer bestimmten Reihenfolge aufgeführt sind, bei alternativen Ausführungsformen Funktionen in einer anderen Reihenfolge durchführen oder Funktionen im Wesentlichen parallel zueinander durchführen. Die Lehre der hier bereitgestellten Offenbarung kann gegebenenfalls auf andere Vorschriften oder Verfahren angewendet werden. Die verschiedenen hier beschriebenen Ausführungsformen lassen sich unter Bereitstellung weiterer Ausführungsformen kombinieren. Aspekte der Offenbarung können, falls erforderlich, dahingehend modifiziert werden, dass die Zusammensetzungen, Funktionen und Konzepte der obigen Literaturstellen und Anmeldung eingesetzt werden, um noch weitere Ausführungsformen der Offenbarung bereitzustellen. Außerdem können aufgrund von Betrachtungen zur biologischen funktionellen Äquivalenz einige Änderungen in der Proteinstruktur vorgenommen werden, ohne dass die biologische oder chemische Wirkung in ihrer Art oder ihrem Ausmaß beeinträchtigt wird. Diese und andere Änderungen können in Anbetracht der ausführlichen Beschreibung an der Offenbarung vorgenommen werden. Alle diese Modifikationen sollen mit in den Schutzbereich der angehängten Ansprüche fallen.The description of the embodiments of the disclosure is not intended to be exhaustive or to limit the disclosure to the precise form disclosed. Specific embodiments of and examples of the disclosure are described herein for purposes of illustration, but various equivalent modifications are possible within the scope of the disclosure, as those skilled in the art will appreciate. For example, if method steps or functions are listed in a particular order, in alternative embodiments one may perform functions in a different order or perform functions substantially in parallel. The teachings of the disclosure provided herein may be applied to other regulations or methods as appropriate. The various embodiments described herein may be combined to provide further embodiments. Aspects of the disclosure may, if necessary, be modified to employ the compositions, functions, and concepts of the above references and application to provide still further embodiments of the disclosure. In addition, due to considerations of biological functional equivalence, some changes in protein structure may be made without affecting the nature or extent of the biological or chemical action. These and other changes may be made in light of the detailed description of the disclosure. All such modifications are intended to be within the scope of the appended claims.

Spezielle Elemente beliebiger der obigen Ausführungsformen können kombiniert oder gegen Elemente in anderen Ausführungsformen ausgetauscht werden. Ferner können, wenngleich mit bestimmten Ausführungsformen der Offenbarung assoziierte Vorteile im Zusammenhang mit diesen Ausführungsformen beschrieben wurden, auch andere Ausführungsformen solche Vorteile bieten, und nicht alle Ausführungsformen müssen notwendigerweise solche Vorteile bieten, um in den Schutzbereich der Offenbarung zu fallen.Specific elements of any of the above embodiments may be combined or replaced with elements in other embodiments. Further, while advantages associated with certain embodiments of the disclosure have been described in conjunction with these embodiments, other embodiments may also provide such advantages, and not all embodiments necessarily must provide such advantages to be within the scope of the disclosure.

Es versteht sich, dass hier beschriebene besondere Konfigurationen, Aspekte, Beispiele, Klauseln und Ausführungsformen zur Veranschaulichung gezeigt sind und nicht als Einschränkungen der Erfindung. Das Hauptmerkmal der vorliegenden Erfindung kann in verschiedenen Ausführungsformen eingesetzt werden, ohne den Schutzbereich der Erfindung zu verlassen. Der Fachmann wird zahlreiche Äquivalente der hier beschriebenen speziellen Vorschriften erkennen oder dazu in der Lage sein, diese unter Anwendung von nicht mehr als Routineversuchen zu ermitteln. Solche Äquivalente werden als in den Schutzbereich der vorliegenden Erfindung fallend angesehen und sind durch die Ansprüche abgedeckt. Alle in der Beschreibung erwähnten Veröffentlichungen und Patentanmeldungen sind indikativ für das Ausmaß an Fachwissen des Fachmanns auf dem Gebiet, zu dem die vorliegende Erfindung gehört. Alle Veröffentlichungen und Patentanmeldungen werden durch Verweis in gleichem Ausmaß Bestandteil der Anmeldung, als wie wenn für die einzelnen Veröffentlichungen oder Patentanmeldungen jeweils speziell und individuell angegeben wurde, dass diese durch Verweis Bestandteil der Anmeldung werden. Die Verwendung des Wortes ”ein” oder ”eine” in Verbindung mit dem Begriff ”umfassend” in den Ansprüchen und/oder der Beschreibung kann ”ein(e) [als Zahl]” bedeuten, ist aber auch mit der Bedeutung ”ein(e) oder mehrere”, ”wenigstens ein(e)” und ”ein(e) oder mehr als ein(e)” vereinbar. Wird in den Ansprüchen der Begriff ”oder” verwendet, so soll er ”und/oder” bedeuten, wenn nicht ausdrücklich angegeben wird, dass er sich nur auf Alternativen bezieht oder die Alternativen sich gegenseitig ausschließen, wenngleich die Offenbarung eine Definition stützt, die sich nur auf Alternativen und ”und/oder” bezieht. Der Begriff ”etwa” wird in der gesamten Anmeldung verwendet, um zu zeigen, dass ein Wert die Fehlervariation, die dem Gerät, dem zur Bestimmung des Wertes angewandten Verfahren oder der Variation, die es zwischen den Studiensubjekten gibt, eigen ist, einschließt.It should be understood that particular configurations, aspects, examples, clauses, and embodiments described herein are shown for purposes of illustration and not as limitations of the invention. The main feature of the present invention may be employed in various embodiments without departing from the scope of the invention. One skilled in the art will recognize or be able to identify numerous equivalents of the specific rules described herein using no more than routine experimentation. Such equivalents are considered to fall within the scope of the present invention and are covered by the claims. All publications and patent applications mentioned in the specification are indicative of the level of skill of the person skilled in the art to which the present invention pertains. All publications and patent applications become part of the application by reference to the same extent as if the individual publications or patent applications were specifically and individually indicated to be incorporated by reference into the application. The use of the word "a" or "an" in connection with the term "comprising" in the claims and / or the description may mean "a number [s]" but is also meant to mean "a (e ) or more "," at least one "and" one or more than one ". When the term "or" is used in the claims, it is intended to mean "and / or" unless expressly stated that it refers to alternatives only or that the alternatives are mutually exclusive, although the disclosure supports a definition which does not warrant refers only to alternatives and "and / or". The term "about" is used throughout the application to show that a value includes the error variation inherent in the device, the method used to determine the value, or the variation that exists between the subjects of the study.

So, wie in der vorliegenden Beschreibung und in den Ansprüchen verwendet, sind die Worte ”umfassend” (und alle Formen von umfassend wie ”umfassen” und ”umfasst”), ”habend” (und alle Formen von habend wie ”haben” und ”hat”), ”einschließend” (und alle Formen von einschließend wie ”einschließt” und ”einschließen”) oder ”enthaltend” (und alle Formen von enthaltend wie ”enthält” und ”enthalten”) einschließend bzw. offen und schließen zusätzliche, nicht aufgeführte Elemente oder Verfahrensschritte nicht aus.As used in the present specification and claims, the words "comprising" (and including all forms of such as "comprising" and "comprising") are "having" (and having all forms of "having" and " has ")," including "(and including all forms of" including "and" "include" or "containing" (and all forms of containing such as "contains" and "contain") including, and does not exclude additional, unlisted elements or method steps.

Alle Teile der vorliegenden Offenbarung können in Kombination mit einem beliebigen anderen Teil der Offenbarung gelesen werden, wenn aus dem Zusammenhang nicht offensichtlich etwas anderes hervorgeht.All parts of the present disclosure may be read in combination with any other part of the disclosure, unless the context clearly indicates otherwise.

Verweise auf Sequenzen anhand der ”SEQ ID NO:” erfolgen hier (z. B. in den Ansprüchen) unter Bezug auf die Sequenzen in den Tabellen; in ähnlicher Weise Verweise auf Positionsnummern ”in SEQ ID NO:” (z. B. in den Ansprüchen) unter Bezug auf die hier in den Tabellen angeführten Sequenzen (z. B. wie in den Tabellen 6, 10 und 17). So bezieht sich zum Beispiel ”ein Asp entsprechend Position 204 von SEQ ID NO: 42 oder ein Leu entsprechend Position 206 von SEQ ID NO: 42” auf das Asp und das Leu, die sich in den Positionen 204 beziehungsweise 206 der hier in Tabelle 10 gezeigten SEQ ID NO: 42 befinden.References to sequences by "SEQ ID NO:" are made herein (eg, in the claims) with reference to the sequences in the tables; Similarly, references to item numbers "in SEQ ID NO:" (eg, in the claims) with reference to the sequences listed herein in the tables (e.g., as in Tables 6, 10, and 17). For example, "an Asp corresponding to position 204 of SEQ ID NO: 42 or a Leu corresponding to position 206 of SEQ ID NO: 42" refers to the Asp and the Leu located at positions 204 and 206, respectively, of Table 10 herein shown SEQ ID NO: 42 are located.

Alle der hier offenbarten und beanspruchten Zusammensetzungen und/oder Verfahren können in Anbetracht der vorliegenden Offenbarung ohne übermäßigen experimentellen Aufwand gemacht und durchgeführt werden. Die Zusammensetzungen und Verfahren der vorliegenden Erfindung wurden in Bezug auf bevorzugte Ausführungsformen beschrieben; es wird dem Fachmann jedoch klar sein, dass Variationen auf die Zusammensetzungen und/oder Verfahren und bei den Schritten oder in der Reihenfolge der Schritte des hier beschriebenen Verfahrens angewendet werden können, ohne vom Konzept, Geist und Schutzbereich der Erfindung abzuweichen. Alle solchen ähnlichen Austausche und Modifikationen, die dem Fachmann offensichtlich sind, werden als zum wie in den angefügten Ansprüchen definierten Geist, Schutzumfang und Konzept der Erfindung gehörig angesehen.All of the compositions and / or methods disclosed and claimed herein can be made and practiced without undue experimentation in light of the present disclosure. The compositions and methods of the present invention have been described in terms of preferred embodiments; however, it will be apparent to those skilled in the art that variations may be applied to the compositions and / or methods and to the steps or order of steps of the method described herein without departing from the spirit, and scope of the invention. All such similar substitutions and modifications as would be obvious to those skilled in the art are deemed to be in the spirit, scope, and concept of the invention as defined in the appended claims.

Die vorliegende Erfindung wird in den folgenden nicht einschränkenden Beispielen eingehender beschrieben.The present invention will be described in more detail in the following non-limiting examples.

Einige Ausführungsformen der hier beschriebenen Technologie lassen sich gemäß einem der folgenden nummerierten Absätze definieren:

• 1. Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: a. die Auswahl eines für die TOI-Polymorphvariante positiven Menschen, wobei das TOI in dem Menschen durch eine Nukleotidsequenz mit einem ein Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% codiert wird, und/oder wobei das TOI in dem Menschen durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird; und b. die Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden an den Menschen zum Targeting des TOI in dem Menschen zur Behandlung oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens.

• A method for treating or preventing a disease or condition in a human, wherein the disease or condition is mediated by a target of interest (TOI), wherein the TOI is present in humans as various polymorphic variants, wherein the method Includes: a. selecting a TOI polymorphic variant positive human, wherein the TOI is encoded in the human by a nucleotide sequence having one allele with a cumulative human allelic frequency of less than 50%, and / or wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence Allele is coded with a total cumulative typhus less than 50%; and b. administering an anti-TOI ligand to a human for targeting the TOI in the human to treat or prevent the disease or disease.

Bei einer ersten Alternative stellt Absatz 1 Folgendes bereit:
Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens bei einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorkommt, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden (z. B. eines Antikörpers oder Antikörperfragments), der spezifisch eine TOI-Variante bindet, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% (z. B. weniger als 40, 35, 30, 35, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2 oder 1%) umfasst, und/oder wobei die TOI-Variante durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% (z. B. weniger als 40, 35, 30, 35, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2 oder 1%) umfasst, an den Menschen umfasst; wobei der Mensch eine (z. B. die besagte) TOI-codierende Nukleotidsequenz umfasst, die den SNP umfasst;

• (i) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine VH-Domäne umfasst, die durch die Rekombination eines humanen VH-Segments, eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Segments erhalten wird, wobei das humane VH-Segment einen SNP umfasst, und wobei der Mensch ein (z. B. das besagte) VH-Segment umfasst, das den SNP umfasst; oder
• (ii) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine Vλ-Domäne umfasst, die durch die Rekombination eines humanen Vλ-Segments und eines humanen Jλ-Segments erhalten wird, wobei das humane Vλ-Segment einen SNP umfasst, und wobei der Mensch ein (z. B. das besagte) Vλ-Segment umfasst, das den SNP umfasst; oder
• (iii) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine Vκ-Domäne umfasst, die durch die Rekombination eines humanen Vκ-Segments und eines humanen Jκ-Segments erhalten wird, wobei das humane Vκ-Segment einen SNP umfasst, und wobei der Mensch ein (z. B. das besagte) Vκ-Segment umfasst, das den SNP umfasst; oder
• (iv) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine konstante Region der schweren Kette (z. B. eine konstante gamma-1-, -2-, -3- oder -4-Region) umfasst, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP umfasst, und wobei der Mensch eine (z. B. die besagte) konstante Region der schweren Kette (z. B. eine konstante gamma-1-, -2-, -3- beziehungsweise -4-Region) umfasst, die den SNP umfasst; oder
• (v) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine konstante Region der lambda-Kette umfasst, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP umfasst, und wobei der Mensch eine (z. B. die besagte) konstante Region der lambda-Kette umfasst, die den SNP umfasst; oder
• (vi) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine konstante Region der kappa-Kette umfasst, die durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die einen SNP umfasst, und wobei der Mensch eine (z. B. die besagte) konstante Region der kappa-Kette umfasst, die den SNP umfasst.

• (i) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a VH domain obtained by recombining a human VH segment, a human D gene segment, and a human JH segment, wherein the human VH Segment comprises an SNP, and wherein the human comprises (e.g., the said) VH segment comprising the SNP; or
• (ii) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a Vλ domain obtained by the recombination of a human Vλ segment and a human Jλ segment, where the human Vλ segment comprises an SNP, and wherein the human comprises an (eg, said) Vλ segment comprising the SNP; or
• (iii) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a Vκ domain obtained by the recombination of a human Vκ segment and a human Jκ segment, wherein the human Vκ segment comprises an SNP, and wherein the human comprises a Vκ segment (eg the said Vκ segment) comprising the SNP; or
• (iv) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a heavy chain constant region (e.g., a gamma 1, 2, 3, or 4 constant region), which is encoded by a nucleotide sequence comprising an SNP, and wherein the human is a heavy chain constant region (eg, said constant region) (e.g., a constant gamma-1, -2, -3, or 4 region) comprising the SNP; or
• (v) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a lambda chain constant region encoded by a nucleotide sequence comprising an SNP, and wherein the human is a (e.g., the said) constant region of the lambda chain comprising the SNP; or
• (vi) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a kappa chain constant region encoded by a nucleotide sequence comprising an SNP, and wherein the human is a (e.g., the said) constant region of the kappa chain, which includes the SNP.

Bei einer zweiten Alternative stellt Absatz 1 Folgendes bereit:
Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens bei einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorkommt, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden (z. B. eines Antikörpers oder Antikörperfragments), der spezifisch eine TOI-Variante bindet, die eine einzelne Aminosäurevariation (d. h. eine einzelne Aminosäure in einer Position, in der es bei den TOI-Varianten in Menschen einen Unterschied gibt) mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% (z. B. weniger als 40, 35, 30, 35, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2 oder 1%) umfasst und/oder wobei die Aminosäurevariante eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% (z. B. weniger als 40, 35, 30, 35, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2 oder 1%) hat, an den Menschen umfasst; wobei der Mensch TOI-Proteine exprimiert, die eine einzelne Aminosäurevariation umfassen; wobei

• (i) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine VH-Domäne umfasst, die die einzelne Aminosäurevariation umfasst, und wobei der Mensch VH-Domänen exprimiert, die die einzelne Aminosäurevariation umfassen; oder
• (ii) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine Vλ-Domäne umfasst, die die einzelne Aminosäurevariation umfasst, und wobei der Mensch Vλ-Domänen exprimiert, die die gleiche einzelne Aminosäurevariation umfassen; oder
• (iii) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine Vκ-Domäne umfasst, die die einzelne Aminosäurevariation umfasst, und wobei der Mensch Vκ-Domänen exprimiert, die die gleiche einzelne Aminosäurevariation umfassen; oder
• (iv) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine konstante Region einer schweren Kette (z. B. eine konstante gamma-1-, -2-, -3- oder -4-Region, z. B. wobei es sich bei der konstanten Region um eine Fc-, CH1-, CH2- oder CH3-Region handelt) umfasst, die eine einzelne Aminosäurevariation umfasst, und wobei der Mensch eine konstante Region einer schweren Kette (z. B. eine konstante gamma-1-, -2-, -3- oder -4-Region, z. B. wobei es sich bei der konstanten Region um eine Fc-, CH1-, CH2- beziehungsweise CH3-Region handelt) exprimiert, die die gleiche einzelne Aminosäurevariation umfasst; oder
• (v) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine konstante Region einer lambda-Kette umfasst, die eine einzelne Aminosäurevariation umfasst, und wobei der Mensch eine konstante Region einer lambda-Kette exprimiert, die die gleiche einzelne Aminosäurevariation umfasst; oder
• (vi) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) eine konstante Region einer kappa-Kette umfasst, die eine einzelne Aminosäurevariation umfasst, und wobei der Mensch eine konstante Region einer kappa-Kette exprimiert, die die gleiche einzelne Aminosäurevariation umfasst.

• (i) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a VH domain comprising the single amino acid variation, and wherein the human expresses VH domains comprising the single amino acid variation; or
• (ii) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a Vλ domain comprising the single amino acid variation, and wherein the human expresses Vλ domains comprising the same single amino acid variation; or
• (iii) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a Vκ domain comprising the single amino acid variation, and wherein the human expresses Vκ domains comprising the same single amino acid variation; or
• (iv) the ligand (e.g., the antibody or fragment) has a heavy chain constant region (e.g., a constant gamma 1, 2, 3, or 4 region, e.g. wherein the constant region is an Fc, CH1, CH2, or CH3 region) comprising a single amino acid variation, and wherein the human is a heavy chain constant region (e.g., a constant gamma -1, -2, -3 or -4 region, for example, where the constant region is an Fc, CH1, CH2 or CH3 region, respectively) expressing the same single Amino acid variation includes; or
• (v) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a lambda chain constant region comprising a single amino acid variation, and wherein the human expresses a lambda chain constant region comprising the same single amino acid variation ; or
• (vi) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises a kappa chain constant region comprising a single amino acid variation, and wherein the human expresses a kappa chain constant region comprising the same single amino acid variation ,

Der Begriff ”eine einzelne Aminosäurevariation umfasst” schließt die Möglichkeit ein, dass weitere Aminosäurevariationen in der TOI-Sequenz vorhanden sind.The term "comprising a single amino acid variation" includes the possibility that further amino acid variations are present in the TOI sequence.

Bei einem Beispiel sind die Häufigkeiten hier gemäß der 1000-Genomes-Datenbank, z. B. der Phase-I-Datenbank oder wie in Ensembl (verfügbar im World Wide Web unter ensembl.org ) gezeigt, z. B. am 1. Oktober 2013 oder am 1. Oktober 2014.In one example, the frequencies here are according to the 1000 Genomes database, e.g. For example, the Phase I database or as in Ensembl (available on the World Wide Web at ensembl.org ), z. On October 1, 2013 or on October 1, 2014.

Bei einem Beispiel codieren die SNPs jeweils für eine nicht-synonyme Aminosäurevariation, d. h. die SNP ist keine stumme Mutation.In one example, the SNPs each encode for a non-synonymous amino acid variation, i. H. the SNP is not a dumb mutation.

Gegebenenfalls umfasst das Verfahren die Auswahl des die Nukleotidsequenz umfassenden Menschen vor der Verabreichung.Optionally, the method comprises selecting the human nucleotide sequence before administration.

Bei einer dritten Alternative, bei der es sich bei dem TOI um humane PCSK9 handelt, stellt Absatz 1 Folgendes bereit:
Ein Verfahren zum Reduzieren der Cholesterinkonzentration oder zur Aufrechterhaltung einer zuvor reduzierten Cholesterinkonzentration bei einem dessen bedürftigen Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Antikörpers oder Antikörperfragments, der bzw. das spezifisch an eine Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (PCSK9) bindet, die eine C-terminale Domäne umfasst, die eine wie hier definierte Mutation (z. B. I474V oder E670G) in SEQ ID NO: 1 umfasst, an den Menschen umfasst, wobei der Antikörper eine VH-Domäne umfasst, die durch die Rekombination eines humanen VH-Segments, eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Segments erhalten wird, wobei das humane VH-Segment für ein Valin an der Aminosäure entsprechend Position 5 von SEQ ID NO: 40 codiert und wobei der Mensch (i) ein VH-Gensegment, das für das Grundgerüst 1 von SEQ ID NO: 40 codiert, und (ii) eine Nukleotidsequenz, die für eine Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (PCSK9) codiert, die eine C-terminale Domäne umfasst, die die Mutation in SEQ ID NO: 1 umfasst, umfasst. For a third alternative, where the TOI is human PCSK9, paragraph 1 provides:
A method of reducing cholesterol concentration or maintaining a previously reduced cholesterol concentration in a human in need thereof, which method comprises administering an antibody or antibody fragment that specifically binds to a proprugin convertase subtilisin / kexin type 9 (PCSK9) that has a C -terminal domain comprising a mutation as defined herein (eg, I474V or E670G) in SEQ ID NO: 1, to human, the antibody comprising a VH domain produced by the recombination of a human VH domain. Segment, a human D gene segment and a human JH segment, wherein the human VH segment encodes a valine at the amino acid corresponding to position 5 of SEQ ID NO: 40, and wherein human (i) is a VH gene segment, that encodes backbone 1 of SEQ ID NO: 40, and (ii) a nucleotide sequence encoding a proprugeine convertase subtilisin / kexin type 9 (PCSK9), which is ei comprises a C-terminal domain comprising the mutation in SEQ ID NO: 1.

Bei einer vierten Alternative, bei der es sich bei dem TOI um humane PCSK9 handelt, stellt Absatz 1 Folgendes bereit:
Ein Verfahren zum Reduzieren der Cholesterinkonzentration oder zur Aufrechterhaltung einer zuvor reduzierten Cholesterinkonzentration bei einem dessen bedürftigen Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Antikörpers oder Antikörperfragments, der bzw. das spezifisch an eine Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (PCSK9) bindet, die eine C-terminale Domäne umfasst, die eine wie hier definierte Mutation (z. B. I474V oder E670G) in SEQ ID NO: 1 umfasst, an den Menschen umfasst, wobei der Antikörper eine VL-Domäne umfasst, die durch die Rekombination eines humanen VL-Segments und eines humanen JL-Segments erhalten wird, wobei es sich bei dem humanen VL-Segment um ein wie hier offenbartes Vλ or Vκ handelt und wobei der Mensch (i) das VL-Gensegment und (ii) eine Nukleotidsequenz, die für eine Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (PCSK9) codiert, die eine C-terminale Domäne umfasst, die die Mutation in SEQ ID NO: 1 umfasst, umfasst.For a fourth alternative, where the TOI is human PCSK9, paragraph 1 provides:
A method for reducing cholesterol concentration or maintaining a previously reduced cholesterol concentration in a human in need thereof, which method comprises administering an antibody or antibody fragment that specifically binds to a proprteine convertase subtilisin / kexin type 9 (PCSK9) which has a C -terminal domain comprising a mutation as defined herein (eg, I474V or E670G) in SEQ ID NO: 1, to human, the antibody comprising a VL domain obtained by the recombination of a human VL Segment and a human JL segment, wherein the human VL segment is a Vλ or Vκ as disclosed herein and wherein the human is (i) the VL gene segment and (ii) a nucleotide sequence encoding a proprotein convertase Subtilisin / Kexin type 9 (PCSK9) encoded comprising a C-terminal domain comprising the mutation in SEQ ID NO: 1.

Bei einer fünften Alternative, bei der es sich bei dem TOI um humane PCSK9 handelt, stellt Absatz 1 Folgendes bereit:
Ein Verfahren zum Reduzieren der Cholesterinkonzentration oder zur Aufrechterhaltung einer zuvor reduzierten Cholesterinkonzentration bei einem dessen bedürftigen Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Antikörpers oder Antikörperfragments, der bzw. das spezifisch an eine Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (PCSK9) bindet, die eine C-terminale Domäne umfasst, die eine wie hier definierte Mutation (z. B. I474V oder E670G) in SEQ ID NO: 1 umfasst, an den Menschen umfasst, wobei der Antikörper eine C-Domäne, codiert durch ein wie hier offenbartes humanes CH-, Cλ- oder Cκ-Gensegment, umfasst, und wobei der Mensch (i) das C-Gensegment und (ii) eine Nukleotidsequenz, die für eine Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (PCSK9) codiert, die eine C-terminale Domäne umfasst, die die Mutation in SEQ ID NO: 1 umfasst, umfasst.For a fifth alternative, where the TOI is human PCSK9, paragraph 1 provides:
A method for reducing cholesterol concentration or maintaining a previously reduced cholesterol concentration in a human in need thereof, which method comprises administering an antibody or antibody fragment that specifically binds to a proprteine convertase subtilisin / kexin type 9 (PCSK9) which has a C a terminal domain comprising a mutation as defined herein (eg, I474V or E670G) in SEQ ID NO: 1, to human, the antibody comprising a C domain encoded by a human CH cell as disclosed herein , Cλ or Cκ gene segment, and wherein the human (i) encodes the C gene segment and (ii) a nucleotide sequence encoding a proprotein convertase subtilisin / kexin type 9 (PCSK9) comprising a C-terminal domain, which comprises the mutation in SEQ ID NO: 1.

Die folgenden Absätze betreffen beliebige der Alternativen zu Absatz 1.

• 2. Das Verfahren nach Absatz 1, wobei vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur spezifischen Bindung an die TOI-Variante fähig ist.
• 3. Das Verfahren nach Absatz 1 oder 2, umfassend die Feststellung, dass der Mensch positiv für die TOI-Polymorphvariante ist, wobei der Schritt der Feststellung gegebenenfalls die Feststellung umfasst, dass der Mensch positiv für eine Nukleotidvariante ist, die für die TOI-Variante codiert.
• 4. Das Verfahren nach Absatz 3, wobei der Schritt der Feststellung die Untersuchung einer von dem Menschen erhaltenen biologischen Probe auf einen für die TOI-Polymorphvariante codierenden Nukleotidpolymorphismus umfasst.
• 5. Das Verfahren nach Absatz 3 oder 4, wobei der Schritt der Feststellung die Untersuchung einer von dem Menschen erhaltenen biologischen Probe auf ein der TOI-Polymorphvariante entsprechendes Protein umfasst.
• 6. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei die Häufigkeit unter 15% beträgt.
• 7. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei die Häufigkeit unter 10% beträgt.
• 8. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Ligand dazu fähig ist, spezifisch zwei oder mehr verschiedene TOI-Varianten zu binden, die jeweils durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert werden.
• 9. Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: a. die Auswahl eines Menschen, der negativ für eine Nukleotidsequenzvariante mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% ist; oder eines Menschen, der negativ für eine TOI-Variante codiert durch eine Nukleotidsequenz mit dem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% ist; und b. die Verabreichung eines auf die TOI-Variante in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden an den Menschen und die Behandlung oder Prävention dieser Krankheit bzw. dieses Leidens, wobei es sich bei dem TOI in dem Menschen um eine Variante handelt, die von einer Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen humanen Allelhäufigkeit von mehr als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von mehr als 50% codiert wird.
• 10. Das Verfahren nach Absatz 9, umfassend die Feststellung, dass der Mensch positiv für die polymorphe TOI-Variante ist, wobei die Feststellung gegebenenfalls die Phänotypisierung des Menschen als positiv für die häufigste TOI-Variante oder die Genotypisierung für die Nukleotidsequenz davon umfasst.
• 11. Das Verfahren nach Absatz 10, wobei die Feststellung die Untersuchung der Nukleotidsequenz zur Feststellung des Vorhandenseins des Allels umfasst.
• 12. Das Verfahren nach Absatz 11, wobei die Untersuchung eine Nukleinsäureamplifikation umfasst.
• 13. Das Verfahren nach Absatz 11 oder 12, wobei die Untersuchung eine Hybridisierung, Sequenzierung oder Sequenzierung der nächsten Generation (Next Generation Sequencing) umfasst.
• 14. Das Verfahren nach einem der Absätze 11–13, ferner umfassend den Schritt der Gewinnung einer biologischen Probe von dem Menschen.
• 15. Das Verfahren nach einem der Absätze 9–14, wobei festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur spezifischen Bindung an die häufigste TOI-Variante fähig ist.
• 16. Das Verfahren nach einem der Absätze 9–15, wobei festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand im Wesentlichen unfähig zum Neutralisieren oder Inhibieren der TOI-Variante ist.
• 17. Das Verfahren nach einem der Absätze 9–16, wobei der Ligand zur spezifischen Bindung an die häufigste TOI-Variante fähig ist.
• 18. Das Verfahren nach einem der Absätze 9–17, wobei der Ligand zur spezifischen Bindung an zwei oder mehr verschiedene TOI-Varianten fähig ist, die jeweils durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von mehr als 50% fähig sind.
• 19. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei festgestellt wurde oder wird, dass die polymorphe TOI-Variante in wenigstens zwei verschiedenen human ethnischen Populationen vorhanden ist.
• 20. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei es sich bei der kumulativen Humanallelhäufigkeit um die Häufigkeit in einer Datenbank natürlich vorkommender Sequenzen von wenigstens 15 verschiedenen human ethnischen Populationen handelt, die wenigstens 1000 Sequenzen umfasst.
• 21. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei es sich bei dem Liganden um einen Antikörper, ein Antikörperfragment oder einen Affibody handelt.
• 22. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Ligand eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer TOI-Nukleotidsequenz mit einem Allel hybridisiert, das eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, oder ein RNA-Transkript davon; und/oder der Ligand eine Nukleotidsequenz umfasst, die wenigstens 10 aufeinanderfolgende Nukleotide einer Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder eine Antisense-Sequenz davon umfasst.
• 23. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei das Genom des Menschen ein Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% umfasst und sich das Allel in wenigstens 2 verschiedenen ethnischen Populationen findet.
• 24. Eine Zusammensetzung, umfassend einen Liganden, der dazu fähig ist, ein Target of Interest zu binden, das durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% codiert wird, wobei sich das Allel in wenigstens 2 verschiedenen ethnischen Populationen findet, und gegebenenfalls einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger und gegebenenfalls ein Etikett oder eine Gebrauchsanleitung, zur Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens bei einem Menschen; wobei das Etikett bzw. die Anleitung gegebenenfalls eine durch eine Zulassungsbehörde erteilte Arzneimittelzulassungsnummer umfasst.
• 25. Ein Kit zur Behandlung oder Prävention eines Leidens oder einer Krankheit, die durch ein wie in einem der vorhergehenden Absätze angeführtes Target of Interest vermittelt wird, wobei das Kit einen Liganden umfasst, der zur spezifischen Bindung an ein Target of Interest fähig ist, das durch eine Nukleotidsequenz codiert wird, die ein Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% umfasst, und wobei sich das Allel in wenigstens 2 verschiedenen ethnischen Populationen findet; und gegebenenfalls in Kombination mit einem Etikett oder einer Gebrauchsanleitung, zur Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens bei einem Menschen; wobei das Etikett bzw. die Anleitung gegebenenfalls eine durch eine Zulassungsbehörde erteilte Arzneimittelzulassungsnummer umfasst; wobei das Kit gegebenenfalls einen Injektionsstift oder ein IV-Behältnis umfasst, der bzw. das den Liganden umfasst.
• 26. Die Zusammensetzung nach Absatz 24 oder das Kit nach Absatz 25, wobei es sich bei der Zulassungsbehörde um die FDA oder die EMA handelt.
• 27. Ein Verfahren zur Herstellung einer Bindungsstelle für einen Antikörper gegen ein humanes TOI, wobei das Verfahren die Gewinnung einer Mehrzahl von Anti-TOI-Antikörperbindungsstellen, das Screening der Antikörperbindungsstellen auf Bindung an ein TOI umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, oder an ein Peptid davon umfassend eine Aminosäurevariation von der entsprechenden Sequenz codiert durch die TOI-codierende Nukleotidsequenz mit einem Allel mit der höchsten kumulativen Humanallelhäufigkeit und/oder der höchsten Gesamthumangenotyphäufigkeit, und das Isolieren einer in dem Screening-Schritt bindenden Antikörperbindungsstelle umfasst.
• 28. Ein Verfahren zur Herstellung einer Bindungsstelle für einen Antikörper gegen ein humanes TOI, wobei das Verfahren die Immunisierung eines nicht humanen Wirbeltieres mit einem TOI umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, oder an ein Peptid davon, das eine Aminosäurevariation von der entsprechenden durch die TOI-codierende Nukleiotidsequenz mit einem Allel mit der höchsten kumulativen Humanallelhäufigkeit und/oder der höchsten Gesamthumangenotyphäufigkeit codierten Sequenz umfasst, und das Isolieren eines Antikörpers, der an ein TOI bindet, das eine Aminosäuresequenz umfasst, die durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird, und gegebenenfalls die Herstellung eines TOI-bindenden Fragments oder Derivats des isolierten Antikörpers umfasst.
• 29. Das Verfahren nach Absatz 28, wobei es sich bei dem nicht humanen Wirbeltier um eine Maus oder eine Ratte handelt.
• 30. Das Verfahren nach Absatz 29 oder 30, welches den Schritt der Gewinnung einer Nukleinsäure umfasst, die für den Antikörper, das Fragment, das Derivat oder die Bindungsstelle codiert, und gegebenenfalls Insertieren der Nukleinsäure in einem Expressionsvektor.
• 31. Ein Kit zum TOI-Genotypisieren eines Menschen, wobei das Kit eine Nukleinsäure umfasst, die eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer TOI-Nukleotidsequenz hybridisiert, die so ausgewählt ist, dass sie eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, oder ein RNA-Transkript davon; und/oder die Nukleinsäure eine Nukleotidsequenz umfasst, die wenigstens 10 aufeinanderfolgende Nukleotide einer TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder eine Antisense-Sequenz davon umfasst.
• 32. Ein Kit zum TOI-Genotypisieren oder -Phänotypisieren eines Menschen, wobei das Kit einen Liganden umfasst, der dazu fähig ist, ein Target of Interest zu binden, das durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% codiert wird, oder einen Antikörper, ein Fragment oder Derivat, hergestellt nach dem Verfahren nach einem der Absätze 28 bis 30.
• 33. Das Kit nach Absatz 32, wobei sich das Allel in wenigstens 2 verschiedenen ethnischen Populationen findet.
• 34. Die Verwendung eines Anti-TOI-Liganden, der spezifisch an ein humanes TOI bindet, umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens bei einem Menschen, dessen Genom eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst.
• 35. Die Verwendung eines Anti-TOI-Liganden, der spezifisch an ein humanes TOI bindet, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, bei der Herstellung eines Medikaments zum Targeting des TOI in einem Menschen zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens.
• 36. Ein Verfahren zum Targeting eines Target of Interest (TOI) zur Behandlung und/oder Prävention einer TOI-vermittelten Krankheit oder eines TOI-vermittelten Leidens bei einem Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden an einen Menschen umfasst, der eine TOI-Nukleotidsequenz umfasst mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, wobei das Target ein TOI ist, das durch die Nukleotidsequenz codiert wird.
• 37. Das Verfahren nach Absatz 36, wobei das Verfahren das Targeting eines humanen TOI umfasst, das eine Aminosäuresequenz mit dem Ligand zur Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens in dem Menschen umfasst, wobei die Aminosäuresequenz durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird.
• 38. Ein Verfahren zum Target-of-Interest-(TOI)-Genotypisieren einer Nukleinsäureprobe eines Menschen, wobei das Verfahren die Untersuchung der Probe auf das Vorhandensein einer TOI-Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst.
• 39. Ein Verfahren zum Target-of-Interest-(TOI)-Typisieren einer Proteinprobe eines Menschen, wobei das Verfahren die Untersuchung der Probe auf das Vorhandensein einer TOI-Aminosäuresequenz codiert durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst.
• 40. Das Verfahren nach Absatz 38 oder 39, bei dem man eine Serum-, Blut-, Kot-, Haar-, Urin- oder Speichelprobe von einem Menschen gewinnt, wobei die Nukleinsäure- oder Proteinprobe zur Verwendung in dem Schritt zur Untersuchung der Sequenz gewonnen wird.
• 41. Das Verfahren nach einem der Absätze 38–40, bei dem man zum Durchführen des Identifizierungsschritts einen zum Targeting einer Nukleinsäuresequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% fähigen Liganden oder einen zur spezifischen Bindung des durch die Nukleinsäuresequenz codierten TOI fähigen Liganden verwendet.
• 42. Ein diagnostisches Kit, umfassend einen Liganden, der zur Bindung an ein humanes Target of Interest (TOI) fähig ist, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, und eine Anleitung zum Durchführen des Verfahrens nach einem der Absätze 38-41.
• 43. Das diagnostische Kit, wobei der Ligand ausgewählt ist aus einem Antikörper, einem Antikörperfragment, einem Antikörperteil, einem Affybody, einem Oligonukleotid, einem modifizierten Oligonukleotid, einem Antisense-Oligonukleotid, siRNA und MikroRNA.
• 44. Ein diagnostisches Kit, umfassend eine Nukleinsäuresonde, die eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer Target-of-Interest-(TOI)-Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder einem RNA-Transkript davon hybridisiert, und eine Anleitung zum Durchführen des Verfahrens nach Absatz 38 oder 39.
• 45. Das Verfahren, der Ligand, die Zusammensetzung, das Kit oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei das TOI durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von 1 bis 10% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von 1 bis etwa 15% oder von 1 bis 15% codiert wird.
• 46. Das Verfahren, der Ligand, die Zusammensetzung, das Kit oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei es sich bei dem TOI um ein humanes TOI ausgewählt aus Tabelle 5 handelt; gegebenenfalls zur Behandlung und/oder Prävention einer entsprechenden Krankheit oder eines entsprechenden Leidens, wie in Tabelle 5 ausgeführt.
• 47. Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens bei einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren die Verabreichung eines auf das TOI in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden an den Menschen, von dem festgestellt wurde, dass er positiv für die polymorphe TOI-Variante ist, zur Behandlung oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens umfasst, wobei das TOI in dem Menschen durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% codiert wird und/oder wobei das TOI in dem Menschen durch eine Nukleotidsequenz mit einem Allel mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird.
• 48. Das Verfahren nach Absatz 47, wobei der Anti-TOI-Ligand ausgewählt ist aus einem Antikörper, einem Antikörperteil, einem Antikörperfragment, einem Affibody, einem Antisense-Oligonukleotid, einer siRNA und einer MikroRNA.
• 49. Ein Anti-TOI-Ligand, der spezifisch an ein wie in Absatz 1 definiertes TOI bindet, zur Verwendung in dem Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze (z. B. zur Verwendung in dem Verfahren nach einem der Absätze 1 bis 8 und 19 bis 23).
• 50. Der Ligand nach Absatz 49, wobei es sich bei dem Liganden um eine Anti-TOI-Falle, einen Antikörper oder ein Antikörperfragment handelt.
• 51. Der Ligand nach Absatz 49 oder 50, wobei der Ligand für die subkutane oder intravenöse Verabreichung an einen Menschen bestimmt ist oder in einer injizierbaren Zubereitung enthalten ist.
• 52. Ein Injektionsgerät, umfassend den Liganden nach einem der Absätze 49 bis 51.

• 2. The method of paragraph 1, wherein prior to step (a), it has been or is determined that the ligand is capable of specific binding to the TOI variant.
• 3. The method of paragraph 1 or 2, comprising determining that the human is positive for the TOI polymorphic variant, wherein the step of determining optionally comprises determining that the human is positive for a variant nucleotide variant for the TOI variant coded.
• 4. The method of paragraph 3, wherein the step of determining comprises examining a human-derived biological sample for a nucleotide polymorphism encoding the TOI polymorphic variant.
• 5. The method of paragraph 3 or 4, wherein the determining step comprises examining a human-derived biological sample for a protein corresponding to the TOI polymorphic variant.
• 6. The method of any preceding paragraph, wherein the frequency is less than 15%.
• 7. The method of any preceding paragraph, wherein the frequency is less than 10%.
• 8. The method according to any one of the preceding paragraphs, wherein the ligand is capable of specifically binding two or more different TOI variants, each by a nucleotide sequence with an allele having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or with a Total typhus frequency of less than 50%.
• A method for treating or preventing a disease or condition in a human, wherein the disease or condition is mediated by a target of interest (TOI), wherein the TOI is present in humans as a distinct polymorphic variant, the method Includes: a. the selection of a human negative for a nucleotide sequence variant with an allele having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total total sexuality of less than 50%; or a human that is negative for a TOI variant encoded by a nucleotide sequence having the allele with a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or having a total total sexuality of less than 50%; and b. the administration to the human of an anti-TOI ligand targeting the TOI variant in human and the treatment or prevention of that disease or affliction, wherein the TOI in the human is a variant that is of a nucleotide sequence is encoded with an allele having a cumulative human allele frequency of greater than 50% and / or a total typhoid genotype greater than 50%.
• 10. The method of paragraph 9, comprising determining that the human is positive for the polymorphic TOI variant, wherein the detection optionally comprises human phenotyping as positive for the most common TOI variant or genotyping for the nucleotide sequence thereof.
• 11. The method of paragraph 10, wherein the determination comprises examining the nucleotide sequence to determine the presence of the allele.
• 12. The method of paragraph 11, wherein the assay comprises a nucleic acid amplification.
• 13. The method of paragraph 11 or 12, wherein the assay comprises next generation sequencing, sequencing or sequencing.
• 14. The method of any one of paragraphs 11-13, further comprising the step of obtaining a biological sample from the human.
• 15. The method of any one of paragraphs 9-14, wherein it has been determined or is that the ligand is capable of specific binding to the most common TOI variant.
• 16. The method of any of paragraphs 9-15, wherein it has been determined or is that the ligand is substantially incapable of neutralizing or inhibiting the TOI variant.
• 17. The method of any one of paragraphs 9-16, wherein the ligand is capable of specific binding to the most abundant TOI variant.
• 18. The method of any one of paragraphs 9-17, wherein the ligand is capable of specific binding to two or more different TOI variants, each capable of a nucleotide sequence with an allele having a cumulative human allelic frequency greater than 50%.
• 19. The method of any one of the preceding paragraphs, wherein it has been found or believed that the polymorphic TOI variant is present in at least two different human ethnic populations.
• 20. The method of any one of the preceding paragraphs, wherein the cumulative human all-time frequency is the frequency in a database of naturally occurring sequences from at least 15 different human ethnic populations comprising at least 1000 sequences.
• 21. The method of any preceding paragraph, wherein the ligand is an antibody, an antibody fragment or an affibody.
• 22. The method of any one of the preceding paragraphs, wherein the ligand comprises a nucleotide sequence that specifically hybridizes to a TOI nucleotide sequence with an allele that has a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or a total syntactic frequency of less than 50%, or an RNA transcript thereof; and / or the ligand comprises a nucleotide sequence comprising at least 10 consecutive nucleotides of a nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or having a total total sexuality less than 50%, or an antisense sequence thereof.
• 23. The method of any one of the preceding paragraphs, wherein the human genome comprises an allele having a cumulative human allele frequency of less than 50% and the allele is found in at least 2 different ethnic populations.
• 24. A composition comprising a ligand capable of binding a target of interest encoded by a nucleotide sequence having an allele with a cumulative human allele frequency of less than 50%, wherein the allele is in at least 2 distinct ethnic populations and optionally a pharmaceutically acceptable carrier and optionally a label or instructions for use, for the treatment and / or prevention of Illness or suffering in a human; where appropriate, the label or instruction includes a drug approval number issued by an approval authority.
• A kit for the treatment or prevention of a disease or disease mediated by a target of interest as recited in any of the preceding paragraphs, the kit comprising a ligand capable of specific binding to a target of interest is encoded by a nucleotide sequence comprising an allele with a cumulative human allele frequency of less than 50%, and wherein the allele is found in at least 2 different ethnic populations; and optionally in combination with a label or instructions for use, for the treatment and / or prevention of the disease or condition in a human; where appropriate, the label or instruction includes a drug approval number issued by an approval authority; wherein the kit optionally comprises an injection pen or an IV container comprising the ligand.
• 26. The composition of paragraph 24 or the kit of paragraph 25, where the regulatory authority is the FDA or the EMA.
• 27. A method of producing a binding site for an antibody to a human TOI, the method comprising obtaining a plurality of anti-TOI antibody binding sites, screening the antibody binding sites for binding to a TOI comprising an amino acid sequence encoded by a nucleotide sequence having an allele a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total synaptic frequency of less than 50%; or a peptide thereof comprising an amino acid variation of the corresponding sequence encoded by the TOI coding nucleotide sequence having one allele with the highest cumulative human allele frequency and / or highest total typhus frequency, and isolating an antibody binding site binding in the screening step.
• 28. A method of producing a binding site for an antibody to a human TOI, the method comprising immunizing a non-human vertebrate with a TOI comprising an amino acid sequence encoded by a nucleotide sequence having an allele with a cumulative human all-time less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, or a peptide thereof comprising an amino acid variation from the corresponding sequence encoded by the TOI coding nucleotide sequence with an allele having the highest cumulative human allele frequency and / or highest total typhus frequency, and isolating an antibody, which binds to a TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence with an allele having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total synaptic frequency of less than 50%, and optionally, the production a TOI-binding fragment or derivative of the isolated antibody.
• 29. The method of paragraph 28, wherein the non-human vertebrate is a mouse or a rat.
• 30. The method of paragraph 29 or 30, comprising the step of recovering a nucleic acid encoding the antibody, fragment, derivative or binding site, and optionally inserting the nucleic acid into an expression vector.
• 31. A kit for TOI genotyping of a human, the kit comprising a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that specifically hybridizes to a TOI nucleotide sequence selected to have a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or has a total typhoid frequency of less than 50%, or an RNA transcript thereof; and / or the nucleic acid comprises a nucleotide sequence comprising at least 10 consecutive nucleotides of a TOI nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or a total total sexuality of less than 50%, or an antisense sequence thereof.
• 32. A kit for TOI genotyping or phenotyping of a human, the kit comprising a ligand capable of binding a target of interest encoding a nucleotide sequence with an allele having a cumulative human all-time frequency of less than 50% or an antibody, fragment or derivative prepared by the method of any one of paragraphs 28 to 30.
• 33. The kit of paragraph 32, wherein the allele is found in at least two different ethnic populations.
• 34. The use of an anti-TOI ligand that specifically binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, wherein A medicament for the treatment and / or prevention of TOI-mediated disease or TOI-mediated disease in a human whose genome has a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total cumulative typhus of less than 50 % includes.
• 35. The use of an anti-TOI ligand which specifically binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total total sexuality less than 50% in the manufacture of a medicament for targeting the TOI in a human for the treatment and / or prevention of a TOI mediated disease or a TOI mediated condition.
• A method of targeting a target of interest (TOI) for the treatment and / or prevention of TOI-mediated disease or TOI-mediated disease in a human, the process comprising administering to a human an anti-TOI ligand, which comprises a TOI nucleotide sequence with an allele having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or one Total typhoid frequency less than 50%, where the target is a TOI encoded by the nucleotide sequence.
• 37. The method of paragraph 36, wherein the method comprises targeting a human TOI comprising an amino acid sequence with the ligand for treating and / or preventing the disease in humans, wherein the amino acid sequence is defined by a nucleotide sequence having an allele is encoded with a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total synaptic frequency of less than 50%.
• 38. A method for target of interest (TOI) genotyping of a nucleic acid sample of a human, the method comprising examining the sample for the presence of a TOI nucleotide sequence with an allele having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total cumulative typhus of less than 50%.
• 39. A method for target of interest (TOI) typing of a human protein sample, the method comprising examining the sample for the presence of a TOI amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having an allele with a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or total totals typhus less than 50%.
• 40. The method of paragraph 38 or 39, comprising obtaining a serum, blood, faeces, hair, urine or saliva sample from a human, wherein the nucleic acid or protein sample is for use in the step of assaying the sequence is won.
• 41. The method of any one of paragraphs 38-40, comprising carrying out the step of identifying a ligand capable of targeting a nucleic acid sequence having less than 50% cumulative human allele frequency and / or less than 50% total cytotoxicity, or one used for specific binding of the encoded by the nucleic acid sequence TOI capable ligands.
• 42. A diagnostic kit comprising a ligand capable of binding to a human target of interest (TOI) comprising one having a TOI nucleotide sequence with an allele having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total typhoid potential of less than 50% encoded amino acid sequence, and instructions for performing the method of any of paragraphs 38-41.
• 43. The diagnostic kit, wherein the ligand is selected from an antibody, an antibody fragment, an antibody part, an antibody body, an oligonucleotide, a modified oligonucleotide, an antisense oligonucleotide, siRNA and microRNA.
• 44. A diagnostic kit comprising a nucleic acid probe comprising a nucleotide sequence specific to a target of interest (TOI) nucleotide sequence having an allele with a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than Hybridized 50% or an RNA transcript thereof, and a guide for performing the procedure according to paragraph 38 or 39.
• 45. The method, ligand, composition, kit or use of any one of the preceding paragraphs, wherein the TOI is represented by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of 1 to 10% and / or a total typhoid frequency of 1 to about 15% or of 1 to 15% is coded.
• 46. The method, ligand, composition, kit or use of any one of the preceding paragraphs, wherein the TOI is a human TOI selected from Table 5; optionally for the treatment and / or prevention of a corresponding disease or condition, as set out in Table 5.
• 47. A method for treating or preventing a disease or condition in a human, the disease or condition being mediated by a target of interest (TOI), wherein the TOI is present in humans as different polymorphic variants, the method the administration to the human of a TOI-targeting anti-TOI ligand which has been found to be positive for the polymorphic TOI variant for the treatment or prevention of the disease or disease, wherein the TOI in which human is encoded by a nucleotide sequence having an allele with a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence having an allele with a total typhoid frequency less than 50%.
• 48. The method of paragraph 47, wherein the anti-TOI ligand is selected from an antibody, an antibody portion, an antibody fragment, an affibody, an antisense oligonucleotide, an siRNA, and a microRNA.
• 49. An anti-TOI ligand that binds specifically to a TOI as defined in paragraph 1 for use in the method of any of the preceding paragraphs (eg, for use in the method of any one of paragraphs 1 to 8 and 19) to 23).
• 50. The ligand of paragraph 49, wherein the ligand is an anti-TOI trap, antibody or antibody fragment.
• 51. The ligand of paragraph 49 or 50, wherein the ligand is for subcutaneous or intravenous administration to a human or contained in an injectable preparation.
• 52. An injection device comprising the ligand of any one of paragraphs 49 to 51.

Zusätzliche individuelle Anpassung von Liganden auf den Genotyp und/oder Phänotyp des menschlichen PatientenAdditional individual adaptation of ligands to the genotype and / or phenotype of the human patient

Wie hier beschrieben zieht die vorliegende Erfindung Liganden (z. B. Antikörper und Fragmente) in Betracht, deren Bindungsstellenspezifitäten einer oder mehreren humanen TOI-(z. B. PCSK9 oder IL6R)-Varianten angepasst wurden. Zusätzlich oder alternativ dazu (und wie weiter in den nicht einschränkenden Beispielen unten erläutert) stellt ein fakultativer Aspekt der Erfindung die Anpassung anderer Merkmale des Liganden an den Genotyp oder Phänotyp des Patienten bereit. In dieser Hinsicht schließt die Erfindung die Fähigkeit zum Anpassen der Aminosäuresequenzvariation in einem menschlichen Patienten an eine oder mehrere Ligandensequenzen oder Domänen außerhalb der Bindungsstellen ein. Umfasst oder besteht der Ligand zum Beispiel aus einem humanes TOI bindenden Antikörper oder einer Anti-Human-TOI-Rezeptor-Fc-Fusion, so stellt dieser Aspekt der Erfindung eine besser zugeschnittene Anpassung einer oder mehrerer Domänen (z. B. Fc) konstanter Regionen an den Genotyp oder Phänotyp des Patienten bereit. Zusätzlich oder alternativ dazu wird in Betracht gezogen, die Sequenzvariation in der Bindungsstelle in ähnlicher Weise an den Genotyp oder Phänotyp des Patienten anzupassen. Der Erfinder der vorliegenden Anmeldung hat dies bewerkstelligt, indem er die Fälle von SNP in Sequenzen, die für einen oder mehrere Teile des Liganden codieren, z. B. SNP, die in einem, mehreren oder allen der Gensegmente vorkommen, von denen sich die variable(n) Domäne(n) und/oder die variable(n) Domäne(n) konstanter Regionen ableitet/ableiten, in Betracht gezogen hat. Dem Erfinder ist klar, dass es wünschenswert wäre, den Liganden an eine oder mehrere entsprechende SNP-Varianten anzupassen, die sich in dem therapeutisch und/oder prophylaktisch zu behandelnden Patienten finden. Die Anpassung könnte die spezielle Entwicklung des Liganden für einen Patienten mit bekanntem Phänotyp und/oder Genotyp umfassen, oder die Anpassung könnte die Auswahl eines Liganden durch die Feststellung, dass es eine Entsprechung zwischen der Variation im Phänotyp oder Genotyp des Patienten zu der Variation in der Ligandenaminosäure und/oder entsprechenden Nukleotiden gibt, umfassen.As described herein, the present invention contemplates ligands (eg, antibodies and fragments) whose binding site specificities have been adapted to one or more human TOI (eg, PCSK9 or IL6R) variants. Additionally or alternatively (and as further explained in the non-limiting examples below), an optional aspect of the invention provides for the adaptation of other features of the ligand to the genotype or phenotype of the patient. In this regard, the invention includes the ability to tailor amino acid sequence variation in a human patient to one or more ligand sequences or domains outside the binding sites. For example, where the ligand comprises or consists of a human TOI binding antibody or an anti-human TOI receptor Fc fusion, this aspect of the invention provides for a more tailored adaptation of one or more domains (eg, Fc) of constant regions ready for the genotype or phenotype of the patient. Additionally or alternatively, it is contemplated that the sequence variation in the binding site will be similarly adapted to the genotype or phenotype of the patient. The inventor of the present application has accomplished this by analyzing the cases of SNP in sequences encoding one or more portions of the ligand, e.g. SNPs occurring in one, several or all of the gene segments from which the variable domain (s) and / or the variable domain (s) of constant regions are derived / derived have been considered. It is clear to the inventor that it would be desirable to adapt the ligand to one or more corresponding SNP variants found in the therapeutically and / or prophylactically treated patient. The adaptation could include the specific development of the ligand for a patient of known phenotype and / or genotype, or the adaptation could be the selection of a ligand by establishing that there is a correspondence between the variation in phenotype or genotype of the patient to the variation in the Ligand amino acid and / or corresponding nucleotides.

Am wichtigsten für den Erfinder war der Wunsch, die Kompatibilität des Liganden mit dem Körper des Patienten und insbesondere den möglichen Reaktionen des Immunsystems des Patienten auf die verabreichten Liganden zu verbessern. So wurde zum Beispiel beobachtet, dass bei menschlichen Patienten, denen humane oder humanisierte Antikörperarzneimittel verabreicht werden, eine Immunreaktion gegen den zugeführten Antikörper (eine sogenannte HAHA-Reaktion) ausgelöst werden kann, die dazu führt, dass der Patient als Folge der Identifizierung des Arzneimittels durch das Immunsystem des Patienten als fremd Antikörper gegen das Arzneimittel bildet. So geht aus Studien beispielsweise hervor, dass bei einigen Patienten, die HUMIRA^TM (Adalimumab), das gegenwärtig am besten verkaufte Antikörpermedikament, verabreicht bekommen, eine HAHA-Immunreaktion gegen das Medikament ausgelöst wird und dass dies eine abträgliche Wirkung auf die Behandlung haben kann. Es sei auf JAMA. 2011;305(14):1460–1468. doi:10.1001/jama.2011.406: ”Development of Antidrug Antibodies Against Adalimumab and Association With Disease Activity and Treatment Failure During Long-term Follow-up”, GM Bartelds et al. verwiesen. Die Autoren haben die Schlussfolgerung gezogen, dass die Ergebnisse dieser Studie zeigten, dass die Entwicklung von Antimedikament-Antikörpern mit einem negativen Ergebnis der Adalimumab-Behandlung in humanen RA-Patienten assoziiert war. Es wurde berichtet, dass nicht nur die Patienten mit Anti-Adalimumab-Antikörpern die Behandlung öfter und früher abbrachen als Patienten ohne Anti-Adalimumab-Antikörper, sondern auch eine höhere Krankheitsaktivität während der Behandlung hatten und nur selten in Remission kamen. Darüber hinaus zeigten die Daten wie berichtet, dass zwei Drittel der für Anti-Adalimumab-Antikörper positiven Patienten diese Antikörper innerhalb der ersten 28 Behandlungswochen entwickelten und dass das Vorhandensein von Anti-Adalimumab-Antikörpern die Adalimumab-Serumkonzentrationen wesentlich beeinflusste.Most important to the inventor was the desire to improve the compatibility of the ligand with the patient's body and, in particular, the possible responses of the patient's immune system to the administered ligands. For example, it has been observed that in human patients given human or humanized antibody drugs, an immune response to the delivered antibody (a so-called HAHA reaction) can be elicited that results in the patient following the identification of the drug the immune system of the patient forms a foreign antibody to the drug. For example, studies indicate that some patients receiving HUMIRA ^TM (adalimumab), currently the best-selling antibody drug, have a HAHA immune response to the drug and may have a detrimental effect on the treatment. It's up JAMA. 2011; 305 (14): 1460 to 1468. doi: 10.1001 / jama.2011.406: "Development of Antidrug Antibodies Against Adalimumab and Association With Disease Activity and Treatment Failure During Long-term Follow-up", GM Bartelds et al. directed. The authors concluded that the results of this study showed that the development of anti-drug antibodies was associated with a negative result of adalimumab treatment in human RA patients. It was reported that not only the patients with anti-adalimumab antibodies discontinued treatment more often and earlier than patients without anti-adalimumab antibodies, but also had higher disease activity during treatment and rarely remissioned. In addition, data reported that two-thirds of anti-adalimumab antibody-positive patients developed these antibodies within the first 28 weeks of treatment and that the presence of anti-adalimumab antibodies significantly affected serum adalimumab concentrations.

Dieses HAHA-Thema stellt somit eine beträchtliche Sorge dar, und dies wurde von den Zulassungsbehörden berücksichtigt. So hat beispielsweise die European Medicines Agency (EMA) eine ”Guideline on immunogenicity assessment of monoclonal antibodies intended for in vivo clinical use” (einsehbar im World Wide Web unter ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2012/06/WC500128688.pdf; EMA/CHMP/BMWP/86289/2010, Addendum zu EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006) herausgegeben, die am 1. Dezember 2012 in Kraft trat. Als solches ist es für Forscher gute Praxis, das Risiko von Anti-Antikörperarzneimittel-Ereignissen und -Effekten zu identifizieren und abzuschätzen.This HAHA issue is therefore a major concern, and this has been taken into account by the regulatory authorities. For example, the European Medicines Agency (EMA) has one "Guideline on immunogenicity assessment of monoclonal antibodies intended for in vivo clinical use" (available on the World Wide Web at: ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2012/06/WC500128688.pdf; EMA / CHMP / BMWP / 86289/2010, Addendum to EMEA / CHMP / BMWP / 14327/2006) which entered into force on 1 December 2012. As such, it is good practice for researchers to identify and assess the risk of anti-antibody drug events and effects.

Der vorliegende Aspekt der Erfindung hilft durch bessere individuelle Anpassung des Liganden selbst (sowie dessen Spezifität) auf den Patienten bei der Entwicklung und Verabreichung von Anti-Human-TOI-Medikamenten zur Behandlung und/oder Prävention von mit dem humanen TOI in Zusammenhang stehenden Krankheiten und Leiden diese Bedenken zu berücksichtigen. The present aspect of the invention helps by better individual adaptation of the ligand itself (and its specificity) to the patient in the development and administration of anti-human TOI drugs for the treatment and / or prevention of human TOI-related diseases and Suffer these concerns.

Der Erfinder hat außerdem die Wünschenswertigkeit des individuellen Anpassens der Variation in der konstanten Region des Liganden (z. B. auf einen Antikörper oder Fc-haltigen Liganden) in Betracht gezogen, darauf achtend, dass dann die dem Patienten verabreichte konstante Region auf die verschiedenen Komponenten wie die Fc-Rezeptoren des Patienten, die mit der konstanten Region im Patienten in Wechselwirkung treten würden, eingestellt werden würde. Gute Fc/Fc-Rezeptor-Wechselwirkungen können für das Recycling des Arzneimittels (über den FcRn) wichtig sein, um brauchbare Halbwertszeiten in vivo oder für einen Einsatz zum Abtöten von Zellen, z. B. bei Krebsindikationen, bereitzustellen. Auf diese Weise ist es daher möglich, die Effektorfunktion der konstanten Region (z. B. Fc) besser auf den Patienten einzustellen, um die Wirksamkeit zu verbessern. Wirksamere Arzneimittel sind zum Beispiel für eine bessere Behandlung des Patienten wünschenswert und können die Möglichkeit bieten, die Dosierung und/oder die Verabreichungshäufigkeit zu senken.The inventor has also considered the desirability of individually adjusting the variation in the constant region of the ligand (e.g., on an antibody or Fc-containing ligand), paying attention that then the constant region administered to the patient on the various components how the patient's Fc receptors, which would interact with the constant region in the patient, would be adjusted. Good Fc / Fc receptor interactions may be important for drug (via FcRn) recycling to provide useful in vivo lifetimes or for use in killing cells, e.g. In cancer indications. In this way, it is possible to better adjust the effector function of the constant region (eg, Fc) to the patient to improve efficacy. More effective drugs, for example, are desirable for better patient care and may provide the opportunity to reduce the dosage and / or the frequency of administration.

Die Erfindung stellt somit in Beispielen dieses Aspekts Folgendes bereit (als Klauseln aufgeführt):

• 1. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung, wobei (i) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) Folgendes umfasst (c) eine variable Domäne, die von einer Nukleotidsequenz der humanen V-Region codiert wird, wobei sich die V-Nukleotidsequenz von einer Rekombination von humanen VH-, D- und JH-Gensegmenten oder humanen VL- und JL-Gensegmenten ableitet; oder (d) eine Domäne einer konstanten Region, die durch ein C-Region-Gensegment codiert wird; wobei ein erstes Gensegment der Gensegmente von (a) oder des C-Region-Gensegments von (b) einen ersten Einzelnukleotidpolymorphismus (Single Nucleotide Polymorphism, SNP) umfasst, der für einen ersten Aminosäurepolymorphismus codiert; und (ii) das Genom des Menschen den ersten SNP umfasst oder wobei der Mensch (a') eine variable Antikörperdomäne, die einen ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, oder (b') eine konstante Antikörperdomäne, die einen ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, exprimiert.
• 2. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 1, wobei Blut das Menschen im Wesentlichen keine Antikörper umfasst, die spezifisch an die Domäne binden, die den ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, wie in einem in-vitro-Bindungsassay bestimmt.
• 3. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 2, wobei man sich zur Durchführung des Assays der SPR bedient. Bei einer Alternative kommt ELISA zur Anwendung.
• 4. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 1 bis 3, wobei das Genom des Menschen das erste Gensegment (im Fall von (a)) oder das C-Region-Gensegment (im Fall von (b)) umfasst.
• 5. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 1 bis 4, wobei das erste Segment oder ein zweites Segment der Segmente von (a), oder das C-Region-Gensegment von (b) einen zweiten SNP umfasst, der für einen zweiten Aminosäurepolymorphismus codiert; und wobei das Genom des Menschen den zweiten SNP umfasst oder wobei der Mensch (a”) eine variable Domäne eines Antikörpers exprimiert, die den zweiten Aminosäurepolymorphismus umfasst, oder (b”) eine Domäne einer konstanten Region eines Antikörpers exprimiert, die den ersten und den zweiten Aminosäurepolymorphismus umfasst.
• 6. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 5, wobei der Mensch eine variable Domäne eines Antikörpers exprimiert, die den ersten und den zweiten Aminosäurepolymorphismus umfasst.
• 7. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 5 oder 6, wobei der erste und der zweite SNP des Genoms im gleichen Antikörpergensegment enthalten sind. Beispielsweise sind der erste und der zweite SNP des Genoms in einem IGHG1*01-Gensegment enthalten und das erste Segment von (a) ist ein IGHG1*01-Gensegment. Beispielsweise sind der erste und der zweite SNP des Genoms in einem IGHG2*02-Gensegment enthalten und das erste Segment von (a) ist ein IGHG2*01-Gensegment.
• 8. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 1 bis 7, wobei jede SNP eine SNP im Gensegment einer variablen Region ist.
• 9. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 1 bis 7, wobei es sich bei den SNP jeweils um ein SNP eines Gensegments einer konstanten Region handelt, wobei z. B. die SNP jeweils ein SNP eines Gensegments einer konstanten gamma-1-Region oder ein SNP eines Gensegments einer konstanten gamma-2-Region oder ein SNP eines Gensegments einer konstanten gamma-3-Region oder ein SNP eines Gensegments einer konstanten gamma-4-Region sind.
• 10. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 9, wobei der erste SNP ein SNP eines CH1-, CH2-, CH3- oder CH4-Gensegments und/oder der zweite SNP ein SNP eines CH1-, CH2-, CH3- oder CH4-Gensegments ist.
• 11. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 1 bis 8, wobei jede SNP eine SNP einer variablen Domäne, z. B. ein VH-Domänen-SNP oder ein Vκ-Domänen-SNP oder ein Vλ-SNP ist.
• 12. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 1 bis 11, wobei die Domäne der konstanten Region von (b) aus einer Antikörper-Fc-Region besteht.
• 13. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 1 bis 12, wobei festgestellt wurde, dass der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) spezifisch an eine oder mehrere wie hier offenbarte humane TOI-Varianten bindet, zum Beispiel mit einem KD von 1 nM oder weniger (z. B. 100 oder 10 pM oder weniger), wie durch SPR bestimmt.
• 14. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 13), wobei der Ligand einen Antikörper oder ein Fragment umfasst oder daraus besteht, der bzw. das die variable Domäne eines humanen Antikörpers umfasst, erhalten durch die Rekombination eines humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments, wenn es sich bei den variablen Domänen um VH-Domänen handelt); und wobei das Genom des Menschen das humane V-Gensegment umfasst und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Antikörperdomänen umfassen, die sich von der Rekombination des humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments) ableiten. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem V-Gensegment um eines der in WO2013041844 , einer 1000 Genomes-Datenbank und/oder www.imgt.org, deren Offenbarung (einschließlich der Offenbarung, die die Sequenz betrifft) ausdrücklich durch Verweis zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung Bestandteil der vorliegenden Erfindung wird, offenbarten V-Gensegmente.
• 15. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 14), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane konstante Domäne einer schweren Kette codiert durch eine erste Nukleotidsequenz einer konstanten Region umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren Kette umfasst, die identisch ist zu der ersten Nukleotidsequenz einer konstanten Region, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane konstante Domäne umfassen.
• 16. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 15), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane CH1-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH1-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH1-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH1-Domäne umfassen.
• 17. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 16), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane CH2-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH2-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH2-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH2-Domäne umfassen.
• 18. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 17), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane CH3-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH3-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH3-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH3-Domäne umfassen.
• 19. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 18), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane CH4-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH4-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH4-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH4-Domäne umfassen.
• 20. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 19), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine Fc-Region einer humanen schweren gamma-Kette codiert durch eine Fc-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der Fc-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-Fc-Region umfassen.
• 21. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 16 bis 20, wobei es sich bei der humanen schweren gamma-Kette um eine humane schwere gamma-1-Kette handelt.
• 22. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 16 bis 20, wobei es sich bei der humanen schweren gamma-Kette um eine humane schwere gamma-2-Kette handelt.
• 23. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 16 bis 20, wobei der Ligand eine konstante IGHG1*01-Region der humanen schweren gamma-1-Kette umfasst.
• 24. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 16 bis 20, wobei der Ligand eine konstante IGHG2*01-Region der humanen schweren gamma-1-Kette umfasst.
• 25. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 15 bis 24, wobei der Mensch als positiv für die Nukleotidsequenz der konstanten Region der schweren Kette genotypisiert wurde oder wird.
• 26. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 23, wobei der Mensch als positiv für die humane IGHG1*01-Nukleotidsequenz genotypisiert wurde oder wird.
• 27. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 24, wobei der Mensch als positiv für die humane IGHG2*01-Nukleotidsequenz genotypisiert wurde oder wird.
• 28. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 16 bis 24, wobei der Mensch als positiv für die konstante Domäne, CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc der schweren gamma-Kette phänotypisiert wurde oder wird.
• 29. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 28, (i) falls abhängig von Klausel 23, wobei der Mensch als positiv für eine konstante IGHG1*01-Domäne einer humanen schweren gamma-Kette, CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc phänotypisiert wurde oder wird oder (ii) falls abhängig von Klausel 24, wobei der Mensch als positiv für eine konstante IGHG2*01-Domäne einer humanen schweren gamma-Kette, CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc phänotypisiert wurde oder wird.
• 30. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 16 bis 24 und 26 bis 29, bei dem man den Menschen als positiv für die Nukleotidsequenz der konstanten Region der schweren gamma-Kette, z. B. positiv für die CH1-, CH2-, CH3-, CH4- oder Fc-Nukleotidsequenz der konstanten Domäne der schweren gamma-Kette; positiv für die CH1-, CH2-, CH3-, CH4- oder Fc-Nukleotidsequenz der konstanten IGHG1*01-Region der humanen schweren gamma-Kette; oder positiv für die CH1-, CH2-, CH3-, CH4- oder Fc-Nukleotidsequenz der konstanten IGHG2*01-Region der humanen schweren gamma-Kette genotypisiert.
• 31. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 16 bis 24 und 26 bis 30, bei dem man den Menschen als positiv für die konstante Region der schweren gamma-Kette, z. B. positiv für CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc der konstanten Domäne der schweren gamma-Kette; positiv für CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc der konstanten IGHG1*01-Domäne der humanen schweren gamma-Kette; oder positiv für CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc der konstanten IGHG2*01-Domäne der humanen schweren gamma-Kette phänotypisiert.

• 1. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention, wherein (i) the ligand (eg the antibody or the fragment) comprises (c) a variable domain derived from a nucleotide sequence of the human V region is encoded, wherein the V nucleotide sequence is derived from a recombination of human VH, D and JH gene segments or human VL and JL gene segments; or (d) a domain of a constant region encoded by a C region gene segment; wherein a first gene segment of the gene segments of (a) or the C region gene segment of (b) comprises a first single nucleotide polymorphism (SNP) encoding a first amino acid polymorphism; and (ii) the human genome comprises the first SNP, or wherein human (a ') expresses a variable antibody domain comprising a first amino acid polymorphism, or (b') an antibody constant domain comprising a first amino acid polymorphism.
• 2. The ligand, method, application, kit or composition according to clause 1, wherein blood comprises human substantially no antibodies that bind specifically to the domain comprising the first amino acid polymorphism, as in an in vitro Binding assay determined.
• 3. The ligand, method, application, kit or composition according to Clause 2, using the SPR Assay. An alternative uses ELISA.
• 4. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 1 to 3, wherein the human genome comprises the first gene segment (in the case of (a)) or the C region gene segment (in the case of (a)) from (b)).
• 5. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 1 to 4, wherein the first segment or a second segment of the segments of (a), or the C region gene segment of (b) a second SNP coding for a second amino acid polymorphism; and wherein the human genome comprises the second SNP or wherein human (a ") expresses a variable domain of an antibody comprising the second amino acid polymorphism, or (b") expresses a constant region domain of an antibody comprising the first and the second second amino acid polymorphism.
• 6. The ligand, method, application, kit or composition of clause 5, wherein the human expresses a variable domain of an antibody comprising the first and second amino acid polymorphisms.
• 7. The ligand, method, application, kit or composition according to clause 5 or 6, wherein the first and second SNP of the genome are contained in the same antibody gene segment. For example, the first and second SNP of the genome are contained in an IGHG1 * 01 gene segment, and the first segment of (a) is an IGHG1 * 01 gene segment. For example, the first and second SNP of the genome are contained in an IGHG2 * 02 gene segment, and the first segment of (a) is an IGHG2 * 01 gene segment.
• 8. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 1-7, wherein each SNP is an SNP in the gene segment of a variable region.
• 9. The ligand, method, application, kit or composition of any of clauses 1-7, wherein the SNPs are each a SNP of a constant region gene segment is, where z. For example, the SNP is an SNP of a gamma-1 constant region gene segment or an SNP of a gamma-2 constant region gene segment or an SNP of a gamma-3 constant region gene segment or SNP of a gamma-4 constant gene segment Region.
• 10. The ligand, method, application, kit or composition of clause 9, wherein the first SNP is an SNP of a CH1, CH2, CH3 or CH4 gene segment and / or the second SNP is an SNP of a CH1 gene. , CH2, CH3 or CH4 gene segment.
• 11. The ligand, method, application, kit, or composition of any of clauses 1-8, wherein each SNP comprises a variable domain SNP, e.g. A VH domain SNP or a Vκ domain SNP or a Vλ SNP.
• 12. The ligand, method, application, kit, or composition of any of clauses 1-11, wherein the domain of the constant region of (b) consists of an antibody Fc region.
• 13. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 1 to 12, wherein it has been determined that the ligand (eg, the antibody or fragment) specifically binds to one or more as disclosed herein human TOI variants bind, for example with a KD of 1 nM or less (eg 100 or 10 pM or less) as determined by SPR.
• 14. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the application according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to one of clauses 1 to 13), wherein the ligand comprises or consists of an antibody or a fragment, the or comprising the variable domain of a human antibody obtained by the recombination of a human V gene segment and a human J gene segment (and optionally a human D gene segment, when the variable domains are V H domains); and wherein the human genome comprises the human V gene segment and / or human expressing antibodies comprising antibody variable domains resulting from recombination of the human V gene segment and a human J gene segment (and optionally a human D gene segment) derived. In one example, the V gene segment is one of the in WO2013041844 , a Genomes database and / or www.imgt.org, the disclosure (including the disclosure concerning the sequence) expressly incorporated herein by reference for use in the present invention disclosed V gene segments.
• 15. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to one of clauses 1 to 14), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprises or consists of an Fc-fused human TOI receptor) comprises a human heavy chain constant domain encoded by a first nucleotide sequence of a constant region; and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a heavy chain constant region identical to the first nucleotide sequence of a constant region, and / or human expressing antibodies comprising the human constant domain.
• 16. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to one of clauses 1 to 15), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprises or consists of an Fc-fused human TOI receptor) comprises a human heavy Gamma chain CH1 domain encoded by a CH1 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH1 nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH1 domain.
• 17. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (eg according to one of clauses 1 to 16), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprising or consisting of a Fc-fused human TOI receptor) comprises a human heavy Gamma chain CH2 domain encoded by a CH2 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH2 nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH2 domain.
• 18. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (eg according to one of clauses 1 to 17), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprising or consisting of a Fc-fused human TOI receptor) comprises a human G3 heavy chain gamma chain encoded by a CH3 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH3 nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH3 domain.
• 19. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to one of clauses 1 to 18), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprising or consisting of a Fc-fused human TOI receptor) comprises a human heavy Gamma chain CH4 domain encoded by a CH4 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH4 nucleotide sequence, and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH4 domain.
• 20. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to one of clauses 1 to 19), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprising or consisting of an Fc-fused human TOI receptor) comprises a Fc region of a human heavy gamma chain encoded by an Fc nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the Fc nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma Fc region.
• 21. The ligand, method, application, kit or composition of any of clauses 16 to 20, wherein the human gamma heavy chain is a human gamma 1 heavy chain.
• 22. The ligand, method, application, kit or composition of any of clauses 16 to 20, wherein the human gamma heavy chain is a human gamma 2 heavy chain.
• 23. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 16 to 20, wherein the ligand comprises a human gamma-1 heavy chain constant IGHG1 * 01 region.
• 24. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 16 to 20, wherein the ligand comprises a human gamma-1 heavy chain constant IGHG2 * 01 region.
• 25. The ligand, method, application, kit, or composition of any one of clauses 15 to 24, wherein the human is or has been genotyped as positive for the nucleotide sequence of the heavy chain constant region.
• 26. The ligand, method, application, kit or composition of clause 23, wherein the human is or has been genotyped as positive for the human IGHG1 * 01 nucleotide sequence.
• 27. The ligand, method, application, kit or composition of clause 24, wherein the human is or has been genotyped as positive for the human IGHG2 * 01 nucleotide sequence.
• 28. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 16 to 24, wherein the human has been phenotyped as positive for the gamma heavy chain constant domain, CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc or will.
• 29. The ligand, method, application, kit or composition according to clause 28, (i) if dependent on clause 23, wherein the human is positive for a constant IGHG1 * 01 domain of a human heavy gamma chain, CH1 , CH2, CH3, CH4 or Fc, or (ii) if dependent on clause 24, wherein the human is positive for a constant IGHG2 * 01 domain of a human heavy gamma chain, CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc has been phenotyped or will.
• 30. The method or use of any one of clauses 16 to 24 and 26 to 29, wherein said human is said to be positive for the heavy gamma chain constant region nucleotide sequence, e.g. B. positive for the heavy gamma chain constant domain CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc nucleotide sequence; positive for the CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc nucleotide sequence of the human heavy gamma heavy chain IGHG1 * 01 constant region; or positively genotyped for the CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc nucleotide sequence of the human heavy gamma chain IGHG2 * 01 constant region.
• 31. The method or use of any one of clauses 16 to 24 and 26 to 30, wherein human is said to be positive for the heavy gamma chain constant region, e.g. B. positive for CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc of the gamma heavy chain constant domain; positive for CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc of the human heavy gamma chain IGHG1 * 01 constant domain; or positively phenotyped for CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc of the human heavy gamma chain IGHG2 * 01 constant domain.

Beispiele für zugeschnittene LigandenExamples of tailored ligands

Der Erfinder hat die Aminosäurevariabilität und -verteilung bei großen repräsentativen humanen Stichproben analysiert. Das Ergebnis der Analyse für beispielhafte Antikörpergensegmente ist in Tabelle 9 gezeigt.The inventor has analyzed the amino acid variability and distribution in large representative human samples. The result of the analysis for exemplary antibody gene segments is shown in Table 9.

Bei einem ersten Beispiel identifizierte der Erfinder die Möglichkeit, die selteneren IGH-gamma-1 SNPs 204D (beobachtet mit einer kumulativen Häufigkeit von 0,296) und 206L (beobachtet mit einer kumulativen Häufigkeit von 0,283) einzeln oder in Kombination anzusprechen. Diese Reste sind Teil der CH3-Domäne und bilden als solche Teil der Fc-Regionen des Antikörpers. Ein Abgleich dieser CH3-Variationen mit dem Patienten ist daher aus den oben angesprochenen Gründen von besonderem Nutzen. Dieses Beispiel stellt somit Aspekte bereit, die in den folgenden Klauseln dargelegt werden.

• 32. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einem der Absätze 1 bis 31), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Region einer humanen schweren gamma-1-Kette, die ein Asp, welches der Position 204 von SEQ ID NO: 42 entspricht, oder ein Leu, welches der Position 206 von SEQ ID NO: 42 entspricht, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-1-Kette umfasst, die für ein solches Asp oder Leu codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-1-Regionen umfassen, die ein solches Asp oder Leu umfassen. Der Fachmann wird mit den Methoden zur Bestimmung von Genomsequenzen eines Menschen z. B. unter Anwendung einer genomische DNA und/oder RNA enthaltenden Probe, Sequenzieren und Vergleichen unter Anwendung von Bioinformatik oder anderen Computerwerkzeugen zum Vergleich der als Probe gezogenen Sequenz mit Sequenzen humaner Allele (z. B. wie in der IMGT-, 100 Genomes- oder einer anderen wie hier offenbarten Datenbank offenbart) vertraut sein. Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Probe um Blut oder Speichel oder eine Wangenabstrich probe.
• 33. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 32, wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-1-Kette umfasst, die ein Asp, das Position 204 von SEQ ID NO: 42 entspricht, und ein Leu, das Position 206 von SEQ ID NO: 42 entspricht, umfasst.
• 34. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 32 oder 33, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz der konstanten Region der schweren gamma-1-Kette umfasst, die für ein solches Asp oder Leu codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die solch ein Asp oder Leu umfassende konstante Regionen der humanen gamma-1-Kette umfassen.
• 35. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 32, 33 oder 34, wobei der Ligand eine konstante IGHG1*01-Region einer humanen schweren gamma-1-Kette, z. B. eine Fc-, CH1-, CH2- und/oder CH3-Domäne codiert durch humanes IGHG1*01, umfasst.
• 36. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 32 bis 35, wobei das Genom des Menschen eine humane IGHG1*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante Domänen umfassen, die durch eine humane IGHG1*01-Nukleotidsequenz codiert werden.
• 37. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 32 bis 36, wobei der Ligand eine durch humanes IGHG1*01 codierte Gelenkregion umfasst.
• 38. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 32 bis 37, wobei der Ligand einen Antikörper umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper schwere Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 61 umfassen.
• 39. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 32 bis 38, wobei der Mensch europäischer Abstammung ist. Wie in Tabelle 9 gezeigt finden sich in solchen Menschen 204D und 206L.
• 40. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 32 bis 39, wobei der Mensch als positiv für das Asp und/oder Leu genotypisiert wurde oder wird.
• 41. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 32 bis 40, wobei der Mensch als positiv für humane IGHG1*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 42. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 32 bis 41, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGHG1*01 CH3 phänotypisiert wurde oder wird.
• 43. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 32 bis 42, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Genom ein Condon/Codons umfasst, die für das Asp und/oder Leu codieren; oder humanes IGHG1*01 umfasst; oder humanes IGHG1*01 CH3 umfasst.
• 44. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 32 bis 43, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Phänotyp das Asp und/oder Leu; eine humane IGHG1*01-Region; oder ein humanes IGHG1*01 CH3 umfasst.
• 44a. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 32 bis 44, wobei der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-1-Regionen umfassen, die ein solches Asp und Leu umfassen.

• 32. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to paragraphs 1 to 31), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprises or consists of a Fc-fused TOI receptor) a human gamma-1 heavy chain constant region comprising an Asp corresponding to position 204 of SEQ ID NO: 42 or a Leu encoding position 206 of SEQ ID NO: 42, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a gamma-1 heavy chain constant region that encodes such an Asp or Leu, or human expresses antibodies that express human constant gamma-1. Include regions comprising such an Asp or Leu. The skilled person will be familiar with the methods for the determination of genome sequences of a human z. Using a genomic DNA and / or RNA-containing sample, sequencing and comparing using bioinformatics or other computer tools to compare the sampled sequence with sequences of human alleles (eg, as in the IMGT, Genomes, or Genomics) another database as disclosed herein). In one example, the sample is blood or saliva or a cheek swab specimen.
• 33. The ligand, method, application, kit or composition of clause 32, wherein the ligand comprises a human gamma-1 heavy chain constant region corresponding to an Asp, position 204 of SEQ ID NO: 42 and a leu corresponding to position 206 of SEQ ID NO: 42.
• 34. The ligand, method, application, kit or composition of clause 32 or 33, wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of the gamma-1 heavy chain constant region encoding such an Asp or Leu, or human expressing antibodies comprising such human gamma-1 chain constant regions comprising such Asp or Leu.
• 35. The ligand, method, application, kit or composition of clause 32, 33 or 34, wherein the ligand is a human heavy gamma-1 heavy chain IGHG1 * 01 region, e.g. A Fc, CH1, CH2 and / or CH3 domain encoded by human IGHG1 * 01.
• 36. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 32 to 35, wherein the human genome comprises a human IGHG1 * 01 nucleotide sequence, or human expressing antibodies comprising human constant domains, the be encoded by a human IGHG1 * 01 nucleotide sequence.
• 37. The ligand, method, application, kit or composition of any of clauses 32 to 36, wherein the ligand comprises a hinge region encoded by human IGHG1 * 01.
• 38. The ligand, method, application, kit, or composition of any of clauses 32 to 37, wherein the ligand comprises or consists of an antibody, wherein the antibody comprises heavy chains comprising SEQ ID NO: 61.
• 39. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 32-38, wherein the human is of European descent. As shown in Table 9, in such people, 204D and 206L are found.
• 40. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 32 to 39, wherein the human is or has been genotyped as positive for the Asp and / or Leu.
• 41. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 32 to 40, wherein human is or has been genotyped as positive for human IGHG1 * 01.
• 42. The ligand, method, use, kit or composition of any of clauses 32 to 41, wherein the human is or has been phenotyped as positive for a human IGHG1 * 01 CH3.
• 43. The method or application of any of clauses 32 to 42, comprising selecting a human whose genome comprises a Condon / codon coding for the Asp and / or Leu; or human IGHG1 * 01; or human IGHG1 * 01 CH3.
• 44. The method or use of any of clauses 32 to 43, comprising selecting a human whose phenotype is Asp and / or Leu; a human IGHG1 * 01 region; or a human IGHG1 * 01 CH3.
• 44a. The ligand, method, application, kit, or composition of any one of clauses 32 to 44, wherein the human expresses antibodies comprising human gamma-1 constant regions comprising such Asp and Leu.

Bei einem zweiten Beispiel identifizierte der Erfinder die Möglichkeit, IGH-gamma-2 SNPs anzusprechen. Dies schloss die Betrachtung der Variation der Fc-Region ein – in dieser Hinsicht konzentrierte sich der Erfinder auf die Positionen 161 und 257, die sich in der Fc-Region befinden. Dieses Beispiel stellt somit Aspekte bereit, die in den folgenden Klauseln dargelegt werden.

• 45. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 31), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Region einer humanen schweren gamma-2-Kette, die eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Pro, welches der Position 72 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Asn, welches der Position 75 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Phe, welches der Position 76 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Val, welches der Position 161 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und einem Ala, welches der Position 257 von SEQ ID NO: 44 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-2-Kette umfasst, die für eine solche ausgewählte Aminosäure codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-2-Regionen umfassen, die eine solche ausgewählte Aminosäure umfassen.
• 46. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 45, wobei der Ligand eine humane konstante Region einer schweren gamma-2-Kette, die (i) ein Pro, welches der Position 72 von SEQ ID NO: 44 entspricht, ein Asn, welches der Position 75 von SEQ ID NO: 44 entspricht, ein Phe, welches der Position 76 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und gegebenenfalls (ii) ein Val, welches der Position 161 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und/oder ein Ala, welches der Position 257 von SEQ ID NO: 44 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-2-Kette umfasst, die für eine solche Aminosäure von (i) codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-2-Regionen umfassen, die eine solche ausgewählte Aminosäure von (i) umfassen. Dieses Beispiel konzentriert sich auf die CH1-Variation.
• 47. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 45 oder 46, wobei der Ligand eine humane konstante Region einer schweren gamma-2-Kette, die (i) ein Val, welches der Position 161 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und ein Ala, welches der Position 257 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und gegebenenfalls (ii) eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Pro, welches der Position 72 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Asn, welches der Position 75 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und einem Phe, welches der Position 76 von SEQ ID NO: 44 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-2-Kette umfasst, die für eine solche Aminosäure von (i) codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-2-Regionen umfassen, die eine solche ausgewählte Aminosäure von (i) umfassen. Dieses Beispiel konzentriert sich auf die Fc-Variation.
• 48. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 47, wobei der Ligand eine konstante IGHG2*01-Region einer humanen schweren gamma-2-Kette, z. B. eine Fc-, CH1-, CH2- und/oder CH3-Domäne codiert durch humanes IGHG2*01, umfasst.
• 49. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 48, wobei das Genom des Menschen eine humane IGHG2*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante Domänen umfassen, die durch eine humane IGHG2*01-Nukleotidsequenz codiert werden.
• 50. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 49, wobei der Ligand eine durch humanes IGHG2*01 codierte Gelenkregion umfasst.
• 51. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 50, wobei der Ligand einen Antikörper umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper schwere Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 63 oder 65 umfassen.
• 52. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 51, wobei der Mensch europäischer, afrikanisch-amerikanischer oder europäisch-amerikanischer Abstammung ist.
• 53. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 52, wobei der Mensch als positiv für eine, mehrere oder alle der Pro, Asn, Phe, Val und Ala genotypisiert wurde oder wird.
• 54. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 53, wobei der Mensch als positiv für humane IGHG2*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 55. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 54, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGHG2*01 CH1 phänotypisiert wurde oder wird.
• 56. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 55, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGHG2*01 CH2 phänotypisiert wurde oder wird.
• 57. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 56, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGHG2*01 CH3 phänotypisiert wurde oder wird.
• 58. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 45 bis 57, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Genom ein Condon/Codons umfasst, die für einen, mehrere oder alle der Pro, Asn, Phe, Val und Ala codieren; oder humanes IGHG2*01 umfasst; oder ein humanes IGHG2*01 CH1, CH2 und/oder CH3 umfasst.
• 59. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 45 bis 58, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Phänotyp einen, mehrere oder alle der Pro, Asn, Phe, Val und Ala; eine humane IGHG2*01-Region; oder ein humanes IGHG2*01 CH1, CH2 und/oder CH3 umfasst.
• 60. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 45 bis 59, wobei der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-2-Regionen umfassen, die ein solches Pro, Asn, Phe, Val und Ala umfassen.

• 45. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to one of clauses 1 to 31), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprises or consists of a Fc-fused TOI receptor) a human gamma 2 heavy chain constant region comprising an amino acid selected from the group consisting of a pro corresponding to position 72 of SEQ ID NO: 44, an Asn corresponding to position 75 of SEQ ID NO: 44, a Phe corresponding to position 76 of SEQ ID NO: 44, a Val corresponding to position 161 of SEQ ID NO: 44, and an Ala representing position 257 of SEQ ID NO: 44, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a heavy gamma 2 heavy chain constant region encoding such a selected amino acid, o the human expressing antibodies comprising human gamma 2 constant regions comprising such a selected amino acid.
• 46. The ligand, method, application, kit or composition of clause 45, wherein the ligand is a human gamma 2 heavy chain constant region comprising (i) a pro which is position 72 of SEQ ID NO 44, an Asn corresponding to position 75 of SEQ ID NO: 44, a Phe corresponding to position 76 of SEQ ID NO: 44, and optionally (ii) a Val corresponding to position 161 of SEQ ID NO : 44, and / or comprises an Ala corresponding to position 257 of SEQ ID NO: 44, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a gamma 2 heavy chain constant region indicative of such Or human expressing antibodies comprising human gamma 2 constant regions comprising such a selected amino acid of (i). This example focuses on CH1 variation.
• 47. The ligand, method, application, kit or composition of clause 45 or 46, wherein the ligand is a human heavy gamma 2 heavy chain constant region which comprises (i) a Val which is position 161 of SEQ ID NO: 44, and an Ala corresponding to position 257 of SEQ ID NO: 44, and optionally (ii) an amino acid selected from the group consisting of a pro corresponding to position 72 of SEQ ID NO: 44, an Asn corresponding to position 75 of SEQ ID NO: 44 and a Phe corresponding to position 76 of SEQ ID NO: 44, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a heavy gamma constant region 2 chain which encodes such amino acid of (i), or human expressing antibodies comprising human gamma 2 constant regions comprising such selected amino acid of (i). This example focuses on the Fc variation.
• 48. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 45 to 47, wherein the ligand is a human heavy gamma 2 chain constant IGHG2 * 01 region, e.g. A Fc, CH1, CH2 and / or CH3 domain encoded by human IGHG2 * 01.
• 49. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 45 to 48, wherein the human genome comprises a human IGHG2 * 01 nucleotide sequence, or the human expressing antibodies comprising human constant domains, the be encoded by a human IGHG2 * 01 nucleotide sequence.
• 50. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 45 to 49, wherein the ligand comprises a hinge region encoded by human IGHG2 * 01.
• 51. The ligand, method, application, kit, or composition of any of clauses 45 to 50, wherein the ligand comprises or consists of an antibody, wherein the antibody comprises heavy chains comprising SEQ ID NO: 63 or 65 ,
• 52. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 45 to 51, wherein the human is of European, African American or European American descent.
• 53. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 45 to 52, wherein human is or has been genotyped as positive for one, several or all of Pro, Asn, Phe, Val and Ala.
• 54. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 45 to 53, wherein human is or has been genotyped as positive for human IGHG2 * 01.
• 55. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 45 to 54, wherein human is or has been phenotyped as positive for a human IGHG2 * 01 CH1.
• 56. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 45 to 55, wherein human is or has been phenotyped as positive for a human IGHG2 * 01 CH2.
• 57. The ligand, method, application, kit or composition of any of clauses 45 to 56, wherein the human has been or is being phenotyped as positive for a human IGHG2 * 01 CH3.
• 58. The method or use of any one of clauses 45 to 57, comprising selecting a human whose genome comprises a Condon / codon encoding one, several or all of Pro, Asn, Phe, Val and Ala; or human IGHG2 * 01; or a human IGHG2 * 01 comprises CH1, CH2 and / or CH3.
• 59. The method or use of any one of clauses 45 to 58, comprising selecting a human whose phenotype has one, several, or all of Pro, Asn, Phe, Val, and Ala; a human IGHG2 * 01 region; or a human IGHG2 * 01 comprises CH1, CH2 and / or CH3.
• 60. The ligand, method, application, kit, or composition of any of clauses 45 to 59, wherein the human expresses antibodies comprising human gamma 2 constant regions comprising such Pro, Asn, Phe, Val and Ala include.

Bei einem dritten Beispiel behandelt der Erfinder die Variation der konstanten Region der humanen kappa-Kette. Der vorliegende Aspekt der Erfindung stellt somit auch Folgendes bereit.

• 61. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. nach einer der Klauseln 1 bis 60), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Region einer humanen leichten kappa-Kette, die ein Val, welches der Position 84 von SEQ ID NO: 50 entspricht, oder ein Cys, welches der Position 87 von SEQ ID NO: 50 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer leichten kappa-Kette umfasst, die für ein solches Val oder Cys codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen einer humanen leichten kappa-Kette umfassen, die ein solches Val oder Cys umfassen.
• 62. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 61, wobei der Ligand eine konstante Region der humanen leichten kappa-Kette umfasst, die ein Val, das Position 84 von SEQ ID NO: 50 entspricht, und ein Cys, das Position 87 von SEQ ID NO: 50 entspricht, umfasst.
• 63. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 61 oder 62, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz der konstanten Region der leichten kappa-Kette umfasst, die für ein solches Val oder Cys codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die solch ein Val oder Cys umfassende konstante Regionen der humanen kappa-Kette umfassen.
• 64. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 61 bis 63, wobei der Antikörper oder das Fragment eine konstante IGKC*01-Region der humanen leichten kappa-Kette umfasst.
• 65. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 61 bis 64, wobei der Ligand einen Antikörper umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper leichte Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 62 oder 66 umfassen.
• 66. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 61 bis 65, wobei der Ligand einen Antikörper umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper eine variable Domäne der leichten Kette umfasst, die sich aus einer Rekombination eines humanen Vκ-Gensegments und eines humanen Jκ-Gensegments ableitet, wobei es sich bei dem Jκ-Gensegment um IGK32*01 (SEQ ID NO: 57) handelt.
• 67. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 61 bis 66, wobei der Mensch als positiv für das Val und/oder Cys phänotypisiert wurde oder wird.
• 68. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 61 bis 67, wobei der Mensch als positiv für humane IGKC*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 69. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 61 bis 68, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGKC*01-Domäne phänotypisiert wurde oder wird.
• 70. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 61 bis 69, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Genom ein Condon/Codons umfasst, die für das Val und/oder Cys codieren; oder humanes IGKC*01 umfasst.
• 71. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 61 bis 70, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Phänotyp ein solches Val und/oder Cys umfasst; oder eine humane IGKC*01-Domäne umfasst.
• 72. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 61 bis 71, wobei der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante kappa-Domänen umfassen, die ein solches Val und Cys umfassen, z. B. konstante IGKC*01-Domänen exprimiert.

• 61. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to one of clauses 1 to 60), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprises or consists of a Fc-fused TOI receptor) a human kappa light chain constant region comprising a Val corresponding to position 84 of SEQ ID NO: 50 or a Cys encoding position 87 of SEQ ID NO : 50 corresponds to, comprises, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a kappa light chain constant region encoding such a Val or Cys, or human expressing antibodies, human kappa light chain constant regions include such a Val or Cys.
• 62. The ligand, method, application, kit or composition of clause 61, wherein the ligand comprises a human kappa light chain constant region corresponding to a Val, position 84 of SEQ ID NO: 50, and a Cys corresponding to position 87 of SEQ ID NO: 50.
• 63. The ligand, method, application, kit or composition of clause 61 or 62, wherein the human genome comprises a kappa light chain constant region nucleotide sequence encoding such a Val or Cys, or the Human expressing antibodies comprising such Val or Cys human kappa chain constant regions.
• 64. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 61 to 63, wherein the antibody or fragment comprises a human kappa light chain constant IGKC * 01 region.
• 65. The ligand, method, application, kit, or composition of any of clauses 61 to 64, wherein the ligand comprises or consists of an antibody, wherein the antibody comprises light chains comprising SEQ ID NO: 62 or 66 ,
• 66. The ligand, method, application, kit, or composition of any of clauses 61 to 65, wherein the ligand comprises or consists of an antibody, wherein the antibody comprises a light chain variable domain resulting from recombination a human Vκ gene segment and a human Jκ gene segment, wherein the Jκ gene segment is IGK32 * 01 (SEQ ID NO: 57).
• 67. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 61 to 66, wherein the human is or has been phenotyped as positive for the Val and / or Cys.
• 68. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 61 to 67, wherein human is or has been genotyped as positive for human IGKC * 01.
• 69. The ligand, method, application, kit or composition of any of clauses 61 to 68, wherein the human is or has been phenotyped as positive for a human IGKC * 01 domain.
• 70. The method or use of any of clauses 61 to 69, comprising selecting a human whose genome comprises a Condon / codon encoding the Val and / or Cys; or human IGKC * 01.
• 71. The method or use of any of clauses 61 to 70, comprising selecting a human whose phenotype includes such Val and / or Cys; or a human IGKC * 01 domain.
• 72. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 61 to 71, wherein the human expresses antibodies comprising human kappa constant domains comprising such Val and Cys, e.g. B. expressed constant IGKC * 01 domains.

Bei einem vierten Beispiel behandelt der Erfinder die Variation der konstanten Region der humanen lambda-Kette. Dieses Beispiel stellt somit Aspekte bereit, die in den folgenden Klauseln dargelegt werden.

• 73. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 60), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante IGLC2*01-Region der humanen leichten Kette umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine humane IGLC2*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante IGLC2*01-Regionen der humanen leichten Kette umfassen.
• 74. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 73, wobei der Antikörper leichte Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 64 umfassen.
• 75. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 73 oder 74, wobei der Mensch als positiv für humanes IGLC2*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 76. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 73 bis 75, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGLC2*01-Domäne phänotypisiert wurde oder wird.
• 77. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 73 bis 76, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Genom humanes IGLC2*01 umfasst.
• 78. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 73 bis 77, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Phänotyp eine humane IGLC2*01-Domäne umfasst.
• 79. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 73 bis 78, wobei der Mensch humane konstante lambda-IGLC2*01-Domänen exprimiert.

• 73. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (eg according to one of the clauses 1 to 60), wherein the ligand (eg an antibody or a fragment or comprising or consisting of a Fc-fused TOI receptor) comprises a human light chain constant IGLC2 * 01 region; and wherein the human genome comprises a human IGLC2 * 01 nucleotide sequence or human expresses antibodies comprising human IG light chain constant IGLC2 * 01 regions.
• 74. The ligand, method, use, kit or composition of clause 73, wherein the antibody comprises light chains comprising SEQ ID NO: 64.
• 75. The ligand, method, application, kit or composition according to clause 73 or 74 wherein the human has been or is being genotyped positive for human IGLC2 * 01.
• 76. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 73 to 75, wherein the human is or has been phenotyped as positive for a human IGLC2 * 01 domain.
• 77. The method or use of any of clauses 73 to 76, comprising selecting a human whose genome comprises human IGLC2 * 01.
• 78. The method or use of any one of clauses 73 to 77, comprising selecting a human whose phenotype comprises a human IGLC2 * 01 domain.
• 79. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 73 to 78, wherein the human expresses human lambda IGLC2 * 01 constant domains.

Bei einem fünften Beispiel behandelt der Erfinder die Variation der variablen Region der humanen schweren Kette. Dieses Beispiel stellt somit Aspekte bereit, die in den folgenden Klauseln dargelegt werden.

• 80. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 79), wobei der Ligand einen Antikörper oder ein Fragment umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper bzw. das Fragment eine VH-Domäne umfasst, die sich aus der Rekombination eines humanen VH-Gensegments, eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Gensegments ableitet, wobei das VH-Gensegment ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus (i) IGHV1-18*01 und das Genom des Menschen eine humane IGHV1-18*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGHV1-18*01 ableiten; oder (ii) IGVH1-46*01 und das Genom des Menschen eine humane IGHV1-46*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich von der Rekombination von humanem IGHV1-46*01 ableiten.
• 81. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 80, wobei der Antikörper oder das Fragment eine, mehrere oder alle einer durch humanes IGHG2*01 codierten CH1-Domäne, CH2-Domäne, CH3-Domäne, Hinge-Region oder Fc-Region umfasst.
• 82. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 80 oder 81, wobei der Antikörper oder das Fragment schwere Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 63 oder 65 umfassen.
• 83. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 80 bis 82, wobei der Mensch als positiv für das ausgewählte VH-Gensegment, positiv für humanes IGHV1-18*01 oder IGVH1-46*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 84. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 80 bis 83, umfassend die Genotypisierung des Menschen als positiv für das ausgewählte VH-Gensegment, z. B. positiv für humanes IGHV1-18*01 oder IGVH1-46*01.

• 80. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to one of clauses 1 to 79), wherein the ligand comprises or consists of an antibody or a fragment, wherein the The antibody or fragment comprises a VH domain derived from the recombination of a human VH gene segment, a human D gene segment and a human JH gene segment, wherein the VH gene segment is selected from the group consisting of (i) IGHV1-18 * 01 and the human genome comprises a human IGHV1-18 * 01 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGHV1-18 * 01; or (ii) IGVH1-46 * 01 and the human genome comprises a human IGHV1-46 * 01 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGHV1-46 * 01.
• 81. The ligand, method, use, kit or composition of clause 80, wherein the antibody or fragment comprises one, several or all of a human IGHG2 * 01 encoded CH1 domain, CH2 domain, CH3 domain, Hinge region or Fc region includes.
• 82. The ligand, method, application, kit or composition of clause 80 or 81, wherein the antibody or fragment comprises heavy chains comprising SEQ ID NO: 63 or 65.
• 83. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 80 to 82, wherein the human is positive for the selected VH gene segment, positive for human IGHV1-18 * 01 or IGVH1-46 * 01 was or will be genotyped.
• 84. The method or use of any one of clauses 80 to 83, comprising human genotyping as positive for the selected VH gene segment, e.g. Positive for human IGHV1-18 * 01 or IGVH1-46 * 01.

Bei einem sechsten Beispiel behandelt der Erfinder die Variation der variablen Region der humanen leichten Kette. Dieses Beispiel stellt somit Aspekte bereit, die in den folgenden Klauseln dargelegt werden.

• 85. Den erfindungsgemäßen Liganden, das erfindungsgemäße Verfahren, die erfindungsgemäße Anwendung, das erfindungsgemäße Kit oder die erfindungsgemäße Zusammensetzung (z. B. gemäß einer der Klauseln 1 bis 84), wobei der Ligand einen Antikörper oder ein Fragment umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper bzw. das Fragment eine VL-Domäne umfasst, die sich aus der Rekombination eines humanen VL-Gensegments und eines humanen JL-Gensegments ableitet, wobei das VL-Gensegment ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus (i) IGKV4-1*01 und das Genom des Menschen eine humane IGKV4-1*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGKV4-1*01 ableiten; (ii) IGLV2-14*01 und das Genom des Menschen eine humane IGLV2-14*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGLV2-14*01 ableiten; oder (iii) IGKV1-13*02 und das Genom des Menschen eine humane IGKV1-13*02-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGKV1-13*02 ableiten.
• 86. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 85, wobei der Antikörper leichte Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 62, 64 oder 66 umfassen.
• 87. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Klausel 85 oder 86, wobei der Antikörper oder das Fragment eine variable Domäne der leichten Kette umfasst, die sich aus einer Rekombination eines humanen Vκ-Gensegments und eines humanen Jκ-Gensegments ableitet, wobei es sich bei dem Jκ-Gensegment um IGKJ2*01 (SEQ ID NO: 57, wobei (i) oder (iii) gilt) handelt.
• 88. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 85 bis 87, wobei der Mensch als positiv für das ausgewählte VL-Gensegment, z. B. positiv für humanes IGKV4-1*01, IGLV2-14*01 oder IGKV1-13*02, genotypisiert wurde oder wird.
• 89. Das Verfahren oder die Anwendung nach Klausel 88, umfassend die Genotypisierung des Menschen als positiv für das ausgewählte VL-Gensegment, z. B. Genotypisieren des Menschen als positiv für humanes IGKV4-1*01, IGLV2-14*01 oder IGKV1-13*02.
• 90. Den Liganden, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einer der Klauseln 1 bis 89, wobei der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) an das humane TOI mit einer Dissoziationskonstante (Kd) von 1 nM oder weniger, bestimmt mittels SPR, (z. B. 100, 10 oder 1 pM oder weniger) bindet.

• 85. The ligand according to the invention, the method according to the invention, the use according to the invention, the kit according to the invention or the composition according to the invention (for example according to one of clauses 1 to 84), wherein the ligand comprises or consists of an antibody or a fragment, wherein the The antibody or the fragment comprises a VL domain derived from the recombination of a human VL gene segment and a human JL gene segment, wherein the VL gene segment is selected from the group consisting of (i) IGKV4-1 * 01 and the human genome comprises a human IGKV4-1 * 01 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGKV4-1 * 01; (ii) IGLV2-14 * 01 and the human genome comprises a human IGLV2-14 * 01 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGLV2-14 * 01; or (iii) IGKV1-13 * 02 and the human genome comprises a human IGKV1-13 * 02 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGKV1-13 * 02.
• 86. The ligand, method, use, kit or composition of clause 85, wherein the antibody comprises light chains comprising SEQ ID NO: 62, 64 or 66.
• 87. The ligand, method, application, kit or composition of clause 85 or 86, wherein the antibody or fragment comprises a light chain variable domain resulting from recombination of a human Vκ gene segment and a human Jκ Gene segment, where the Jκ gene segment is IGKJ2 * 01 (SEQ ID NO: 57, where (i) or (iii) applies).
• 88. The ligand, method, application, kit or composition of any one of clauses 85 to 87, wherein the human is positive for the selected VL gene segment, e.g. Positive for human IGKV4-1 * 01, IGLV2-14 * 01 or IGKV1-13 * 02, has been or will be genotyped.
• 89. The method or the application of clause 88, comprising human genotyping as positive for the selected VL gene segment, e.g. B. Genotyping of human as positive for human IGKV4-1 * 01, IGLV2-14 * 01 or IGKV1-13 * 02.
• 90. The ligand, method, application, kit, or composition of any one of clauses 1 to 89, wherein the ligand (eg, the antibody or fragment) to the human TOI has a dissociation constant (Kd) of 1 nM or less, determined by SPR (eg, 100, 10 or 1 pM or less).

Gemäß einer speziellen Ausführungsform umfasst der Ligand, der Antikörper oder das Fragment der vorliegenden Erfindung eine Fc-Region, wobei die Fc-Region wenigstens einen nichtnativen Aminosäurerest ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 234D, 234E, 234N, 234Q, 234T, 234H, 234V, 234I, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235W, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235T, 235H, 235V, 235I, 235V, 235F, 236E, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239V, 240I, 240A, 240T, 240M, 241W, 241L, 241Y, 241E, 241R. 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247L, 247V, 247G, 251F, 252Y, 254T, 255L, 256E, 256M, 262I, 262A, 262T, 262E, 263I, 263A, 263T, 263M, 264L, 264I, 264W, 264T, 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 265I, 265L, 265H, 265T, 266I, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 268E, 269H, 269Y, 269F, 269R, 270E, 280A, 284M, 292P, 292L, 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 296I, 296H, 269G, 297S, 297D, 297E, 298H, 298I, 298T, 298F, 299I, 299L, 299A, 299S, 299V, 299H, 299F, 299E, 305I, 313F, 316D, 325Q, 325L, 325I, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S, 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 328I, 328V, 328T, 328H, 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330V, 330V, 330I, 330F, 330R, 330H, 331G, 331A, 331L, 331M, 331F, 331W, 331K, 331Q, 331E, 331S, 331V, 331I, 331C, 331V, 331H, 331R, 331N, 331D, 331T, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N, 332Q, 332T, 332H, 332V, 332A, 339T, 370E, 370N, 378D, 392T, 396L, 416G, 419H, 421K, 440V und 434W, wie in dem in Kabat angeführten EU-Index nummeriert, umfasst. Gegebenenfalls kann die Fc-Region zusätzliche und/oder alternative dem Fachmann bekannte nicht-native Aminosäurereste umfassen (siehe z. B. US-Patentschriften 5,624,821 ; 6,277,375 ; 6,737,056 ; PCT-Patentveröffentlichungen WO 01/58957 ; WO 02/06919 ; WO 04/016750 ; WO 04/029207 ; WO 04/035752 und WO 05/040217 ).According to a specific embodiment, the ligand, antibody or fragment of the present invention comprises an Fc region, wherein the Fc region has at least one nonnative amino acid residue selected from the group consisting of 234D, 234E, 234N, 234Q, 234T, 234H, 234V, 234I, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235W, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235T, 235H, 235V, 235I, 235V, 235F, 236E, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239V, 240I, 240A, 240T, 240M, 241W, 241L, 241Y, 241E, 241R. 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247L, 247V, 247G, 251F, 252Y, 254T, 255L, 256E, 256M, 262I, 262A, 262T, 262E, 263I, 263A, 263T, 263M, 264L, 264I , 264W, 264T, 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 265I, 265L, 265H, 265T, 266I, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 268E, 269H , 269Y, 269F, 269R, 270E, 280A, 284M, 292P, 292L, 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 296I, 296H, 269G, 297S, 297D, 297E, 298H, 298I, 298T, 298F , 299I, 299L, 299A, 299S, 299V, 299H, 299F, 299E, 305I, 313F, 316D, 325Q, 325L, 325I, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S , 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 328I, 328V, 328T, 328H, 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330V, 330V, 330I, 330F, 330R, 330H , 331G, 331A, 331L, 331M, 331F, 331W, 331K, 331Q, 331E, 331S, 331V, 331I, 331C, 331V, 331H, 331R, 331N, 331D, 331T, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N , 332Q, 332T, 332H, 332V, 332A, 339T, 370E, 370N, 378D, 392T, 396L, 416G, 419H, 421K, 440V and 43 4W, as numbered in the EU index cited in Kabat. Optionally, the Fc region may comprise additional and / or alternative non-native amino acid residues known to those of skill in the art (see, for example, U.S. Pat. U.S. Patents 5,624,821 ; 6,277,375 ; 6,737,056 ; PCT patent publications WO 01/58957 ; WO 02/06919 ; WO 04/016750 ; WO 04/029207 ; WO 04/035752 and WO 05/040217 ).

Bei einem Beispiel umfasst der Ligand, der Antikörper oder das Fragment eine oder mehrere humane Bindungsstellen, die spezifisch das TOI (z. B. PCSK9, den LDL-Rezeptor, IL4Ra, IL6R, PD-L1, PD-1, PDGF-B, PDGFR-B, Angiopoietin, BMP6, Hämojuvelin, Hepcidin, Ferroportin, Transferrin, HFE, TMPRSS6, VEGFA, Nav1.8 oder Nav1.7) binden. Gemäß einer Ausführungsform umfassen die Bindungsstellen die variablen Domänen humaner Antikörper oder humaner Rezeptoren für das TOI (z. B. humane Rezeptorbindungsstellen für VEGFA), bzw. sie bestehen daraus. Ferner kann der Ligand, der Antikörper bzw. das Fragment gegebenenfalls vollständig human sein (z. B. humane konstante Regionen, z. B. humane Fc-Regionen mit oder ohne humane CL-Regionen umfassen). Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden um Aflibercept, Alirocumab, Sarilumab oder Dupilumab. Vollständig humane Liganden maximieren bei einer Verwendung im Rahmen der Erfindung die Kompatibilität mit dem menschlichen Patienten, wobei die V- und/oder C-Regionen maßgeschneidert auf den humanen Genotyp und/oder Phänotyp gemäß der hier gegebenen Beschreibung sind.In one example, the ligand, antibody, or fragment comprises one or more human binding sites that specifically target the TOI (eg, PCSK9, the LDL receptor, IL4Ra, IL6R, PD-L1, PD-1, PDGF-B, PDGFR-B, angiopoietin, BMP6, hemojuvelin, hepcidin, ferroportin, transferrin, HFE, TMPRSS6, VEGFA, Nav1.8 or Nav1.7). In one embodiment, the binding sites comprise or consist of the variable domains of human antibodies or human receptors for the TOI (eg, human receptor binding sites for VEGFA). Further, the ligand, antibody or fragment may optionally be fully human (eg, include human constant regions, eg, human Fc regions with or without human CL regions). In one example, the ligand is aflibercept, alirocumab, sarilumab or dupilumab. Fully human ligands maximize when used in the frame of the invention, compatibility with the human patient, where the V and / or C regions are tailored to the human genotype and / or phenotype as described herein.

Einige Ausführungsformen der hier beschriebenen Technologie lassen sich gemäß einem der folgenden nummerierten Absätze definieren:

• 1. Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: a. die Verabreichung eines auf eine TOI-Variante in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden an den Menschen und die Behandlung oder Prävention dieser Krankheit bzw. dieses Leidens, wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz mit einer kumulativen humanen Allelhäufigkeit von weniger als 50% codiert wird und/oder wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird; wobei b. der Mensch vor Schritt (a) als positiv für die Nukleotidsequenz genotypisiert wurde oder wird oder als positiv für die TOI-Variante phänotypisiert wurde oder wird.
• 2. Das Verfahren nach Absatz 1, wobei vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur Bindung an die TOI-Variante fähig ist.
• 3. Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: a. die Verabreichung eines auf eine TOI-Variante in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden an den Menschen und die Behandlung oder Prävention dieser Krankheit bzw. dieses Leidens, wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz mit einer kumulativen humanen Allelhäufigkeit von weniger als 50% codiert wird und/oder wobei das TOI in dem Menschen von einer Nukleotidsequenz mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird; wobei b. vor Schritt (a) der Ligand als zur Bindung der TOI-Variante fähig bestimmt wurde oder wird.
• 4. Das Verfahren nach Absatz 3, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz umfasst, die für die TOI-Variante codiert; und vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass die Nukleotidsequenz eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% aufweist.
• 5. Das Verfahren nach Absatz 3 oder 4, wobei der Mensch vor Schritt (a) als positiv für die Nukleotidsequenzvariante genotypisiert wurde oder wird.
• 6. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Mensch vor Schritt (a) als positiv für die TOI-Variante phänotypisiert wurde oder wird.
• 7. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei die Häufigkeit unter 10 oder 15% beträgt.
• 8. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Ligand dazu fähig ist, zwei oder mehr verschiedene TOI-Varianten zu binden, die jeweils durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert werden.
• 9. Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Krankheit oder eines Leidens in einem Menschen, wobei die Krankheit bzw. das Leiden durch ein Target of Interest (TOI) vermittelt wird, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: a. die Verabreichung eines auf eine TOI-Variante in dem Menschen zielenden Anti-TOI-Liganden an den Menschen und die Behandlung oder Prävention dieser Krankheit bzw. dieses Leidens, wobei es sich bei dem TOI in dem Menschen um eine Variante handelt, die von einer Nukleotidsequenz codiert wird, die eine kumulative humane Allelhäufigkeit von mehr als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von mehr als 50% hat; wobei b. der Mensch vor Schritt (a) als negativ für eine Nukleotidsequenzvariante mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird; oder als negativ für eine durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte TOI-Variante phänotypisiert wurde.
• 10. Das Verfahren nach Absatz 9, wobei vor Schritt (a) der Mensch als positiv für die häufigste TOI-Variante phänotypisiert oder für die Nukleotidsequenz davon genotypisiert wurde oder wird.
• 11. Das Verfahren nach Absatz 9 oder 10, wobei vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur Bindung an die häufigste TOI-Variante fähig ist.
• 12. Das Verfahren nach Absatz 9, 10 oder 11, wobei vor Schritt (a) festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand im Wesentlichen unfähig zur Neutralisierung oder Inhibierung der in Schritt (b) angeführten TOI-Variante ist.
• 13. Das Verfahren nach einem der Absätze 9 bis 12, wobei der Ligand zur Bindung an die häufigste TOI-Variante fähig ist.
• 14. Das Verfahren nach einem der Absätze 9 bis 13, wobei der Ligand zur Bindung an zwei oder mehr verschiedene TOI-Varianten fähig ist, die jeweils durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von mehr als 50% fähig sind.
• 15. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei festgestellt wurde oder wird, dass die in Schritt (a) angeführte Nukleotidsequenzvariante in wenigstens 2 verschiedenen humanen ethnischen Populationen vorhanden ist.
• 16. Das Verfahren nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei es sich bei der Humanhäufigkeit um die Häufigkeit in einer Datenbank natürlich vorkommender Sequenzen von wenigstens 15 verschiedenen human ethnischen Populationen handelt, die wenigstens 1000 Sequenzen umfasst.
• 17. Einen Antihuman-TOI-Liganden zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens in einem Menschen, wobei das TOI in Menschen als verschiedene polymorphe Varianten vorhanden ist und wobei das Genom des Menschen eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.
• 18. Der Ligand nach Absatz 17, wobei festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur Bindung an das durch die Nukleotidsequenz codierte humane TOI fähig ist.
• 19. Einen Liganden, der an ein humanes TOI bindet, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierten Aminosäuresequenz umfasst, zur Verwendung in einem Verfahren, welches den Schritt der Verwendung des Liganden zum Targeting des TOI in einem Menschen zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens umfasst, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.
• 20. Der Ligand nach einem der Absätze 17 bis 19, wobei der Mensch als positiv für die TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird. Der Ligand nach einem der Absätze 17 bis 19, wobei der Mensch als positiv für die TOI-Nukleotidsequenz mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird.
• 21. Der Ligand nach einem der Absätze 17 bis 20, wobei der Mensch als positiv für ein durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiertes TOI phänotypisiert wurde oder wird.
• 22. Der Ligand nach einem der Absätze 17 bis 21, wobei der Mensch als heterozygot für eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird; wobei der Mensch gegebenenfalls als eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von mehr als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von mehr als 50% umfassend genotypisiert wurde oder wird.
• 23. Der Ligand nach einem der Absätze 17 bis 22, wobei das Genom des Menschen als homozygot für eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% genotypisiert wurde oder wird.
• 24. Der Ligand nach einem der Absätze 17 bis 23, wobei der Ligand eine Antikörperbindungsstelle umfasst, die ein humanes TOI bindet, das eine Aminosäuresequenz umfasst, die durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird; und von dem gegebenenfalls festgestellt wurde oder wird, dass er zu einer solchen Bindung fähig ist.
• 25. Der Ligand nach Absatz 24, wobei es sich bei dem Liganden um einen Antikörper oder ein Antikörperfragment handelt.
• 26. Der Ligand nach einem der Absätze 17 bis 23, wobei der Ligand eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer TOI-Nukleotidsequenz hybridisiert, die eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, oder ein RNA-Transkript davon; und/oder der Ligand eine Nukleotidsequenz umfasst, die wenigstens 10 aufeinanderfolgende Nukleotide einer Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder mit einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder eine Antisense-Sequenz davon umfasst.
• 27. Der Ligand nach einem der Absätze 17 bis 26, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% umfasst und sich die Sequenz in wenigstens 2 verschiedenen ethnischen Populationen findet.
• 28. Eine pharmazeutische Zusammensetzung oder ein Kit zur Behandlung oder Prävention eines Leidens oder einer Krankheit, die durch ein wie in einem der vorhergehenden Absätze angeführtes TOI vermittelt wird, wobei die Zusammensetzung bzw. das Kit den Liganden nach einem der Absätze 17 bis 27 umfasst; und gegebenenfalls in Kombination mit einem Etikett oder einer Gebrauchsanleitung, zur Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens bei einem Menschen; wobei das Etikett bzw. die Anleitung gegebenenfalls eine durch eine Zulassungsbehörde erteilte Arzneimittelzulassungsnummer umfasst (z. B. eine FDA- oder EMA-Zulassungsnummer); wobei das Kit gegebenenfalls einen Injektionsstift oder ein IV-Behältnis umfasst, der bzw. das den Liganden umfasst.
• 29. Ein Verfahren zur Herstellung einer Bindungsstelle für einen Antikörper gegen ein humanes TOI, wobei das Verfahren die Gewinnung einer Mehrzahl von Anti-TOI-Antikörperbindungsstellen, das Screening der Antikörperbindungsstellen auf Bindung an TOI umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, oder an ein Peptid davon umfassend eine Aminosäurevariation von der entsprechenden Sequenz codiert durch die TOI-codierende Nukleotidsequenz mit der höchsten kumulativen Humanallelhäufigkeit und/oder der höchsten Gesamthumangenotyphäufigkeit, und das Isolieren einer in dem Screening-Schritt bindenden Antikörperbindungsstelle umfasst.
• 30. Ein Verfahren zur Herstellung eines Antikörpers gegen ein humanes TOI, wobei das Verfahren die Immunisierung eines nicht humanen Wirbeltieres (z. B. einer Maus oder Ratte) mit einem TOI umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, oder an ein Peptid davon, das eine Aminosäurevariation von der entsprechenden durch die TOI-codierende Nukleiotidsequenz mit der höchsten kumulativen Humanallelhäufigkeit und/oder der höchsten Gesamthumangenotyphäufigkeit codierten Sequenz umfasst, und das Isolieren eines Antikörpers, der an ein TOI bindet, das eine Aminosäuresequenz umfasst, die durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird, und gegebenenfalls die Herstellung eines TOI-bindenden Fragments oder Derivats des isolierten Antikörpers umfasst.
• 31. Das Verfahren nach Absatz 29 oder 30, welches den Schritt der Gewinnung einer Nukleinsäure umfasst, die für den Antikörper, das Fragment, das Derivat oder die Bindungsstelle codiert, und gegebenenfalls Insertieren der Nukleinsäure in einem Expressionsvektor.
• 32. Ein Kit zum TOI-Genotypisieren eines Menschen, wobei das Kit eine Nukleinsäure umfasst, die eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer TOI-Nukleotidsequenz hybridisiert, die so ausgewählt ist, dass sie eine kumulative Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder eine Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% hat, oder ein RNA-Transkript davon; und/oder die Nukleinsäure eine Nukleotidsequenz umfasst, die wenigstens 10 aufeinanderfolgende Nukleotide einer TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder eine Antisense-Sequenz davon umfasst.
• 33. Ein Kit zur TOI-Genotypisierung oder -Phänotypisierung eines Menschen, wobei das Kit einen Liganden gemäß einem der Absätze 17 bis 27 oder einen Antikörper, ein Fragment oder ein Derivat produziert durch das Verfahren nach einem der Absätze 29 bis 31 umfasst.
• 34. Die Verwendung eines Anti-TOI-Liganden, der ein humanes TOI bindet, umfassend eine Aminosäuresequenz codiert durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50%, bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens bei einem Menschen, dessen Genom eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst.
• 35. Die Verwendung eines Anti-TOI-Liganden, der an ein humanes TOI bindet, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, bei der Herstellung eines Medikaments zum Targeting des TOI in einem Menschen zur Behandlung und/oder Prävention einer durch das TOI vermittelten Krankheit oder eines durch das TOI vermittelten Leidens.
• 36. Ein Verfahren zum Targeting eines TOI zur Behandlung und/oder Prävention einer TOI-vermittelten Krankheit oder eines TOI-vermittelten Leidens bei einem Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-TOI-Liganden an einen Menschen umfasst, der eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% umfasst, wobei das Target ein TOI ist, das durch die Nukleotidsequenz codiert wird.
• 37. Das Verfahren nach Absatz 36, wobei das Verfahren das Targeting eines humanen TOI umfasst, das eine Aminosäuresequenz mit dem Ligand zur Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens in dem Menschen umfasst, wobei die Aminosäuresequenz durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codiert wird.
• 38. Ein Verfahren zum TOI-Genotypisieren einer Nukleinsäureprobe eines Menschen, wobei das Verfahren das Identifizieren des Vorhandenseins einer TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% in der Probe umfasst.
• 39. Ein Verfahren zum TOI-Typisieren einer Proteinprobe eines Menschen, wobei das Verfahren das Identifizieren des Vorhandenseins einer TOI-Aminosäuresequenz codiert durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% in der Probe umfasst.
• 40. Das Verfahren nach Absatz 38 oder 39, bei dem man eine Serum-, Blut-, Kot-, Haar-, Urin- oder Speichelprobe von einem Menschen gewinnt, wobei die Nukleinsäure- oder Proteinprobe zur Verwendung in dem Schritt zur Identifizierung der Sequenz gewonnen wird.
• 41. Das Verfahren nach einem der Absätze 38 bis 40, bei dem man einen Liganden gemäß einem der Absätze 17 bis 27 zur Durchführung des Identifikationsschrittes verwendet.
• 42. Ein diagnostisches Kit, umfassend einen Liganden, der zur Bindung an ein humanes TOI fähig ist, welches eine durch eine TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% codierte Aminosäuresequenz umfasst, und eine Anleitung zum Durchführen des Verfahrens nach Absatz 38 oder 39.
• 43. Ein diagnostisches Kit, umfassend eine Nukleinsäuresonde, die eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer TOI-Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von weniger als 50% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von weniger als 50% oder einem RNA-Transkript davon hybridisiert, und eine Anleitung zum Durchführen des Verfahrens nach Absatz 38 oder 39.
• 44. Das Verfahren, der Ligand, die Zusammensetzung, das Kit oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei das TOI durch eine Nukleotidsequenz mit einer kumulativen Humanallelhäufigkeit von 1 bis 10% und/oder einer Gesamthumangenotyphäufigkeit von 1 bis etwa 15% oder von 1 bis 15% codiert wird.
• 45. Das Verfahren, der Ligand, die Zusammensetzung, das Kit oder die Anwendung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei es sich bei dem TOI um ein humanes TOI ausgewählt aus Tabelle 5 handelt; gegebenenfalls zur Behandlung und/oder Prävention einer entsprechenden Krankheit oder eines entsprechenden Leidens, wie in Tabelle 5 ausgeführt.
• 46. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei (i) der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) Folgendes umfasst (e) eine variable Domäne, die von einer Nukleotidsequenz der humanen V-Region codiert wird, wobei sich die V-Nukleotidsequenz von einer Rekombination von humanen VH-, D- und JH-Gensegmenten oder humanen VL- und JL-Gensegmenten ableitet; oder (f) eine Domäne einer konstanten Region, die durch ein C-Region-Gensegment codiert wird; wobei ein erstes Gensegment der Gensegmente von (a) oder des C-Region-Gensegments von (b) einen ersten Einzelnukleotidpolymorphismus (Single Nucleotide Polymorphism, SNP) umfasst, der für einen ersten Aminosäurepolymorphismus codiert; und (ii) das Genom des Menschen den ersten SNP umfasst oder wobei der Mensch (a') eine variable Antikörperdomäne, die einen ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, oder (b') eine konstante Antikörperdomäne, die einen ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, exprimiert.
• 47. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 46, wobei Blut das Menschen im Wesentlichen keine Antikörper umfasst, die spezifisch an die Domäne binden, die den ersten Aminosäurepolymorphismus umfasst, wie in einem in-vitro-Bindungsassay bestimmt.
• 48. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 47, wobei man sich zur Durchführung des Assays der SPR bedient.
• 49. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 46 bis 48, wobei das Genom des Menschen das erste Gensegment (im Fall von (a)) oder das C-Region-Gensegment (im Fall von (b)) umfasst.
• 50. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 46 bis 49, wobei das erste Segment oder ein zweites Segment der Segmente von (a), oder das C-Region-Gensegment von (b) einen zweiten SNP umfasst, der für einen zweiten Aminosäurepolymorphismus codiert; und wobei das Genom des Menschen den zweiten SNP umfasst oder wobei der Mensch (a'') eine variable Domäne eines Antikörpers exprimiert, die den zweiten Aminosäurepolymorphismus umfasst, oder (b'') eine Domäne einer konstanten Region eines Antikörpers exprimiert, die den ersten und den zweiten Aminosäurepolymorphismus umfasst.
• 51. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 50, wobei der Mensch eine variable Domäne eines Antikörpers exprimiert, die den ersten und den zweiten Aminosäurepolymorphismus umfasst.
• 52. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 50 oder 51, wobei der erste und der zweite SNP des Genoms im gleichen Antikörpergensegment enthalten sind.
• 53. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 46 bis 52, wobei jede SNP eine SNP im Gensegment einer variablen Region ist.
• 54. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 46 bis 52, wobei es sich bei den SNP jeweils um ein SNP eines Gensegments einer konstanten Region handelt, wobei z. B. die SNP jeweils ein SNP eines Gensegments einer konstanten gamma-1-Region oder ein SNP eines Gensegments einer konstanten gamma-2-Region oder ein SNP eines Gensegments einer konstanten gamma-3-Region oder ein SNP eines Gensegments einer konstanten gamma-4-Region sind.
• 55. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 54, wobei der erste SNP ein SNP eines CH1-, CH2-, CH3- oder CH4-Gensegments und/oder der zweite SNP ein SNP eines CH1-, CH2-, CH3- oder CH4-Gensegments ist.
• 56. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 46 bis 53, wobei jede SNP eine SNP einer variablen Domäne, z. B. ein VH-Domänen-SNP oder ein Vκ-Domänen-SNP oder ein Vλ-SNP ist.
• 57. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 46 bis 56, wobei die Domäne der konstanten Region von (b) aus einer Antikörper-Fc-Region besteht.
• 58. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 46 bis 57, wobei festgestellt wurde, dass der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) spezifisch an eine oder mehrere wie hier offenbarte humane TOI-Varianten bindet, zum Beispiel mit einem KD von 1 nM oder weniger (z. B. 100 oder 10 pM oder weniger), wie durch SPR bestimmt.
• 59. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze (z. B. gemäß einem der Absätze 46 bis 58), wobei der Ligand einen Antikörper oder ein Fragment umfasst oder daraus besteht, der bzw. das die variable Domäne eines humanen Antikörpers umfasst, erhalten durch die Rekombination eines humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments, wenn es sich bei den variablen Domänen um VH-Domänen handelt); und wobei das Genom des Menschen das humane V-Gensegment umfasst und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Antikörperdomänen umfassen, die sich von der Rekombination des humanen V-Gensegments und eines humanen J-Gensegments (und gegebenenfalls eines humanen D-Gensegments) ableiten.
• 60. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze (z. B. gemäß einem der Absätze 46 bis 59), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane konstante Domäne einer schweren Kette codiert durch eine erste Nukleotidsequenz einer konstanten Region umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren Kette umfasst, die identisch ist zu der ersten Nukleotidsequenz einer konstanten Region, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane konstante Domäne umfassen.
• 61. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze (z. B. gemäß einem der Absätze 46 bis 60), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane CH1-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH1-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH1-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH1-Domäne umfassen.
• 62. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze (z. B. gemäß einem der Absätze 46 bis 61), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane CH2-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH2-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH2-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH2-Domäne umfassen.
• 63. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze (z. B. gemäß einem der Absätze 46 bis 62), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane CH3-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH3-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH3-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH3-Domäne umfassen.
• 64. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze (z. B. gemäß einem der Absätze 46 bis 63), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine humane CH4-Domäne einer schweren gamma-Kette codiert durch eine CH4-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der CH4-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-CH4-Domäne umfassen.
• 65. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze (z. B. gemäß einem der Absätze 46 bis 64), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten humanen TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine Fc-Region einer humanen schweren gamma-Kette codiert durch eine Fc-Nukleotidsequenz umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-Kette umfasst, die identisch ist zu der Fc-Nukleotidsequenz, und/oder der Mensch Antikörper exprimiert, die die humane gamma-Fc-Region umfassen.
• 66. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 61 bis 65, wobei es sich bei der humanen schweren gamma-Kette um eine humane schwere gamma-1-Kette handelt.
• 67. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 61 bis 65, wobei es sich bei der humanen schweren gamma-Kette um eine humane schwere gamma-2-Kette handelt.
• 68. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 61 bis 65, wobei der Ligand eine konstante IGHG1*01-Region der humanen schweren gamma-1-Kette umfasst.
• 69. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 61 bis 65, wobei der Ligand eine konstante IGHG2*01-Region der humanen schweren gamma-1-Kette umfasst.
• 70. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 60 bis 69, wobei der Mensch als positiv für die Nukleotidsequenz der konstanten Region der schweren Kette genotypisiert wurde oder wird.
• 71. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 68, wobei der Mensch als positiv für die humane IGHG1*01-Nukleotidsequenz genotypisiert wurde oder wird.
• 72. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 69, wobei der Mensch als positiv für die humane IGHG2*01-Nukleotidsequenz genotypisiert wurde oder wird.
• 73. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 61 bis 69, wobei der Mensch als positiv für die konstante Domäne, CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc der schweren gamma-Kette phänotypisiert wurde oder wird.
• 74. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 63, (i) falls abhängig von Klausel 23, wobei der Mensch als positiv für eine konstante IGHG1*01-Domäne einer humanen schweren gamma-Kette, CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc phänotypisiert wurde oder wird oder (ii) falls abhängig von Klausel 24, wobei der Mensch als positiv für eine konstante IGHG2*01-Domäne einer humanen schweren gamma-Kette, CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc phänotypisiert wurde oder wird.
• 75. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 61 bis 69 und 71 bis 74, bei dem man den Menschen als positiv für die Nukleotidsequenz der konstanten Region der schweren gamma-Kette, z. B. positiv für die CH1-, CH2-, CH3-, CH4- oder Fc-Nukleotidsequenz der konstanten Domäne der schweren gamma-Kette; positiv für die CH1-, CH2-, CH3-, CH4- oder Fc-Nukleotidsequenz der konstanten IGHG1*01-Region der humanen schweren gamma-Kette; oder positiv für die CH1-, CH2-, CH3-, CH4- oder Fc-Nukleotidsequenz der konstanten IGHG2*01-Region der humanen schweren gamma-Kette genotypisiert.
• 76. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 61 bis 69 und 71 bis 75, bei dem man den Menschen als positiv für die konstante Region der schweren gamma-Kette, z. B. positiv für CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc der konstanten Domäne der schweren gamma-Kette; positiv für CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc der konstanten IGHG1*01-Domäne der humanen schweren gamma-Kette; oder positiv für CH1, CH2, CH3, CH4 oder Fc der konstanten IGHG2*01-Domäne der humanen schweren gamma-Kette phänotypisiert.
• 77. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze (z. B. gemäß einer der Klauseln 46 bis 76), wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Region einer humanen schweren gamma-1-Kette, die ein Asp, welches der Position 204 von SEQ ID NO: 42 entspricht, oder ein Leu, welches der Position 206 von SEQ ID NO: 42 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-1-Kette umfasst, die für ein solches Asp oder Leu codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-1-Regionen umfassen, die ein solches Asp oder Leu umfassen.
• 78. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 77, wobei der Ligand eine konstante Region der humanen schweren gamma-1-Kette umfasst, die ein Asp, das Position 204 von SEQ ID NO: 42 entspricht, und ein Leu, das Position 206 von SEQ ID NO: 42 entspricht, umfasst.
• 79. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 77 oder 78, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz der konstanten Region der schweren gamma-1-Kette umfasst, die für ein solches Asp oder Leu codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die solch ein Asp oder Leu umfassende konstante Regionen der humanen gamma-1-Kette umfassen.
• 80. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 77, 78 oder 79, wobei der Ligand eine konstante IGHG1*01-Region einer humanen schweren gamma-1-Kette, z. B. eine Fc-, CH1-, CH2- und/oder CH3-Domäne codiert durch humanes IGHG1*01, umfasst.
• 81. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 77 bis 80, wobei das Genom des Menschen eine humane IGHG1*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante Domänen umfassen, die durch eine humane IGHG1*01-Nukleotidsequenz codiert werden.
• 82. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 77 bis 81, wobei der Ligand eine durch humanes IGHG1*01 codierte Gelenkregion umfasst.
• 83. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 77 bis 82, wobei der Ligand einen Antikörper umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper schwere Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 61 umfassen.
• 84. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 77 bis 83, wobei der Mensch europäischer Abstammung ist.
• 85. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 77 bis 84, wobei der Mensch als positiv für das Asp und/oder Leu genotypisiert wurde oder wird.
• 86. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 77 bis 85, wobei der Mensch als positiv für humane IGHG1*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 87. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 77 bis 86, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGHG1*01 CH3 phänotypisiert wurde oder wird.
• 88. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 77 bis 87, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Genom ein Condon/Codons umfasst, die für das Asp und/oder Leu codieren; oder humanes IGHG1*01 umfasst; oder humanes IGHG1*01 CH3 umfasst.
• 89. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 77 bis 88, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Phänotyp das Asp und/oder Leu; eine humane IGHG1*01-Region; oder ein humanes IGHG1*01 CH3 umfasst.
• 90. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Region einer humanen schweren gamma-2-Kette, die eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Pro, welches der Position 72 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Asn, welches der Position 75 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Phe, welches der Position 76 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Val, welches der Position 161 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und einem Ala, welches der Position 257 von SEQ ID NO: 44 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-2-Kette umfasst, die für eine solche ausgewählte Aminosäure codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-2-Regionen umfassen, die eine solche ausgewählte Aminosäure umfassen.
• 91. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 90, wobei der Ligand eine humane konstante Region einer schweren gamma-2-Kette, die (i) ein Pro, welches der Position 72 von SEQ ID NO: 44 entspricht, ein Asn, welches der Position 75 von SEQ ID NO: 44 entspricht, ein Phe, welches der Position 76 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und gegebenenfalls (ii) ein Val, welches der Position 161 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und/oder ein Ala, welches der Position 257 von SEQ ID NO: 44 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-2-Kette umfasst, die für eine solche Aminosäure von (i) codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-2-Regionen umfassen, die eine solche ausgewählte Aminosäure von (i) umfassen.
• 92. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 90 oder 91, wobei der Ligand eine humane konstante Region einer schweren gamma-2-Kette, die (i) ein Val, welches der Position 161 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und ein Ala, welches der Position 257 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und gegebenenfalls (ii) eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Pro, welches der Position 72 von SEQ ID NO: 44 entspricht, einem Asn, welches der Position 75 von SEQ ID NO: 44 entspricht, und einem Phe, welches der Position 76 von SEQ ID NO: 44 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer schweren gamma-2-Kette umfasst, die für eine solche Aminosäure von (i) codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-2-Regionen umfassen, die eine solche ausgewählte Aminosäure von (i) umfassen.
• 93. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 92, wobei der Ligand eine konstante IGHG2*01-Region einer humanen schweren gamma-2-Kette, z. B. eine Fc-, CH1-, CH2- und/oder CH3-Domäne codiert durch humanes IGHG2*01, umfasst.
• 94. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 93, wobei das Genom des Menschen eine humane IGHG2*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante Domänen umfassen, die durch eine humane IGHG2*01-Nukleotidsequenz codiert werden.
• 95. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 94, wobei der Ligand eine durch humanes IGHG2*01 codierte Gelenkregion umfasst.
• 96. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 95, wobei der Ligand einen Antikörper umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper schwere Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 63 oder 65 umfassen.
• 97. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 96, wobei der Mensch europäischer, afrikanisch-amerikanischer oder europäisch-amerikanischer Abstammung ist.
• 98. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 97, wobei der Mensch als positiv für eine, mehrere oder alle der Pro, Asn, Phe, Val und Ala genotypisiert wurde oder wird.
• 99. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 98, wobei der Mensch als positiv für humane IGHG2*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 100. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 99, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGHG2*01 CH1 phänotypisiert wurde oder wird.
• 101. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 100, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGHG2*01 CH2 phänotypisiert wurde oder wird.
• 102. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 101, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGHG2*01 CH3 phänotypisiert wurde oder wird.
• 103. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 90 bis 102, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Genom ein Condon/Codons umfasst, die für einen, mehrere oder alle der Pro, Asn, Phe, Val und Ala codieren; oder humanes IGHG2*01 umfasst; oder ein humanes IGHG2*01 CH1, CH2 und/oder CH3 umfasst.
• 104. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 90 bis 103, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Phänotyp einen, mehrere oder alle der Pro, Asn, Phe, Val und Ala; eine humane IGHG2*01-Region; oder ein humanes IGHG2*01 CH1, CH2 und/oder CH3 umfasst.
• 105. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 90 bis 104, wobei der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante gamma-2-Regionen umfassen, die ein solches Pro, Asn, Phe, Val und Ala umfassen.
• 106. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante Region einer humanen leichten kappa-Kette, die ein Val, welches der Position 84 von SEQ ID NO: 50 entspricht, oder ein Cys, welches der Position 87 von SEQ ID NO: 50 entspricht, umfasst, umfasst, und wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz einer konstanten Region einer leichten kappa-Kette umfasst, die für ein solches Val oder Cys codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante Regionen der humanen leichten kappa-Kette umfassen, die ein solches Val oder Cys umfassen.
• 107. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 106, wobei der Ligand eine konstante Region der humanen leichten kappa-Kette umfasst, die ein Val, das Position 84 von SEQ ID NO: 50 entspricht, und ein Cys, das Position 87 von SEQ ID NO: 50 entspricht, umfasst.
• 108. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 106 oder 107, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz der konstanten Region der leichten kappa-Kette umfasst, die für ein solches Val oder Cys codiert, oder der Mensch Antikörper exprimiert, die solch ein Val oder Cys umfassende konstante Regionen der humanen kappa-Kette umfassen.
• 109. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 106 bis 108, wobei der Antikörper oder das Fragment eine konstante IGKC*01-Region der humanen leichten kappa-Kette umfasst.
• 110. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 106 bis 109, wobei der Ligand einen Antikörper umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper leichte Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 62 oder 66 umfassen.
• 111. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 106 bis 110, wobei der Ligand einen Antikörper umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper eine variable Domäne der leichten Kette umfasst, die sich aus einer Rekombination eines humanen Vκ-Gensegments und eines humanen Jκ-Gensegments ableitet, wobei es sich bei dem Jκ-Gensegment um IGK32*01 (SEQ ID NO: 57) handelt.
• 112. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 106 bis 111, wobei der Mensch als positiv für das Val und/oder Cys phänotypisiert wurde oder wird.
• 113. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 106 bis 112, wobei der Mensch als positiv für humane IGKC*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 114. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 106 bis 113, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGKC*01-Domäne phänotypisiert wurde oder wird.
• 115. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 106 bis 114, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Genom ein Condon/Codons umfasst, die für das Val und/oder Cys codieren; oder humanes IGKC*01 umfasst.
• 116. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 106 bis 115, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Phänotyp ein solches Val und/oder Cys umfasst; oder eine humane IGKC*01-Domäne umfasst.
• 117. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 106 bis 116, wobei der Mensch Antikörper exprimiert, die humane konstante kappa-Domänen umfassen, die ein solches Val und Cys umfassen, z. B. konstante IGKC*01-Domänen exprimiert.
• 118. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Ligand (der z. B. einen Antikörper oder ein Fragment oder einen Fc-kondensierten TOI-Rezeptor umfasst oder daraus besteht) eine konstante IGLC2*01-Region der humanen leichten Kette umfasst; und wobei das Genom des Menschen eine humane IGLC2*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die konstante IGLC2*01-Regionen der humanen leichten Kette umfassen.
• 119. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 118, wobei der Antikörper leichte Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 64 umfassen.
• 120. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 118 oder 119, wobei der Mensch als positiv für humanes IGLC2*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 121. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 118 bis 120, wobei der Mensch als positiv für eine humane IGLC2*01-Domäne phänotypisiert wurde oder wird.
• 122. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 118 bis 212, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Genom humanes IGLC2*01 umfasst.
• 123. Das Verfahren oder die Anwendung nach einer der Klauseln 73 bis 77, umfassend die Auswahl eines Menschen, dessen Phänotyp eine humane IGLC2*01-Domäne umfasst.
• 124. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 108 bis 123, wobei der Mensch humane konstante lambda-IGLC2*01-Domänen exprimiert.
• 125. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Ligand einen Antikörper oder ein Fragment umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper bzw. das Fragment eine VH-Domäne umfasst, die sich aus der Rekombination eines humanen VH-Gensegments, eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Gensegments ableitet, wobei das VH-Gensegment ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus (i) IGHV1-18*01 und das Genom des Menschen eine humane IGHV1-18*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGHV1-18*01 ableiten; oder (ii) IGVH1-46*01 und das Genom des Menschen eine humane IGHV1-46*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich von der Rekombination von humanem IGHV1-46*01 ableiten.
• 126. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 125, wobei der Antikörper oder das Fragment eine, mehrere oder alle einer durch humanes IGHG2*01 codierte CH 1-Domäne, CH2-Domäne, CH3-Domäne, Hinge-Region oder Fc-Region umfasst.
• 127. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 125 oder 126, wobei der Antikörper oder das Fragment schwere Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 63 oder 65 umfassen.
• 128. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 125 bis 127, wobei der Mensch als positiv für das ausgewählte VH-Gensegment, positiv für humanes IGHV1-18*01 oder IGVH1-46*01 genotypisiert wurde oder wird.
• 129. Das Verfahren oder die Anwendung nach einem der Absätze 125 bis 128, umfassend die Genotypisierung des Menschen als positiv für das ausgewählte VH-Gensegment, z. B. positiv für humanes IGHV1-18*01 oder IGVH1-46*01.
• 130. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Ligand einen Antikörper oder ein Fragment umfasst oder daraus besteht, wobei der Antikörper bzw. das Fragment eine VL-Domäne umfasst, die sich aus der Rekombination eines humanen VL-Gensegments und eines humanen JL-Gensegments ableitet, wobei das VL-Gensegment ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus (i) IGKV4-1*01 und das Genom des Menschen eine humane IGKV4-1*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGKV4-1*01 ableiten; (ii) IGLV2-14*01 und das Genom des Menschen eine humane IGLV2-14*01-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGLV2-14*01 ableiten; oder (iii) IGKV1-13*02 und das Genom des Menschen eine humane IGKV1-13*02-Nukleotidsequenz umfasst oder der Mensch Antikörper exprimiert, die variable Domänen umfassen, die sich aus der Rekombination von humanem IGKV1-13*02 ableiten.
• 131. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 130, wobei der Antikörper leichte Ketten umfasst, die SEQ ID NO: 62, 64 oder 66 umfassen.
• 132. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach Absatz 130 oder 131, wobei der Antikörper oder das Fragment eine variable Domäne der leichten Kette umfasst, die sich aus einer Rekombination eines humanen Vκ-Gensegments und eines humanen Jκ-Gensegments ableitet, wobei es sich bei dem Jκ-Gensegment um IGKJ2*01 (SEQ ID NO: 57, wobei (i) oder (iii) gilt) handelt.
• 133. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der Absätze 130 bis 132, wobei der Mensch als positiv für das ausgewählte VL-Gensegment, z. B. positiv für humanes IGKV4-1*01, IGLV2-14*01 oder IGKV1-13*02, genotypisiert wurde oder wird.
• 134. Das Verfahren oder die Anwendung nach Absatz 133, umfassend die Genotypisierung des Menschen als positiv für das ausgewählte VL-Gensegment, z. B. Genotypisieren des Menschen als positiv für humanes IGKV4-1*01, IGLV2-14*01 oder IGKV1-13*02.
• 135. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei der Ligand (z. B. der Antikörper oder das Fragment) an das humane TOI mit einer Dissoziationskonstante (Kd) von 1 nM oder weniger, bestimmt mittels SPR, (z. B. 100, 10 oder 1 pM oder weniger) bindet.
• 136. Der Ligand, das Verfahren, die Anwendung, das Kit oder die Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Absätze, wobei es sich bei dem TOI um humane PCSK9 oder humanen IL6R handelt.

• A method for treating or preventing a disease or condition in a human, wherein the disease or condition is mediated by a target of interest (TOI), wherein the TOI is present in humans as various polymorphic variants, wherein the method Includes: a. administering to a human an anti-TOI ligand targeting a TOI variant in human and treating or preventing that disease, wherein the TOI in the human being is from a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50 % and / or wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence having a total typhoid frequency of less than 50%; where b. the human was or is genotyped as being positive for the nucleotide sequence prior to step (a) or has been or will be phenotyped as positive for the TOI variant.
• 2. The method of paragraph 1, wherein prior to step (a), it has been or is determined that the ligand is capable of binding to the TOI variant.
• 3. A method for treating or preventing a disease or condition in a human, wherein the disease or condition is mediated by a target of interest (TOI), wherein the TOI is present in humans as various polymorphic variants, wherein the method Includes: a. administering to a human an anti-TOI ligand targeting a TOI variant in human and treating or preventing that disease, wherein the TOI in the human being is from a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50 % and / or wherein the TOI in the human is encoded by a nucleotide sequence having a total typhoid frequency of less than 50%; where b. before step (a) the ligand has been or is determined to be capable of binding to the TOI variant.
• 4. The method of paragraph 3, wherein the human genome comprises a nucleotide sequence encoding the TOI variant; and prior to step (a), it has been or is determined that the nucleotide sequence has a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%.
• 5. The method of paragraph 3 or 4, wherein the human has been or is genotyped positive for the nucleotide sequence variant prior to step (a).
• 6. The method of any one of the preceding paragraphs, wherein the human was or is phenotyped prior to step (a) as positive for the TOI variant.
• 7. The method of any preceding paragraph, wherein the frequency is less than 10 or 15%.
• 8. The method of any one of the preceding paragraphs, wherein the ligand is capable of binding two or more different TOI variants each represented by a nucleotide sequence having a cumulative human allelicity of less than 50% and / or having a total cumulative typhus less than 50% coded.
• A method for treating or preventing a disease or condition in a human, wherein the disease or condition is mediated by a target of interest (TOI), wherein the TOI is present in humans as a distinct polymorphic variant, the method Includes: a. administering to a human an anti-TOI ligand targeting a TOI variant in human and treating or preventing that disease, wherein the TOI in the human is a variant that is of a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of greater than 50% and / or a total cumulative typhus of greater than 50%; where b. the human was or is genotyped before step (a) as negative for a nucleotide sequence variant having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total syntactic frequency of less than 50%; or was phenotyped negative for a TOI variant encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total heterogenous typhus of less than 50%.
• 10. The method of paragraph 9, wherein before step (a), the human is phenotyped as being positive for the most common TOI variant or genotyped for the nucleotide sequence thereof.
• 11. The method of paragraph 9 or 10, wherein prior to step (a), it has been or is determined that the ligand is capable of binding to the most abundant TOI variant.
• 12. The method of paragraph 9, 10 or 11, wherein prior to step (a), it has been or is determined that the ligand is substantially incapable of neutralizing or inhibiting the TOI variant recited in step (b).
• 13. The method of any one of paragraphs 9 to 12, wherein the ligand is capable of binding to the most abundant TOI variant.
• 14. The method of any one of paragraphs 9 to 13, wherein the ligand is capable of binding to two or more different TOI variants, each capable of a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency greater than 50%.
• 15. The method of any one of the preceding paragraphs, wherein it has been established that the nucleotide sequence variant recited in step (a) is present in at least 2 different human ethnic populations.
• 16. The method of any one of the preceding paragraphs, wherein the human frequency is the frequency in a database of naturally occurring sequences from at least 15 different human ethnic populations comprising at least 1000 sequences.
• 17. An anti-human TOI ligand for use in a method of treating and / or preventing a TOI-mediated disease or TOI-mediated disease in a human, wherein the TOI is present in humans as various polymorphic variants, and wherein the The human genome has a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, the method comprising administering the ligand to a human.
• 18. The ligand according to paragraph 17, wherein it has been or is determined that the ligand is capable of binding to the human TOI encoded by the nucleotide sequence.
• 19. A ligand that binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total total sexuality less than 50%, for use in a method comprising A step of using the ligand to target the TOI in a human for the treatment and / or prevention of a TOI-mediated disease or a TOI-mediated disease, which process comprises administering the ligand to a human.
• 20. The ligand according to any one of paragraphs 17 to 19, wherein the human has been or is genotyped as positive for the TOI nucleotide sequence with a cumulative human allelic frequency of less than 50%. The ligand of any one of paragraphs 17 to 19, wherein the human is or has been genotyped as positive for the TOI nucleotide sequence having a total total sexuality of less than 50%.
• 21. The ligand of any one of paragraphs 17 to 20, wherein the human has been or is being phenotyped for a TOI encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total syntactic frequency of less than 50%.
• 22. The ligand of any one of paragraphs 17 to 21, wherein the human has been or is being genotyped as heterozygous for a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total syntactic frequency of less than 50%; wherein the human is or may have been fully genotyped as a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelicity of greater than 50% and / or having a total total sexuality greater than 50%.
• 23. The ligand of any one of paragraphs 17 to 22, wherein the human genome has been or is being homozygous for a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or having a total total sexuality less than 50%.
• 24. The ligand according to any one of paragraphs 17 to 23, wherein the ligand comprises an antibody binding site that binds a human TOI comprising an amino acid sequence represented by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or with a Total typhoid frequency is coded less than 50%; and which has been or may be determined to be capable of such binding.
• 25. The ligand of paragraph 24, wherein the ligand is an antibody or an antibody fragment.
• 26. The ligand of any one of paragraphs 17 to 23, wherein the ligand comprises a nucleotide sequence that specifically hybridizes to a TOI nucleotide sequence that has a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, or an RNA transcript thereof; and / or the ligand comprises a nucleotide sequence comprising at least 10 consecutive nucleotides of a nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or having a total total sexuality less than 50%, or an antisense sequence thereof.
• 27. The ligand of any one of paragraphs 17 to 26, wherein the human genome comprises a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and the sequence is found in at least two distinct ethnic populations.
• 28. A pharmaceutical composition or kit for the treatment or prevention of a condition or illness mediated by a TOI as recited in any of the preceding paragraphs, the composition or kit comprising the ligand of any one of paragraphs 17 to 27; and optionally in combination with a label or instructions for use, for the treatment and / or prevention of the disease or condition in a human; the label or instruction may include a drug approval number issued by an approval authority (eg, an FDA or EMA approval number); wherein the kit optionally comprises an injection pen or an IV container comprising the ligand.
• 29. A method for producing a binding site for an antibody to a human TOI, the method comprising obtaining a plurality of anti-TOI antibody binding sites, screening the antibody binding sites for binding to TOI comprising an amino acid sequence encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency less than 50%, or a peptide thereof comprising an amino acid variation of the corresponding sequence encoded by the TOI coding nucleotide sequence having the highest cumulative human allele frequency and / or highest total typhus frequency, and isolating one in the screening step binding antibody binding site.
• 30. A method for producing an antibody to a human TOI, the method comprising immunizing a non-human vertebrate (eg, a mouse or rat) with a TOI comprising an amino acid sequence encoded by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50 and / or a total typhoid frequency less than 50%, or to a peptide thereof comprising an amino acid variation from the corresponding sequence encoded by the TOI coding nucleotide sequence having the highest cumulative human allele frequency and / or highest total typhus frequency, and isolating an antibody which binds to a TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, and optionally the production of a TOI binding fragment or derivative of the isolated antibody.
• 31. The method of paragraph 29 or 30, comprising the step of recovering a nucleic acid encoding the antibody, fragment, derivative or binding site, and optionally inserting the nucleic acid into an expression vector.
• 32. A kit for TOI genotyping of a human, the kit comprising a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that specifically hybridizes to a TOI nucleotide sequence selected to have a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or has a total typhoid frequency of less than 50%, or an RNA transcript thereof; and / or the nucleic acid comprises a nucleotide sequence comprising at least 10 consecutive nucleotides of a TOI nucleotide sequence having a cumulative human all-time frequency of less than 50% and / or a total total sexuality of less than 50%, or an antisense sequence thereof.
• 33. A kit for human TOI genotyping or phenotyping, wherein the kit comprises a ligand according to any one of paragraphs 17 to 27 or an antibody, fragment or derivative produced by the method of any of paragraphs 29 to 31.
• 34. The use of an anti-TOI ligand that binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, in the preparation of a human TOI A medicament for the treatment and / or prevention of a TOI-mediated disease or a TOI-mediated condition in a human whose genome comprises a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhus sexuality of less than 50% ,
• 35. The use of an anti-TOI ligand which binds to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%; To provide a medicament for targeting the TOI in a human for the treatment and / or prevention of a TOI mediated disease or TOI mediated disease.
• 36. A method for targeting a TOI for the treatment and / or prevention of TOI-mediated disease or TOI-mediated disease in a human, the method comprising administering to a human an anti-TOI ligand having a TOI nucleotide sequence comprising a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, wherein the target is a TOI encoded by the nucleotide sequence.
• 37. The method of paragraph 36, wherein the method comprises targeting a human TOI comprising an amino acid sequence with the ligand for treating and / or preventing the disease in humans, wherein the amino acid sequence is selected by a nucleotide sequence having a cumulative Humanallelhäufigkeit of less than 50% and / or a total cumulative typhus less than 50% is encoded.
• 38. A method of TOI genotyping a nucleic acid sample of a human, the method comprising identifying the presence of a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% in the sample.
• 39. A method of TOI typing a human protein sample, the method comprising identifying the presence of a TOI amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelicity of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% the sample comprises.
• 40. The method of paragraph 38 or 39, comprising obtaining a serum, blood, faeces, hair, urine or saliva sample from a human, wherein the nucleic acid or protein sample is for use in the sequence identification step is won.
• 41. The method according to any one of paragraphs 38 to 40, wherein a ligand according to any one of paragraphs 17 to 27 is used to carry out the identification step.
• 42. A diagnostic kit comprising a ligand capable of binding to a human TOI comprising an amino acid sequence encoded by a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelic frequency of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50%, and instructions for carrying out the procedure referred to in paragraphs 38 or 39.
• 43. A diagnostic kit comprising a nucleic acid probe comprising a nucleotide sequence that specifically hybridizes to a TOI nucleotide sequence having a cumulative human allelicity of less than 50% and / or a total typhoid frequency of less than 50% or an RNA transcript thereof, and a guide to carrying out the procedure referred to in paragraphs 38 or 39.
• 44. The method, ligand, composition, kit or use of any one of the preceding paragraphs, wherein the TOI is represented by a nucleotide sequence having a cumulative human allele frequency of 1 to 10% and / or a total typhus of 1 to about 15% or of 1 to 15% is coded.
• 45. The method, ligand, composition, kit or use of any one of the preceding paragraphs, wherein the TOI is a human TOI selected from Table 5; optionally for the treatment and / or prevention of a corresponding disease or condition, as set out in Table 5.
• The ligand, method, application, kit or composition of any of the preceding paragraphs, wherein (i) the ligand (e.g., the antibody or fragment) comprises (e) a variable domain derived from a nucleotide sequence of the human V region is encoded, wherein the V nucleotide sequence is derived from a recombination of human VH, D and JH gene segments or human VL and JL gene segments; or (f) a domain of a constant region encoded by a C region gene segment; wherein a first gene segment of the gene segments of (a) or the C region gene segment of (b) comprises a first single nucleotide polymorphism (SNP) encoding a first amino acid polymorphism; and (ii) the human genome comprises the first SNP, or wherein human (a ') expresses a variable antibody domain comprising a first amino acid polymorphism, or (b') an antibody constant domain comprising a first amino acid polymorphism.
• 47. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 46, wherein blood comprises human substantially no antibodies that bind specifically to the domain comprising the first amino acid polymorphism, such as in an in vitro Binding assay determined.
• 48. The ligand, method, application, kit or composition referred to in paragraph 47, using the SPR assay.
• 49. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 46 to 48, wherein the human genome comprises the first gene segment (in the case of (a)) or the C region gene segment (in the case of (a)) from (b)).
• 50. The ligand, method, application, kit or composition of any of paragraphs 46 to 49, wherein the first segment or a second segment of the segments of (a), or the C region gene segment of (b) a second SNP coding for a second amino acid polymorphism; and wherein the human genome comprises the second SNP or wherein human (a ") expresses a variable domain of an antibody comprising the second amino acid polymorphism, or (b '') expresses a constant region domain of an antibody comprising the first and second amino acid polymorphisms.
• 51. The ligand, method, use, kit or composition of paragraph 50, wherein the human expresses a variable domain of an antibody comprising the first and second amino acid polymorphisms.
• 52. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 50 or 51, wherein the first and second SNP of the genome are contained in the same antibody gene segment.
• 53. The ligand, method, application, kit or composition of any of paragraphs 46 to 52, wherein each SNP is an SNP in the variable region gene segment.
• 54. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 46 to 52, wherein the SNP is a SNP of a constant region gene segment, where e.g. For example, the SNP is an SNP of a gamma-1 constant region gene segment or an SNP of a gamma-2 constant region gene segment or an SNP of a gamma-3 constant region gene segment or SNP of a gamma-4 constant gene segment Region.
• 55. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 54, wherein the first SNP is an SNP of a CH1, CH2, CH3 or CH4 gene segment and / or the second SNP is an SNP of a CH1 gene. , CH2, CH3 or CH4 gene segment.
• 56. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 46 to 53, wherein each SNP comprises a variable domain SNP, e.g. A VH domain SNP or a Vκ domain SNP or a Vλ SNP.
• 57. The ligand, method, application, kit, or composition of any one of paragraphs 46 to 56, wherein the constant region domain of (b) consists of an antibody Fc region.
• 58. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 46 to 57, wherein it has been found that the ligand (eg, the antibody or fragment) specifically binds to one or more as disclosed herein human TOI variants bind, for example with a KD of 1 nM or less (eg 100 or 10 pM or less) as determined by SPR.
• The ligand, method, use, kit or composition of any one of the preceding paragraphs (eg, according to any of paragraphs 46 to 58), wherein the ligand comprises or consists of an antibody or a fragment, the or comprising the variable domain of a human antibody obtained by the recombination of a human V gene segment and a human J gene segment (and optionally a human D gene segment, when the variable domains are V H domains); and wherein the human genome comprises the human V gene segment and / or human expressing antibodies comprising antibody variable domains resulting from recombination of the human V gene segment and a human J gene segment (and optionally a human D gene segment) derived.
• 60. The ligand, method, application, kit or composition of any one of the preceding paragraphs (eg, according to any of paragraphs 46 to 59), wherein the ligand (eg, an antibody or a fragment or comprises or consists of an Fc-fused human TOI receptor) comprises a human heavy chain constant domain encoded by a first nucleotide sequence of a constant region; and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a heavy chain constant region identical to the first nucleotide sequence of a constant region and / or human expressing antibodies comprising the human constant domain.
• 61. The ligand, method, application, kit, or composition of any one of the preceding paragraphs (eg, according to any of paragraphs 46 to 60), wherein the ligand (eg, an antibody or a fragment or comprises or consists of an Fc-fused human TOI receptor) comprises a human heavy Gamma chain CH1 domain encoded by a CH1 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH1 nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH1 domain.
• 62. The ligand, method, application, kit, or composition of any one of the preceding paragraphs (eg, according to any of paragraphs 46 to 61), wherein the ligand (eg, an antibody or a fragment or comprising or consisting of a Fc-fused human TOI receptor) comprises a human heavy Gamma chain CH2 domain encoded by a CH2 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH2 nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH2 domain.
• 63. The ligand, method, use, kit, or composition of any one of the preceding paragraphs (eg, according to any of paragraphs 46 to 62), wherein the ligand (eg, an antibody or a fragment or comprising or consisting of a Fc-fused human TOI receptor) comprises a human G3 heavy chain gamma chain encoded by a CH3 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH3 nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH3 domain.
• 64. The ligand, method, application, kit or composition of any one of the preceding paragraphs (eg, according to any one of paragraphs 46 to 63), wherein the ligand (eg, an antibody or a fragment or comprising or consisting of a Fc-fused human TOI receptor) comprises a human heavy Gamma chain CH4 domain encoded by a CH4 nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the CH4 nucleotide sequence, and / or human expressing antibodies comprising the human gamma CH4 domain.
• 65. The ligand, method, application, kit, or composition of any one of the preceding paragraphs (eg, according to any of paragraphs 46 to 64), wherein the ligand (eg, an antibody or a fragment or comprising or consisting of an Fc-fused human TOI receptor) comprises a Fc region of a human heavy gamma chain encoded by an Fc nucleotide sequence; and wherein the human genome comprises a heavy gamma chain constant region nucleotide sequence identical to the Fc nucleotide sequence and / or human expressing antibodies comprising the human gamma Fc region.
• 66. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 61 to 65, wherein the human gamma heavy chain is a human gamma 1 heavy chain.
• 67. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 61 to 65, wherein the human heavy gamma chain is a human gamma 2 heavy chain.
• 68. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 61 to 65, wherein the ligand comprises a human gamma-1 heavy chain constant IGHG1 * 01 region.
• 69. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 61 to 65, wherein the ligand comprises a human gamma-1 heavy chain constant IGHG2 * 01 region.
• 70. The ligand, method, use, kit or composition of any of paragraphs 60 to 69, wherein the human is or has been genotyped as positive for the nucleotide sequence of the heavy chain constant region.
• 71. The ligand, method, use, kit or composition of paragraph 68, wherein the human is or has been genotyped as positive for the human IGHG1 * 01 nucleotide sequence.
• 72. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 69, wherein the human is or has been genotyped as positive for the human IGHG2 * 01 nucleotide sequence.
• 73. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 61 to 69, wherein the human has been phenotyped as positive for the gamma heavy chain constant domain, CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc or will.
• 74. The ligand, method, application, kit or composition referred to in paragraph 63, (i) if dependent on clause 23, wherein the human is positive for a human heavy gamma chain constant IGHG1 * 01 domain, CH1 , CH2, CH3, CH4 or Fc, or (ii) if dependent on clause 24, wherein the human is positive for a constant IGHG2 * 01 domain of a human heavy gamma chain, CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc has been phenotyped or will.
• 75. The method or use of any of paragraphs 61 to 69 and 71 to 74, wherein human is said to be positive for the heavy gamma chain constant region nucleotide sequence, e.g. B. positive for the heavy gamma chain constant domain CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc nucleotide sequence; positive for the CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc nucleotide sequence of the human heavy gamma heavy chain IGHG1 * 01 constant region; or positively genotyped for the CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc nucleotide sequence of the human heavy gamma chain IGHG2 * 01 constant region.
• 76. The method or use of any one of paragraphs 61 to 69 and 71 to 75, wherein human is said to be positive for the heavy gamma chain constant region, e.g. B. positive for CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc of the gamma heavy chain constant domain; positive for CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc of the human heavy gamma chain IGHG1 * 01 constant domain; or positively phenotyped for CH1, CH2, CH3, CH4 or Fc of the human heavy gamma chain IGHG2 * 01 constant domain.
• 77. The ligand, method, application, kit or composition of any one of the preceding paragraphs (eg, according to any one of clauses 46 to 76), wherein the ligand (eg, an antibody or a fragment, or comprises or consists of a Fc-fused TOI receptor) a human gamma-1 heavy chain constant region comprising an Asp corresponding to position 204 of SEQ ID NO: 42 or a Leu encoding position 206 of SEQ ID NO: 42 corresponds to, comprises, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a gamma-1 heavy chain constant region which codes for such an Asp or Leu or the human expresses antibodies which express human constant gamma 1 regions comprising such an Asp or Leu.
• 78. The ligand, method, use, kit or composition of paragraph 77, wherein the ligand comprises a human gamma-1 heavy chain constant region corresponding to an Asp, position 204 of SEQ ID NO: 42 and a leu corresponding to position 206 of SEQ ID NO: 42.
• 79. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 77 or 78, wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of the gamma-1 heavy chain constant region that encodes such an Asp or Leu, or human expressing antibodies comprising such human gamma-1 chain constant regions comprising such Asp or Leu.
• 80. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 77, 78 or 79, wherein the ligand is a human heavy gamma-1 heavy chain IGHG1 * 01 region, e.g. A Fc, CH1, CH2 and / or CH3 domain encoded by human IGHG1 * 01.
• 81. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 77 to 80, wherein the human genome comprises a human IGHG1 * 01 nucleotide sequence, or human expressing antibodies comprising human constant domains, the be encoded by a human IGHG1 * 01 nucleotide sequence.
• 82. The ligand, method, use, kit or composition of any of paragraphs 77 to 81, wherein the ligand comprises a hinge region encoded by human IGHG1 * 01.
• 83. The ligand, method, use, kit, or composition of any of paragraphs 77 to 82, wherein the ligand comprises or consists of an antibody, wherein the antibody comprises heavy chains comprising SEQ ID NO: 61.
• 84. The ligand, method, use, kit or composition of any of paragraphs 77 to 83, wherein the human being is of European descent.
• 85. The ligand, method, use, kit or composition of any of paragraphs 77 to 84, wherein the human has been or is being genotyped positive for the Asp and / or Leu.
• 86. The ligand, method, use, kit or composition of any of paragraphs 77 to 85, wherein the human is or has been genotyped as positive for human IGHG1 * 01.
• 87. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 77 to 86, wherein human is or has been phenotyped as positive for a human IGHG1 * 01 CH3.
• 88. The method or use of any one of paragraphs 77 to 87, comprising selecting a human whose genome comprises a Condon / codon coding for the Asp and / or Leu; or human IGHG1 * 01; or human IGHG1 * 01 CH3.
• 89. The method or use of any one of paragraphs 77 to 88, comprising selecting a human whose phenotype is Asp and / or Leu; a human IGHG1 * 01 region; or a human IGHG1 * 01 CH3.
• 90. The ligand, method, application, kit or composition of any one of the preceding paragraphs, wherein the ligand (eg, comprises or consists of an antibody or a fragment or a Fc-fused TOI receptor) constant region of a human heavy gamma-2 chain containing one amino acid selected from the group consisting of a pro, which corresponds to position 72 of SEQ ID NO: 44, an Asn corresponding to position 75 of SEQ ID NO: 44, a Phe corresponding to position 76 of SEQ ID NO: 44, a Val corresponding to position 161 of SEQ ID NO: 44, and comprises an Ala corresponding to position 257 of SEQ ID NO: 44, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a gamma 2 heavy chain constant region indicative of a or human expressing antibodies comprising human gamma 2 constant regions comprising such a selected amino acid.
• 91. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 90, wherein the ligand is a human gamma 2 heavy chain constant region comprising (i) a pro which is position 72 of SEQ ID NO 44, an Asn corresponding to position 75 of SEQ ID NO: 44, a Phe corresponding to position 76 of SEQ ID NO: 44, and optionally (ii) a Val corresponding to position 161 of SEQ ID NO : 44, and / or comprises an Ala corresponding to position 257 of SEQ ID NO: 44, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a gamma 2 heavy chain constant region indicative of such Or human expressing antibodies comprising human gamma 2 constant regions comprising such a selected amino acid of (i).
• 92. The ligand, method, use, kit or composition of paragraph 90 or 91, wherein the ligand is a human gamma 2 heavy chain constant region which comprises (i) a Val which is at position 161 of SEQ ID NO: 44, and an Ala corresponding to position 257 of SEQ ID NO: 44, and optionally (ii) an amino acid selected from the group consisting of a pro corresponding to position 72 of SEQ ID NO: 44, an Asn corresponding to position 75 of SEQ ID NO: 44 and a Phe corresponding to position 76 of SEQ ID NO: 44, and wherein the human genome comprises a nucleotide sequence of a heavy gamma constant region 2 chain which encodes such amino acid of (i), or human expressing antibodies comprising human gamma 2 constant regions comprising such selected amino acid of (i).
• 93. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 90 to 92, wherein the ligand is a human heavy gamma 2 chain constant IGHG2 * 01 region, e.g. A Fc, CH1, CH2 and / or CH3 domain encoded by human IGHG2 * 01.
• 94. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 90 to 93, wherein the human genome comprises a human IGHG2 * 01 nucleotide sequence, or the human expressing antibodies comprising human constant domains be encoded by a human IGHG2 * 01 nucleotide sequence.
• 95. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 90 to 94, wherein the ligand comprises a hinge region encoded by human IGHG2 * 01.
• 96. The ligand, method, use, kit, or composition of any one of paragraphs 90 to 95, wherein the ligand comprises or consists of an antibody, wherein the antibody comprises heavy chains comprising SEQ ID NO: 63 or 65 ,
• 97. The ligand, method, application, kit or composition of any of paragraphs 90 to 96, wherein the human is of European, African American or European American descent.
• 98. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 90 to 97, wherein human is or has been genotyped as positive for one, several or all of Pro, Asn, Phe, Val and Ala.
• 99. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 90 to 98, wherein human is or has been genotyped as positive for human IGHG2 * 01.
• 100. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 90 to 99, wherein the human is or has been phenotyped as positive for a human IGHG2 * 01 CH1.
• 101. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 90 to 100, wherein human is or has been phenotyped as positive for a human IGHG2 * 01 CH2.
• 102. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 90 to 101, wherein the human is or has been phenotyped as positive for a human IGHG2 * 01 CH3.
• 103. The method or use of any one of paragraphs 90 to 102, comprising selecting a human whose genome comprises a Condon / codon encoding one, several or all of Pro, Asn, Phe, Val and Ala; or human IGHG2 * 01; or a human IGHG2 * 01 comprises CH1, CH2 and / or CH3.
• 104. The method or use of any one of paragraphs 90 to 103, comprising selecting a human whose phenotype has one, more, or all of the Pro, Asn, Phe, Val, and Ala; a human IGHG2 * 01 region; or a human IGHG2 * 01 comprises CH1, CH2 and / or CH3.
• 105. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 90 to 104, wherein the human expresses antibodies comprising human gamma 2 constant regions comprising such Pro, Asn, Phe, Val and Ala include.
• 106. The ligand, method, use, kit or composition of any one of the preceding paragraphs, wherein the ligand (eg, comprising or consisting of an antibody or a fragment or a Fc-fused TOI receptor) human kappa light chain constant region comprising a Val corresponding to position 84 of SEQ ID NO: 50 or a Cys corresponding to position 87 of SEQ ID NO: 50, and wherein the genome of the Human comprises a nucleotide sequence of a kappa light kappa constant region coding for such a Val or Cys or a human expressing antibodies comprising human kappa light chain constant regions comprising such a Val or Cys.
• 107. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 106, wherein the ligand comprises a human kappa light chain constant region corresponding to a Val, position 84 of SEQ ID NO: 50, and a Cys corresponding to position 87 of SEQ ID NO: 50.
• 108. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 106 or 107, wherein the human genome comprises a kappa light chain constant region nucleotide sequence encoding such a Val or Cys, or the Human expressing antibodies comprising such Val or Cys human kappa chain constant regions.
• 109. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 106 to 108, wherein the antibody or fragment comprises a human kappa light chain constant IGKC * 01 region.
• 110. The ligand, method, application, kit, or composition of any one of paragraphs 106 to 109, wherein the ligand comprises or consists of an antibody, wherein the antibody comprises light chains comprising SEQ ID NO: 62 or 66 ,
• 111. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 106 to 110, wherein the ligand comprises or consists of an antibody, wherein the antibody comprises a light chain variable domain resulting from recombination a human Vκ gene segment and a human Jκ gene segment, wherein the Jκ gene segment is IGK32 * 01 (SEQ ID NO: 57).
• 112. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 106 to 111, wherein human is or has been phenotyped as positive for the Val and / or Cys.
• 113. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 106 to 112, wherein human is or has been genotyped as positive for human IGKC * 01.
• 114. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 106 to 113, wherein the human is or has been phenotyped as positive for a human IGKC * 01 domain.
• 115. The method or use of any one of paragraphs 106 to 114, comprising selecting a human whose genome comprises a Condon / codon encoding the Val and / or Cys; or human IGKC * 01.
• 116. The method or use of any of paragraphs 106 to 115, comprising selecting a human whose phenotype includes such Val and / or Cys; or a human IGKC * 01 domain.
• 117. The ligand, method, use, kit or composition of any one of paragraphs 106 to 116, wherein the human expresses antibodies comprising human kappa constant domains comprising such Val and Cys, e.g. B. expressed constant IGKC * 01 domains.
• 118. The ligand, method, application, kit, or composition of any one of the preceding paragraphs, wherein the ligand (eg, comprises or consists of an antibody or a fragment or a Fc-fused TOI receptor) constant human light chain IGLC2 * 01 region; and wherein the human genome comprises a human IGLC2 * 01 nucleotide sequence or human expresses antibodies comprising human IG light chain constant IGLC2 * 01 regions.
• 119. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 118, wherein the antibody comprises light chains comprising SEQ ID NO: 64.
• 120. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 118 or 119, wherein the human is or has been genotyped as positive for human IGLC2 * 01.
• 121. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 118 to 120, wherein the human is or has been phenotyped as positive for a human IGLC2 * 01 domain.
• 122. The method or use of any one of paragraphs 118 to 212, comprising selecting a human whose genome comprises human IGLC2 * 01.
• 123. The method or use of any one of clauses 73 to 77, comprising selecting a human whose phenotype comprises a human IGLC2 * 01 domain.
• 124. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 108 to 123, wherein human expresses human lambda IGLC2 * 01 constant domains.
• 125. The ligand, method, use, kit, or composition of any one of the preceding paragraphs, wherein the ligand comprises or consists of an antibody or fragment, wherein the antibody or fragment comprises a VH domain comprising derived from the recombination of a human VH gene segment, a human D gene segment and a human JH gene segment, wherein the VH gene segment is selected from the group consisting of (i) IGHV1-18 * 01 and the human genome is a human IGHV1 Or human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGHV1-18 * 01; or (ii) IGVH1-46 * 01 and the human genome comprises a human IGHV1-46 * 01 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGHV1-46 * 01.
• 126. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 125, wherein the antibody or fragment comprises one, several or all of a CH1 domain, CH2 domain, CH3 domain encoded by human IGHG2 * 01 , Hinge region or Fc region.
• 127. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 125 or 126, wherein the antibody or fragment comprises heavy chains comprising SEQ ID NO: 63 or 65.
• 128. The ligand, method, application, kit or composition of any one of paragraphs 125 to 127, wherein the human is positive for the selected VH gene segment, positive for human IGHV1-18 * 01 or IGVH1-46 * 01 was or will be genotyped.
• 129. The method or use of any one of paragraphs 125 to 128, comprising human genotyping as positive for the selected VH gene segment, e.g. Positive for human IGHV1-18 * 01 or IGVH1-46 * 01.
• 130. The ligand, method, use, kit or composition of any one of the preceding paragraphs, wherein the ligand comprises or consists of an antibody or fragment, wherein the antibody or fragment comprises a VL domain comprising derived from the recombination of a human VL gene segment and a human JL gene segment, wherein the VL gene segment is selected from the group consisting of (i) IGKV4-1 * 01 and the human genome is a human IGKV4-1 * 01 nucleotide sequence or human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGKV4-1 * 01; (ii) IGLV2-14 * 01 and the human genome comprises a human IGLV2-14 * 01 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGLV2-14 * 01; or (iii) IGKV1-13 * 02 and the human genome comprises a human IGKV1-13 * 02 nucleotide sequence or the human expressing antibodies comprising variable domains derived from the recombination of human IGKV1-13 * 02.
• 131. The ligand, method, use, kit or composition of paragraph 130, wherein the antibody comprises light chains comprising SEQ ID NO: 62, 64 or 66.
• 132. The ligand, method, application, kit or composition of paragraph 130 or 131, wherein the antibody or fragment comprises a light chain variable domain resulting from recombination of a human Vκ gene segment and a human Jκ Gene segment, where the Jκ gene segment is IGKJ2 * 01 (SEQ ID NO: 57, where (i) or (iii) applies).
• 133. The ligand, method, application, kit or composition of any of paragraphs 130 to 132, wherein the human is positive for the selected VL gene segment, e.g. Positive for human IGKV4-1 * 01, IGLV2-14 * 01 or IGKV1-13 * 02, has been or will be genotyped.
• 134. The method or use of paragraph 133, comprising human genotyping as positive for the selected VL gene segment, e.g. B. Genotyping of human as positive for human IGKV4-1 * 01, IGLV2-14 * 01 or IGKV1-13 * 02.
• 135. The ligand, method, use, kit or composition of any one of the preceding paragraphs, wherein the ligand (e.g., the antibody or fragment) binds to the human TOI with a dissociation constant (Kd) of 1 nM or less, determined by SPR (eg, 100, 10 or 1 pM or less) binds.
• 136. The ligand, method, use, kit or composition of any one of the preceding paragraphs, wherein the TOI is human PCSK9 or human IL6R.

Im gesamten Text wie in den Ansprüchen beziehen sich hier die mit Sequenzen in Zusammenhang stehenden Positionsnummern auf die hier in den Tabellen aufgeführten Positionen, wie z. B. in Tabelle 10 oder 17 angeführt.Throughout the text as in the claims, the position numbers related to sequences refer to the positions shown in the tables, such as. As listed in Table 10 or 17.

BEISPIELEEXAMPLES

Beispiel 1: Seltene PCSK9-VariantenExample 1: Rare PCSK9 variants

Bei der Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (Proprotein Convertase Subtilisin Kexin Type 9, PCSK9) handelt es sich um eine Serinprotease, die an der Regulierung der LDLR-Proteinkonzentrationen (LDLR = Low Density Lipoprotein Receptor) beteiligt ist ( Horton et al., 2007; Seidah und Prat, 2007 ). In-vitro-Experimente haben gezeigt, dass durch Zugabe von PCSK9 zu HepG2-Zellen die Konzentrationen an Zelloberflächen-LDLR gesenkt werden ( Benjannet et al., 2004 ; Lagace et al., 2006 ; Maxwell et al., 2005 ; Park et al., 2004 ). Experimente mit Mäusen haben gezeigt, dass durch eine Erhöhung der PCSK9-Proteinspiegel die Konzentrationen an LDLR-Protein in der Leber gesenkt werden (Benjannet et al., 2004; Lagace et al., 2006; Maxwell et al., 2005; Park et al., 2004), während PCSK9-Knockout-Mäuse erhöhte LDLR-Konzentrationen in der Leber aufweisen ( Rashid et al., 2005 ). Darüber hinaus wurden verschiedene humane PCSK9-Mutationen identifiziert, die entweder erhöhte oder verminderte LDL-Plasmaspiegel zur Folge haben ( Kotowski et al., 2006 ; Zhao et al., 2006 ). Es wurde gezeigt, dass PCSK9 in direkte Wechselwirkung mit dem LDLR-Protein tritt, zusammen mit dem LDLR endozytosiert wird und beim Durchlaufen des endosomalen Pfades gemeinsam mit dem LDLR immunfluoresziert (Lagace et al., 2006).The proprotein convertase subtilisin / kexin type 9 (Proprotein Convertase Subtilisin Kexin Type 9, PCSK9) is a serine protease involved in the regulation of LDLR (Low Density Lipoprotein Receptor) protein concentrations ( Horton et al., 2007; Seidah and Prat, 2007 ). In vitro experiments have shown that by adding PCSK9 to HepG2 cells, the levels of cell surface LDLR are lowered ( Benjannet et al., 2004 ; Lagace et al., 2006 ; Maxwell et al., 2005 ; Park et al., 2004 ). Experiments with mice have shown that increasing the PCSK9 protein levels lowers the levels of LDLR protein in the liver (Benjannet et al., 2004; Lagace et al., 2006; Maxwell et al., 2005; Park et al , 2004), while PCSK9 knockout mice have elevated LDLR levels in the liver ( Rashid et al., 2005 ). In addition, several human PCSK9 mutations have been identified that result in either elevated or decreased LDL plasma levels ( Kotowski et al., 2006 ; Zhao et al., 2006 ). It has been shown that PCSK9 interacts directly with the LDLR protein, is endocytosed together with the LDLR and immunofluoresced as it traverses the endosomal pathway together with the LDLR (Lagace et al., 2006).

PCSK9 ist eine Prohormon-Proprotein-Konvertase aus der Subtilisin-(S8)-Familie der Serinproteasen ( Seidah et al., 2003 ). Menschen verfügen über neun Prohormon-Proprotein-Konvertasen, die sich auf die S8A- und S8B-Unterfamilien aufteilen lassen ( Rawlings et al., 2006 ). Furin, PC1/PC3, PC2, PACE4, PC4, PC5/PC6 und PC7/PC8/LPC/SPC7 werden der Unterfamilie S8B zugeordnet. Kristall- und NMR-Strukturen verschiedner Domänen von Mäusefurin und PC1 zeigen subtilisinähnliche Pro- und katalytische Domänen und eine P-Domäne direkt C-terminal zur katalytischen Domäne ( Henrich et al., 2003 ; Tangrea et al., 2002 ). Basierend auf der Aminosäuresequenzähnlichkeit in dieser Unterfamilie wird vorhergesagt, dass alle sieben Mitglieder ähnliche Strukturen aufweisen ( Henrich et al., 2005 ). SKI-1/S1P und PCSK9 werden der Unterfamilie S8A zugeordnet. Sequenzvergleiche mit diesen Proteinen deuten außerdem auf das Vorhandensein von subtilisinähnlichen Pro- und katalytischen Domänen hin ( Sakai et al., 1998 ; Seidah et al., 2003; Seidah et al., 1999 ). Bei diesen Proteinen ist die Aminosäuresequenz, die sich C-terminal zur katalytischen Domäne befindet, variabler und deutet nicht auf das Vorhandensein einer P-Domäne hin.PCSK9 is a prohormone proprotein convertase from the subtilisin (S8) family of serine proteases ( Seidah et al., 2003 ). Humans have nine prohormone proprotein convertases that can be divided among the S8A and S8B subfamilies ( Rawlings et al., 2006 ). Furin, PC1 / PC3, PC2, PACE4, PC4, PC5 / PC6 and PC7 / PC8 / LPC / SPC7 are assigned to subfamily S8B. Crystal and NMR structures of different domains of murefurin and PC1 show subtilisin-like pro and catalytic domains and a P-domain directly C-terminal to the catalytic domain ( Henrich et al., 2003 ; Tangrea et al., 2002 ). Based on the amino acid sequence similarity in this subfamily, it is predicted that all seven members have similar structures ( Henrich et al., 2005 ). SKI-1 / S1P and PCSK9 are assigned to subfamily S8A. Sequence comparisons with these proteins also indicate the presence of subtilisin-like pro and catalytic domains ( Sakai et al., 1998 ; Seidah et al., 2003; Seidah et al., 1999 ). In these proteins, the amino acid sequence that is C-terminal to the catalytic domain is more variable and does not indicate the presence of a P-domain.

Prohormon-Proprotein-Konvertasen werden als Zymogene exprimiert und sie können über einen mehrstufigen Prozess reifen. Die Prodomäne hat bei diesem Prozess eine Doppelfunktion. Zunächst wirkt die Prodomäne als Chaperon und wird zum richtigen Falten der katalytischen Domäne benötigt ( Ikemura et al., 1987 ). Nachdem die katalytische Domäne gefaltet ist, kommt es zwischen der Prodomäne und der katalytischen Domäne zur Autokatalyse. Nach dieser ursprünglichen Spaltungsreaktion bleibt die Prodomäne an die katalytische Domäne gebunden, wo sie dann als Inhibitor der katalytischen Aktivität wirkt ( Fu et al., 2000 ). Unter den richtigen Bedingungen verläuft die Reifung mit einem zweiten autokatalytischen Ereignis an einer Stelle innerhalb der Prodomäne ( Anderson et al., 1997 ). Nachdem dieses zweite Spaltungsereignis stattgefunden hat, dissoziieren die Prodomäne und katalytische Domäne unter Erhalt einer aktiven Protease.Prohormone proprotein convertases are expressed as zymogens and can mature through a multi-step process. The Prodomain has a dual function in this process. Initially, the prodomain acts as a chaperone and is required for proper folding of the catalytic domain ( Ikemura et al., 1987 ). After the catalytic domain is folded, auto-catalysis occurs between the prodomain and the catalytic domain. After this initial cleavage reaction, the prodomain remains attached to the catalytic domain, where it acts as an inhibitor of catalytic activity ( Fu et al., 2000 ). Under the right conditions, ripening will proceed with a second autocatalytic event at a site within the prod domain ( Anderson et al., 1997 ). After this second cleavage event has occurred, the prodomain and catalytic domain dissociate to give an active protease.

Zu einer Autokatalyse des PCSK9-Zymogens kommt es zwischen Gln152 und Ser153 (VFAQ|SIP (SEQ ID NO: 116)) ( Naureckiene et al., 2003 ), und es wurde gezeigt, dass diese für ihre Sezernierung aus Zellen erforderlich ist ( Seidah et al., 2003 ). Ein zweites autokatalytisches Ereignis an einer Stelle innerhalb der Prodomäne von PCSK9 wurde nicht beobachtet. Aufgereinigte PCSK9 besteht aus zwei Spezies, die sich durch nicht reduzierende SDS-PAGE trennen lassen: der Prodomäne bei 17 Kd und den katalytischen plus C-terminalen Domänen bei 65 Kd. PCSK9 wurde nicht ohne seine inhibierende Prodomäne isoliert, und Messungen der katalytischen Aktivität von PCSK9 haben unterschiedliche Ergebnisse geliefert (Naureckiene et al., 2003; Seidah et al., 2003).Autocatalysis of the PCSK9 zymogen occurs between Gln152 and Ser153 (VFAQ | SIP (SEQ ID NO: 116)) ( Naureckiene et al., 2003 ), and has been shown to be required for its secretion from cells ( Seidah et al., 2003 ). A second autocatalytic event at one site within the pro domain of PCSK9 was not observed. Purified PCSK9 consists of two species that can be separated by non-reducing SDS-PAGE: the prod domain at 17 Kd and the catalytic plus C-terminal domains at 65 Kd. PCSK9 was not isolated without its inhibitory prodomain, and measurements of the catalytic activity of PCSK9 have given different results (Naureckiene et al., 2003, Seidah et al., 2003).

Gemäß bestimmten Ausführungsformen schließt ein PCSK9-Polypeptid terminale Reste wie, wobei dies keine Einschränkung darstellt, Leadersequenzreste, Targeting-Reste, aminoterminale Methioninreste, Lysinreste, Tag-Reste und/oder Fusionsproteinreste ein. ”PCSK9” wird auch als FH3, NARC1, HCHOLA3, Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 und durch neurale Apoptose regulierte Konvertase 1 bezeichnet. Das PCSK9-Gen codiert für ein Proproteinkonvertaseprotein, das zur Proteinase-K-Unterfamilie der sekretorischen Subtilasefamilie gehört. Der Begriff ”PCSK9” bezeichnet sowohl das Proprotein als auch das nach der Autokatalyse des Proproteins erzeugte Produkt. Wird nur auf das autokatalysierte Produkt Bezug genommen (wie z. B. bei einem antigenbindenden Protein oder Liganden, das/der an die gespaltene PCSK9 bindet), so kann man das Protein als ”reife”, ”gespaltene”, ”prozessierte” oder ”aktive” PCSK9 bezeichnen. Wird nur auf die inaktive Form Bezug genommen, so kann man das Protein als ”inaktive”, ”Pro-Form” oder ”nicht prozessierte” Form von PCSK9 bezeichnen. Der Begriff PCSK9 schließt außerdem PCSK9-Moleküle ein, die posttranslationale Modifikationen der PCSK9-Aminosäuresequenz beinhalten, wie PCSK9-Sequenzen, die glykosyliert wurden, PCSK9-Sequenzen, von denen die Signalsequenz abgespalten wurde, eine PCSK9-Sequenz, von der die Prodomäne von der katalytischen Domäne gespalten, jedoch nicht von der katalytischen Domäne abgetrennt wurde (siehe z. B. 1A und 1B von US20120093818A1 ; welches hiermit durch Verweis in seiner Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird).In certain embodiments, a PCSK9 polypeptide includes, but is not limited to, terminal residues such as leader sequence residues, targeting residues, amino terminal methionine residues, lysine residues, tag residues, and / or fusion protein residues. "PCSK9" is also referred to as FH3, NARC1, HCHOLA3, proprotein convertase subtilisin / kexin type 9, and convertase 1 regulated by neural apoptosis. The PCSK9 gene codes for a proprotein convertase protein belonging to the proteinase K subfamily of the secretory subtilase family. The term "PCSK9" refers to both the proprotein and the product produced after autocatalysis of the proprotein. When referring only to the autocatalyzed product (such as an antigen-binding protein or ligand that binds to the cleaved PCSK9), the protein may be termed "mature,""split,""processed," or " denote active "PCSK9. When referring only to the inactive form, one may refer to the protein as "inactive,""pro-form," or "unprocessed" form of PCSK9. The term PCSK9 also includes PCSK9 molecules that include post translational modifications of the PCSK9 amino acid sequence, such as PCSK9 sequences that have been glycosylated, PCSK9 sequences from which the signal sequence has been cleaved, a PCSK9 sequence from which the prodomain of the but not separated from the catalytic domain (see e.g. 1A and 1B from US20120093818A1 ; which is hereby incorporated by reference in its entirety part of the present application).

Die vorliegende Erfindung stellt wie hier beschriebene Anti-PCSK9-Liganden und PCSK9-bindende oder auf PCSK9 zielende Liganden bereit. Die Liganden können unterschiedlich eingesetzt werden. Einige der Liganden eignen sich zum Beispiel für Assays zur spezifischen Bindung, zum Genotypisieren oder Phänotypisieren von Menschen, zur Affinitätsaufreinigung der PCSK9, insbesondere humaner PCSK9 oder deren Liganden, und für Durchmusterungsassays zum Identifizieren anderer Antagonisten der PCSK9-Aktivität. Einige der erfindungsgemäßen Liganden eignen sich zum Inhibieren der Bindung von PCSK9 an LDLR, oder zum Inhibieren von durch PCSK9 vermittelten Aktivitäten.The present invention provides anti-PCSK9 ligands and PCSK9-binding or PCSK9-targeting ligands as described herein. The ligands can be used differently. For example, some of the ligands are useful in assays for specific binding, genotyping or phenotyping of humans, for affinity purification of PCSK9, particularly human PCSK9 or its ligands, and for screening assays for identifying other antagonists of PCSK9 activity. Some of the ligands of the invention are useful for inhibiting the binding of PCSK9 to LDLR, or for inhibiting PCSK9 mediated activities.

Anti-PCSK9-Liganden (z. B. Antikörper und Anti-Sense-RNA) wurden basierend auf dem Targeting und Neutralisieren sogenannter humaner ”Wildtyp”-PCSK9, bei der es sich um eine herkömmlicherweise vorkommende Form handelt (siehe z. B. US20120093818A1 und US20110065902A1 , die hiermit jeweils durch Verweis in seiner Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden), entwickelt. Während sich solche Therapien für menschliche Patienten eignen, bei denen diese Form humaner PCSK9 vorkommt, hat es der Erfinder als nützlich empfunden, die Möglichkeit des Targeting sehr viel seltenerer – jedoch immer noch natürlich vorkommender – Formen von PCSK9 in humanen Populationen zu untersuchen. Auf diese Weise ist der Erfinder zu Einblicken in das natürliche Vorkommen und die Verteilung seltenerer humaner PCSK9-Formen gekommen, die als nützliche Targets (auf der Ebene des Proteins oder der Nukleinsäure) für die Behandlung, die Prophylaxe und die Diagnose von Menschen im Hinblick auf Krankheiten und Leiden, die durch PCSK9-Aktivität vermittelt werden oder damit assoziiert sind, dienen können. Hierdurch werden insbesondere zugeschnittene Therapien, Prophylaxen und Diagnosen in Menschen, denen das normale PCSK9-Gen bzw. Protein (d. h. die wie in US20120093818A1 und US20110065902A1 zur Erzeugung von Antikörpern verwendete Form a bzw. a') fehlt, bereitgestellt. Anti-PCSK9 ligands (eg, antibodies and anti-sense RNA) have been developed based on the targeting and neutralization of so-called human "wild-type" PCSK9, which is a conventionally occurring form (see e.g. US20120093818A1 and US20110065902A1 , which are hereby incorporated by reference in their entirety part of the present application), developed. While such therapies are suitable for human patients experiencing this form of human PCSK9, the inventor has found it useful to examine the possibility of targeting much more rare, but still naturally occurring, forms of PCSK9 in human populations. In this way, the inventor has come to glimpses of the natural occurrence and distribution of lesser human PCSK9 forms, which are useful targets (at the protein or nucleic acid level) for the treatment, prophylaxis, and diagnosis of humans Diseases and conditions mediated by or associated with PCSK9 activity. In particular, this provides tailored therapies, prophylactics and diagnostics in humans lacking the normal PCSK9 gene or protein (ie, the forms a and a ', respectively, used as in US20120093818A1 and US20110065902A1 for producing antibodies).

Dem Fachmann wird bekannt sein, dass SNPs oder andere Veränderungen, die zu Aminosäurevariationen translatiert werden, bei den anzusprechenden humanen Targets eine Variabilität bei der Aktivität und/oder Konformation zur Folge haben können. Dies hat zu einem großen Interesse bei der individuell abgestimmten Medizin geführt, bei der man sich zur effizienteren Anpassung von Medikamenten und Diagnosen an Patienten der Genotypisierung und des Wissens um Protein- und Nukleotidvariabilität bedient. Die Erfindung stellt somit individuell zugeschnittene Pharmazeutika und Untersuchungen bereit, die speziell seltenere polymorphe PCSK9-Variantenformen ansprechen. Solche Formen bzw. ”Allele” (auf der Nukleotidebene) umfassen in vielen der vom Erfinder bestimmten Beispiele mehrfache Veränderungen auf der Nukleotid- und Aminosäureebene im Vergleich zur entsprechenden herkömmlichen Form der Nukleotid- und Aminosäuresequenzen, d. h. es gibt mehrfache nicht-synonyme Veränderungen auf der Nukleotidebene, die in mehrfache entsprechende Veränderungen in dem Proteintarget in Menschen translatiert werden.It will be appreciated by those skilled in the art that SNPs or other changes translated into amino acid variations may result in variability in activity and / or conformation in the human targets to be targeted. This has led to a great deal of interest in personalized medicine using more efficient drug adaptation and diagnostics to genotyping patients and understanding protein and nucleotide variability. The invention thus provides individually tailored pharmaceuticals and assays that specifically address more rare polymorphic PCSK9 variant forms. Such forms or "alleles" (at the nucleotide level) in many of the examples set forth by the inventor include multiple changes at the nucleotide and amino acid levels as compared to the corresponding conventional form of nucleotide and amino acid sequences, i. H. there are multiple non-synonymous changes at the nucleotide level that are translated into multiple corresponding changes in the protein target in humans.

Ferner hat der Erfinder überraschenderweise festgestellt, dass die selteneren natürlichen Formen, wenngleich sie bei Menschen sehr viel weniger häufig auftreten als die herkömmliche Form, nichtsdestotrotz in mehreren und ethnisch unterschiedlichen humanen Populationen vorhanden sind, gewöhnlich mit vielen humanen Beispielen pro wiedergegebener ethnischer Population. Der Erfinder hat somit festgestellt, dass mit einer Zielausrichtung auf solche selteneren Formen eine wirksame Behandlung, Prophylaxe oder Diagnose über viele humane ethnische Populationen bereitgestellt würde, wodurch der Nutzen der vorliegenden Erfindung erweitert wird.Further, the inventor has surprisingly found that the rarer natural forms, although much less common in humans than the conventional form, are nonetheless present in multiple and ethnically diverse human populations, usually with many human examples per reported ethnic population. The inventor has thus found that targeting such more rare forms would provide effective treatment, prophylaxis, or diagnosis across many human ethnic populations, thus extending the utility of the present invention.

Mit dieser Erkenntnis hat der Erfinder festgestellt, dass es beträchtliche industrielle und medizinische Anwendungen für die Erfindung gibt, was die Richtung bei der Auswahl eines Anti-PCSK9-Liganden zur Verabreichung an menschliche Patienten zur Therapie und/oder Prophylaxe von durch PCSK9 vermittelten oder mit PCSK9 assoziierten Krankheiten bzw. Leiden betrifft. Auf diese Weise erhält der Patient Arzneimittel und Liganden, die auf seine – durch die genetische oder phänotypische Zusammensetzung des Patienten bedingten – Bedürfnisse zugeschnitten sind. Einhergehend hiermit stellt die Erfindung die Genotypisierung und/oder Phänotypisierung von Patienten im Zusammenhang mit einer solchen Behandlung bereit, wodurch es möglich wird, das passende Arzneimittel für den Patienten zu finden. Hierdurch erhöhen sich die Chancen einer medizinischen Wirksamkeit, die Wahrscheinlichkeit einer mangelhaften Behandlung mit Arzneimitteln oder Liganden, die nicht auf den Patienten abgestimmt sind (z. B. schlechte Wirksamkeit und/oder Nebenwirkungen), wird verringert und pharmazeutische Fehlverschreibungen und Verschwendung werden vermieden.With this finding, the inventor has found that there are significant industrial and medical applications to the invention, which has become the direction in the selection of an anti-PCSK9 ligand for administration to human patients for the therapy and / or prophylaxis of PCSK9-mediated or with PCSK9 associated diseases or conditions. In this way, the patient receives drugs and ligands that are tailored to his needs, due to the genetic or phenotypic composition of the patient. Along with this, the invention provides the genotyping and / or phenotyping of patients in connection with such treatment, thereby making it possible to find the appropriate drug for the patient. This increases the chances of medical efficacy, reduces the likelihood of poor treatment with drugs or ligands that are not personalized to the patient (eg, poor efficacy and / or side effects), and avoids pharmaceutical misconduct and waste.

Bei der Entwicklung dieser Gedankenreihe hat sich der Erfinder der vorliegenden Erfindung entschlossen, einen Satz humaner PCSK9-Varianten auf der Basis der folgenden Kriterien zu bestimmen, wobei dies Kriterien sind, von denen der Erfinder festgestellt hat, dass sie nützliche Arzneimittel und Diagnostika auf zugeschnittene Bedürfnisse in der menschlichen Population liefern würden. Der Erfinder wählte Varianten, die wenigstens 3 der 4 folgenden Kriterien erfüllten:

• • PCSK9-Varianten mit einer kumulativen humanen Allelhäufigkeit im Bereich von 1 bis 10%;
• • PCSK9-Varianten mit einer humanen Genotypgesamthäufigkeit im Bereich von 1 bis 15%;
• • PCSK9-Varianten, die sich in vielen verschiedenen humanen ethnischen Populationen finden (unter Anwendung der Standardkategorisierung des 1000 Genomes Project, bei dem es sich um den anerkannten technischen Standard handelt; siehe Tabelle 4 unten); und
• • PCSK9-Varianten, die sich in vielen Individuen verteilt über solche vielen verschiedenen ethnischen Populationen finden.

• PCSK9 variants with a cumulative human allele frequency ranging from 1 to 10%;
• PCSK9 variants with a total genotypic genotype in the range of 1 to 15%;
• • PCSK9 variants found in many different human ethnic populations (using the standard categorization of the 1000 Genome Project, which is the accepted technical standard, see Table 4 below); and
• • PCSK9 variants that are found in many individuals across such many different ethnic populations.

Auf der Basis dieser Kriterien identifizierte der Erfinder die in Tabelle 1 unten aufgeführten Varianten (mit Ausnahme von Form a). Based on these criteria, the inventor identified the variants listed in Table 1 below (except for form a).

Die Auswahl des Erfinders schloss, als Erwägung, die Auswahl von Nukleotidvariation, die zu Aminosäurevariation in den entsprechenden PCSK9-Formen führte (d. h. nicht-synonyme Variationen), im Gegensatz zu stummen Variationen, bei denen sich die Aminosäurereste im Zielprotein nicht ändern, ein.The inventor's selection included, as a consideration, the selection of nucleotide variation that resulted in amino acid variation in the corresponding PCSK9 forms (i.e., non-synonymous variations) as opposed to silent variations in which the amino acid residues in the target protein do not change.

Allel-NukleotidsequenzenvariantenAllele Nukleotidsequenzenvarianten

Somit

• (i) Die Nukleotidsequenz von Allel f ist identisch zu SEQ ID NO: 28, wobei allerdings die Nukleotidsequenz von Allel fein GTC-Codon anstelle eines ATC-Codons an der mit ”I474V” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst;
• (ii) Die Nukleotidsequenz von Allel c ist identisch zu SEQ ID NO: 28, wobei allerdings die Nukleotidsequenz von Allel c ein GGG-Codon anstelle eines GAG-Codons an der mit ”E670G” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst;
• (iii) Die Nukleotidsequenz von Allel r ist identisch zu SEQ ID NO: 28, wobei allerdings die Nukleotidsequenz von Allel rein GTC-Codon anstelle eines ATC-Codons an der mit ”I474V” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst; und ein GGG-Codon anstelle eines GAG-Codons an der mit ”E670G” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst;
• (iv) Die Nukleotidsequenz von Allel p ist identisch zu SEQ ID NO: 28, wobei allerdings die Nukleotidsequenz von Allel p ein GTC-Codon anstelle eines GCC-Codons an der mit ”A53V” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst; und ein GTC-Codon anstelle eines ATC-Codons an der mit ”I474V” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst;
• (v) Die Nukleotidsequenz von Allel m ist identisch zu SEQ ID NO: 28, wobei allerdings die Nukleotidsequenz von Allel m ein ACC-Codon anstelle eines GCC-Codons an der mit ”A443T” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst;
• (vi) Die Nukleotidsequenz von Allel e ist identisch zu SEQ ID NO: 28, wobei allerdings die Nukleotidsequenz von Allel e ein AGT-Codon anstelle eines AAT-Codons an der mit ”N425S” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst; und ein GTC-Codon anstelle eines ATC-Codons an der mit ”I474V” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst;
• (vii) Die Nukleotidsequenz von Allel h ist identisch zu SEQ ID NO: 28, wobei allerdings die Nukleotidsequenz von Allel h ein ACC-Codon anstelle eines GCC-Codons an der mit ”A443T” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst; und ein CCG-Codon anstelle eines CAG-Codons an der mit ”Q619P” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst;
• (viii) Die Nukleotidsequenz von Allel aj ist identisch zu SEQ ID NO: 28, wobei allerdings die Nukleotidsequenz von Allel aj ein CTT-Codon anstelle eines CGT-Codons an der mit ”R46L” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst; und ein GTC-Codon anstelle eines ATC-Codons an der mit ”I474V” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst; und
• (ix) Die Nukleotidsequenz von Allel q ist identisch zu SEQ ID NO: 28, wobei allerdings die Nukleotidsequenz von Allel q ein GTC-Codon anstelle eines GCC-Codons an der mit ”A53V” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst; und ein GGG-Codon anstelle eines GAG-Codons an der mit ”E670G” markierten Position in SEQ ID NO: 28 umfasst;

• (i) The nucleotide sequence of allele f is identical to SEQ ID NO: 28 except that the nucleotide sequence of allele comprises fine GTC codon instead of an ATC codon at the "I474V" labeled position in SEQ ID NO: 28;
• (ii) The nucleotide sequence of allele c is identical to SEQ ID NO: 28, but the nucleotide sequence of allele c comprises a GGG codon instead of a GAG codon at the "E670G" labeled position in SEQ ID NO: 28;
• (iii) The nucleotide sequence of allele r is identical to SEQ ID NO: 28 except that the nucleotide sequence of allele comprises pure GTC codon instead of an ATC codon at the "I474V" labeled position in SEQ ID NO: 28; and a GGG codon in place of a GAG codon at the position marked "E670G" in SEQ ID NO: 28;
• (iv) The nucleotide sequence of allele p is identical to SEQ ID NO: 28 except that the nucleotide sequence of allele p comprises a GTC codon instead of a GCC codon at the "A53V" labeled position in SEQ ID NO: 28; and a GTC codon in place of an ATC codon at the "I474V" marked position in SEQ ID NO: 28;
• (v) The nucleotide sequence of allele m is identical to SEQ ID NO: 28 except that the nucleotide sequence of allele m comprises an ACC codon instead of a GCC codon at the "A443T" labeled position in SEQ ID NO: 28;
• (vi) The nucleotide sequence of allele e is identical to SEQ ID NO: 28 except that the nucleotide sequence of allele e comprises an AGT codon instead of an AAT codon at the "N425S" labeled position in SEQ ID NO: 28; and a GTC codon in place of an ATC codon at the "I474V" marked position in SEQ ID NO: 28;
• (vii) The nucleotide sequence of allele h is identical to SEQ ID NO: 28 except that the nucleotide sequence of allele h comprises an ACC codon instead of a GCC codon at the "A443T" labeled position in SEQ ID NO: 28; and a CCG codon in place of a CAG codon at the position marked "Q619P" in SEQ ID NO: 28;
• (viii) The nucleotide sequence of allele aj is identical to SEQ ID NO: 28 except that the nucleotide sequence of allele aj comprises a CTT codon instead of a CGT codon at the "R46L" labeled position in SEQ ID NO: 28; and a GTC codon in place of an ATC codon at the "I474V" marked position in SEQ ID NO: 28; and
• (ix) The nucleotide sequence of allele q is identical to SEQ ID NO: 28 except that the nucleotide sequence of allele q comprises a GTC codon instead of a GCC codon at the "A53V" labeled position in SEQ ID NO: 28; and a GGG codon in place of a GAG codon at the position marked "E670G" in SEQ ID NO: 28;

Aminosäuresequenzvarianten der Proform (Nummerierung wie bei der oben angeführten SEQ ID NO: 1)Amino Acid Sequence Variants of Proform (Numbering as in the above-mentioned SEQ ID NO: 1)

• (A) Die Aminosäuresequenz von Form f ist identisch zur Aminosäuresequenz von Aminosäure Nummer 31 bis (und einschließlich) Aminosäure Nummer 692 der SEQ ID NO: 1, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form f in Position 474 ein Valin umfasst;(A) The amino acid sequence of form f is identical to the amino acid sequence of amino acid number 31 to (and including) amino acid number 692 of SEQ ID NO: 1 except that the amino acid sequence of form f at position 474 comprises a valine;
• (B) Die Aminosäuresequenz von Form c ist identisch zur Aminosäuresequenz von Aminosäure Nummer 31 bis (und einschließlich) Aminosäure Nummer 692 der SEQ ID NO: 1, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form c in Position 670 ein Glycin umfasst;(B) The amino acid sequence of form c is identical to the amino acid sequence of amino acid number 31 to (and including) amino acid number 692 of SEQ ID NO: 1, but the amino acid sequence of form c at position 670 comprises a glycine;
• (C) Die Aminosäuresequenz von Form r ist identisch zur Aminosäuresequenz von Aminosäure Nummer 31 bis (und einschließlich) Aminosäure Nummer 692 der SEQ ID NO: 1, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form rin Position 474 ein Valin und in Position 670 ein Glycin umfasst;(C) The amino acid sequence of form r is identical to the amino acid sequence of amino acid number 31 to (and including) amino acid number 692 of SEQ ID NO: 1, except that the amino acid sequence of position rin 474 comprises a valine and in position 670 a glycine;
• (D) Die Aminosäuresequenz von Form p ist identisch zur Aminosäuresequenz von Aminosäure Nummer 31 bis (und einschließlich) Aminosäure Nummer 692 der SEQ ID NO: 1, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form p in Position 53 ein Valin und in Position 474 ein Valin umfasst;(D) The amino acid sequence of form p is identical to the amino acid sequence of amino acid number 31 to (and including) amino acid number 692 of SEQ ID NO: 1 except that the amino acid sequence of form p at position 53 comprises a valine and at position 474 a valine ;
• (E) Die Aminosäuresequenz von Form m ist identisch zur Aminosäuresequenz von Aminosäure Nummer 31 bis (und einschließlich) Aminosäure Nummer 692 der SEQ ID NO: 1, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form m in Position 443 ein Threonin umfasst;(E) The amino acid sequence of form m is identical to the amino acid sequence of amino acid number 31 to (and including) amino acid number 692 of SEQ ID NO: 1 except that the amino acid sequence of form m at position 443 comprises a threonine;
• (F) Die Aminosäuresequenz von Form e ist identisch zur Aminosäuresequenz von Aminosäure Nummer 31 bis (und einschließlich) Aminosäure Nummer 692 der SEQ ID NO: 1, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form e in Position 425 ein Serin und in Position 474 ein Valin umfasst;(F) The amino acid sequence of form e is identical to the amino acid sequence of amino acid number 31 to (and including) amino acid number 692 of SEQ ID NO: 1 except that the amino acid sequence of form e at position 425 comprises a serine and at position 474 a valine ;
• (G) Die Aminosäuresequenz von Form h ist identisch zur Aminosäuresequenz von Aminosäure Nummer 31 bis (und einschließlich) Aminosäure Nummer 692 der SEQ ID NO: 1, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form h in Position 443 ein Threonin und in Position 619 ein Prolin umfasst;(G) The amino acid sequence of form h is identical to the amino acid sequence of amino acid number 31 to (and including) amino acid number 692 of SEQ ID NO: 1 except that the amino acid sequence of form h at position 443 comprises a threonine and at position 619 a proline ;
• (H) Die Aminosäuresequenz von Form aj ist identisch zur Aminosäuresequenz von Aminosäure Nummer 31 bis (und einschließlich) Aminosäure Nummer 692 der SEQ ID NO: 1, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form aj in Position 46 ein Leucin und in Position 474 ein Valin umfasst(H) The amino acid sequence of form aj is identical to the amino acid sequence of amino acid number 31 to (and including) amino acid number 692 of SEQ ID NO: 1 except that the amino acid sequence of form aj at position 46 comprises a leucine and at position 474 a valine
• (I) Die Aminosäuresequenz von Form q ist identisch zur Aminosäuresequenz von Aminosäure Nummer 31 bis (und einschließlich) Aminosäure Nummer 692 der SEQ ID NO: 1, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form q in Position 53 ein Valin und in Position 670 ein Glycin umfasst;(I) The amino acid sequence of form q is identical to the amino acid sequence of amino acid number 31 to (and including) amino acid number 692 of SEQ ID NO: 1 except that the amino acid sequence of form q at position 53 comprises a valine and at position 670 a glycine ;

Aminosäuresequenzvarianten der reifen Form (Nummerierung wie bei der oben angeführten SEQ ID NO: 1)Amino acid sequence variants of the mature form (Numbering as in the above-mentioned SEQ ID NO: 1)

• (A') die Aminosäuresequenz von Form f ist identisch zur SEQ ID NO: 2, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form f in Position 474 ein Valin umfasst;(A ') the amino acid sequence of form f is identical to SEQ ID NO: 2, but the amino acid sequence of form f at position 474 comprises a valine;
• (B') die Aminosäuresequenz von Form c ist identisch zur SEQ ID NO: 2, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form c in Position 670 ein Glycin umfasst;(B ') the amino acid sequence of form c is identical to SEQ ID NO: 2, but the amino acid sequence of form c at position 670 comprises a glycine;
• (C') die Aminosäuresequenz von Form r ist identisch zur SEQ ID NO: 2, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form r in Position 474 ein Valin und in Position 670 ein Glycin umfasst; (C ') the amino acid sequence of form r is identical to SEQ ID NO: 2, except that the amino acid sequence of form r at position 474 comprises a valine and at position 670 a glycine;
• (D') die Aminosäuresequenz von Form p ist identisch zur SEQ ID NO: 2, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form p in Position 474 ein Valin umfasst; (D ') the amino acid sequence of form p is identical to SEQ ID NO: 2, but the amino acid sequence of form p at position 474 comprises a valine;
• (E') die Aminosäuresequenz von Form m ist identisch zur SEQ ID NO: 2, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form m in Position 443 ein Threonin umfasst;(E ') the amino acid sequence of form m is identical to SEQ ID NO: 2, except that the amino acid sequence of form m at position 443 comprises a threonine;
• (F') die Aminosäuresequenz von Form e ist identisch zur SEQ ID NO: 2, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form e in Position 425 ein Serin und in Position 474 ein Valin umfasst;(F ') the amino acid sequence of form e is identical to SEQ ID NO: 2 except that the amino acid sequence of form e at position 425 comprises a serine and at position 474 a valine;
• (G') die Aminosäuresequenz von Form h ist identisch zur SEQ ID NO: 2, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form h in Position 443 ein Threonin und in Position 619 ein Prolin umfasst;(G ') the amino acid sequence of form h is identical to SEQ ID NO: 2, except that the amino acid sequence of form h at position 443 comprises a threonine and at position 619 a proline;
• (H') die Aminosäuresequenz von Form aj ist identisch zur SEQ ID NO: 2, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form aj in Position 474 ein Valin umfasst; und(H ') the amino acid sequence of Form aj is identical to SEQ ID NO: 2 except that the amino acid sequence of Form aj at position 474 comprises a valine; and
• (I') die Aminosäuresequenz von Form q ist identisch zur SEQ ID NO: 2, wobei allerdings die Aminosäuresequenz von Form q in Position 670 ein Glycin umfasst.(I ') the amino acid sequence of Form q is identical to SEQ ID NO: 2, except that the amino acid sequence of Form q at position 670 comprises a glycine.

Die reife Form von p ist identisch zur reifen Form von f und aj.The mature form of p is identical to the mature form of f and aj.

Die reife Form von c ist identisch zur reifen Form von q.The mature form of c is identical to the mature form of q.

Weitere Sequenzanalysen und 3D-Computermodellierung (siehe 1) zeigten, dass ausgewählte Varianten auch die folgenden Auswahlkriterien erfüllten:

• • PCSK9-Varianten, deren Aminosäurerestevarianten (im Vergleich zur üblichen Form der humanen PCSK9) sich in der reifen Form des Targets finden (d. h. außerhalb der Pro-Domäne); und
• • PCSK9-Varianten, deren Aminosäurerestevarianten (im Vergleich zur üblichen Form der humanen PCSK9) auf dem Target an der Oberfläche exponiert sind, was der Erfinder als einen Beitrag zur Bestimmung der Topographie des Targets leistend und potentiell einen Beitrag zu wie und wo es auf dem Target zur Ligandenbindung kommt leistend ansah.

• PCSK9 variants whose amino acid residue variants (in comparison to the usual form of human PCSK9) find themselves in the mature form of the target (ie outside the pro domain); and
• PCSK9 variants whose amino acid residue variants (compared to the usual form of human PCSK9) are exposed on the surface of the target, which the inventor contributes to determining the topography of the target and potentially contributing to how and where it exists on the target Target for ligand binding comes in handy.

Wie in 1 gezeigt sind die identifizierten Positionen 425, 443, 474, 619 und 670 (die sich in den ausgewählten erfindungsgemäßen Varianten finden) alle oberflächenexponiert und außerhalb der Pro-Domäne. Die Variantenpositionen 425 und 443 sind auf der katalytischen Domäne oberflächenexponiert, während die Variantenpositionen 474, 619 und 670 auf der C-terminalen Domäne oberflächenexponiert sind.As in 1 As shown, the identified positions 425, 443, 474, 619, and 670 (found in the selected variants of the invention) are all surface exposed and outside the pro domain. Variant positions 425 and 443 are surface exposed on the catalytic domain, while variant positions 474, 619 and 670 are surface exposed on the C-terminal domain.

Bei einem ersten Beispiel spricht die Erfindung das Bedürfnis zur Behandlung von Menschen mit natürlich vorkommenden selteneren natürlichen PCSK9-Allelen, Genotypen und Phänotypen (selteneren Proteinformen) an. In dieser Hinsicht stellt die Erfindung die folgenden Aspekte bereit.In a first example, the invention addresses the need to treat humans with naturally occurring, less abundant natural PCSK9 alleles, genotypes and phenotypes (rarer protein forms). In this regard, the invention provides the following aspects.

Gemäß einem ersten Aspekt: Ein Anti-Human-PCSK9-Ligand zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens bei einem Menschen, dessen Genom eine Nukleotidsequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–37, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.According to a first aspect: An anti-human PCSK9 ligand for use in a method for the treatment and / or prevention of a PCSK9-mediated disease or a PCSK9 mediated condition in a human whose genome comprises a nucleotide sequence selected from A group consisting of SEQ ID NOs: 29-37, the method comprising administering the ligand to a human.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that satisfy the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29. In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Bei der Alternative codiert die Nukleotidsequenz für eine humane PCSK9, die eine Mutation ausgewählt aus R46L, A53V, N425S, A443T, I474V, Q619P und E670G (z. B. eine Mutation I474, E670G, N425S oder Q619P) in SEQ ID NO: 1 umfasst; beispielsweise umfasst die PCSK9 I474V in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 E670G in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 Q619P in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 N425S in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 R46L in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Erhöhung von Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 A53V in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Erhöhung von Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 A443T in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Erhöhung von Cholesterin im Menschen handelt).In the alternative, the nucleotide sequence encodes a human PCSK9 having a mutation selected from R46L, A53V, N425S, A443T, I474V, Q619P, and E670G (eg, a mutation I474, E670G, N425S, or Q619P) in SEQ ID NO: 1 includes; For example, PCSK9 comprises I474V in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises E670G in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises Q619P in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises N425S in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, PCSK9 comprises R46L in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , eg the increase of cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises A53V in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , eg the increase of cholesterol in humans); For example, PCSK9 comprises A443T in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , eg the increase of cholesterol in humans).

Gemäß einem zweiten Aspekt: Den Liganden nach Aspekt 1, wobei festgestellt wurde oder wird, dass der Ligand zur Bindung einer humanen PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj and q fähig ist.According to a second aspect: The ligand according to aspect 1, wherein it has been established that the ligand for binding a human PCSK9 is selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q is capable.

Bei der Alternative wurde festgestellt, dass der Ligand zur Bindung an eine humane PCSK9 fähig ist, die eine Mutation ausgewählt aus R46L, A53V, N425S, A443T, I474V, Q619P und E670G (z. B. eine Mutation I474, E670G, N425S oder Q619P) in SEQ ID NO: 1 umfasst; beispielsweise umfasst die PCSK9 I474V in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 E670G in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 Q619P in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 N425S in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Verminderung von Cholesterin oder die Aufrechterhaltung von vermindertem Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 R46L in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Erhöhung von Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 A53V in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Erhöhung von Cholesterin im Menschen handelt); beispielsweise umfasst die PCSK9 A443T in SEQ ID NO: 1, und gegebenenfalls umfasst der Mensch eine solche PCSK9 oder eine Nukleotidsequenz, die für eine solche PCSK9 codiert (wobei es sich bei dem Verfahren z. B. um ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie, z. B. die Erhöhung von Cholesterin im Menschen handelt).In the alternative, it has been found that the ligand is capable of binding to a human PCSK9 having a mutation selected from R46L, A53V, N425S, A443T, I474V, Q619P and E670G (e.g., a mutation I474, E670G, N425S or Q619P ) in SEQ ID NO: 1; For example, PCSK9 comprises I474V in SEQ ID NO: 1, and optionally For example, a human such includes a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such a PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia, eg, lowering cholesterol or maintaining decreased levels of cholesterol) Cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises E670G in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises Q619P in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises N425S in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , for example, the reduction of cholesterol or the maintenance of reduced cholesterol in humans); For example, PCSK9 comprises R46L in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , eg the increase of cholesterol in humans); For example, the PCSK9 comprises A53V in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , eg the increase of cholesterol in humans); For example, PCSK9 comprises A443T in SEQ ID NO: 1, and optionally, the human comprises such a PCSK9 or a nucleotide sequence encoding such PCSK9 (which method is, for example, a method of treating or preventing dyslipidemia , eg the increase of cholesterol in humans).

Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts bindet der Ligand zwei, drei, vier oder mehr humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q oder die PCSK9s in der Alternative (oder es wurde festgestellt, dass er diese bindet).In one example of any aspect, the ligand binds two, three, four or more human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q or the PCSK9s in the alternative ( or it has been found to bind this).

Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts umfasst der Ligand eine Proteindomäne, die spezifisch an PCSK9 bindet, z. B. eine humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q, oder die PCSK9s in der AlternativeIn one example of any aspect, the ligand comprises a protein domain that binds specifically to PCSK9, e.g. For example, a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q, or the PCSK9s in the alternative

Der Begriff ”spezifisch bindet” oder dergleichen bedeutet, dass ein Ligand, z. B. ein Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment davon einen Komplex mit einem Antigen bildet, der unter physiologischen Bedingungen relativ stabil ist. Spezifisch bindend kann als eine Gleichgewichtsdissoziationskonstante von wenigstens etwa 1 × 10^–6 M oder weniger charakterisiert werden (ein kleinerer KD z. B. bezeichnet eine festere Bindung). Methoden, mit denen festgestellt werden kann, ob zwei Moleküle spezifisch binden, sind im Stand der Technik gut bekannt und schließen zum Beispiel Gleichgewichtsdialyse, Oberflächenplasmonresonanz und dergleichen ein. Ein isolierter Antikörper, der eine humane PCSK9 spezifisch bindet, kann jedoch Kreuzreaktivität mit anderen Antigenen wie einem PCSK9-Molekül aus anderen Arten zeigen. Außerdem werden multispezifische Antikörper (z. B. bispezifische), die an humane PCSK9 und ein oder mehrere zusätzliche Antigene binden, nichtsdestotrotz als Antikörper angesehen, die PCSK9 ”spezifisch binden”, so wie der Begriff hier verwendet wird.The term "specifically binds" or the like means that a ligand, e.g. For example, an antibody or antigen-binding fragment thereof forms a complex with an antigen which is relatively stable under physiological conditions. Specific binding may be characterized as an equilibrium dissociation constant of at least about 1 x 10 ^-6 M or less (a smaller KD, for example, denotes a more rigid binding). Methods for determining whether two molecules bind specifically are well known in the art and include, for example, equilibrium dialysis, surface plasmon resonance, and the like. However, an isolated antibody that specifically binds a human PCSK9 may show cross-reactivity with other antigens such as a PCSK9 molecule of other species. In addition, multispecific antibodies (eg, bispecific) that bind to human PCSK9 and one or more additional antigens are nevertheless considered to be antibodies that "specifically bind" PCSK9, as the term is used herein.

Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts umfasst der Ligand ein Protein oder besteht aus diesem, das die EGFA-Domäne des LDL-Rezoptors nachahmt und spezifisch an PCSK9 bindet, z. B. eine humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q, oder die PCSK9s in der Alternative.In an example of any aspect, the ligand comprises or consists of a protein which mimics the EGFA domain of the LDL receptor and binds specifically to PCSK9, e.g. For example, a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q, or the PCSK9s in the alternative.

Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts antagonisiert der Ligand PCSK9, z. B. eine humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q, oder die PCSK9s in der Alternative.In an example of any aspect, the ligand antagonizes PCSK9, e.g. For example, a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q, or the PCSK9s in the alternative.

Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts umfasst das Verfahren (vor der Verabreichung des Liganden) den Schritt der Feststellung, dass der Ligand dazu fähig ist, eine humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q oder die PCSK9s in der Alternative zu binden.In an example of any aspect, the method (prior to administration of the ligand) comprises the step of determining that the ligand is capable of producing a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e , h, aj, and q, or to bind the PCSK9s in the alternative.

Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts wird die Bindung durch SPR festgestellt. Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts wird die Bindung durch ELISA festgestellt.In an example of any aspect, binding is detected by SPR. In one example of any aspect, binding is detected by ELISA.

Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example of any aspect, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In an example of any aspect, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem dritten Aspekt: Ein Ligand, der (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine humane PCSK9 bindet, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 4–27 zur Verwendung in einem Verfahren, welches den Schritt der Verwendung des Liganden zum Targetting der PCSK9 in einem Menschen zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens umfasst, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst.According to a third aspect: A ligand which binds (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 4-27 for use in a method comprising the step of using the ligand to target the PCSK9 in a human for the treatment and / or prevention of a PCSK9-mediated disease or a condition mediated by PCSK9, the method comprising administration of the ligand to humans.

Bei einem Beispiel wird die Krankheit bzw. das Leiden durch (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine humane PCSK9 vermittelt, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 427.In one example, the disease is mediated by (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 427.

Bei einem Beispiel ist die Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 4–23, 26 und 27; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 4–14 und 18–27; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 4–14, 18–23, 26 und 27. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Sequenzen, die nicht 46L umfassen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the amino acid sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4-23, 26 and 27; or selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4-14 and 18-27; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 4-14, 18-23, 26 and 27. These are naturally occurring sequences that are not 46L and that meet the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 18, 19 oder 20, die ein 425S umfasst, das mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist (Pisciotta et al 2006).In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 18, 19 or 20, which includes a 425S associated with elevated LDL-C (Pisciotta et al 2006).

Bei einem Beispiel ist die Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 10, 11, 12, 26 und 27, die 670G umfassen, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the amino acid sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 10, 11, 12, 26, and 27, which comprise 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 10–14 und 18–27; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 10–14, 18–23, 26 und 27. Hierbei handelt es sich um Sequenzen, bei denen eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden von SEQ ID NO: 1–3 (Form a) vorliegt und die die unten aufgeführten Kriterien erfüllen.In one example, the amino acid sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 10-14 and 18-27; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 10-14, 18-23, 26, and 27. These are sequences in which a naturally occurring combination of differences of SEQ ID NOs: 1-3 (form a) and meet the criteria listed below.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 4.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 4.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 5.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 5.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 6.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 6.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 7.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 7.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: B.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: B.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 9.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 9.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 10.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 10.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 11.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 11.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 12.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 12.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 13.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 13.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 14.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 14.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 15.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 15.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 16.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 16.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 17.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 17.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 18.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 18.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 19.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 19.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 20. In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 20.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 21.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 21.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 22.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 22.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 23.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 23.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 24.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 24.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 25.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 25.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 26.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 26.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 27.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 27.

Gemäß einem vierten Aspekt: Den Liganden nach Aspekt 3, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder eine für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz umfasst.According to a fourth aspect: The ligand of aspect 3, wherein the human genome comprises a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or a nucleotide sequence encoding a PCSK9 of the alternative.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that satisfy the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Gemäß einem fünften Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Mensch als positiv für eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder zumindest die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon umfassend.According to a fifth aspect: The ligand according to any one of the preceding aspects, wherein the human is positive for a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 29-37 or at least the catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that satisfy the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Gemäß einem sechsten Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Mensch als positiv für (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q oder zumindest die katalytische oder C-terminale Domäne davon phänotypisiert wurde oder wird.According to a sixth aspect, the ligand according to any one of the preceding aspects, wherein the human is positive for (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m , e, h, aj and q or at least the catalytic or C-terminal domain thereof has been or will be phenotyped.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem siebten Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei das Verfahren das Genotypisieren des Menschen als positiv für eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder zumindest der für die katalytische oder C-terminale Domäne codierenden Sequenz davon; oder für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz, umfasst.According to a seventh aspect, the ligand of any one of the preceding aspects, wherein the method comprises genotyping the human as positive for a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or at least that for the catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof; or, for a PCSK9, the alternative coding nucleotide sequence.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that satisfy the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ). In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Gemäß einem achten Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei das Verfahren das Phänotypisieren des Menschen als positiv für (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q oder zumindest die katalytische oder C-terminale Domäne davon umfasst.According to an eighth aspect: The ligand according to any one of the preceding aspects, wherein the method is human phenotyping as positive for (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 selected from the group consisting of forms f, c, r , p, m, e, h, aj and q or at least the catalytic or C-terminal domain thereof.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem neunten Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Mensch als heterozygot für eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder zumindest der für die katalytische Domäne oder C-terminale Domäne codierenden Sequenz davon; oder eine für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz genotypisiert wurde oder wird; wobei der Mensch gegebenenfalls als die Nukleotidsequenz von SEQ ID NO: 28 oder zumindest die für die katalytische Domäne oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon und eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NOs: 29–37 oder zumindest der für die katalytische oder C-terminale Domäne codierenden Sequenz davon; oder für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz, umfasst.According to a ninth aspect: The ligand according to any preceding aspect, wherein the human is heterozygous for a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or at least the catalytic domain or C-terminal domain encoding sequence thereof ; or genotyping a nucleotide sequence encoding a PCSK9 of the alternative; wherein the human optionally as the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 28 or at least the coding for the catalytic domain or C-terminal domain coding sequence thereof and a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or at least that for the catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof; or, for a PCSK9, the alternative coding nucleotide sequence.

”Heterozygot” bedeutet hier, dass im Genotyp des Menschen ein Allel eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NOs: 29–37 oder zumindest die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon umfasst und ein anderes Allel eine beliebige PCSK9 sein kann (z. B. Form a, a' oder ein Allel, welches eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder zumindest die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon umfasst)."Heterozygous" as used herein means that in the human genotype, one allele comprises one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or at least the catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof and another allele may be any PCSK9 may (for example, form a, a 'or an allele, which comprises a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 29-37 or at least the catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof).

Bei einem Beispiel umfasst das Verfahren (vor der Verabreichung des Liganden) das Genotypisieren des Menschen als heterozygot für eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder zumindest der für die katalytische Domäne oder C-terminale Domäne codierenden Sequenz davon; wobei der Mensch gegebenenfalls außerdem als die Nukleotidsequenz von SEQ ID NO: 28 oder zumindest die für die katalytische Domäne oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon und eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NOs: 29–37 oder zumindest die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon umfassend genotypisiert wurde oder wird.In one example, the method (prior to administration of the ligand) comprises genotyping the human as heterozygous for a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or at least the sequence encoding the catalytic domain or C-terminal domain from that; wherein the human optionally also as the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 28 or at least the coding for the catalytic domain or C-terminal domain coding sequence thereof and a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or at least the catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof has been or will be genotyped.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37.

Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that meet the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Gemäß einem zehnten Aspekt: Den Liganden nach einem der Aspekte 1 bis 9, wobei das Genom des Menschen als homozygot für eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder zumindest der für die katalytische oder C-terminale Domäne codierenden Sequenz davon; oder für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz, umfasst.According to a tenth aspect: The ligand according to any one of aspects 1 to 9, wherein the human genome as homozygous for a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 29-37 or at least that for the catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof; or, for a PCSK9, the alternative coding nucleotide sequence.

”Homozygot” bedeutet hier, dass im Genotyp des Menschen jedes Allel die gleiche Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NOs: 29–37 oder zumindest die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon genotypisiert wurde oder wird."Homozygous" as used herein means that in the human genotype, each of the alleles has been or will be genotyped the same nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 29-37 or at least the catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof.

Bei einem Beispiel umfasst das Verfahren das Genotypisieren des Menschen als homozygot für eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder zumindest der für die katalytische oder C-terminale Domäne codierenden Sequenz davon; oder für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz, umfasst.In one example, the method comprises genotyping the human as homozygous for a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or at least the catalytic or C-terminal domain encoding sequence thereof; or, for a PCSK9, the alternative coding nucleotide sequence.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29-35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that satisfy the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ). In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Gemäß einem elften Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand eine Antikörperbindungsstelle umfasst, die (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine humane PCSK9 bindet, die eine Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 4–27 umfasst, und gegebenenfalls festgestellt wurde oder wird, dass er zu einer solchen Bindung fähig ist.According to an eleventh aspect, the ligand of any one of the preceding aspects, wherein the ligand comprises an antibody binding site that binds (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO : 4-27, and has been or may be determined to be capable of such binding.

Bei einem Beispiel umfasst das Verfahren (vor der Verabreichung des Liganden) den Schritt der Feststellung, dass der Ligand zur Bindung an die humane PCSK9 fähig ist.In one example, the method (prior to administration of the ligand) comprises the step of determining that the ligand is capable of binding to the human PCSK9.

Bei einem Beispiel ist die Bindung eine spezifische Bindung. Bei einem Beispiel bindet der Ligand (oder wurde als bindend festgestellt) an die PCSK9 mit einer Affinität (Kd) von 1 mM, 100 mM, 10 nM oder 1 nM oder weniger. Gemäß einer Ausführungsform beträgt die Affinität nicht weniger als 10, 100 oder 1000 fM.In one example, the binding is a specific binding. In one example, the ligand binds (or was found to be binding) to the PCSK9 with an affinity (Kd) of 1 mM, 100 mM, 10 nM, or 1 nM or less. In one embodiment, the affinity is not less than 10, 100 or 1000 fM.

Bei einem Beispiel wird die Bindung oder Affinität durch SPR oder ELISA bestimmt.In one example, binding or affinity is determined by SPR or ELISA.

Bei einem Beispiel wird die Krankheit bzw. das Leiden durch eine humane PCSK9 vermittelt, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 4-27.In one example, the disease is mediated by a human PCSK9 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 4-27.

Bei einem Beispiel ist die Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 4–23, 26 und 27; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 4–14 und 18–27; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 4–14, 18–23, 26 und 27. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Sequenzen, die nicht 46L umfassen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the amino acid sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4-23, 26 and 27; or selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4-14 and 18-27; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 4-14, 18-23, 26 and 27. These are naturally occurring sequences that are not 46L and that meet the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 18, 19 oder 20, die ein 425S umfasst, das mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 18, 19, or 20, which includes a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 10, 11, 12, 26 und 27, die 670G umfassen, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the amino acid sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 10, 11, 12, 26, and 27, which comprise 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 10–14 und 18–27; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 10–14, 18–23, 26 und 27. Hierbei handelt es sich um Sequenzen, bei denen eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden von SEQ ID NO: 1–3 (Form a) vorliegt und die die unten aufgeführten Kriterien erfüllen.In one example, the amino acid sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 10-14 and 18-27; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 10-14, 18-23, 26, and 27. These are sequences in which a naturally occurring combination of differences of SEQ ID NOs: 1-3 (form a) and meet the criteria listed below.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 4. In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 4.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 5.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 5.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 6.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 6.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 7.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 7.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: B.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: B.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 9.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 9.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 10.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 10.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 11.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 11.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 12.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 12.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 13.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 13.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 14.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 14.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 15.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 15.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 16.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 16.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 17.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 17.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 18.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 18.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 19.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 19.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 20.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 20.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 21.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 21.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 22.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 22.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 23.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 23.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 24.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 24.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 25.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 25.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 26.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 26.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Aminosäuresequenz um SEQ ID NO: 27.In one example, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 27.

Gemäß einem zwölften Aspekt: Den Liganden nach Aspekt 11, wobei es sich bei dem Liganden um einen Antikörper oder ein Antikörperfragment handelt. Beispielsweise handelt es sich bei dem Antikörper oder Antikörperfragment um einen PCSK9-Antagonisten, z. B. neutralisiert er PCSK9.According to a twelfth aspect: The ligand according to aspect 11, wherein the ligand is an antibody or an antibody fragment. For example, the antibody or antibody fragment is a PCSK9 antagonist, e.g. For example, it neutralizes PCSK9.

Beispiele für solche Antikörper sind zum Beispiel in WO 2008/057457 , WO2008/057458 , WO 2008/057459 , WO 2008/063382 , WO 2008/133647 , WO 2009/100297 , WO 2009/100318 , WO 2011/037791 , WO 2011/053759 , WO 2011/053783 , WO 2008/125623 , WO 2011/072263 , WO 2009/055783 , WO 2010/029513 , WO 2011/111007 , WO 2010/077854 offenbart, deren Offenbarungen und Sequenzen solcher Antikörper hiermit durch Verweis in ihrer Gesamtheit zur Verwendung in der Erfindung Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden. Ein spezielles Beispiel ist AMG 145 (Amgen), LY3015014 (Eli Lilly) oder Alirocumab. Vorteilhafterweise handelt es sich bei dem Liganden um Alirocumab, oder er umfasst dieses. Alternativ dazu handelt es sich bei dem Liganden um Evolocumab, oder er umfasst dieses.Examples of such antibodies are, for example, in WO 2008/057457 . WO2008 / 057458 . WO 2008/057459 . WO 2008/063382 . WO 2008/133647 . WO 2009/100297 . WO 2009/100318 . WO 2011/037791 . WO 2011/053759 . WO 2011/053783 . WO 2008/125623 . WO 2011/072263 . WO 2009/055783 . WO 2010/029513 . WO 2011/111007 . WO 2010/077854 whose disclosures and sequences of such antibodies are incorporated herein by reference in their entirety for use in the invention. A specific example is AMG 145 (Amgen), LY3015014 (Eli Lilly) or Alirocumab. Advantageously, the ligand is or comprises alirocumab. Alternatively, the ligand is or comprises evolocumab.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden um SAR236553/REGN727 (Sanofi Aventis/Regeneron) oder ein PCSK9-bindendes Derivat davon. In one example, the ligand is SAR236553 / REGN727 (Sanofi Aventis / Regeneron) or a PCSK9 binding derivative thereof.

Bei einem Beispiel umfasst der Ligand einen neutralisierenden Antikörper, der an PCSK9 bindet, oder er besteht daraus, wobei der Antikörper an PCSK9 bindet und die Wahrscheinlichkeit, dass PCSK9 an LDLR bindet, reduziert.In one example, the ligand comprises or consists of a neutralizing antibody that binds to PCSK9, which antibody binds to PCSK9 and reduces the likelihood that PCSK9 will bind to LDLR.

Den Liganden nach Aspekt 11, wobei es sich bei dem Liganden um einen PCSK9-Antagonisten handelt, der z. B. PCSK9 neutralisiert.The ligand of aspect 11, wherein the ligand is a PCSK9 antagonist, e.g. B. PCSK9 neutralized.

Bei einem Beispiel eines beliebigen Aspekts der Erfindung umfasst der Ligand einen Liganden ausgewählt aus Evolocumab, 1D05-IgG2 (Merck & Co.), ALN-PCS02 (Alnylam), RN316 (Pfizer-Rinat), LY3015014 (Eli Lilly) und Alirocumab (SAR236553/REGN727; Sanofi Aventis/Regeneron).In an example of any aspect of the invention, the ligand comprises a ligand selected from evolocumab, 1D05-IgG2 (Merck & Co.), ALN-PCS02 (Alnylam), RN316 (Pfizer-Rinat), LY3015014 (Eli Lilly), and alirocumab (SAR236553 / REGN727; Sanofi Aventis / Regeneron).

Gemäß einem dreizehnten Aspekt: Den Liganden nach einem der Aspekte 1 bis 10, wobei (i) der Ligand eine Sequenz aufeinanderfolgender Nukleotide umfasst, die spezifisch mit einer Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder zumindest der für die katalytische Domäne oder C-terminale Domäne codierenden Sequenz davon hybridisiert (oder mit einer für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz hybridisiert), oder spezifisch mit einer Antisense-Sequenz oder einem RNA-Transkript der Sequenz hybridisiert, wobei die Sequenz aufeinanderfolgender Nukleotide mit wenigstens einem Nukleotid hybridisiert, das in der ausgewählten Sequenz vorhanden ist, die nicht in SEQ ID NO: 28 vorhanden ist, oder mit einer Antisense-Sequenz beziehungsweise einem RNA-Transkript davon hybridisiert; und/oder (ii) der Ligand eine Sequenz von wenigstens 10 aufeinanderfolgenden Nukleotiden einer Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NOs: 29–37 davon (oder eine für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz) umfasst oder eine Antisense-Sequenz oder RNA-Version dieser aufeinanderfolgenden Nukleotide ist, wobei die Sequenz aufeinanderfolgender Nukleotide wenigstens ein Nukleotid umfasst, das in der ausgewählten Sequenz vorhanden ist, aber nicht in SEQ ID NO: 28.According to a thirteenth aspect: The ligand according to any one of aspects 1 to 10, wherein (i) the ligand comprises a sequence of consecutive nucleotides specific to a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or at least one of the catalytic domain or C-terminal domain encoding sequence thereof hybridizes (or hybridized to a nucleotide sequence encoding a PCSK9 of the alternative), or specifically hybridizes with an antisense sequence or an RNA transcript of the sequence, wherein the sequence of consecutive nucleotides comprises at least one Nucleotide present in the selected sequence not present in SEQ ID NO: 28 or hybridizing with an antisense sequence or an RNA transcript thereof; and / or (ii) the ligand comprises a sequence of at least 10 contiguous nucleotides of a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 thereof (or a nucleotide sequence encoding a PCSK9 of the alternative) or an antisense sequence or RNA Version of these consecutive nucleotides, wherein the sequence of consecutive nucleotides comprises at least one nucleotide present in the selected sequence but not in SEQ ID NO: 28.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that satisfy the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35. In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Gemäß einer Ausführungsform umfasst der Ligand wenigstens 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 oder 100 aufeinanderfolgende Nukleotide der Nukleotidsequenz.In one embodiment, the ligand comprises at least 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 or 100 consecutive nucleotides of the nucleotide sequence.

Gemäß einem vierzehnten Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei es sich bei der Krankheit bzw. dem Leiden um Hyperlipidämie, Hypercholesterinämie (z. B. familiäre Hypercholesterinämie), Herzanfall, Schlaganfall, koronare Herzkrankheit, Atherosklerose oder eine Herz-Kreislauf-Krankheit oder ein Herz-Kreislauf-Leiden handelt.According to a fourteenth aspect, the ligand according to any one of the preceding aspects, wherein the disease or condition is hyperlipidemia, hypercholesterolemia (e.g., familial hypercholesterolemia), heart attack, stroke, coronary heart disease, atherosclerosis, or cardiovascular disease. Illness or cardiovascular disease.

Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei es sich bei der Krankheit bzw. dem Leiden um Hypercholesterinämie, Hyperlipidämie, Hypercholesterinämie, Dyslipidämie, cholestatische Leberkrankheit, nephrotisches Syndrom, Hypothyroidismus, Obesitas, Atherosklerose oder eine Herz-Kreislauf-Krankheit handelt.The ligand of any one of the preceding aspects, wherein the disease or condition is hypercholesterolemia, hyperlipidemia, hypercholesterolemia, dyslipidemia, cholestatic liver disease, nephrotic syndrome, hypothyroidism, obesity, atherosclerosis or cardiovascular disease.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Krankheit bzw. dem Leiden um Hypercholesterinämie. Der Begriff ”Hypercholesterinämie” bezieht sich, so wie er hier verwendet wird, auf einen Zustand, bei dem die Cholesterinspiegel auf über eine erwünschte Konzentration erhöht sind. Gemäß einigen Ausführungsformen werden hiermit erhöhte Serumcholesterinspiegel bezeichnet. Gemäß einigen Ausführungsformen werden bei den gewünschten Konzentrationen verschiedene ”Risikofaktoren” berücksichtigt, die dem Fachmann bekannt (und in US20120093818 beschrieben oder erwähnt) sind.In one example, the disease or condition is hypercholesterolemia. The term "hypercholesterolemia" as used herein refers to a condition wherein cholesterol levels are elevated above a desired level. According to some embodiments, this refers to increased serum cholesterol levels. According to some embodiments, at the desired concentrations, various "risk factors" are considered which are known to the person skilled in the art (and in US Pat US20120093818 described or mentioned).

Den Liganden nach einem vorhergehenden Aspekt, wobei der Mensch als heterozygot für familiäre Hypercholesterinämie, statinintolerant oder nicht auf Statine ansprechend identifiziert wurde oder bei dem das Risiko des Auftretens von Hypercholesterinämie, Dyslipidämie, cholestatischer Leberkrankheit, nephrotischem Syndrom, Hypothyroidismus, Obesitas, Atherosklerose oder eine Herz-Kreislauf-Krankheit identifiziert wurde.The ligand according to any preceding aspect, wherein the human has been identified as heterozygous for familial hypercholesterolemia, statin intolerant or not statinally responsive, or at risk for the occurrence of hypercholesterolemia, dyslipidemia, cholestatic liver disease, nephrotic syndrome, hypothyroidism, obesity, atherosclerosis or a heart Cycle disease was identified.

Gemäß einem fünfzehnten Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei die Krankheit bzw. das Leiden mit erhöhtem LDL-Cholesterin assoziiert ist.According to a fifteenth aspect: The ligand of any one of the preceding aspects, wherein the disease is associated with elevated LDL cholesterol.

Cholesterinspiegel werden in den Vereinigten Staaten und in einigen anderen Ländern in Milligramm (mg) Cholesterin pro Deziliter (dl) Blut gemessen. In Kanada und den meisten europäischen Ländern wird Cholesterin in Millimol (mmol) pro Liter (l) Blut gemessen. Unten sind allgemeine Richtwerte für Idealbereiche und erhöhte Bereiche angeführt. Gesamtcholesterin (USA und einige andere Länder) Gesamtcholesterin* (Kanada und die meisten europäischen Länder) unter 200 mg/dl unter 5,2 mmol/l ideal 200–239 mg/dl 5,2–5,6 mmol/l grenzwertig hoch 240 mg/dl und darüber über 6,2 mmol/l hoch LDL-Cholesterin (USA und einige andere Länder) LDL-Cholesterin* (Kanada und die meisten europäischen Länder) 100–129 mg/dl 2,6–3,3 mmol ideal 130–159 mg/dl 3,4–4,1 mmol grenzwertig hoch 160–189 mg/dl 4,1–4,9 mmol hoch 190 mg/dl und darüber über 4,9 mmol sehr hoch *Kanadische und europäische Richtlinien unterscheiden sich etwas von den US-Richtlinien.Cholesterol levels are measured in the United States and in some other countries in milligrams (mg) of cholesterol per deciliter (dl) of blood. In Canada and most European countries, cholesterol is measured in millimoles (mmol) per liter (l) of blood. Below are general guidelines for ideal ranges and elevated ranges. Total cholesterol (USA and some other countries) Total cholesterol * (Canada and most European countries) below 200 mg / dl below 5.2 mmol / l ideal 200-239 mg / dl 5.2-5.6 mmol / l borderline high 240 mg / dl and above over 6.2 mmol / l high LDL cholesterol (US and some other countries) LDL cholesterol * (Canada and most European countries) 100-129 mg / dl 2.6-3.3 mmol ideal 130-159 mg / dl 3.4-4.1 mmol borderline high 160-189 mg / dl 4.1-4.9 mmol high 190 mg / dl and above over 4.9 mmol very high * Canadian and European guidelines are slightly different from US regulations.

Diese Umrechnungen beruhen auf US-Richtlinien.These conversions are based on US guidelines.

Erhöhtes LDL-Cholesterin ist somit 160 mg/dl oder darüber (4,1 mmol/l oder darüber).Elevated LDL cholesterol is thus 160 mg / dL or above (4.1 mmol / L or above).

Gemäß einem sechzehnten Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand die Bindung von humanem PCSK9 an den humanen LDL-Rezeptor inhibiert und gegebenenfalls zu einer solchen Inhibierung fähig war oder als dazu fähig bestimmt wurde. According to a sixteenth aspect: The ligand according to any one of the preceding aspects, wherein the ligand inhibits the binding of human PCSK9 to the human LDL receptor and was optionally capable of or was determined to be capable of such inhibition.

Bei einem Beispiel umfasst das Verfahren (vor der Verabreichung des Liganden) die Feststellung, dass der Ligand zu einer solchen Inhibierung fähig ist.In one example, the method (prior to administration of the ligand) comprises determining that the ligand is capable of such inhibition.

Die Feststellung einer Inhibierung ist z. B. die Inhibierung in einer Blut- oder Serumprobe bei RT, bei einem pH-Wert von 7, bei 37 Grad Celsius und/oder unter den physiologischen Bedingungen eines menschlichen Körpers.The finding of an inhibition is z. B. inhibition in a blood or serum sample at RT, at a pH of 7, at 37 degrees Celsius and / or under the physiological conditions of a human body.

Gemäß einem siebzehnten Aspekt: Den Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Mensch resistent oder im Wesentlichen resistent gegenüber einer Statin-(z. B. Avorstatin- und/oder Fluvastatin-)Behandlung der Krankheit bzw. des Leidens ist.According to a seventeenth aspect: The ligand according to any preceding aspect, wherein the human is resistant or substantially resistant to statin (eg, avorstatin and / or fluvastatin) treatment of the disease or condition.

Gemäß einem achtzehnten Aspekt: Der Ligand nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens in einem Menschen bestimmt ist,

• (i) dessen Genom SEQ ID NO: 29 umfasst und wobei der Mensch ASW-, YRI-, GBR-, TSI-, CLM-, LWK-, MXL-, JPT-, PUR-, IBS-, FIN- oder CEU-Abstammung ist; oder
• (ii) dessen Genom SEQ ID NO: 30 umfasst und wobei der Mensch ASW-, YRI-, GBR-, TSI-, CLM-, CHB-, LWK-, CHS-, JPT-, PUR-, FIN- oder CEU-Abstammung ist; oder
• (iii) dessen Genom SEQ ID NO: 32 umfasst und wobei der Mensch ASW-, GBR-, TSI-, CLM-, JPT-, PUR-, IBS-, FIN- oder CEU-Abstammung ist; oder
• (iv) dessen Genom SEQ ID NO: 33 umfasst und wobei der Mensch LWK-, ASW-, YRI- oder CLM-Abstammung ist; oder
• (v) dessen Genom SEQ ID NO: 34 umfasst und wobei der Mensch LWK-, ASW- oder YRI-Abstammung ist; oder
• (vi) dessen Genom SEQ ID NO: 35 umfasst und wobei der Mensch PUR-, TSI-, FIN- oder CEU-Abstammung ist; oder
• (vii) dessen Genom SEQ ID NO: 36 umfasst und wobei der Mensch LWK-, ASW- oder YRI-Abstammung ist; oder
• (viii) dessen Genom SEQ ID NO: 37 umfasst und wobei der Mensch CHS-, ASW-, JPT-, PUR- oder CHB-Abstammung ist.

• (i) whose genome comprises SEQ ID NO: 29 and wherein human beings are ASW, YRI, GBR, TSI, CLM, LWK, MXL, JPT, PUR, IBS, FIN or CEU Descent is; or
• (ii) whose genome comprises SEQ ID NO: 30, and wherein human beings are ASW, YRI, GBR, TSI, CLM, CHB, LWK, CHS, JPT, PUR, FIN or CEU Descent is; or
• (iii) whose genome comprises SEQ ID NO: 32 and wherein the human is ASW, GBR, TSI, CLM, JPT, PUR, IBS, FIN or CEU ancestry; or
• (iv) whose genome comprises SEQ ID NO: 33 and wherein the human is LWK, ASW, YRI or CLM lineage; or
• (v) whose genome comprises SEQ ID NO: 34 and wherein the human is LWK, ASW or YRI derived; or
• (vi) whose genome comprises SEQ ID NO: 35 and wherein the human is PUR, TSI, FIN or CEU ancestry; or
• (vii) whose genome comprises SEQ ID NO: 36 and wherein the human is LWK, ASW or YRI derived; or
• (viii) whose genome comprises SEQ ID NO: 37 and wherein the human is CHS, ASW, JPT, PUR or CHB descent.

Gemäß einem neunzehnten Aspekt: Der Ligand nach einem der vorhergehenden Aspekte, wobei der Ligand zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens in einem Menschen bestimmt ist,

• (i) der die PCSK9-Form f exprimiert und wobei der Mensch ASW-, YRI-, GBR-, TSI-, CLM-, LWK-, MXL-, JPT-, PUR-, IBS-, FIN- oder CEU-Abstammung ist; oder
• (ii) der die PCSK9-Form c exprimiert und wobei der Mensch ASW-, YRI-, GBR-, TSI-, CLM-, CHB-, LWK-, CHS-, JPT-, PUR-, FIN- oder CEU-Abstammung ist; oder
• (iii) der die PCSK9-Form p exprimiert und wobei der Mensch ASW-, GBR-, TSI-, CLM-, JPT-, PUR-, IBS-, FIN- oder CEU-Abstammung ist; oder
• (iv) der die PCSK9-Form m exprimiert und wobei der Mensch LWK-, ASW-, YRI- oder CLM-Abstammung ist; oder
• (v) der die PCSK9-Form e exprimiert und wobei der Mensch LWK-, ASW- oder YRI-Abstammung ist; oder
• (vi) der die PCSK9-Form h exprimiert und wobei der Mensch PUR-, TSI-, FIN- oder CEU-Abstammung ist; oder
• (vii) der die PCSK9-Form aj exprimiert und wobei der Mensch LWK-, ASW- oder YRI-Abstammung ist; oder
• (viii) der die PCSK9-Form q exprimiert und wobei der Mensch CHS-, ASW-, JPT-, PUR- oder CHB-Abstammung ist.

• (i) expressing the PCSK9 form f and wherein humans are ASW, YRI, GBR, TSI, CLM, LWK, MXL, JPT, PUR, IBS, FIN or CEU ancestry is; or
• (ii) expressing the PCSK9 form c, and wherein human beings have ASW, YRI, GBR, TSI, CLM, CHB, LWK, CHS, JPT, PUR, FIN or CEU ancestry is; or
• (iii) expressing the PCSK9 form p and wherein the human is ASW, GBR, TSI, CLM, JPT, PUR, IBS, FIN or CEU ancestry; or
• (iv) expressing the PCSK9 form m and wherein the human is LWK, ASW, YRI or CLM lineage; or
• (v) expressing the PCSK9 form e and wherein the human being is LWK, ASW or YRI descent; or
• (vi) expressing the PCSK9 form h and wherein the human is PUR, TSI, FIN or CEU ancestry; or
• (vii) expressing the PCSK9 form aj, and wherein the human is LWK, ASW or YRI descent; or
• (viii) expressing the PCSK9 form q and wherein the human is CHS, ASW, JPT, PUR or CHB descent.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem zwanzigsten Aspekt: Eine pharmazeutische Zusammensetzung oder ein pharmazeutisches Kit zur Behandlung und/oder Prävention eines durch PCSK9 vermittelten Leidens oder einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit (wie z. B. in Aspekt 14 oder 15 aufgeführt), wobei die Zusammensetzung bzw. das Kit einen Liganden nach einem der vorhergehenden Aspekte und gegebenenfalls ein Statin (z. B. Cerovastatin, Atorvastatin, Simvastatin, Pitavastin, Rosuvastatin, Fluvastatin, Lovastatin oder Pravastatin) umfasst; und gegebenenfalls in Kombination mit einem Etikett oder Instruktionen zur Anwendung bei der Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens bei einem Menschen (was z. B. die Behandlung eines Menschen wie in Aspekt 18 oder 19 abdeckt); wobei das Etikett bzw. die Instruktionen gegebenenfalls eine Arzneimittelzulassungsnummer (z. B. eine FDA- oder EMA-Zulassungsnummer) umfasst; wobei das Etikett bzw. die Instruktionen gegebenenfalls Anweisungen zur Verabreichung von Alirocumab oder Evolocumab an den Menschen umfassen; wobei das Kit gegebenenfalls ein IV- bzw. Injektionsgerät umfasst, welches den Liganden (und z. B. auch ein Statin) umfasst.According to a twentieth aspect: A pharmaceutical composition or a pharmaceutical kit for the treatment and / or prevention of a PCSK9-mediated condition or a PCSK9-mediated disease (as set out, for example, in Aspects 14 or 15), wherein the composition or the kit comprises a ligand according to any preceding aspect and optionally a statin (eg, cerovastatin, atorvastatin, simvastatin, pitavastin, rosuvastatin, fluvastatin, lovastatin or pravastatin); and optionally in combination with a label or instructions for use in the treatment and / or prevention of the disease or condition in a human (e.g., covering treatment of a human, as in Aspects 18 or 19); the label or instructions optionally comprising a drug approval number (eg, an FDA or EMA approval number); optionally, the label or instructions include instructions for administering alirocumab or evolocumab to a human; wherein the kit optionally comprises an IV or injection device which comprises the ligand (and, for example, also a statin).

Gemäß einem einundzwanzigsten Aspekt: Ein Verfahren zur Herstellung einer Anti-Human-PCSK9-Antikörper-Bindungsstelle, wobei das Verfahren die Gewinnung einer Mehrzahl von Anti-PCSK9-Antikörper-Bindungsstellen, die Durchmusterung der Antikörper-Bindungsstellen auf Bindung an (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine aus der aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q bestehenden Gruppe ausgewählte humane PCSK9 oder eine katalytische oder C-terminale Domäne oder ein Peptid davon, die bzw. das eine Aminosäurevariation von der entsprechenden Sequenz von SEQ ID NO: 1, 2 oder 3 umfasst, und Isolieren einer Antikörperbindungsstelle, die im Durchmusterungsschritt bindet, und gegebenenfalls Herstellen eines die PCSK9 der Form f, c, r, p, m, e, h, aj oder q bindenden Fragments oder Derivats des isolierten Antikörpers umfasst.According to a twenty-first aspect: A method of producing an anti-human PCSK9 antibody binding site, the method comprising obtaining a plurality of anti-PCSK9 antibody binding sites, screening the antibody binding sites for binding to (i) a PCSK9 the alternative or (ii) a human PCSK9 or a catalytic or C-terminal domain or a peptide thereof selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q; comprising an amino acid variation from the corresponding sequence of SEQ ID NO: 1, 2 or 3 and isolating an antibody binding site which binds in the screening step and optionally producing a PCSK9 of the form f, c, r, p, m, e, h , aj or q binding fragment or derivative of the isolated antibody.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Bei einem Beispiel dieses und des nächsten Aspekts umfasst die Mehrzahl der Bindungensstellen eine Mehrzahl an 4-Ketten-Antikörpern oder Fragmenten davon, z. B. dAbs, Fabs oder scFvs, oder besteht daraus. Geeignete Verfahren zur Herstellung von Mehrzahlen von Bindungsstellen zur Durchmusterung schließen Phagen-Display (wodurch man eine Phagen-Display-Bibliothek von Antikörperbindungsstellen erhält), Ribosomen-Display (wodurch man eine Ribosomen-Display-Bibliothek von Antikörperbindungsstellen erhält), Hefe-Display (wodurch man eine Hefe-Display-Bibliothek von Antikörperbindungsstellen erhält) und die Immunisierung eines nicht menschlichen Wirbeltieres (z. B. eines Nagetieres, z. B. einer Maus oder Ratte, z B. einer Velocimouse^TM, Kymouse^TM, Xenomouse^TM, Aliva Mouse^TM, Hublab Mouse^TM, Omnimouse^TM, Omnirat^TM oder MeMo Mouse^TM) mit einem PCSK9-Epitop und die Isolierung eines Repertoires antikörperproduzierender Zellen (z. B. einer B-Zelle, einer Plasmazelle oder ein Plasmablast-Repertoire) und/oder ein Repertoire isolierter Antikörper ein.In one example of this and the next aspect, the plurality of binding sites comprises a plurality of 4-chain antibodies or fragments thereof, e.g. DAbs, Fabs or scFvs, or consists thereof. Suitable methods for making multiple numbers of binding sites for screening include phage display (to obtain a phage display library of antibody binding sites), ribosome display (to obtain a ribosome display library of antibody binding sites), yeast display (whereby obtaining a yeast display library of antibody binding sites) and immunizing a non-human vertebrate (e.g., a rodent, e.g., a mouse or rat, e.g., a Velocimouse ^™ , Kymouse ^™ , Xenomouse ^™ , Aliva Mouse ^TM , Hublab Mouse ^™ , Omnimouse ^™ , Omnirat ^™ or MeMo Mouse ^™ ) with a PCSK9 epitope and the isolation of a repertoire of antibody-producing cells (eg a B-cell, a plasma cell or a plasma-load repertoire) and / or Repertoire of isolated antibodies.

Bei einem Beispiel umfasst das Verfahren die Auswahl einer oder mehrerer Antikörperbindungsstellen, die spezifisch an ein humanes PCSK9-Epitop binden, das eine Aminosäurevariation aus der entsprechenden Sequenz von SEQ ID NO: 1, 2 oder 3 umfasst.In one example, the method comprises selecting one or more antibody binding sites that specifically bind to a human PCSK9 epitope comprising an amino acid variation from the corresponding sequence of SEQ ID NO: 1, 2 or 3.

Gemäß einem zweiundzwanzigsten Aspekt: Verfahren zur Herstellung eines Anti-Human-PCSK9-Antikörpers, wobei das Verfahren die Immunisierung eines nicht humanen Wirbeltieres (z. B. einer Maus oder einer Ratte) mit (i) einer PCSK9 der Alternative oder (ii) einer humanen PCSK9, welche eine Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Aminosäuresequenzen der Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q oder einer katalytischen oder C-terminalen Domäne oder eines Peptids davon, das eine Aminosäurevariation von der entsprechenden Sequenz von SEQ ID NO: 1, 2 oder 3 umfasst, und das Isolieren eines Antikörper, der eine humane PCSK9 umfassend ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q oder einer katalytischen oder C-terminalen Domäne oder eines Peptids davon, das eine Aminosäurevariation von der entsprechenden Sequenz von SEQ ID NO: 1, 2 oder 3 umfasst, und gegebenenfalls Herstellen eines die PCSK9 der Form f, c, r, p, m, e, h, aj oder q bindenden Fragments oder Derivativs des isolierten Antikörper umfasst.According to a twenty-second aspect: A method of producing an anti-human PCSK9 antibody, the method comprising immunizing a non-human vertebrate (e.g., a mouse or rat) with (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 which has an amino acid sequence selected from the group consisting of the amino acid sequences of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q or a catalytic or C-terminal domain or a peptide thereof which has an amino acid variation of SEQ ID NO: 1, 2 or 3, and isolating an antibody comprising a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q or a catalytic or C-terminal domain or a peptide thereof comprising an amino acid variation from the corresponding sequence of SEQ ID NO: 1, 2 or 3, and optionally producing a PCSK9 of the form f, c, r, p, m , e, h, aj or q binding fragment or derivative of the isolated antibody.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem dreiundzwanzigsten Aspekt: Das Verfahren nach Aspekt 21 oder 22, welches den Schritt der Gewinnung einer Nukleinsäure umfasst, die für den Antikörper, das Fragment, das Derivat oder die Bindungsstelle codiert, und gegebenenfalls Insertieren der Nukleinsäure in einem Expressionsvektor.According to a twenty-third aspect: The method of aspect 21 or 22, comprising the step of recovering a nucleic acid encoding the antibody, fragment, derivative or binding site and optionally inserting the nucleic acid into an expression vector.

Zum Beispiel umfasst das Verfahren das Isolieren einer Zelle (z. B. B-Zelle, Plasmablast, Plasmazelle oder Gedächtniszelle), welche die Nukleinsäure umfasst, wobei die Zelle aus einem nicht menschlichen Wirbeltier erhalten wird, das mit dem PCSK9-Epitop immunisiert wurde. For example, the method comprises isolating a cell (eg, B cell, plasma load, plasma cell, or memory cell) comprising the nucleic acid, wherein the cell is obtained from a non-human vertebrate animal that has been immunized with the PCSK9 epitope.

Gemäß einem vierundzwanzigsten Aspekt: Ein Kit zum PCSK9-Genotypisieren eines Menschen, wobei das Kit eine Nukleinsäure umfasst, die (i) eine Sequenz von 10 oder mehr (z. B. 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 oder mehr) aufeinanderfolgenden Nukleotiden umfasst, die spezifisch mit (i) einer für eine PCSK9 der Alternative codierenden Nukleotidsequenz oder (ii) einer Nukleotidsequenz, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–37 oder zumindest der für die katalytische Domäne oder C-terminale Domäne codierenden Sequenz davon hybridisiert, oder spezifisch mit einer Antisense-Sequenz oder einem RNA-Transkript der Sequenz hybridisiert, wobei die Sequenz aufeinanderfolgender Nukleotide mit wenigstens einem Nukleotid hybridisiert, das in der ausgewählten Sequenz vorhanden ist, das nicht in SEQ ID NO: 28 vorhanden ist, oder mit einer Antisense-Sequenz oder einem RNA-Transkript davon hybridisiert; und/oder (ii) eine Sequenz von wenigstens 10 oder mehr (z. B. 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 oder mehr) Nukleotiden einer Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NOs: 29–37 (oder die Nukleotidsequenz von (i)) umfasst oder eine Antisense-Sequenz oder RNA-Version dieser aufeinanderfolgenden Nukleotide umfasst, wobei die Sequenz aufeinanderfolgender Nukleotide wenigstens ein Nukleotid umfasst, das in der ausgewählten Sequenz vorhanden ist, aber nicht in SEQ ID NO: 28.According to a twenty-fourth aspect: A kit for PCSK9 genotyping of a human, the kit comprising a nucleic acid having (i) a sequence of 10 or more (e.g., 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 or more) contiguous nucleotides specific to (i) a nucleotide sequence encoding a PCSK9 of the alternative or (ii) a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or at least the catalytic domain or C-terminal domain encoding sequence thereof hybridizes, or specifically hybridizes with an antisense sequence or an RNA transcript of the sequence, wherein the sequence of consecutive nucleotides hybridizes to at least one nucleotide present in the selected sequence which is not present in SEQ ID NO: 28 or hybridizes with an antisense sequence or an RNA transcript thereof; and / or (ii) a sequence of at least 10 or more (eg, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, or more) nucleotides of a nucleotide sequence selected from the group consisting from SEQ ID NOs: 29-37 (or the nucleotide sequence of (i)) or comprises an antisense sequence or RNA version of these consecutive nucleotides, wherein the sequence of consecutive nucleotides comprises at least one nucleotide present in the selected sequence, but not in SEQ ID NO: 28.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that satisfy the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Gemäß einem fünfundzwanzigsten Aspekt: Ein Kit zur PCSK9-Genotypisierung oder -Phänotypisierung eines Menschen, wobei das Kit einen Liganden gemäß einem der Aspekte 1 bis 19 oder einen Antikörper, ein Fragment oder ein Derivat produziert durch das Verfahren nach einem der Aspekte 21 bis 23 umfasst.According to a twenty-fifth aspect: A kit for human PCSK9 genotyping or phenotyping, wherein the kit comprises a ligand according to any of aspects 1 to 19 or an antibody, fragment or derivative produced by the method of any of aspects 21 to 23 ,

Gemäß einem sechsundzwanzigsten Aspekt: Verwendung eines Anti-PCSK9-Liganden, der an (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q bindet, bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens bei einem Menschen, dessen Genom (iii) eine Nukleotidsequenz, die für die PCSK9 von (i) codiert; oder (iv) eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–37 umfasst, gegebenenfalls zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens bei einem Menschen, wie in Aspekt 18 oder 19 angeführt. According to a twenty-sixth aspect: Use of an anti-PCSK9 ligand linked to (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h , aj and q, in the manufacture of a medicament for the treatment and / or prevention of a PCSK9 mediated disease or a PCSK9 mediated disease in a human whose genome (iii) encodes a nucleotide sequence encoding the PCSK9 of (i); or (iv) a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37, optionally for the treatment and / or prevention of a PCSK9 mediated disease or a PCSK9 mediated disease in a human, as recited in Aspects 18 or 19 ,

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem siebenundzwanzigsten Aspekt: Verwendung eines Anti-PCSK9-Liganden, der an (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q bindet, bei der Herstellung eines Medikaments zum Targeting der PCSK9 in einem Menschen zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens, gegebenenfalls zum Targeting von PCSK9 bei einem Menschen, wie in Aspekt 18 oder 19 angeführt.According to a twenty-seventh aspect: use of an anti-PCSK9 ligand linked to (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h , aj and q, in the manufacture of a medicament for targeting PCSK9 in a human for the treatment and / or prevention of a PCSK9 mediated disease or a PCSK9 mediated condition, optionally for targeting PCSK9 in a human, such as in aspect 18 or 19 cited.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that satisfy the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Bei dem Liganden kann es sich um einen beliebigen hier offenbarten Anti-PCSK9-Liganden handeln. The ligand may be any anti-PCSK9 ligand disclosed herein.

Gemäß einem achtundzwanzigsten Aspekt: Verwendung nach Aspekt 26 oder 27, wobei der Ligand, der Mensch, die Krankheit oder das Leiden gemäß einem der Aspekte 1 bis 19 ist.According to a twenty-eighth aspect: Use according to aspect 26 or 27, wherein the ligand, human, disease or condition is according to any of aspects 1 to 19.

Gemäß einem neunundzwanzigsten Aspekt: Ein Verfahren zum Targeting einer PCSK9 zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens bei einem Menschen, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Anti-PCSK9-Liganden an einen Menschen umfasst, der (i) eine für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz oder (ii) eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29-37 umfasst, wobei auf eine durch die Nukleotidsequenz codierte PCSK9 gezielt wird.According to a twenty-ninth aspect: A method for targeting a PCSK9 for the treatment and / or prevention of a PCSK9-mediated disease or a PCSK9-mediated condition in a human, the method comprising administering to a human an anti-PCSK9 ligand which ( i) a nucleotide sequence encoding a PCSK9 of the alternative, or (ii) a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37, targeting a PCSK9 encoded by the nucleotide sequence.

Bei dem Liganden kann es sich um einen beliebigen hier offenbarten Anti-PCSK9-Liganden handeln.The ligand may be any anti-PCSK9 ligand disclosed herein.

Gemäß einem dreißigsten Aspekt: Das Verfahren nach Aspekt 29, wobei das Verfahren das Targeting einer humanen PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q mit dem Liganden zur Behandlung und/oder Prävention der Krankheit bzw. des Leidens in dem Menschen umfasst.In a thirtieth aspect, the method of aspect 29, wherein the method comprises targeting a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q with the ligand for treatment and / or prevention of the disease or condition in the human being.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem einunddreißigsten Aspekt: Ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens bei einem Menschen, wobei das Verfahren das Targeting (i) einer PCSK9 der Alternative oder (ii) einer humanen PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q durch Verabreichung eines Liganden, der die PCSK9 bindet, an den Menschen umfasst, wodurch die Krankheit bzw. das Leiden bei dem Menschen behandelt und/oder verhindert wird.According to a thirty-first aspect: A method of treating and / or preventing a PCSK9 mediated disease or a PCSK9 mediated disease in a human, the method comprising targeting (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 selected from the A group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q, comprising administering to humans a ligand which binds the PCSK9 thereby treating the disease or condition in humans and / or or prevented.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Bei dem Liganden kann es sich um einen beliebigen hier offenbarten Anti-PCSK9-Liganden handeln.The ligand may be any anti-PCSK9 ligand disclosed herein.

Gemäß einem zweiunddreißigsten Aspekt: Das Verfahren nach Aspekt 31, wobei das Genom des Menschen eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37.According to a thirty-second aspect: The method of aspect 31, wherein the human genome comprises a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37.

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–35 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32 und 34–37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29–32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um natürlich vorkommende Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die nicht für 46L codieren und die die oben angeführten Kriterien erfüllen. Diese Gruppen umfassen Varianten, die mit erhöhtem LDL-C assoziiert sind.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-35 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32 and 34-37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-32, 34, 35 and 37. These are naturally occurring allelic (haplotype) sequences that do not code for 46L and that satisfy the criteria listed above. These groups include variants associated with elevated LDL-C.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34, die für ein 425S codiert, welches mit erhöhtem LDL-C assoziiert ist ( Pisciotta et al 2006 ).In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34, which codes for a 425S associated with elevated LDL-C ( Pisciotta et al 2006 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31 und 37, die für 670G codieren, bei dem es sich um einen Marker für den Schweregrad einer koronaren Atherosklerose handelt ( Chen et al 2005 ).In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31 and 37, which encode 670G, which is a marker of the severity of coronary atherosclerosis ( Chen et al 2005 ).

Bei einem Beispiel ist die Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35, 36 und 37; oder ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 31, 32, 34, 35 und 37. Hierbei handelt es sich um Allel-(Haplotyp-)Sequenzen, die eine natürlich vorkommende Kombination von Unterschieden zur SEQ ID NO: 28 (Form a) aufweisen und die die oben angeführten Kriterien erfüllen.In one example, the nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 31, 32, 34, 35, 36 and 37; or selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 31, 32, 34, 35, and 37. These are allelic (haplotype) sequences that contain a naturally occurring combination of differences from SEQ ID NO: 28 (form a ) and meet the above criteria.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 29.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 29.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 30. In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 30.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 31.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 31.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 32.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 32.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 33.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 33.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 34.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 34.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 35.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 35.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 36.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 36.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei der Nukleotidsequenz um SEQ ID NO: 37.In one example, the nucleotide sequence is SEQ ID NO: 37.

Gemäß einem dreiunddreißigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 29 bis 32, wobei der Mensch als positiv für eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder die für die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon in der Probe genotypisiert wurde oder wird.According to a thirty-third aspect: The method of any one of aspects 29 to 32, wherein said human being positive for a nucleotide sequence is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or the catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof was or will be genotyped in the sample.

Gemäß einem vierunddreißigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 29 bis 33, wobei der Mensch als positiv für (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine humane PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q phänotypisiert wurde oder wird.According to a thirty-fourth aspect, the method of any one of aspects 29 to 33, wherein the human is positive for (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p , m, e, h, aj and q has been or will be phenotyped.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem fünfunddreißigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 29 bis 34, wobei das Verfahren das Genotypisieren des Menschen als positiv für (i) eine für eine PCSK9 der Alternative codierende Nukleotidsequenz oder (ii) eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder die für die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon in der Probe genotypisiert wurde oder wird.According to a thirty-fifth aspect, the method of any one of aspects 29 to 34, wherein the method is human genotyping positive for (i) a nucleotide sequence encoding a PCSK9 of the alternative or (ii) a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 29-37 or the catalytic or C-terminal domain encoding sequence thereof was or is being genotyped in the sample.

Gemäß einem sechsunddreißigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 29 bis 35, wobei das Verfahren das Phänotypisieren des Menschen als positiv für (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine humane PCSK9-Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q umfasst.According to a thirty-sixth aspect, the method of any one of aspects 29 to 35, wherein the method is human phenotyping as positive for (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 sequence selected from the group consisting of forms f , c, r, p, m, e, h, aj and q.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem siebenunddreißigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 29 bis 36, wobei der Mensch als heterozygot für die Nukleotidsequenz von (i) oder eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder der für die katalytische Domäne oder C-terminale Domäne codierenden Sequenz davon genotypisiert wurde oder wird; wobei der Mensch gegebenenfalls als die Nukleotidsequenz von SEQ ID NO: 28 oder die für die katalytische Domäne oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon und e die Nukleotidsequenz von (i) oder eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NOs: 29–37 oder die für die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon in der Probe umfassend genotypisiert wurde oder wird.According to a thirty-seventh aspect: The method of any one of aspects 29 to 36, wherein the human is heterozygous for the nucleotide sequence of (i) or a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or the catalytic domain or C-terminal domain coding sequence thereof has been or will be genotyped; wherein the human optionally as the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 28 or the catalytic domain or C-terminal domain coding sequence thereof and e the nucleotide sequence of (i) or a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29 Or the sequence coding for the catalytic or C-terminal domain thereof has been or will be genotyped in the sample.

Gemäß einem achtunddreißigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 29 bis 37, wobei das Genom des Menschen als homozygot für die Nukleotidsequenz von (i) oder eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder die für die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon in der Probe genotypisiert wurde oder wird.According to a thirty-eighth aspect: The method of any one of aspects 29 to 37, wherein the human genome is homozygous for the nucleotide sequence of (i) or a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or US Pat catalytic or C-terminal domain coding sequence thereof has been or will be genotyped in the sample.

Gemäß einem neununddreißigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 29 bis 38, wobei das Verfahren das Genotypisieren des Menschen für die Nukleotidsequenz von (i) oder eine Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den SEQ ID NO: 29–37 oder die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon vor der Verabreichung des Liganden an den Menschen umfasst, wobei festgestellt wird, dass der Ligand zur Bindung an eine durch die ausgewählte Sequenz codierte PCSK9 fähig ist.According to a thirty-ninth aspect, the method of any one of aspects 29 to 38, wherein the method comprises human genotyping for the nucleotide sequence of (i) or a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or the catalytic or C-terminal Domain-encoding sequence thereof prior to administration of the ligand to a human, it being determined that the ligand is capable of binding to a PCSK9 encoded by the selected sequence.

Gemäß einem vierzigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 29 bis 39, wobei der Ligand, der Mensch, die Krankheit oder das Leiden gemäß einem der Aspekte 1 bis 19 ist.According to a fortieth aspect: The method of any one of aspects 29 to 39, wherein the ligand, human, disease or ailment is according to any one of aspects 1 to 19.

Gemäß einem einundvierzigsten Aspekt: Ein Verfahren gemäß einem der Aspekte 29 bis 40 zur Behandlung und/oder Prävention eines Leidens oder einer Krankheit, wie in Aspekt 14 oder 15 aufgeführt, wobei das Verfahren die Verabreichung des Liganden und eines Statins (z. B. Cerovastatin, Atorvastatin, Simvastatin, Pitavastin, Rosuvastatin, Fluvastatin, Lovastatin oder Pravastatin) an den Menschen umfasst.According to a forty-first aspect: A method according to any one of aspects 29 to 40 for the treatment and / or prevention of a disease or disease as recited in aspect 14 or 15, said method comprising administration of said ligand and a statin (e.g., cerovastatin , Atorvastatin, simvastatin, pitavastine, rosuvastatin, fluvastatin, lovastatin or pravastatin) in humans.

Gemäß einem zweiundvierzigsten Aspekt: Das Verfahren nach Aspekt 41, wobei der Ligand und das Statin getrennt verabreicht werden.According to a forty-second aspect: the method of aspect 41, wherein the ligand and the statin are administered separately.

Gemäß einem dreiundvierzigsten Aspekt: Das Verfahren nach Aspekt 41, wobei der Ligand und das Statin gleichzeitig verabreicht werden.According to a forty-third aspect: The method according to aspect 41, wherein the ligand and the statin are administered simultaneously.

Gemäß einem vierundvierzigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 29 bis 43, wobei der Ligand durch subkutane Injektion verabreicht wird.According to a forty-fourth aspect: The method of any one of aspects 29 to 43, wherein the ligand is administered by subcutaneous injection.

Gemäß einem fünfundvierzigsten Aspekt: Ein Verfahren des PCSK9-Genotypisierens einer Nukleinsäureprobe eines Menschen, wobei das Verfahren das Identifizieren des Vorhandenseins (i) einer für eine PCSK9 der Alternative codierenden Nukleotidsequenz oder (ii) einer Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 29-37 oder die für die katalytische oder C-terminale Domäne codierende Sequenz davon in der Probe genotypisiert wurde oder wird.According to a forty-fifth aspect: A method of PCSK9 genotyping a nucleic acid sample of a human, the method comprising identifying the presence of (i) a nucleotide sequence encoding a PCSK9 of the alternative or (ii) a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 29-37 or the catalytic or C-terminal domain encoding sequence thereof was or is genotyped in the sample.

Gemäß einem sechsundvierzigsten Aspekt: Ein Verfahren des PCSK9-Typisierens einer Proteinprobe eines Menschen, wobei das Verfahren das Identifizieren des Vorhandenseins (i) einer PCSK9 der Alternative oder (ii) einer humanen PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q in der Probe umfasst.According to a forty-sixth aspect: A method of PCSK9 typing a human protein sample, the method comprising identifying the presence of (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 selected from the group consisting of forms f, c, r , p, m, e, h, aj and q in the sample.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die reifen Formen.In one example, the shapes are the mature shapes.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei den Formen um die Pro-Formen.In one example, the shapes are the pro-shapes.

Gemäß einem siebenundvierzigsten Aspekt: Das Verfahren nach Aspekt 45 oder 46, bei dem man eine Serum-, Blut-, Kot-, Haar-, Gewebe-, Zell-, Urin- oder Speichelprobe von einem Menschen gewinnt, wobei die Nukleinsäure- oder Proteinprobe gewonnen und in dem Schritt zur Identifizierung der Sequenz verwendet wird.According to a forty-fourth aspect, the method of aspect 45 or 46, comprising obtaining a serum, blood, faeces, hair, tissue, cell, urine or saliva sample from a human, wherein the nucleic acid or protein sample and used in the step of identifying the sequence.

Gemäß einem achtundvierzigsten Aspekt: Das Verfahren nach einem der Aspekte 45 bis 47, bei dem man einen Liganden gemäß einem der Aspekte 1 bis 19 zur Durchführung des Identifikationsschrittes verwendet.According to a forty-eighth aspect: The method according to any one of aspects 45 to 47, wherein one uses a ligand according to any of aspects 1 to 19 for performing the identification step.

Gemäß einem neunundvierzigsten Aspekt: Ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prävention einer Herz-Kreislauf-Krankheit oder eines Herz-Kreislauf-Leidens, oder einer Krankheit oder eines Leidens, die bzw. das mit erhöhtem LDL-Cholesterin assoziiert ist (z. B. Hypercholesterinämie), bei einem humanen Patienten, wobei der Patient eine Statinbehandlung gegen die Krankheit bzw. das Leiden erhält oder zuvor erhalten hat, wobei das Verfahren die Typisierung des Patienten unter Anwendung eines Verfahrens nach einem der Aspekte 45 bis 48 und die Verabreichung eines Liganden gemäß einem der Aspekte 1 bis 19 umfasst, wobei der Mensch behandelt wird oder die Krankheit bzw. das Leiden verhindert wird; gegebenenfalls außerdem die Reduzierung oder das Stoppen der Statinbehandlung.According to a forty-ninth aspect: A method for treating and / or preventing a cardiovascular disease or a cardiovascular condition, or a disease or condition associated with elevated LDL cholesterol (e.g. Hypercholesterolemia) in a human patient, wherein the patient receives or has previously received statin treatment for the disease, the method comprising typing the patient using a method according to any one of items 45 to 48 and administering a ligand according to one of aspects 1 to 19, wherein the human is treated or the disease or the condition is prevented; optionally also reducing or stopping the statin treatment.

Bei einem Beispiel umfasst die Reduzierung bzw. das Stoppen das Reduzieren der Dosis und/oder der Verabreichungshäufigkeit von Statin.In one example, the reduction or stopping comprises reducing the dose and / or the frequency of administration of statin.

Gemäß einem fünfzigsten Aspekt: Ein diagnostisches, therapeutisches oder prophylaktisches Kit, umfassend einen Liganden, der dazu fähig ist, an eine Aminosäuresequenz ausgewählt aus SEQ ID NO: 4–27 zu binden, oder bei dem bestimmt wurde oder wird, dass er dazu fähig ist, und Instruktionen nach einem der Aspekte 46 bis 49 und/oder ein Etikett oder Instruktionen, aus dem/denen die Verabreichung des Liganden an einen wie in einem der Aspekte 1 to 19 definierten Menschen hervorgeht bzw. diese darin abgedeckt wird.According to a fiftieth aspect: A diagnostic, therapeutic or prophylactic kit comprising a ligand capable of binding to, or being capable of, an amino acid sequence selected from SEQ ID NO: 4-27 , and instructions according to any one of aspects 46 to 49 and / or a label or instructions from which the administration of the ligand to or as defined in any of the aspects 1 to 19 defined humans.

Gemäß einem einundfünfzigsten Aspekt: Ein diagnostisches, therapeutisches oder prophylaktisches Kit, das eine Nukleinsäuresonde umfasst, die eine Nukleotidsequenz umfasst, die spezifisch mit einer Nukleotidsequenz von (i) oder einer Nukleotidsequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NOs: 29–37 oder einer Antisense-Sequenz oder einem RNA-Transkript davon hybridisiert, und Instruktionen zum Durchführen des Verfahrens nach Aspekt 45, 47 oder 48. According to a fifty-first aspect: A diagnostic, therapeutic or prophylactic kit comprising a nucleic acid probe comprising a nucleotide sequence specific to a nucleotide sequence of (i) or a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 29-37 or a Antisense sequence or an RNA transcript thereof hybridized, and instructions for carrying out the method according to aspect 45, 47 or 48.

Bei Beispielen der vorliegenden Erfindung bindet der Ligand spezifisch an humane PCSK9, z. B. eine oder mehrere (i) der PCKS9 der Alternative oder (ii) der hier offenbarten seltenen PCSK9-Varianten (z. B. eine, zwei, drei, mehr oder alle reifen Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q) und gegebenenfalls außerdem die a- und/oder a'-Form. Zum Beispiel bindet der Ligand spezifisch an die reife Form f und/oder c sowie Form a. Zum Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation E670G umfasst, und bindet außerdem an eine humane PCSK9, die eine Mutation I474V, Q619P oder N425S in SEQ ID NO: 1 umfasst. Zum Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation E670G umfasst, und bindet außerdem an eine humane PCSK9, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst. Zum Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation E670G umfasst, und bindet außerdem an eine humane PCSK9, die eine Mutation Q619P in SEQ ID NO: 1 umfasst. Zum Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation E670G umfasst, und bindet außerdem an eine humane PCSK9, die eine Mutation N425S in SEQ ID NO: 1 umfasst. Die Feststellung einer solchen Bindung kann durch einen beliebigen im Stand der Technik bekannten Antikörperbindungstest erfolgen, z. B. durch Oberflächenplasmonresonanz. Die Bindung an jede dieser Formen ist zum Beispiel mit einem Kd von wenigstens 1 mM, 100 nM, 1 nM, 100 pM, 10 pM oder 1 pM.In examples of the present invention, the ligand specifically binds to human PCSK9, e.g. One or more of (i) the PCKS9 of the alternative or (ii) of the rare PCSK9 variants disclosed herein (eg, one, two, three, more or all of the mature forms f, c, r, p, m, e , h, aj and q) and optionally also the a and / or a 'form. For example, the ligand binds specifically to the mature form f and / or c and form a. For example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising an E670G mutation, and also binds to a human PCSK9 comprising a mutation I474V, Q619P or N425S in SEQ ID NO: 1. For example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising an E670G mutation and also binds to a human PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1. For example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising an E670G mutation and also binds to a human PCSK9 comprising a mutation Q619P in SEQ ID NO: 1. For example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising an E670G mutation and also binds to a human PCSK9 comprising a N425S mutation in SEQ ID NO: 1. Detection of such binding can be accomplished by any antibody binding assay known in the art, e.g. B. by surface plasmon resonance. The binding to each of these forms is for example with a Kd of at least 1 mM, 100 nM, 1 nM, 100 pM, 10 pM or 1 pM.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und (i) eine PCSK9 der Alternative oder (ii) eine PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q, wobei der Ligand, der an die ausgewählte Form bindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen.In one example, the ligand binds form a and (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj, and q, where the Ligand that binds to the selected form does so with a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90 or 95% of the Kd value for the bond to form a. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und Form f, wobei der Ligand, der an Form fbindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen.In one example, the ligand binds form a and form f, with the ligand linking to form a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90 or 95% of the Kd value for binding to form a. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und Form c, wobei der Ligand, der an Form c bindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen.In one example, the ligand binds form a and form c, with the ligand that binds to form c doing so with a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90, or 95% of the Kd value. Value for binding to form a is. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und Form r, wobei der Ligand, der an Form r bindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen.In one example, the ligand binds form a and form r, with the ligand that binds to form r doing so with a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90 or 95% of the Kd value. Value for binding to form a is. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und Form p, wobei der Ligand, der an Form p bindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen.In one example, the ligand binds form a and form p, with the ligand that binds to form p doing so with a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90, or 95% of the Kd value. Value for binding to form a is. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und Form m, wobei der Ligand, der an Form m bindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen.In one example, the ligand binds form a and form m, with the ligand that binds to form m doing so with a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90, or 95% of the Kd value. Value for binding to form a is. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und Form e, wobei der Ligand, der an Form e bindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen. In one example, the ligand binds form a and form e, with the ligand that binds to form e doing so with a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90, or 95% of the Kd value. Value for binding to form a is. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und Form h, wobei der Ligand, der an Form h bindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen.In one example, the ligand binds form a and form h, with the ligand that binds to form h doing so with a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90, or 95% of the Kd value. Value for binding to form a is. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und Form aj, wobei der Ligand, der an Form aj bindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen.In one example, the ligand binds form a and form aj, with the ligand that binds to form aj doing so with a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90, or 95% of the Kd value. Value for binding to form a is. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand Form a und Form q, wobei der Ligand, der an Form q bindet, dies mit einem Kd-Wert (bestimmt mittels SPR) macht, der wenigstens 60, 70, 80, 90 oder 95% des Kd-Wertes für die Bindung an Form a beträgt. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um reife Formen. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei beiden Formen um Pro-Formen.In one example, the ligand binds form a and form q, with the ligand that binds to form q doing so with a Kd value (determined by SPR) that is at least 60, 70, 80, 90, or 95% of the Kd value. Value for binding to form a is. In one embodiment, both forms are mature forms. In one embodiment, both forms are pro-forms.

Bei Beispielen der vorliegenden Erfindung neutralisiert der Ligand humane PCSK9, z. B. eine oder mehrere der hier offenbarten seltenen PCSK9-Varianten (z. B. eine, zwei, drei, mehr oder alle reifen Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q) und gegebenenfalls außerdem die a- und/oder a'-Form. Beispielsweise neutralisiert der Ligand die reife Form f und/oder c sowie Form a. Die Feststellung der Neutralisierung kann zum Beispiel durch ein beliebiges in US20120093818A1 (Amgen, Inc) oder US20110065902A1 (Regeneron Pharmaceuticals, Inc) offenbartes Neutralisierungsassayverfahren erfolgen. Erfindungsgemäße Liganden, die PCSK9 binden oder darauf zielen, eignen sich zum Beispiel für in US20120093818A1 und US20110065902A1 offenbarte therapeutische und prophylaktische Anwendungen, wobei diese speziellen Offenbarungen hiermit durch Verweis zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung und zur möglichen Aufnahme in die Ansprüche Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden.In examples of the present invention, the ligand neutralizes human PCSK9, e.g. For example, one or more of the rare PCSK9 variants disclosed herein (eg, one, two, three, more, or all of the mature forms f, c, r, p, m, e, h, aj, and q) and optionally also the a and / or a 'form. For example, the ligand neutralizes the mature form f and / or c and form a. The determination of neutralization can be made, for example, by any of US20120093818A1 (Amgen, Inc.) or US20110065902A1 (Regeneron Pharmaceuticals, Inc). Ligands of the invention which bind or target PCSK9 are useful, for example, in therapeutic and prophylactic applications disclosed in US20120093818A1 and US20110065902A1, which specific disclosures incorporated herein by reference for use in the present invention and possible inclusion in the claims ,

Bei Ausführungsformen, bei denen der Ligand für therapeutische Anwendungen eingesetzt wird, kann ein antigenbindendes Protein eine oder mehrere biologische Aktivitäten von PCSK9 (z. B. einer oder mehrerer der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls auch der a- und/oder a'-Form) inhibieren, diese stören oder diese modulieren. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Liganden spezifisch an humane PCSK9 (z. B. eine oder mehrere der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls auch die a- und/oder a'-Form) und/oder inhibiert im Wesentlichen die Bindung von humaner PCSK9 (z. B. einer oder mehrerer der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls auch der a- und/oder a'-Form) an LDLR um wenigstens 20%, z. B. 20%–40%, 40–60%, 60–80%, 80–85% oder mehr (zum Beispiel durch Messen der Bindung in einem in vitro kompetitiven Bindungsassay). Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden um einen Antikörper.In embodiments where the ligand is used for therapeutic applications, an antigen-binding protein may include one or more biological activities of PCSK9 (eg, one or more of the rare variants disclosed herein, and optionally also the a and / or a 'forms ), interfere with them or modulate them. In one embodiment, the ligand specifically binds to human PCSK9 (eg, one or more of the rare variants disclosed herein, and optionally also the a and / or a 'form) and / or substantially inhibits the binding of human PCSK9 (e.g. B. one or more of the rare variants disclosed herein and optionally also the a and / or a 'form) to LDLR by at least 20%, e.g. 20% -40%, 40-60%, 60-80%, 80-85% or more (for example, by measuring binding in an in vitro competitive binding assay). In one example, the ligand is an antibody.

Gemäß einer Ausführungsform hat der Ligand einen Kd von weniger (die Bindung ist enger) als 10^–7, 10^–8, 10^–9, 10^–10, 10^–11, 10^–12, 10^–13 M für die Bindung an eine, zwei oder mehr der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls außerdem die a- und/oder a'-Form. Bei einem Beispiel wird der Kd unter Anwendung von SPR bestimmt.In one embodiment, the ligand has a Kd of less (the binding is narrower) than 10 ^-7 , 10 ^-8 , 10 ^-9 , 10 ^-10 , 10 ^-11 , 10 ^-12 , 10 ^-13 M for attachment to one , two or more of the rare variants disclosed herein, and optionally also the a and / or a 'form. In one example, the Kd is determined using SPR.

Gemäß einer Ausführungsform hat der Ligand beim Blockieren der Bindung von LDLR an eine oder mehrere der hier offenbarten seltenen PCSK9-Varianten (und gegebenenfalls auch der a- und/oder a'-Form) einen IC50 von weniger als 1 mikroM, 1000 nM bis 100 nM, 100 nM bis 10 nM, 10 nM bis 1 nM, 1000 pM bis 500 pM, 500 pM bis 200 pM, weniger als 200 pM, 200 pM bis 150 pM, 200 pM bis 100 pM, 100 pM bis 10 pM, 10 pM bis 1 pM.In one embodiment, in blocking the binding of LDLR to one or more of the rare PCSK9 variants (and optionally also the a and / or a 'forms) disclosed herein, the ligand has an IC 50 of less than 1 microM, 1000 nM to 100 nM, 100 nM to 10 nM, 10 nM to 1 nM, 1000 pM to 500 pM, 500 pM to 200 pM, less than 200 pM, 200 pM to 150 pM, 200 pM to 100 pM, 100 pM to 10 pM, 10 pM to 1 pM.

Gemäß einer Ausführungsform hat der Ligand beim Blockieren der Bindung von LDLR an die a- und/oder a'-Form von PCSK9 einen IC50 von nicht mehr als 1000, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 oder 10-fach mehr (d. h. mehr inhibierend) als der IC50 beim Blockieren der Bindung von LDLR an eine oder mehrere der hier offenbarten seltenen PCSK9-Varianten (z. B. eine oder mehrere der PCSK9-Proteine, die eine Sequenz ausgewählt aus SEQ ID NO: 4 bis 27) umfassen. Zusätzlich oder alternativ dazu hat der Ligand zum Beispiel einen IC50 beim Blockieren der Bindung von LDLR an (i) die a- und/oder a'-Form von weniger als 1 mikroM, 1000 nM bis 100 nM, 100 nM bis 10 nM, 10 nM bis 1 nM, 1000 pM bis 500 pM, 500 pM bis 200 pM, weniger als 200 pM, 200 pM bis 150 pM, 200 pM bis 100 pM, 100 pM bis 10 pM, 10 pM bis 1 pM, z. B. im Bereich von 1 mM bis 1 pM (z. B. 1 mM bis 100 pM; 10 nM bis 100 pM; 1 nM bis 10 pM; oder 100 pM bis 1 pM) und (ii) eines oder mehrere PCSK9-Proteine umfassend eine Sequenz ausgewählt aus SEQ ID NO: 4 bis 27 von weniger als 1 mikroM, 1000 nM bis 100 nM, 100 nM bis 10 nM, 10 nM bis 1 nM, 1000 pM bis 500 pM, 500 pM bis 200 pM, weniger als 200 pM, 200 pM bis 150 pM, 200 pM bis 100 pM, 100 pM bis 10 pM, 10 pM bis 1 pM, z. B. im Bereich von 1 mM bis 1 pM (z. B. 1 mM bis 100 pM; 10 nM bis 100 pM; 1 nM bis 10 pM; oder 100 pM bis 1 pM).In one embodiment, in blocking the binding of LDLR to the a- and / or a'-form of PCSK9, the ligand has an IC 50 of not more than 1000, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 or 10-fold more (ie, more inhibitory) than the IC50 in blocking the binding of LDLR to one or more of the rare PCSK9 variants disclosed herein (e.g., one or more of the PCSK9 proteins having a sequence selected from SEQ ID NO: 4 to 27). Additionally or alternatively, for example, the ligand has an IC50 in blocking the binding of LDLR to (i) the a and / or a 'form of less than 1 microM, 1000 nM to 100 nM, 100 nM to 10 nM, 10 nM to 1 nM, 1000 pM to 500 pM, 500 pM to 200 pM, less than 200 pM, 200 pM to 150 pM, 200 pM to 100 pM, 100 pM to 10 pM, 10 pM to 1 pM, e.g. In the range of 1 mM to 1 pM (eg, 1 mM to 100 pM, 10 nM to 100 pM, 1 nM to 10 pM, or 100 pM to 1 pM) and (ii) one or more PCSK9 proteins comprising a sequence selected from SEQ ID NO: 4 to 27 of less than 1 microM, 1000 nM to 100 nM, 100 nM to 10 nM, 10 nM to 1 nM, 1000 pM to 500 pM, 500 pM to 200 pM, less than 200 pM, 200 pM to 150 pM, 200 pM to 100 pM, 100 pM to 10 pM, 10 pM to 1 pM, e.g. In the range of 1 mM to 1 pM (eg, 1 mM to 100 pM, 10 nM to 100 pM, 1 nM to 10 pM, or 100 pM to 1 pM).

Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand an die a- und/oder a'-Form von PCSK9 mit einer Bindungsaffinität (Kd) größer als bis zu 10%, größer als bis zu 20%, größer als bis zu 40%, größer als bis zu 50%, größer als bis zu 55%, größer als bis zu 60%, größer als bis zu 65%, größer als bis zu 70%, größer als bis zu 75%, größer als bis zu 80%, größer als bis zu 85%, größer als bis zu 90%, größer als bis zu 95% oder größer als bis zu 100% (d. h. dem Doppelten) bezogen auf die Bindung an eine PCSK9 umfassend eine Sequenz ausgewählt aus SEQ ID NO: 4 bis 27. Solche Bindungsmessungen können unter Anwendung verschiedener im Stand der Technik bekannter Bindungsassays erfolgen, z. B. unter Anwendung der Oberflächenplasmonresonanz (SPR), wie mittels Biacore^TM, oder unter Anwendung des ProteOn XPR36^TM (Bio-Rad^®), oder unter Anwendung von KinExA^® (Sapidyne Instruments, Inc).In one embodiment, the ligand binds to the a- and / or a'-form of PCSK9 having a binding affinity (Kd) greater than up to 10%, greater than up to 20%, greater than 40%, greater than or equal to 50% greater than 55% greater than 60% greater than 65% greater than 70% greater than 75% greater than 80% greater than 85 %, greater than or equal to 90%, greater than or equal to 95% or greater than 100% (ie, double) of binding to a PCSK9 comprising a sequence selected from SEQ ID NOs: 4 to 27. Such binding measurements may using various binding assays known in the art, e.g. B. using the surface plasmon resonance (SPR), as measured by Biacore ^™, or using the Proteon XPR36 ^TM (Bio-Rad ^®), or using KinExA ^® (Sapidyne Instruments, Inc).

Gemäß einer Ausführungsform wird die Oberflächenplasmonresonanz (SPR) bei 25°C durchgeführt. Gemäß einer anderen Ausführungsform wird die SPR bei 37°C durchgeführt.In one embodiment, surface plasmon resonance (SPR) is performed at 25 ° C. In another embodiment, the SPR is performed at 37 ° C.

Gemäß einer Ausführungsform wird die SPR bei einem physiologischen pH-Wert wie etwa pH 7 oder bei pH 7,6 durchgeführt (z. B. unter Verwendung von Hepes-gepufferter Kochsalzlösung bei pH 7,6 (auch als HBS-EP bezeichnet)).In one embodiment, the SPR is performed at a physiological pH, such as pH 7, or at pH 7.6 (eg, using Hepes buffered saline at pH 7.6 (also referred to as HBS-EP)).

Gemäß einer Ausführungsform wird die SPR bei einer physiologischen Salzkonzentration, z. B. 150 mM NaCl, durchgeführt.According to one embodiment, the SPR is at a physiological salt concentration, z. B. 150 mM NaCl performed.

Gemäß einer Ausführungsform wird die SPR bei einer Tensidkonzentration von nicht mehr als 0,05 Vol.-%, z. B. in Gegenwart von P20 (Polysorbat 20; z. B. Tween-20TM) bei 0,05% und 3 mM EDTA durchgeführt.In one embodiment, the SPR is at a surfactant concentration of not more than 0.05 vol .-%, z. In the presence of P20 (polysorbate 20, eg Tween-20 ™) at 0.05% and 3 mM EDTA.

Bei einem Beispiel wird die SPR bei 25°C oder 37°C in einem Puffer bei einem pH-Wert von 7,6, 150 mM NaCl, 0,05% Tensid (z. B. P20) und 3 mM EDTA durchgeführt. Der Puffer kann 10 mM Hepes enthalten. Bei einem Beispiel wird die SPR bei 25°C oder 37°C in HBS-EP durchgeführt. HBS-EP ist von Teknova Inc (Kalifornien; Katalognummer H8022) erhältlich.In one example, the SPR is performed at 25 ° C or 37 ° C in a buffer at pH 7.6, 150 mM NaCl, 0.05% surfactant (eg P20) and 3 mM EDTA. The buffer may contain 10 mM Hepes. In one example, the SPR is performed at 25 ° C or 37 ° C in HBS-EP. HBS-EP is available from Teknova Inc (California, catalog number H8022).

Bei einem Beispiel wird die Affinität des Liganden, bei dem es sich um einen Antikörper handelt, unter Anwendung von SPR bestimmt, durch

• 1. Kuppeln von Anti-Maus-(oder einer anderen relevanten Wirbeltier)IgG (z. B. Biacore BR-1008-38) an einen Biosensor-Chip (z. B. GLM-Chip) wie z. B. durch primäre Aminkupplung;
• 2. Exponieren des Anti-Maus-IgG (Wirbeltier-Antikörpers) gegenüber einem Test-IgG-Antikörper zum Einfangen von Testantikörper auf dem Chip;
• 3. Leiten des Testantigens über die Einfangoberfläche des Chips in einer Konzentration von 1024 nM, 256 nM, 64 nM, 16 nM, 4 nM mit einem 0 nM (d. h. nur Puffer); und
• 4. Bestimmen der Bindungsaffinität des Testantikörpers zu Testantigen durch Oberflächenplasmonresonanz, z. B. unter einer oben diskutierten SPR-Bedingung (z. B. bei 25°C in physiologischem Puffer). Die SPR kann unter Verwendung eines beliebigen Standard-SPR-Geräts wie von BiacoreTM oder unter Verwendung des ProteOn XPR36TM (Bio-Rad^®) durchgeführt werden.

• 1. Coupling of anti-mouse (or other relevant vertebrate) IgG (eg, Biacore BR-1008-38) to a biosensor chip (eg, GLM chip) such as a biosensor chip. By primary amine coupling;
• 2. exposing the anti-mouse IgG (vertebrate antibody) to a test IgG antibody for capturing test antibody on the chip;
• 3. Passing the test antigen across the capture surface of the chip at a concentration of 1024 nM, 256 nM, 64 nM, 16 nM, 4 nM with a 0 nM (ie only buffer); and
• 4. Determine the binding affinity of the test antibody to test antigen by surface plasmon resonance, e.g. Under a SPR condition discussed above (eg at 25 ° C in physiological buffer). The SPR can be performed using any standard SPR device, such as by BIAcore or by using the Proteon XPR36TM (Bio-Rad ^®).

Die Regeneration der Einfangoberfläche kann mit 10 mM Glycin bei einem pH-Wert von 1,7 erfolgen. Hierdurch wird der eingefangene Antikörper entfernt und die Oberfläche kann für eine andere Wechselwirkung verwendet werden. Die Bindungsdaten können unter Anwendung von Standardverfahren an ein inhärentes 1:1-Modell angepasst werden, z. B. unter Anwendung eines der ProteOn XPR36^TM-Analyse-Software inhärenten Modells.The regeneration of the capture surface can be done with 10 mM glycine at a pH of 1.7. This removes the captured antibody and allows the surface to be used for another interaction. The binding data can be adapted to an inherent 1: 1 model using standard techniques, e.g. Using an inherent model of the ProteOn XPR36 ^™ analysis software.

Gemäß einer Ausführungsform erfolgt das Untersuchen oder Testen eines erfindungsgemäßen Liganden bei oder im Wesentlichen bei einem pH-Wert von 7 (z. B. bei in-vitro-Tests und -Assays) und bei oder im Wesentlichen bei RT.In one embodiment, assaying or testing a ligand of the invention is at or substantially at a pH of 7 (eg, in in vitro assays and assays) and at or substantially at RT.

Ein Beispiel einer konstanten Domäne einer schweren IgG2-Kette eines Anti-PCSK9-Antikörpers der vorliegenden Erfindung hat die Aminosäuresequenz, die in SEQ ID NO: 154, 3KK von US20120093818A1 gezeigt ist, deren Sequenz hiermit durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird. An example of an IgG2 heavy chain constant domain of an anti-PCSK9 antibody of the present invention has the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 154, 3KK from US20120093818A1 is shown, the sequence of which is hereby incorporated by reference part of the present application.

Ein Beispiel einer konstanten Domäne einer schweren IgG4-Kette eines Anti-PCSK9-Antikörpers der vorliegenden Erfindung hat die Aminosäuresequenz, die in SEQ ID NO: 155, 3KK von US20120093818A1 gezeigt ist, deren Sequenz hiermit durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird.An example of a heavy IgG4 heavy chain constant domain of an anti-PCSK9 antibody of the present invention has the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 155, 3KK from US20120093818A1 is shown, the sequence of which is hereby incorporated by reference part of the present application.

Ein Beispiel einer konstanten Domäne einer leichten kappa-Kette eines Anti-PCSK9-Antikörpers hat die Aminosäuresequenz, die in SEQ ID NO: 157, 3KK gezeigt ist, deren Sequenz hiermit durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird.An example of a kappa light kappa constant domain constant of an anti-PCSK9 antibody has the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 157, 3KK is shown, the sequence of which is hereby incorporated by reference part of the present application.

Ein Beispiel einer konstanten Domäne einer leichten lambda-Kette eines Anti-PCSK9-Antikörpers hat die Aminosäuresequenz, die in SEQ ID NO: 156, 3KK von US20120093818A1 gezeigt ist, deren Sequenz hiermit durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird.An example of a light lambda chain constant domain of an anti-PCSK9 antibody has the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 156, 3KK from US20120093818A1 is shown, the sequence of which is hereby incorporated by reference part of the present application.

Bei den Beispielen der vorliegenden Erfindung bindet der Ligand reife PCSK9, z. B. eine reife Form einer oder mehrerer der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls außerdem die a- und/oder a'-Form.In the examples of the present invention, the ligand binds mature PCSK9, e.g. A mature form of one or more of the rare variants disclosed herein, and optionally also the a and / or a 'form.

Bei den Beispielen der vorliegenden Erfindung bindet der Ligand die katalytische Domäne von PCSK9, z. B. von einer reifen Form einer oder mehrerer der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls außerdem die a- und/oder a'-Form.In the examples of the present invention, the ligand binds the catalytic domain of PCSK9, e.g. From a mature form of one or more of the rare variants disclosed herein, and optionally also the a and / or a 'form.

Bei den Beispielen der vorliegenden Erfindung bindet der Ligand die Prodomäne von PCSK9, z. B. von einer reifen Form einer oder mehrerer der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls außerdem die a- und/oder a'-Form.In the examples of the present invention, the ligand binds the pro domain of PCSK9, e.g. From a mature form of one or more of the rare variants disclosed herein, and optionally also the a and / or a 'form.

Gemäß einigen Ausführungsformen bindet der Ligand an die V-Domäne von PCSK9, z. B. von einer reifen Form einer oder mehrerer der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls außerdem die a- und/oder a'-Form. Gemäß einigen Ausführungsformen bindet der Ligand an die V-Domäne von PCSK9 (z. B. von einer reifen Form einer oder mehrerer der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls außerdem die a- und/oder a'-Form) und verhindert (oder reduziert, z. B. um wenigstens 10%) die Bindung von PCSK9 an LDLR. Gemäß einigen Ausführungsformen bindet der Ligand an die V-Domäne von PCSK9 (z. B. von einer reifen Form einer oder mehrerer der hier offenbarten seltenen Varianten und gegebenenfalls außerdem die a- und/oder a'-Form) und, obwohl er die Bindung von PCSK9 an LDLR nicht verhindert (oder reduziert), verhindert oder reduziert (z. B. um wenigstens 10%) der Ligand die durch PCSK9 vermittelten abträglichen Wirkungen auf LDLR.According to some embodiments, the ligand binds to the V domain of PCSK9, e.g. From a mature form of one or more of the rare variants disclosed herein, and optionally also the a and / or a 'form. In some embodiments, the ligand binds to the V domain of PCSK9 (eg, from a mature form of one or more of the rare variants disclosed herein, and optionally also the a and / or a 'form) and prevents (or reduces, eg at least 10%) binding of PCSK9 to LDLR. In some embodiments, the ligand binds to the V domain of PCSK9 (eg, from a mature form of one or more of the rare variants disclosed herein, and optionally also the a and / or a 'form) and, although binding from PCSK9 to LDLR does not prevent (or reduce), prevent or reduce (e.g., by at least 10%) the ligand, the PCSK9-mediated deleterious effects on LDLR.

Bei Beispielen der vorliegenden Erfindung handelt es sich bei dem Liganden um einen vollständigen humanen Antikörper, oder er umfasst einen solchen. Bei einem Beispiel umfasst der Ligand humane variable Regionen oder humanisierte variable Regionen.In examples of the present invention, the ligand is or comprises a complete human antibody. In one example, the ligand comprises human variable regions or humanized variable regions.

Bei einem Beispiel bindet der erfindungsgemäße Ligand spezifisch an ein Epitop (i) einer PCSK9 der Alternative oder (ii) einer humanen PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Die Aminosäure ist zum Beispiel ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 46L, 53V, 425S, 443T, 474V, 619P und 670G (Nummerierung wie in SEQ ID NO:1). Zum Beispiel ist die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 425S, 443T, 474V, 619P und 670G (Nummerierung wie in SEQ ID NO:1). Zum Beispiel ist die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 425S und 443T (Nummerierung wie in SEQ ID NO:1). Zum Beispiel ist die Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 474V, 619P und 670G (Nummerierung wie in SEQ ID NO:1). Bei einem Beispiel handelt es sich bei der PCSK9-Form um die reife Form. Bei einem Beispiel handelt es sich bei der PCSK9-Form um die Pro-Form. Bei einem Beispiel bindet der Ligand auch spezifisch an Form a und/oder a. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop der Form fPCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop der Form c PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop der Form rPCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop der Form p PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop der Form m PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop der Form e PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop der Form h PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop der Form aj PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an ein Epitop der Form q PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet.In one example, the ligand of the invention specifically binds to an epitope of (i) a PCSK9 of the alternative or (ii) a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not in form a. The amino acid is, for example, selected from the group consisting of 46L, 53V, 425S, 443T, 474V, 619P and 670G (numbering as in SEQ ID NO: 1). For example, the amino acid is selected from the group consisting of 425S, 443T, 474V, 619P and 670G (numbering as in SEQ ID NO: 1). For example, the amino acid is selected from the group consisting of 425S and 443T (numbering as in SEQ ID NO: 1). For example, the amino acid is selected from the group consisting of 474V, 619P and 670G (numbering as in SEQ ID NO: 1). In one example, the PCSK9 shape is the mature shape. In one example, the PCSK9 mold is the pro-form. In one example, the ligand also binds specifically to form a and / or a. In one embodiment, the ligand specifically binds to an epitope of the form fPCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to an epitope of the form c PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to an epitope of the form rPCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to an epitope of the form p PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to an epitope of the form m PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to an epitope of the form PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to Epitope of the form h PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to an epitope of the form aj PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to an epitope of the form q PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a.

Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne einer humanen PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q. Bei einem Beispiel bindet der Ligand auch spezifisch an die Pro-Domäne der Form a und/oder a. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne der Form f PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne der Form c PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne der Form r PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne der Form p PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne der Form m PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne der Form e PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne der Form h PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne der Form aj PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die Pro-Domäne der Form q PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet.In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro domain of a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q. In one example, the ligand also binds specifically to the pro domain of the form a and / or a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro domain of the form f PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro domain of the form c PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro domain of the form r PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro domain of the form p PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro domain of the form m PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro domain of the form PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro domain of the form h PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro-domain of the form aj PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the pro domain of the form q PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a.

Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne einer humanen PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q. Bei einem Beispiel bindet der Ligand auch spezifisch an die katalytische Domäne der Form a und/oder a. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne der Form f PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne der Form c PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne der Form r PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne der Form p PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne der Form m PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne der Form e PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne der Form h PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne der Form aj PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die katalytische Domäne der Form q PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet.In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q. In one example, the ligand also binds specifically to the catalytic domain of form a and / or a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of the form f PCSK9, where the Epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of the form c PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of the form r PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of the form p PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of the form m PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of the form PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of the form h PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of the form aj PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the catalytic domain of the form q PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a.

Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne einer humanen PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q. Bei einem Beispiel bindet der Ligand auch spezifisch an die C-terminale Domäne der Form a und/oder a. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne der Form f PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne der Form c PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne der Form r PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne der Form p PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne der Form m PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne der Form e PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne der Form h PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne der Form aj PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die C-terminale Domäne der Form q PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet.In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q. In one example, the ligand also binds specifically to the C-terminal domain of the form a and / or a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of the form f PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of the form c PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of the form r PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of the form p PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of the form m PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of the form PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of the form h PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of the form aj PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the C-terminal domain of the form q PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not in form a.

Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche einer humanen PCSK9 ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Formen f, c, r, p, m, e, h, aj und q (siehe Cunningham et al., Nat Struct Mol Biol. Mai 2007;14(5):413–9. Epub 15. April 2007, ”Structural and biophysical studies of PCSK9 and its mutants linked to familial hypercholesterolemia” , die hiermit durch Verweis in ihrer Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird). Bei einem Beispiel bindet der Ligand auch spezifisch an die substratbindende Furche der Form a und/oder a' Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche der Form f PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche der Form c PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche der Form r PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche der Form p PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche der Form m PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche der Form e PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche der Form h PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche der Form aj PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet. Gemäß einer Ausführungsform bindet der Ligand spezifisch an die substratbindende Furche der Form q PCSK9, wobei das Epitop wenigstens eine Aminosäure umfasst, die sich nicht in Form a findet.In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate-binding groove of a human PCSK9 selected from the group consisting of the forms f, c, r, p, m, e, h, aj and q (see Cunningham et al., Nat Struct Mol Biol. May 2007; 14 (5): 413-9. Epub April 15, 2007, "Structural and biophysical studies of PCSK9 and its mutants linked to familial hypercholesterolemia" , which is hereby incorporated herein by reference in its entirety). In one example, the ligand also specifically binds to the substrate binding groove of the form a and / or a '. In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate binding groove of the form f PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not in the form a place. In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate-binding groove of the form c PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate-binding groove of the form r PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate-binding groove of the form p PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate-binding groove of the form m PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate binding groove of the form PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate-binding groove of the form h PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate-binding groove of the form aj PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a. In one embodiment, the ligand specifically binds to the substrate-binding groove of the form q PCSK9, wherein the epitope comprises at least one amino acid that is not found in form a.

Es sei auf US20120093818A1 (Amgen, Inc) verwiesen, deren gesamte Offenbarung hiermit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird. Die vorliegende Patentanmeldung offenbart relevante Liganden zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung sowie Beispiele und Methoden zur Herstellung und zum Testen von Liganden, die mit Bezug auf die vorliegende Erfindung zur Anwendung kommen können.It's up US20120093818A1 (Amgen, Inc), the entire disclosure of which is incorporated herein by reference. The present patent application discloses relevant ligands for use in the present invention as well as examples and methods for preparing and testing ligands that can be used with respect to the present invention.

sBei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden um einen in Tabelle 2 von US20120093818A1 (Amgen, Inc) offenbarten Antikörper, oder der Ligand umfasst einen solchen Antikörper, oder es handelt sich bei dem Liganden um ein PCSK9-bindendes Derivat davon.In one example, the ligand is one in Table 2 of US20120093818A1 (Amgen, Inc), or the ligand comprises such an antibody, or the ligand is a PCSK9-binding derivative thereof.

Gemäß einer Ausführungsform ist der erfindungsgemäße PCSK9-bindende Ligand ausgewählt aus den in US20120093818A1 (Amgen, Inc), z. B. den Absätzen [0009] bis [0014] und [0058] bis [0063] von US20120093818A1, offenbarten antigenbindenden Proteinen; alle diese Offenbarungen (einschließlich der Sequenzen solcher Proteine) werden hiermit durch Verweis in gleicher Weise Bestandteil der vorliegenden Anmeldung, als wie wenn sie hier detailliert und zur möglichen Aufnahme in einen oder mehrere Ansprüche oder zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung aufgeführt worden wären.In one embodiment, the PCSK9-binding ligand of the invention is selected from those described in U.S. Pat US20120093818A1 (Amgen, Inc.), e.g. U.S. Patent Nos. 4,100,198, and 3,822,191, for example, paragraphs [0009] to [0014] and [0058] to [0063] of US20120093818A1 disclosed antigen binding proteins; all such disclosures (including sequences of such proteins) are hereby incorporated by reference in the same manner as if they had been listed in detail herein for possible inclusion in one or more claims or for use in the present invention.

In diesem Absatz sind die SEQ ID NOs die gleichen, die in US20120093818A1 (Amgen, Inc) verwendet werden, und diese Sequenzen werden hiermit durch Verweis in gleicher Weise Bestandteil der vorliegenden Anmeldung, als wie wenn sie hier detailliert und zur möglichen Aufnahme in einen oder mehrere Ansprüche oder zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung aufgeführt worden wären. Gemäß einigen Aspekten umfasst der erfindungsgemäße Ligand ein isoliertes antigenbindendes Protein, welches PCSK9 bindet, umfassend: A) eine oder mehrere hypervariable Regionen der schweren Kette (Heavy-Chain Complementary Determining Regions, CDRH) ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: (i) einer CDRH1 aus einer CDRH1 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 und 60; (ii) einer CDRH2 aus einer CDRH2 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 und 60; (iii) einer CDRH3 aus einer CDRH3 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 und 60; und (iv) einer CDRH aus (i), (ii), und (iii), die eine oder mehrere Aminosäuresubstitutionen, -deletionen oder -insertionen von nicht mehr als 4 Aminosäuren enthält; B) eine oder mehrere hypervariable Regionen der leichten Kette (Light-Chain Complementary Determining Regions, CDRL) ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: (i) einer CDRL1 aus einer CDRL1 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 und 46; (ii) einer CDRL2 aus einer CDRL2 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 und 46; (iii) einer CDRL3 aus einer CDRL3 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 und 46; und (iv) einer CDRL aus (i), (ii) und (iii), die eine oder mehrere als eine Aminosäuresubstitutionen, -deletionen oder -insertionen von nicht mehr als 4 Aminosäuren enthält; oder C) eine oder mehrere Schwere-Ketten-CDRHs von A) und eine oder mehrere Leichte-Ketten-CDRLs von B). Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst das isolierte antigenbindende Protein wenigstens eine CDRH aus A) und wenigstens eine CDRL aus B). Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst das isolierte antigenbindende Protein wenigstens zwei CDRH aus A) und wenigstens zwei CDRL aus B). Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst das isolierte antigenbindende Protein die CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 und CDRL3. Gemäß einigen Ausführungsformen ist die CDRH aus A) ausgewählt aus wenigstens einer aus der Gruppe bestehend aus: (i) einer CDRH1-Aminosäuresequenz ausgewählt aus der CDRH1 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 67, 79, 89 und 49; (ii) einer CDRH2-Aminosäuresequenz ausgewählt aus der CDRH2 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 67, 79, 89 und 49; (iii) einer CDRH3-Aminosäuresequenz ausgewählt aus the CDRH3 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 67, 79, 89 und 49; und (iv) einer CDRH aus (i), (ii) und (iii), die eine oder mehrere Aminosäuresubstitutionen, -deletionen oder -insertionen von nicht mehr als 2 Aminosäuren enthält. Darüber hinaus ist die CDRL aus B) ausgewählt aus wenigstens einer aus der Gruppe bestehend aus: (i) einer CDRL1-Aminosäuresequenz ausgewählt aus der CDRL1 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 12, 35, 32 und 23; (ii) einer CDRL2-Aminosäuresequenz ausgewählt aus der CDRL2 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 12, 35, 32 und 23; (iii) einer CDRL3-Aminosäuresequenz ausgewählt aus the CDRL3 in einer Sequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 12, 35, 32 und 23; und (iv) einer CDRL aus (i), (ii) und (iii), die eine oder mehrere Aminosäuresubstitutionen, -deletionen oder -insertionen von nicht mehr als 2 Aminosäuren enthält; oder C) einer oder mehreren Schwere-Kette-CDRH aus A) und einer oder mehreren Leichte-Kette-CDRL aus B. Gemäß einigen Ausführungsformen ist die CDRH aus A) ausgewählt aus wenigstens einer der Gruppe bestehend aus: (i) einer CDRH1-Aminosäuresequenz aus der CDRH1-Aminosäuresequenz in SEQ ID NO: 67; (ii) einer CDRH2-Aminosäuresequenz aus der CDRH2-Aminosäuresequenz in SEQ ID NO: 67; (iii) einer CDRH3-Aminosäuresequenz aus der CDRH3-Aminosäuresequenz in SEQ ID NO: 67; und (iv) einer CDRH aus (i), (ii) und (iii), die eine oder mehrere Aminosäuresubstitutionen, -deletionen oder -insertionen von nicht mehr als 2 Aminosäuren enthält; wobei die CDRL aus B) ausgewählt ist aus wenigstens einer aus der Gruppe bestehend aus: (i) einer CDRL1-Aminosäuresequenz aus der CDRL1-Aminosäuresequenz in SEQ ID NO: 12; (ii) einer CDRL2-Aminosäuresequenz aus der CDRL2-Aminosäuresequenz in SEQ ID NO: 12; (iii) einer CDRL3-Aminosäuresequenz aus der CDRL3-Aminosäuresequenz in SEQ ID NO: 12; und (iv) einer CDRL aus (i), (ii) und (iii), die eine oder mehrere Aminosäuresubstitutionen, -deletionen oder -insertionen von nicht mehr als 2 Aminosäuren enthält; oder C) einer oder mehreren Schwere-Kette-CDRH aus A) und einer oder mehreren CDRL aus B). Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst das antigenbindende Protein A) eine CDRH1 der CDRH1-Sequenz in SEQ ID NO: 67, eine CDRH2 der CDRH2-Sequenz in SEQ ID NO: 67 und eine CDRH3 der CDRH3-Sequenz in SEQ ID NO: 67, und B) eine CDRL1 der CDRL1-Sequenz in SEQ ID NO: 12, eine CDRL2 der CDRL2-Sequenz in SEQ ID NO: 12 und eine CDRL3 der CDRL3-Sequenz in SEQ ID NO: 12. Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst das antigenbindende Protein eine variable Region der schweren Kette (VH) mit wenigstens 80% Sequenzidentität mit einer Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 und 60 und/oder eine variable Region der leichten Kette (VL) mit wenigstens 80% Sequenzidentität mit einer Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 und 46. Gemäß einigen Ausführungsformen hat die VH wenigstens 90% Sequenzidentität mit einer Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 und 60 und/oder die VL hat wenigstens 90% Sequenzidentität mit einer Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 und 46. Gemäß einigen Ausführungsformen ist die VH ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 und 60 und/oder ist die VL ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 und 46.In this paragraph, the SEQ ID NOs are the same as in US20120093818A1 (Amgen, Inc), and these sequences are hereby incorporated by reference in the same manner as if they had been listed in detail herein and for possible inclusion in one or more claims or for use in the present invention. In some aspects, the ligand of the invention comprises an isolated antigen-binding protein that binds PCSK9, comprising: A) one or more hyper-variable complementarity regions (CDRH) selected from the group consisting of: (i) a CDRH1 from a CDRH1 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 and 60; (ii) a CDRH2 from a CDRH2 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49 , 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 and 60; (iii) a CDRH3 from a CDRH3 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49 , 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 and 60; and (iv) a CDRH of (i), (ii), and (iii) containing one or more amino acid substitutions, deletions or insertions of not more than 4 amino acids; B) one or more Light-Chain Complementary Determining Regions (CDRLs) selected from the group consisting of: (i) a CDRL1 from a CDRL1 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 and 46; (ii) a CDRL2 from a CDRL2 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 , 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 and 46; (iii) a CDRL3 from a CDRL3 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 , 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 and 46; and (iv) a CDRL of (i), (ii) and (iii) containing one or more than one amino acid substitutions, deletions or insertions of not more than 4 amino acids; or C) one or more heavy chain CDRHs of A) and one or more light chain CDRLs of B). According to some embodiments, the isolated antigen-binding protein comprises at least one CDRH from A) and at least one CDRL from B). According to some embodiments, the isolated antigen-binding protein comprises at least two CDRH from A) and at least two CDRL from B). According to some embodiments, the isolated antigen-binding protein comprises CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 and CDRL3. In some embodiments, the CDRH is selected from A) selected from at least one of the group consisting of: (i) a CDRH1 amino acid sequence selected from CDRH1 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 67, 79, 89 and 49 ; (ii) a CDRH2 amino acid sequence selected from CDRH2 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 67, 79, 89 and 49; (iii) a CDRH3 amino acid sequence selected from the CDRH3 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 67, 79, 89 and 49; and (iv) a CDRH of (i), (ii) and (iii) containing one or more amino acid substitutions, deletions or insertions of not more than 2 amino acids. In addition, the CDRL of B) is selected from at least one of the group consisting of: (i) a CDRL1 amino acid sequence selected from CDRL1 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 12, 35, 32 and 23; (ii) a CDRL2 amino acid sequence selected from CDRL2 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 12, 35, 32 and 23; (iii) a CDRL3 amino acid sequence selected from the CDRL3 in a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 12, 35, 32 and 23; and (iv) a CDRL of (i), (ii) and (iii) containing one or more amino acid substitutions, deletions or insertions of not more than 2 amino acids; or C) one or more heavy chain CDRH from A) and one or more light chain CDRLs from B. According to some embodiments, the CDRH from A) is selected from at least one of the group consisting of: (i) a CDRH1- Amino acid sequence from the CDRH1 amino acid sequence in SEQ ID NO: 67; (ii) a CDRH2 amino acid sequence from the CDRH2 amino acid sequence in SEQ ID NO: 67; (iii) a CDRH3 amino acid sequence from the CDRH3 amino acid sequence in SEQ ID NO: 67; and (iv) a CDRH of (i), (ii) and (iii) containing one or more amino acid substitutions, deletions or insertions of not more than 2 amino acids; wherein the CDRL of B) is selected from at least one of the group consisting of: (i) a CDRL1 amino acid sequence from the CDRL1 amino acid sequence in SEQ ID NO: 12; (ii) a CDRL2 amino acid sequence from the CDRL2 amino acid sequence in SEQ ID NO: 12; (iii) a CDRL3 amino acid sequence from the CDRL3 amino acid sequence in SEQ ID NO: 12; and (iv) a CDRL of (i), (ii) and (iii) containing one or more amino acid substitutions, deletions or insertions of not more than 2 amino acids; or C) one or more heavy chain CDRH from A) and one or more CDRL from B). According to some embodiments, the antigen-binding protein A) comprises a CDRH1 of the CDRH1 sequence in SEQ ID NO: 67, a CDRH2 of the CDRH2 sequence in SEQ ID NO: 67 and a CDRH3 of the CDRH3 sequence in SEQ ID NO: 67, and B ) a CDRL1 of the CDRL1 sequence in SEQ ID NO: 12, a CDRL2 of the CDRL2 sequence in SEQ ID NO: 12 and a CDRL3 of the CDRL3 sequence in SEQ ID NO: 12. In some embodiments, the antigen binding protein comprises a variable region heavy chain (VH) having at least 80% sequence identity with an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 and 60 and / or a light chain variable region (VL) of at least 80 % Sequence identity with an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28 , 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38 , 39, 40, 42, 44 and 46. According to some embodiments, the VH has at least 90% sequence identity with an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 and 60 and / or the VL has at least 90% sequence identity with an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 and 46. In some embodiments, the VH is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 and 60 and / or the VL is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 , 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 and 46.

Bei einem Beispiel eines Aspekts der Erfindung umfasst der auf PCSK9 zielende bzw. der PCSK9-bindende Ligand AMG145 oder 31H4, 16F12, 11F1, 8A3 oder 21812, offenbart in US20120093818A1 (Amgen, Inc), oder einen Antikörper, der die variablen Domänen von AMG145, 31H4, 16F12, 11F1, 8A3 oder 21B12 umfasst, oder besteht daraus, wobei deren Offenbarungen (einschließlich Sequenzen) hiermit durch Verweis in gleicher Weise Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden, als wie wenn sie hier detailliert und zur möglichen Aufnahme in einen oder mehrere Ansprüche oder zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung aufgeführt worden wären. Vorzugsweise umfasst der auf PCSK9 zielende bzw. der PCSK9-bindende Ligand AMG145 oder besteht daraus.In one example of an aspect of the invention, the PCSK9 targeting or PCSK9-binding ligand comprises AMG145 or 31H4, 16F12, 11F1, 8A3 or 21812, disclosed in U.S. Pat US20120093818A1 (Amgen, Inc), or an antibody comprising the variable domains of AMG145, 31H4, 16F12, 11F1, 8A3 or 21B12, the disclosures (including sequences) of which are hereby incorporated herein by reference in the same manner as if detailed herein and for possible inclusion in one or more claims or for use in the present invention. Preferably, the PCSK9 targeting or PCSK9-binding ligand comprises or consists of AMG145.

Bei einem Beispiel ist AMG145 oder ein anderer erfindungsgemäßer Ligand glykosyliert und weist z. B. eine humane Glykosylierung (z. B. produziert durch eine CHO-, Cos- oder Hek293-Zelle) auf. Bei einem Beispiel wird der erfindungsgemäße Ligand in CHO produziert.In one example, AMG145 or another ligand of the invention is glycosylated and has e.g. B. human glycosylation (eg produced by a CHO, Cos or Hek293 cell). In one example, the ligand of the invention is produced in CHO.

Es sei auf US20110065902A1 (Regeneron Pharmaceuticals, Inc) verwiesen, deren gesamte Offenbarung hiermit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird. Die vorliegende Patentanmeldung offenbart relevante Liganden zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung sowie Beispiele und Methoden zur Herstellung und zum Testen von Liganden und Bestimmen der medizinischen Wirksamkeit, die mit Bezug auf die vorliegende Erfindung zur Anwendung kommen können.It's up US20110065902A1 (Regeneron Pharmaceuticals, Inc), the entire disclosure of which is incorporated herein by reference. The present patent application discloses relevant ligands for use in the present invention as well as examples and methods for preparing and testing ligands and determining the medical efficacy that may be used with respect to the present invention.

Es sei auf die folgenden PCT-Anmeldungen verwiesen, deren gesamten Offenbarungen hiermit Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden. Diese offenbaren relevante Liganden zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung sowie Beispiele und Methoden zur Herstellung und zum Testen von Liganden und Bestimmen der medizinischen Wirksamkeit, die mit Bezug auf die vorliegende Erfindung zur Anwendung kommen können.
WO2008057457
WO2008057458
WO2008057459
WO2008063382
WO2008133647
WO2009100297
WO2009100318
WO2011037791
WO2011053759
WO2011053783
WO2008125623
WO2011072263
WO2009055783
WO2010029513
WO2011111007
WO2010077854 Reference should be made to the following PCT applications, the entire disclosures of which are hereby incorporated by reference into the present application. These disclose relevant ligands for use in the present invention, as well as examples and methods of preparing and testing ligands, and determining the medical efficacy that may be used with respect to the present invention.
WO2008057457
WO2008057458
WO2008057459
WO2008063382
WO2008133647
WO2009100297
WO2009100318
WO2011037791
WO2011053759
WO2011053783
WO2008125623
WO2011072263
WO2009055783
WO2010029513
WO2011111007
WO2010077854

Antikörperliganden an PCSK9 sind zum Beispiel in WO 2008/057457 , WO 2008/057458 , WO 2008/057459 , WO 2008/063382 , WO 2008/125623 und US 2008/0008697 beschrieben, die jeweils hiermit durch Verweis in ihrer Gesamtheit Bestandteil der vorliegenden Erfindung werden.Antibody ligands to PCSK9 are for example in WO 2008/057457 . WO 2008/057458 . WO 2008/057459 . WO 2008/063382 . WO 2008/125623 and US 2008/0008697 which are each hereby incorporated by reference in their entirety part of the present invention.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden um einen in den Beispielen von US20110065902A1 (z. B. 316P oder 300N) offenbarten Antikörper, oder der Ligand umfasst einen solchen Antikörper, oder es handelt sich bei dem Liganden um ein PCSK9-bindendes Derivat davon. Alle diese Offenbarungen (einschließlich der Sequenzen solcher Proteine und der entsprechenden Nukleotidsequenzen) werden hiermit durch Verweis in gleicher Weise Bestandteil der vorliegenden Anmeldung, als wie wenn sie hier detailliert und zur möglichen Aufnahme in einen oder mehrere Ansprüche oder zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung aufgeführt worden wären. Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei dem Liganden um die variablen Domänen des in US20110065902A1 offenbarten Antikörpers 316P oder 300N, oder er umfasst diese, oder es handelt sich um einen solchen Antikörper oder ein PCSK9-bindendes Derivat davon (oder er umfasst diese).In one example, the ligand is one in the examples of US20110065902A1 (e.g., 316P or 300N), or the ligand comprises such antibody, or the ligand is a PCSK9-binding derivative thereof. All these disclosures (including the sequences of such proteins and the corresponding nucleotide sequences) are hereby incorporated by reference in the same way as if they have been detailed herein and for possible inclusion in one or more claims or for use in the present invention would. In one embodiment, the ligand is the variable domains of in US20110065902A1 or comprises antibody 316P or 300N, or it is or is such an antibody or a PCSK9-binding derivative thereof.

Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei dem Liganden um die variablen Domänen des Antikörpers Alirocumab bzw. SAR236553/REGN727 (Sanofi Aventis/Regeneron), oder er umfasst diese, oder es handelt sich um einen solchen Antikörper oder ein PCSK9-bindendes Derivat davon (oder er umfasst diese). Bei einem Beispiel ist Alirocumab glykosyliert und weist z. B. eine humane Glykosylierung (z. B. produziert durch eine CHO-, Cos- oder Hek293-Zelle) auf. Vorzugsweise handelt es sich bei dem Liganden um Alirocumab bzw. SAR236553/REGN727.In one embodiment, the ligand is or comprises the variable domains of the antibody alirocumab or SAR236553 / REGN727 (Sanofi Aventis / Regeneron), or is such an antibody or PCSK9-binding derivative thereof (or he includes these). In one example, alirocumab is glycosylated and has e.g. B. human glycosylation (eg produced by a CHO, Cos or Hek293 cell). Preferably, the ligand is alirocumab or SAR236553 / REGN727.

Gemäß einer Ausführungsform handelt es sich bei dem Liganden um die variablen Domänen des Antikörpers Evolocumab, oder er umfasst diese, oder es handelt sich um einen solchen Antikörper oder ein PCSK9-bindendes Derivat davon (oder er umfasst diese). Bei einem Beispiel ist der Antikörper glykosyliert und weist z. B. eine humane Glykosylierung (z. B. produziert durch eine CHO-, Cos- oder Hek293-Zelle) auf. Vorzugsweise handelt es sich bei dem Liganden um Evolocumab.In one embodiment, the ligand is or comprises the variable domain of the antibody evolocumab, or is or includes such antibody or a PCSK9-binding derivative thereof. In one example, the antibody is glycosylated and has e.g. B. human glycosylation (eg produced by a CHO, Cos or Hek293 cell). Preferably, the ligand is evolocumab.

Gemäß einer Ausführungsform ist der Ligand ausgewählt aus Evolocumab, 1D05-IgG2 (Merck & Co.), ALN-PCS02 (Alnylam), RN316 (Pfizer-Rinat) und Alirocumab.In one embodiment, the ligand is selected from evolocumab, 1D05-IgG2 (Merck & Co.), ALN-PCS02 (alnylam), RN316 (Pfizer-rinate), and alirocumab.

Gemäß einer Ausführungsform ist der Ligand ausgewählt aus den Folgenden (Sequenzen und Definitionen gemäß US2011/0065902 , die hiermit durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird):

• 1. Ein Antikörper oder antigenbindendes Fragment davon, der/das spezifisch hPCSK9 bindet, wobei der Antikörper bzw. das antigenbindende Fragment die CDRs der schweren und der leichten Kette eines HCVR/LCVR-Aminosäuresequenzpaars mit den SEQ ID NO: 218/226.
• 2. Der Antikörper bzw. das antigenbindende Fragment nach Konzept 1, der/das die CDRs der schweren und der leichten Kette der Aminosäuresequenzen mit den SEQ ID NO: 220, 222, 224, 228, 230 und 232 umfasst, um Bindung an hPCSK9 konkurriert.
• 3. Der Antikörper bzw. das antigenbindende Fragment nach Konzept 2, der/das eine HCVR mit der Aminosäuresequenz von SEQ ID NO: 218 und eine LCVR mit der Aminosäuresequenz von SEQ ID NO: 226 umfasst.
• 4. Ein Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment davon, der/das an das gleiche Epitop auf hPCSK9 bindet wie ein Antikörper, der die CDR-Aminosäuresequenzen der schweren und der leichten Kette mit SEQ ID NO: 220, 222, 224, 228, 230 und 232 umfasst, um Bindung an hPCSK9 konkurriert.
• 5. Ein Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment davon, der/das mit einem Antikörper, der die CDR-Aminosäuresequenzen der schweren und der leichten Kette mit SEQ ID NO: 220, 222, 224, 228, 230 und 232 umfasst, um Bindung an hPCSK9 konkurriert.

• An antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds hPCSK9, wherein the antibody or antigen-binding fragment comprises the heavy and light chain CDRs of an HCVR / LCVR amino acid sequence pair having SEQ ID NOs: 218/226.
• 2. The antibody or antigen-binding fragment of Concept 1 comprising the heavy and light chain CDRs of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 220, 222, 224, 228, 230, and 232 compete for binding to hPCSK9 ,
• 3. The antibody or antigen-binding fragment of Concept 2 comprising an HCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 218 and an LCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 226.
• 4. An antibody or antigen-binding fragment thereof which binds to the same epitope on hPCSK9 as an antibody comprising the heavy and light chain CDR amino acid sequences of SEQ ID NOs: 220, 222, 224, 228, 230 and 232 involves binding to hPCSK9.
• 5. An antibody or antigen binding fragment thereof comprising an antibody comprising the heavy and light chain CDR amino acid sequences of SEQ ID NOs: 220, 222, 224, 228, 230 and 232 for binding to hPCSK9 competes.

Gemäß einer Ausführungsform ist der Ligand ausgewählt aus den Folgenden (Sequenzen und Definitionen gemäß US2012/0093818 , die hiermit durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird):

• 1. Ein isoliertes neutralisierendes antigenbindendes Protein, das an ein PCSK9-Protein bindet, das die Aminosäuresequenz von SEQ ID NO: 1 umfasst, wobei das neutralisierende antigenbindende Protein die LDLR-absenkende Wirkung von PCSK9 auf LDLR vermindert, wobei das antigenbindende Protein eine leichte Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 46 umfasst, und wobei das antigenbindende Protein eine schwere Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 60 umfasst.
• 2. Das isolierte neutralisierende antigenbindende Protein nach Konzept 2, wobei es sich bei dem antigenbindenden Protein um ein LDLR nicht kompetitiv neutralisierendes antigenbindendes Protein handelt.
• 3. Das isolierte neutralisierende antigenbindende Protein nach Konzept 2, wobei es sich bei dem antigenbindenden Protein um ein LDLR kompetitiv neutralisierendes antigenbindendes Protein handelt.
• 4. Ein antigenbindendes Protein, das selektiv an PCSK9 bindet, wobei das antigenbindende Protein mit einem Kd von weniger als 100 pM an PCSK9 bindet.
• 5. Ein antigenbindendes Protein, das in einer ersten Weise an ein PCSK9-Protein von SEQ ID NO: 303 bindet, wobei das antigenbindende Protein an eine Variante von PCSK9 in einer zweiten Weise bindet, wobei die PCSK9-Variante wenigstens eine Punktmutation in einer Position ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: 207, 208, 185, 181, 439, 513, 538, 539, 132, 351, 390, 413, 582, 162, 164, 167, 123, 129, 311, 313, 337, 519, 521, und 554 von SEQ ID NO: 303 umfasst, wobei die erste Weise einen ersten EC50, einen ersten Bmax oder einen ersten EC50 und einen ersten Bmax umfasst, wobei die zweite Weise einen zweiten EC50, einen zweiten Bmax oder einen zweiten EC50 und einen zweiten Bmax umfasst, und wobei ein Wert für die erste Weise verschieden ist von einem Wert für die zweite Weise, und wobei das antigenbindende Protein eine leichte Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 46 umfasst, und wobei das antigenbindende Protein eine schwere Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 60 umfasst.
• 6. Das antigenbindende Protein nach Konzept 6, wobei die erste Weise einen ersten Bmax umfasst, wobei die zweite Weise einen zweiten Bmax umfasst, der vom ersten Bmax verschieden ist, und wobei die PCSK9-Variante wenigstens eine Punktmutation ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: D162R, R164E, E167R, S123R, E129R, A311R, D313R, D337R, R519E, H521R und Q554R aufweist.
• 7. Das antigenbindende Protein nach Konzept 6, wobei das antigenbindende Protein an PCSK9 an einer Stelle bindet, die sich mit einer Stelle, an der LDLR an PCSK9 bindet, überlappt.
• 8. Ein Verfahren zur Herstellung eines antigenbindenden Proteins, das an ein PCSK9-Protein bindet, das die Aminosäuresequenz von SEQ ID NO: 1 umfasst, wobei das antigenbindende Protein die LDLR-absenkende Wirkung von PCSK9 auf LDLR vermindert, wobei das Verfahren die Bereitstellung einer Wirtszelle, die eine Nukleinsäuresequenz umfasst, die für das antigenbindende Protein codiert; und die Aufrechterhaltung der Wirtszelle unter Bedingungen, bei denen das antigenbindende Protein exprimiert wird, umfasst, wobei das antigenbindende Protein eine leichte Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 46 umfasst, und wobei das antigenbindende Protein eine schwere Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 60 umfasst.
• 9. Ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention eines mit erhöhten Serumcholesterinspiegeln in einem Patienten assoziierten Leidens, wobei das Verfahren die Verabreichung eines isolierten neutralisierenden antigenbindenden Proteins an einen dessen bedürftigen Patienten gleichzeitig oder aufeinanderfolgend mit einem die Verfügbarkeit von LDLR-Protein erhöhenden Mittel umfasst, wobei das isolierte antigenbindende Protein an ein PCSK9-Protein bindet, das die Aminosäuresequenz von SEQ ID NO: 1 umfasst, wobei das neutralisierende antigenbindende Protein die LDLR-absenkende Wirkung von PCSK9 auf LDLR vermindert, wobei das antigenbindende Protein eine leichte Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 46 umfasst, und wobei das antigenbindende Protein eine schwere Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 60 umfasst.
• 10. Das Verfahren nach Konzept 10, wobei das Mittel, das die Verfügbarkeit an LDLR-Protein erhöht, ein Statin umfasst.
• 11. Ein antigenbindes Protein, das an PCSK9 bindet, wobei sich, wenn das antigenbindende Protein an PCSK9 gebunden ist, der Antikörper 8 Angström oder weniger von wenigstens einem der folgenden Reste von PCSK9 befindet: S153, S188, I189, Q190, S191, D192, R194, E197, G198, R199, V200, D224, R237, D238, K243, S373, D374, S376, T377, F379, I154, T187, H193, E195, I196, M201, V202, C223, T228, S235, G236, A239, G244, M247, I369, S372, C375 oder C378, wobei das antigenbindende Protein eine leichte Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 46 umfasst, und wobei das antigenbindende Protein eine schwere Kette umfasst, die eine Aminosäuresequenz von SEQ ID NO 60 umfasst.

• An isolated neutralizing antigen binding protein that binds to a PCSK9 protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, wherein the neutralizing antigen binding protein reduces the LDLR lowering effect of PCSK9 on LDLR, wherein the antigen binding protein is a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO 46, and wherein the antigen-binding protein comprises a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO 60.
• 2. The isolated neutralizing antigen binding protein of Concept 2, wherein the antigen binding protein is an LDLR non-competitively neutralizing antigen binding protein.
• 3. The isolated neutralizing antigen binding protein of Concept 2, wherein the antigen binding protein is an LDLR competitively neutralizing antigen binding protein.
• 4. An antigen-binding protein that selectively binds to PCSK9, with the antigen-binding protein binding to PCSK9 with a Kd of less than 100 pM.
• 5. An antigen-binding protein that binds in a first manner to a PCSK9 protein of SEQ ID NO: 303, wherein the antigen-binding protein binds to a variant of PCSK9 in a second manner, wherein the PCSK9 variant has at least one point mutation in a position selected from the group consisting of: 207, 208, 185, 181, 439, 513, 538, 539, 132, 351, 390, 413, 582, 162, 164, 167, 123 , 129, 311, 313, 337, 519, 521, and 554 of SEQ ID NO: 303, wherein the first mode comprises a first EC50, a first Bmax or a first EC50, and a first Bmax, the second mode comprising a second EC50, a second Bmax or a second EC50, and a second Bmax, and wherein a value for the first mode is different from a value for the second method, and wherein the antigen binding protein comprises a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO 46, and wherein the antigen-binding protein comprises a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO 60.
• 6. The antigen-binding protein of Concept 6, wherein the first mode comprises a first Bmax, wherein the second mode comprises a second Bmax other than the first Bmax, and wherein the PCSK9 variant comprises at least one point mutation selected from the group consisting of: D162R, R164E, E167R, S123R, E129R, A311R, D313R, D337R, R519E, H521R and Q554R.
• 7. The antigen-binding protein of Concept 6, wherein the antigen-binding protein binds to PCSK9 at a site that overlaps a site where LDLR binds to PCSK9.
• 8. A method of producing an antigen-binding protein that binds to a PCSK9 protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, wherein the antigen-binding protein reduces the LDLR lowering effect of PCSK9 on LDLR, the method comprising providing a protein A host cell comprising a nucleic acid sequence encoding the antigen-binding protein; and maintaining the host cell under conditions wherein the antigen-binding protein is expressed, wherein the antigen-binding protein comprises a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO 46, and wherein the antigen-binding protein comprises a heavy chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO 60.
• A method for treating or preventing a condition associated with elevated serum cholesterol levels in a patient, the method comprising administering an isolated neutralizing antigen-binding protein to a needy patient, simultaneously or sequentially, with an LDLR protein-enhancing agent; isolated antigen-binding protein binds to a PCSK9 protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, wherein the neutralizing antigen-binding protein reduces the LDLR-lowering effect of PCSK9 on LDLR, wherein the antigen binding protein comprises a light chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO 46 comprises, and wherein the antigen-binding protein comprises a heavy chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO 60.
• 10. The method of Concept 10, wherein the agent that increases the availability of LDLR protein comprises a statin.
• 11. An antigen binding protein that binds to PCSK9, wherein when the antigen binding protein is bound to PCSK9, the antibody is 8 angstroms or less of at least one of the following residues of PCSK9: S153, S188, I189, Q190, S191, D192 , R194, E197, G198, R199, V200, D224, R237, D238, K243, S373, D374, S376, T377, F379, I154, T187, H193, E195, I196, M201, V202, C223, T228, S235, G236 , A239, G244, M247, I369, S372, C375 or C378, wherein the antigen-binding protein comprises a light chain comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO 46, and wherein the antigen-binding protein comprises a heavy chain having an amino acid sequence of SEQ ID NO 60 includes.

Der Ligand kann zur Behandlung, Therapie, Prophylaxe und/oder Diagnose einer oder mehrerer Krankheiten oder Leiden oder Empfindlichkeiten dagegen verwendet werden, wobei solche Krankheiten oder Leiden die in US20120093818A1 (Amgen, Inc) und US20110065902A1 (Regeneron Pharmaceuticals, Inc) offenbarten umfassen, z. B. eine Krankheit oder ein Leiden, die/das in den Absätzen [0375] bis [0383] von US20120093818A1 offenbart ist, deren Offenbarung durch Verweis in ihrer Gesamtheit zur Aufnahme in einem oder mehreren der Ansprüche Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird.The ligand may be used for the treatment, therapy, prophylaxis and / or diagnosis of one or more diseases or conditions or conditions of susceptibility thereto, such diseases or conditions as described in U.S. Pat US20120093818A1 (Amgen, Inc) and US20110065902A1 (Regeneron Pharmaceuticals, Inc) include, e.g. A disease or condition disclosed in paragraphs [0375] to [0383] of US20120093818A1, the disclosure of which is incorporated herein by reference in its entirety for inclusion in any one or more of the claims.

Der Ligand kann einem Menschen wie in US20120093818A1 (Amgen, Inc) oder US20110065902A1 beschrieben charakterisiert verabreicht werden.The ligand can be a human like in US20120093818A1 (Amgen, Inc.) or US20110065902A1 be described characterized described.

Der Ligand kann in einer in US20120093818A1 (Amgen, Inc) oder US20110065902A1 offenbarten Form oder Kombination verabreicht werden, wobei diese Offenbarung durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird. Zum Beispiel der Ligand mit einem Arzneimittel, Exzipienten, Verdünnungsmittel oder Träger wie in US20120093818A1 (Amgen, Inc) oder US20110065902A1 (z. B. wie in den Absätzen [0384] bis [0412] von US20120093818A1 offenbart) beschrieben, wobei diese Offenbarung durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird, und die vorliegende Erfindung betrifft außerdem die entsprechenden pharmazeutischen Zusammensetzungen, die die Kombination eines erfindungsgemäßen Liganden und eines solchen weiteren Mittels umfasst.The ligand can be found in an in US20120093818A1 (Amgen, Inc.) or US20110065902A1 disclosed form or combination, this disclosure is incorporated herein by reference. For example, the ligand with a drug, excipient, diluent or carrier as described in US20120093818A1 (Amgen, Inc) or US20110065902A1 (e.g., as disclosed in paragraphs [0384] to [0412] of US20120093818A1), which disclosure is incorporated herein by reference Part of the present application, and the present invention also relates to the corresponding pharmaceutical compositions comprising the combination of a ligand according to the invention and such a further agent.

Der Ligand kann in einem wie in US20120093818A1 (Amgen, Inc) oder US20110065902A1 , z. B. in den Absätzen [0413] bis [0415] von US20120093818A1, ausgeführten Diagnoseverfahren eingesetzt werden, wobei diese Offenbarung durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird.The ligand can be in a like in US20120093818A1 (Amgen, Inc.) or US20110065902A1 , z. For example, in paragraphs [0413] to [0415] of US20120093818A1, this disclosure is incorporated herein by reference.

Diagnostische AnwendungenDiagnostic applications

Gemäß einigen Ausführungsformen ist der erfindungsgemäße Ligand ein diagnostisches Werkzeug. Mit dem Liganden lässt sich die Menge an in einer Probe und/oder einem Subjekt vorhandener PCSK9 untersuchen. Wie dem Fachmann bewusst sein wird, müssen solche Liganden keine neutralisierenden Liganden sein. Gemäß einigen Ausführungsformen handelt es sich bei dem diagnostischen Liganden nicht um einen neutralisierenden Liganden. Gemäß einigen Ausführungsformen bindet der diagnostische Ligand an ein anderes Epitop als das, an das ein neutralisierender Ligand bindet. Gemäß einigen Ausführungsformen konkurrieren die beiden Liganden nicht miteinander.According to some embodiments, the ligand of the invention is a diagnostic tool. The ligand can be used to study the amount of PCSK9 present in a sample and / or subject. As those skilled in the art will appreciate, such ligands need not be neutralizing ligands. In some embodiments, the diagnostic ligand is not one neutralizing ligands. In some embodiments, the diagnostic ligand binds to an epitope other than that to which a neutralizing ligand binds. According to some embodiments, the two ligands do not compete with each other.

Gemäß einigen Ausführungsformen werden die erfindungsgemäßen Liganden in einem Assay-Kit und/oder Verfahren zum Nachweis von PCSK9 in Säugetiergeweben oder -zellen zum Durchmustern/Diagnostizieren auf eine mit Veränderungen bei den PCSK9-Konzentrationen assoziierte Krankheit oder Erkrankung verwendet oder bereitgestellt. Das Kit umfasst einen Liganden, der PCSK9 bindet, und Mittel zum Anzeigen der Bindung des Liganden an PCSK9, falls vorhanden, und gegebenenfalls der Konzentrationen an PCSK9-Protein. Zum Anzeigen des Vorhandenseins eines Liganden können verschiedene Mittel angewendet werden. Man kann beispielsweise Fluorophore, andere molekulare Sonden oder Enzyme an den Liganden anbinden und das Vorhandensein des Liganden auf verschiedene Arten beobachten. Das Verfahren zur Durchmusterung auf solche Erkrankungen kann die Anwendung des Kits oder einfach die Anwendung eines der offenbarten Liganden und die Feststellung, ob der Ligand an PCSK9 in einer Probe bindet, einschließen. Dem Fachmann wird bewusst sein, dass hohe bzw. erhöhte Konzentrationen an PCSK9 dazu führen, dass größere Mengen des Liganden an PCSK9 in der Probe binden. Über den Ligandenbindungsgrad lässt sich somit feststellen, wie viel PCSK9 in einer Probe vorhanden ist. Subjekte oder Proben mit einer Menge an PCSK9, die über einer vorbestimmten Menge liegt (z. B. einer Menge oder einem Bereich, die/den eine Person ohne eine mit PCSK9 in Zusammenhang stehende Erkrankung haben würde), können als an einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit leidend charakterisiert werden. Gemäß einigen Ausführungsformen stellt die Erfindung ein Verfahren bereit, bei dem man einem ein Statin einnehmenden Subjekt den Liganden verabreicht, um festzustellen, ob durch das Statin die Menge an PCSK9 erhöht wurde.According to some embodiments, the ligands of the invention are used or provided in an assay kit and / or method for detecting PCSK9 in mammalian tissues or cells for screening / diagnosis for a disease or disease associated with changes in PCSK9 levels. The kit includes a ligand that binds PCSK9 and means for indicating binding of the ligand to PCSK9, if present, and optionally, the levels of PCSK9 protein. Various means can be used to indicate the presence of a ligand. For example, one can attach fluorophores, other molecular probes or enzymes to the ligand and observe the presence of the ligand in several ways. The method of screening for such diseases may include the use of the kit or simply the application of one of the disclosed ligands and the determination of whether the ligand binds to PCSK9 in a sample. It will be appreciated by those skilled in the art that high or elevated levels of PCSK9 result in larger amounts of the ligand binding to PCSK9 in the sample. The degree of ligand binding can thus be used to determine how much PCSK9 is present in a sample. Subjects or samples with an amount of PCSK9 that is above a predetermined amount (e.g., an amount or range that a subject would have without a PCSK9 related disease) may be considered to be at a PCSK9 mediated level Illness be characterized. According to some embodiments, the invention provides a method of administering the ligand to a statin-occupying subject to determine if the statin has increased the amount of PCSK9.

Gemäß einigen Ausführungsformen handelt es sich bei dem Liganden um einen nicht neutralisierenden Liganden, der eingesetzt wird, um die Menge an PCSK9 in einem Subjekt, das eine ABP- und/oder Statinbehandlung erhält, festzustellen.In some embodiments, the ligand is a non-neutralizing ligand used to detect the amount of PCSK9 in a subject receiving ABP and / or statin treatment.

Gemäß einigen Ausführungsformen kann der erfindungsgemäße Ligand spezifisch an humane PCSK9 (z. B. eine, zwei oder mehr hier offenbarte seltene Formvarianten) binden und ist durch wenigstens eines der Folgenden charakterisiert: (i) die Fähigkeit zum Reduzieren des Serumgesamtcholesterins um wenigstens etwa 25–35% und zum Aufrechterhalten der Reduzierung über einen Zeitraum von wenigstens 24 Tagen im Vergleich zu einem Spiegel vor der Verabreichung der Dosis; (ii) die Fähigkeit zum Reduzieren des Serum-LDL-Cholesterins um wenigstens etwa 65–80% und zum Aufrechterhalten der Reduzierung über einen Zeitraum von wenigstens 24 Tagen im Vergleich zu einem Spiegel vor der Verabreichung der Dosis; (iii) die Fähigkeit zum Reduzieren des Serum-LDL-Cholesterins um wenigstens etwa 40–70% und zum Aufrechterhalten der Reduzierung über einen Zeitraum von wenigstens 60 oder 90 Tagen im Vergleich zu einem Spiegel vor der Verabreichung der Dosis; (iv) die Fähigkeit zur Reduzierung des Serumtriglyceridgehalts um wenigstens etwa 25–40% im Vergleich zum Spiegel vor der Verabreichung der Dosis; (v) keine Reduzierung des Serum-HDL-Cholesterins oder eine Reduzierung des Serum-HDL-Cholesterins um nicht mehr als 5% im Vergleich zum Spiegel vor der Verabreichung der Dosis. Gemäß einigen Ausführungsformen wird ein isoliertes Nukleinsäuremolekül bereitgestellt, welches für den Liganden codiert. Gemäß einigen Ausführungsformen wird ein Expressionsvektor bereitgestellt, der das Nukleinsäuremolekül umfasst. Gemäß einigen Ausführungsformen wird eine pharmazeutische Zusammensetzung bereitgestellt, die den Liganden und einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger umfassen kann. Gemäß einigen Ausführungsformen wird ein Verfahren zur Behandlung einer Krankheit oder eines Leiden bereitgestellt, das mit einem erfindungsgemäßen PCSK9-antagonistischen Liganden gelindert, verbessert, gehemmt oder verhindert werden kann. Das Verfahren kann die Verabreichung einer therapeutischen Menge der pharmazeutischen Zusammensetzung bzw. des Liganden an ein dessen bedürftiges Subjekt umfassen. Gemäß einigen Ausführungsformen handelt es sich bei dem Subjekt um ein menschliches Subjekt, das an Hypercholesterinämie oder Hyperlipidämie leidet, bei dem eine LDL-Apherese festgestellt wurde, der als heterozygot für familiäre Hypercholesterinämie, statinintolerant oder nicht auf Statine ansprechend identifiziert wurde oder bei dem das Risiko des Auftretens von Hypercholesterinämie, Dyslipidämie, cholestatischer Leberkrankheit, nephrotischem Syndrom, Hypothyroidismus, Obesitas, Atherosklerose und Herz-Kreislauf-Krankheit besteht. Gemäß einigen Ausführungsformen wird einem Subjekt ein Verfahren zur Bereitstellung einer Behandlung oder Therapie bereitgestellt. Gemäß einigen Ausführungsformen umfasst das Verfahren die Reduzierung des Serumcholesterins um wenigstens 40–70% über wenigstens 60 bis 90 Tage. Gemäß einigen Ausführungsformen wird ein Verfahren zum Erhalten einer Behandlung oder Therapie bereitgestellt, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Liganden in einer Häufigkeit von einmal alle 60 bis 90 Tage umfassen kann.According to some embodiments, the ligand of the invention may bind specifically to human PCSK9 (eg, one, two or more rare form variants disclosed herein) and is characterized by at least one of the following: (i) the ability to reduce serum total cholesterol by at least about 25%. 35% and to maintain the reduction over a period of at least 24 days as compared to a level before administration of the dose; (ii) the ability to reduce serum LDL cholesterol by at least about 65-80% and to maintain the reduction over a period of at least 24 days compared to a level prior to the administration of the dose; (iii) the ability to reduce serum LDL cholesterol by at least about 40-70% and to maintain the reduction over a period of at least 60 or 90 days compared to a level prior to the administration of the dose; (iv) the ability to reduce serum triglyceride content by at least about 25-40% compared to the level prior to administration of the dose; (v) no reduction in serum HDL cholesterol or no reduction in serum HDL cholesterol by more than 5% compared to the level before dose administration. In accordance with some embodiments, an isolated nucleic acid molecule encoding the ligand is provided. According to some embodiments, an expression vector comprising the nucleic acid molecule is provided. According to some embodiments, there is provided a pharmaceutical composition which may comprise the ligand and a pharmaceutically acceptable carrier. According to some embodiments, there is provided a method of treating a disease or condition that can be alleviated, improved, inhibited or prevented with a PCSK9 antagonist ligand of the present invention. The method may comprise administering a therapeutic amount of the pharmaceutical composition or ligand to a subject in need thereof. According to some embodiments, the subject is a human subject suffering from hypercholesterolemia or hyperlipidemia who has been diagnosed as having LDL apheresis identified as heterozygous for familial hypercholesterolemia, statin intolerant or not statinally-responsive, or at risk the occurrence of hypercholesterolemia, dyslipidemia, cholestatic liver disease, nephrotic syndrome, hypothyroidism, obesity, atherosclerosis and cardiovascular disease. In accordance with some embodiments, a subject is provided with a method of providing a treatment or therapy. According to some embodiments, the method comprises reducing serum cholesterol by at least 40-70% for at least 60 to 90 days. According to some embodiments, there is provided a method of obtaining a treatment or therapy, which method may comprise administering a ligand at a frequency of once every 60 to 90 days.

Gemäß einem Aspekt stellt die Erfindung einen erfindungsgemäßen Liganden bereit, bei dem es sich um einen humanen Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment eines humanen Antikörpers handelt bzw. der einen solchen Antikörper bzw. ein solches Fragment umfasst, welcher bzw. welches spezifisch an humane Proproteinkonvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (hPCSK9, z. B. eine, zwei oder mehr hier offenbarte seltene Formvarianten, und gegebenenfalls Form a und/oder Form a') bindet und diese inhibiert, gekennzeichnet durch die Fähigkeit zur Reduzierung des Serum-LDL-Cholesterins in einem Menschen um 40–80% über einen Zeitraum von 24, 60 oder 90 Tagen im Vergleich zu einem Spiegel vor der Verabreichung der Dosis, mit einer geringen oder keiner Reduzierung des Serum-HDL-Cholesterins und/oder mit einer geringen oder keiner messbaren Wirkung auf die Leberfunktion, bestimmt mittels ALT- und AST-Messungen. In one aspect, the invention provides a ligand of the invention which is a human antibody or an antigen-binding fragment of a human antibody, or which comprises such an antibody or fragment specific to human proprotein convertase subtilisin / Kexin type 9 (hPCSK9, e.g., one, two or more rare form variants disclosed herein, and optionally form a and / or form a ') binds and inhibits, characterized by the ability to reduce serum LDL cholesterol in one 40-80% over a period of 24, 60 or 90 days compared to a pre-dose level, with little or no reduction in serum HDL cholesterol and / or with little or no measurable effect liver function as determined by ALT and AST measurements.

Gemäß einer Ausführungsform umfasst der erfindungsgemäße Ligand einen Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment eines Antikörpers, der bzw. das spezifisch an hPCSK9 bindet und durch wenigstens eines der Folgenden gekennzeichnet ist:

• (i) die Fähigkeit zum Reduzieren des Serumgesamtcholesterins um wenigstens etwa 25–35% und zum Aufrechterhalten der Reduzierung über einen Zeitraum von wenigstens 24 Tagen im Vergleich zu einem Spiegel vor der Verabreichung der Dosis, vorzugsweise beträgt die Reduktion des Gesamtserumcholesterins wenigstens etwa 30–40%;
• (ii) die Fähigkeit zum Reduzieren des Serum-LDL-Cholesterins um wenigstens etwa 65–80% und zum Aufrechterhalten der Reduzierung über einen Zeitraum von wenigstens 24 Tagen im Vergleich zu einem Spiegel vor der Verabreichung der Dosis;
• (iii) die Fähigkeit zur Reduzierung des Serumtriglyceridgehalts um wenigstens etwa 25–40% im Vergleich zum Spiegel vor der Verabreichung der Dosis;
• (iv) keine Reduzierung des Serum-HDL-Cholesterins oder eine Reduzierung des Serum-HDL-Cholesterins um nicht mehr als 5% im Vergleich zum Spiegel vor der Verabreichung der Dosis.

• (i) the ability to reduce serum total cholesterol by at least about 25-35% and to maintain the reduction over a period of at least 24 days as compared to a pre-dose level, preferably at least about 30-40 reduction in total serum cholesterol %;
• (ii) the ability to reduce serum LDL cholesterol by at least about 65-80% and to maintain the reduction over a period of at least 24 days compared to a level prior to the administration of the dose;
• (iii) the ability to reduce serum triglyceride content by at least about 25-40% compared to the level prior to the administration of the dose;
• (iv) no reduction in serum HDL cholesterol or no reduction in serum HDL cholesterol by more than 5% compared to the level before dose administration.

Siehe US2011/0065902 für Definitionen dieser Begriffe und optionalen Merkmale, deren Offenbarung in ihrer Gesamtheit durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung wird.Please refer US2011 / 0065902 for definitions of these terms and optional features, the disclosure of which is incorporated herein by reference in its entirety.

Gemäß einer Ausführungsform umfasst die Erfindung einen Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment eines Antikörpers, der bzw. das spezifisch an hPCSK9 bindet und durch wenigstens eines der Folgenden gekennzeichnet ist:

• (i) fähig zur Reduktion von Serum-LDL-Cholesterin um wenigstens etwa 40–70% und zur Aufrechterhaltung der Reduktion über einen Zeitraum von wenigstens 60 oder 90 Tagen im Vergleich zu einer Konzentration vor der Verabreichung;
• (ii) fähig zur Reduktion von Serumtriglycerid um wenigstens etwa 25–40% im Vergleich zu einer Konzentration vor der Verabreichung;
• (iii) reduziert Serum-HDL-Cholesterin nicht bzw. reduziert Serum-HDL-Cholesterin um nicht mehr als 5% im Vergleich zu einer Konzentration vor der Verabreichung.

• (i) capable of reducing serum LDL cholesterol by at least about 40-70% and maintaining the reduction over a period of at least 60 or 90 days compared to a pre-administration level;
• (ii) capable of reducing serum triglyceride by at least about 25-40% compared to a pre-administration level;
• (iii) does not reduce serum HDL cholesterol or reduce serum HDL cholesterol by more than 5% compared to pre-administration concentration.

Gemäß einer Ausführungsform ist der Antikörper bzw. das antigenbindende Fragment dadurch charakterisiert, dass er bzw. es eine gesteigerte Bindungsaffinität (KD) für hPCSK9 bei einem pH-Wert von 5,5 im Vergleich zu dem KD bei einem pH-Wert von 7,4, gemessen durch Plasmonoberflächenresonanz, zeigt. Gemäß einer speziellen Ausführungsform zeigt der Antikörper bzw. das Fragment davon eine wenigstens 20-fach, wenigstens 40-fach oder wenigstens 50-fach gesteigerte Affinität für PCSK9 bei einem sauren pH-Wert im Vergleich zu einem neutralen pH-Wert, gemessen durch Oberflächenplasmonresonanz.In one embodiment, the antibody or antigen binding fragment is characterized as having increased binding affinity (KD) for hPCSK9 at pH 5.5 compared to KD at pH 7.4 , measured by plasmon surface resonance. In a specific embodiment, the antibody or fragment thereof exhibits at least a 20-fold, at least 40-fold or at least a 50-fold increased affinity for PCSK9 at an acidic pH compared to a neutral pH measured by surface plasmon resonance.

Gemäß einer Ausführungsform ist der Antikörper bzw. das antigenbindende Fragment dadurch charakterisiert, dass er bzw. es keine gesteigerte Bindungsaffinität für PCSK9 bei einem sauren pH-Wert im Vergleich zu einem neutralen pH-Wert, gemessen durch Plasmonoberflächenresonanz, zeigt. Gemäß einer speziellen Ausführungsform zeigt der Antikörper bzw. das Fragment davon bei einem sauren pH-Wert eine verminderte Bindungsaffinität.In one embodiment, the antibody or antigen-binding fragment is characterized as having no enhanced binding affinity for PCSK9 at an acidic pH as compared to a neutral pH as measured by plasmon surface resonance. According to a specific embodiment, the antibody or the fragment thereof exhibits a reduced binding affinity at an acidic pH.

Gemäß einer anderen Ausführungsform bindet der Antikörper bzw. das antigenbindende Fragment humane PCSK9, humane PCSK9 mit der GOF-Mutation D374Y, Javaneraffen-PCSK9, Rhesusaffen-PCSK9, Maus-PCSK9, Ratten-PCSK9 und Hamster-PCSK9.In another embodiment, the antibody or antigen binding fragment binds human PCSK9, human PCSK9 with the GOF mutation D374Y, Java monkey PCSK9, rhesus monkey PCSK9, mouse PCSK9, rat PCSK9 and hamster PCSK9.

Gemäß einer Ausführungsform bindet der Antikörper bzw. das antigenbindende Fragment humane PCSK9 und Affen-PCSK9, jedoch nicht Maus-PCSK9, Ratten-PCSK9 oder Hamster-PCSK9.In one embodiment, the antibody or antigen binding fragment binds human PCSK9 and monkey PCSK9, but not mouse PCSK9, rat PCSK9, or hamster PCSK9.

Gemäß einer Ausführungsform umfasst die Erfindung einen Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment eines Antikörpers, der bzw. das eine oder mehrere einer variablen Region einer schweren Kette (Heavy Chain Variable Region, HCVR), einer variablen Region einer leichten Kette (Light Chain Variable Region, LCVR), HCDR1, HCDR2, HCDR3, offenbart in einem der Absätze [023]–[037] von US2011/0065902 , deren Offenbarungen durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden, umfasst. In one embodiment, the invention includes an antibody or antigen binding fragment of an antibody comprising one or more of a Heavy Chain Variable Region (HCVR), a Light Chain Variable Region (LCVR) variable region ), HCDR1, HCDR2, HCDR3, disclosed in any of paragraphs [023] - [037] of US2011 / 0065902 , the disclosures of which are incorporated herein by reference.

Gemäß einer verwandten Ausführungsform umfasst die Erfindung einen Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment eines Antikörpers, der bzw. das hPCSK9 spezifisch bindet, wobei der Antikörper bzw. das Fragment CDR-Domänen der schweren und leichten Kette umfasst, die in den Schwer- und Leichtketten-Sequenzpaaren ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO (mit der Sequenznummerierung aus US2011/0065902 ): 2/10, 18/20, 22/24, 26/34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120, 122/130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/168, 170/178, 186/188, 190/192, 194/202, 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 266/274, 282/284, 286/288, 290/298, 306/308, 310/312, 314/322, 330/332, 334/336, 338/346, 354/356, 358/360, 362/370, 378/380, 382/384, 386/394, 402/404, 406/408, 410/418, 426/428, 430/432, 434/442, 450/452, 454/456, 458/466, 474/476, 478/480, 482/490, 498/500, 502/504, 506/514, 522/524, 526/528, 530/538, 546/548, 550/552, 554/562, 570/572, 574/576, 578/586, 594/596, 598/600, 602/610, 618/620, 622/624, 626/634, 642/644, 646/648, 650/658, 666/668, 670/672, 674/682, 690/692, 694/696, 698/706, 714/716, 718/720, 722/730, 738/740 und 742/744) enthalten sind. Gemäß einer Ausführungsform sind die CDR-Sequenzen enthalten in HCVR und LCVR ausgewählt aus den Aminosäuresequenzpaaren von SEQ ID NO: 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 122/130, 138/140, 142/144, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 314/322, 330/332 und 334/336. Gemäß spezielleren Ausführungsformen sind die CDR-Sequenzen in HCVR/LCVR-Sequenzen ausgewählt aus SEQ ID NO: 90/92 oder 218/226.In a related embodiment, the invention encompasses an antibody or antigen-binding fragment of an antibody that specifically binds hPCSK9, the antibody or fragment comprising heavy and light chain CDR domains that are in the heavy and light chain sequence pairs selected from the group consisting of SEQ ID NO (with the sequence numbering US2011 / 0065902 2/10, 18/20, 22/24, 26/34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120, 122/130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/168, 170/178, 186/188, 190/192, 194 / 202, 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 266/274, 282/284, 286/288, 290/298, 306/308, 310/312, 314/322, 330/332, 334/336, 338/346, 354/356, 358/360, 362/370, 378/380, 382/384, 386/394, 402 / 404, 406/408, 410/418, 426/428, 430/432, 434/442, 450/452, 454/456, 458/466, 474/476, 478/480, 482/490, 498/500, 502/504, 506/514, 522/524, 526/528, 530/538, 546/548, 550/552, 554/562, 570/572, 574/576, 578/586, 594/596, 598 / 600, 602/610, 618/620, 622/624, 626/634, 642/644, 646/648, 650/658, 666/668, 670/672, 674/682, 690/692, 694/696, 698/706, 714/716, 718/720, 722/730, 738/740 and 742/744). In one embodiment, the CDR sequences contained in HCVR and LCVR are selected from the amino acid sequence pairs of SEQ ID NOs: 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 122/130, 138/140, 142/144, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 314/322, 330/332 and 334/336. According to more specific embodiments, the CDR sequences in HCVR / LCVR sequences are selected from SEQ ID NO: 90/92 or 218/226.

Bei einem Beispiel ist die Erfindung durch eine pharmazeutische Zusammensetzung gekennzeichnet, die einen erfindungsgemäßen Liganden, wobei der Ligand einen rekombinanten humanen Antikörper oder ein Fragment davon, der bzw. das hPCSK9 spezifisch bindet, umfasst bzw. daraus besteht, und einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger umfasst. Gemäß einer Ausführungsform ist die Erfindung durch eine Zusammensetzung gekennzeichnet, bei der es sich um eine Kombination des erfindungsgemäßen Liganden (z. B. einen Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment eines Antikörpers) und eines zweiten therapeutischen Mittel handelt. Bei dem zweiten therapeutischen Mittel kann es sich um ein beliebiges Mittel handeln, das vorteilhaft mit dem erfindungsgemäßen Liganden kombiniert wird, zum Beispiel ein Mittel, dass dazu fähig ist, eine zelluläre Depletion der Cholesterinsynthese durch Inhibieren von 3-Hydroxy-3-methylglutaryl (HMG)-Coenzym A(CoA)-Reduktase zu induzieren, wie zum Beispiel Cerovastatin, Atorvastatin, Simvastatin, Pitavastin, Rosuvastatin, Fluvastatin, Lovastatin, Pravastatin usw.; dazu fähig ist, die Cholesterinaufnahme und/oder Gallensäurewiederaufnahme zu hemmen; dazu fähig ist, den Lipoproteinkatabolismus zu erhöhen (wie Niacin); und/oder Aktivatoren des LXR-Transkriptionsfaktors, der eine Rolle bei der Cholesterineliminierung spielt, wie 22-Hyd roxycholesterin.In one example, the invention is characterized by a pharmaceutical composition comprising a ligand of the invention wherein the ligand comprises or consists of a recombinant human antibody or a fragment thereof specifically binding to hPCSK9, and a pharmaceutically acceptable carrier. In one embodiment, the invention is characterized by a composition which is a combination of the ligand of the invention (eg, an antibody or an antigen-binding fragment of an antibody) and a second therapeutic agent. The second therapeutic agent may be any agent which is advantageously combined with the ligand of the invention, for example, an agent capable of inducing cellular depletion of cholesterol synthesis by inhibiting 3-hydroxy-3-methylglutaryl (HMG ) Coenzyme A (CoA) reductase, such as cerovastatin, atorvastatin, simvastatin, pitavastine, rosuvastatin, fluvastatin, lovastatin, pravastatin, etc .; is able to inhibit cholesterol intake and / or bile acid recovery; is capable of increasing lipoprotein catabolism (such as niacin); and / or activators of the LXR transcription factor that plays a role in cholesterol elimination, such as 22-hydroxycholesterol.

Bei einem Beispiel stellt die Erfindung ein Verfahren zur Inhibierung der hPCSK9-Aktivität unter Einsatz des erfindungsgemäßen Anti-PCSK9-Liganden (z. B. eines Antikörpers oder eines antigenbindenden Teils des erfindungsgemäßen Antikörpers) bereit, wobei die therapeutischen Verfahren die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge einer einen erfindungsgemäßen Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment eines erfindungsgemäßen Antikörpers umfassenden pharmazeutischen Zusammensetzung umfassen. Bei der behandelten Erkrankung handelt es sich um eine beliebige Krankheit oder ein beliebiges Leiden, die bzw. das durch das Entfernen, das Inhibieren oder die Reduzierung der PCSK9-Aktivität verbessert, gelindert, gehemmt oder verhindert wird. Spezielle Populationen, die mit den erfindungsgemäßen therapeutischen Verfahren behandelt werden können, schließen Subjekte ein, bei denen eine LDL-Apherese festgestellt wurde, Subjekte mit PCSK9-aktivierenden Mutationen (Gain of Function Mutations, ”GOF”), Subjekte mit heterozygoter familiärer Hypercholesterinämie (Heterozygous Familial Hypercholesterolemia, heFH); Subjekte mit primärer Hypercholesterinämie, die statinintolerant oder statinunkontrolliert sind; und Subjekte, bei denen ein Risiko des Auftretens von Hypercholesterinämie besteht und die präventativ behandelt werden können. Andere Indikationen schließen Dyslipidämie assoziiert mit sekundären Ursachen wie Typ-2-Diabetes mellitus, cholestatischen Leberkrankheiten (primärer biliärer Zirrhose), nephrotischem Syndrome, Hypothyroidismus, Obesitas; und die Prävention und Behandlung von Atherosklerose und Herz-Kreislauf-Krankheiten ein.In one example, the invention provides a method of inhibiting hPCSK9 activity using the anti-PCSK9 ligand of the invention (eg, an antibody or antigen-binding portion of the antibody of the invention), wherein the therapeutic methods comprise administering a therapeutically effective amount a pharmaceutical composition comprising an antibody according to the invention or an antigen-binding fragment of an antibody according to the invention. The disease being treated is any disease or condition that is improved, alleviated, inhibited or prevented by the removal, inhibition or reduction of PCSK9 activity. Specific populations that can be treated with the therapeutic methods of the invention include subjects identified as having LDL apheresis, subjects with Gain of Function Mutations ("GOF"), subjects with heterozygous familial hypercholesterolemia (Heterozygous Familial hypercholesterolemia, heFH); Subjects with primary hypercholesterolemia who are statin intolerant or statin uncontrolled; and subjects at risk of hypercholesterolemia who may be treated preventively. Other indications include dyslipidemia associated with secondary causes such as type 2 diabetes mellitus, cholestatic liver disease (primary biliary cirrhosis), nephrotic syndrome, hypothyroidism, obesity; and the prevention and treatment of atherosclerosis and cardiovascular diseases.

Bei speziellen Ausführungsformen des erfindungsgemäßen Verfahrens eignet sich der erfindungsgemäße Ligand (z. B. erfindungsgemäße Anti-hPCSK9-Antikörper oder Antikörperfragment) zur Reduzierung von erhöhtem Gesamtcholesterin, Nicht-HDL-Cholesterin, LDL-Cholesterin und/oder Apolipoprotein B (Apolipoprotein B100).In specific embodiments of the method according to the invention, the ligand according to the invention (for example anti-hPCSK9 antibody or antibody fragment according to the invention) is suitable for reducing elevated total cholesterol, non-HDL cholesterol, LDL cholesterol and / or apolipoprotein B (apolipoprotein B100).

Der erfindungsgemäße Ligand (z. B. der Antikörper oder das antigenbindende Fragment) kann alleine oder in Kombination mit einem zweiten Mittel, zum Beispiel einem HMG-CoA-Reduktase-Inhibitor und/oder einem anderen lipidsenkenden Arzneimittel eingesetzt werden. The ligand according to the invention (eg the antibody or the antigen-binding fragment) can be used alone or in combination with a second agent, for example an HMG-CoA reductase inhibitor and / or another lipid-lowering medicament.

Behandlungspopulationtreatment population

Die Erfindung stellt therapeutische Methoden zur Behandlung eines humanen Patienten bereit, der einer Zusammensetzung oder eines Liganden gemäß der Erfindung bedarf. Während Umstellungen des Lebensstils und die Behandlung mit herkömmlichen Arzneimitteln bei einer Reduzierung der Cholesterinspiegel häufig erfolgreich sind, sind nicht alle Patienten dazu in der Lage, die empfohlenen Target-Cholesterinspiegel über solche Ansätze zu erzielen. Verschiedene Bedingungen wie familiäre Hypercholesterinämie (FH) scheinen hinsichtlich einer Absenkung von LDL-C-Spiegeln resistent zu sein, trotz einer aggressiven Anwendung herkömmlicher Therapien. Homozygote und heterozygote familiäre Hypercholesterinämie (hoFH, heFH) ist ein mit vorzeitiger atherosklerotischer Gefäßkrankheit assoziiertes Leiden. Patienten, bei denen hoFH diagnostiziert wird, sprechen jedoch größtenteils nicht auf eine herkömmliche Arzneimitteltherapie an und haben eingeschränkte Behandlungsoptionen. Speziell könnte eine Behandlung mit Statinen, die LDL-C durch Inhibieren der Cholesterinsynthese und Hochregulieren des hepatischen LDL-Rezeptors reduzieren, bei Patienten, die nicht über LDL-Rezeptoren verfügen bzw. bei denen diese defekt sind, nur eine geringe Wirkung haben. Eine mittlere LDL-C-Reduzierung von lediglich weniger als etwa 20% wurde vor kurzem für mit der Statinhöchstdosis behandelte Patienten mit genotypbestätigter hoFH berichtet. Die Zugabe von Ezetimib 10 mg/Tag zu diesem Protokoll führte zu einer Gesamtreduzierung der LDL-C-Spiegel von 27%, was immer noch bei weitem nicht optimal ist. Ebenso sprechen viele Patienten nicht auf Statine an, sind bei einer Statintherapie schlecht eingestellt oder können eine Statintherapie nicht vertragen; im Allgemeinen sind diese Patienten nicht dazu in der Lage, Cholesterin mit alternativen Behandlungen unter Kontrolle zu bekommen. Es besteht ein großer unbefriedigter medizinischer Bedarf an neuen Behandlungen, die die Unzulänglichkeiten der gegenwärtigen Behandlungsoptionen ansprechen.The invention provides therapeutic methods for treating a human patient in need of a composition or ligand according to the invention. While lifestyle changes and conventional drug treatment are often successful in reducing cholesterol levels, not all patients are able to achieve the recommended target cholesterol levels through such approaches. Various conditions, such as familial hypercholesterolemia (FH), appear to be resistant to lowering LDL-C levels, despite aggressive use of conventional therapies. Homozygous and heterozygous familial hypercholesterolemia (hoFH, heFH) is a condition associated with premature atherosclerotic vascular disease. However, patients diagnosed with hoFH are largely unresponsive to conventional drug therapy and have limited treatment options. Specifically, treatment with statins that reduce LDL-C by inhibiting cholesterol synthesis and upregulating the hepatic LDL receptor could have little effect in patients who do not have LDL receptors or are deficient. A mean LDL-C reduction of only less than about 20% has recently been reported for statin-topped patients with genotype-confirmed hoFH. The addition of ezetimibe 10 mg / day to this protocol resulted in an overall reduction in LDL-C levels of 27%, which is still far from optimal. Likewise, many patients do not respond to statins, are ill-timed with statin therapy or can not tolerate statin therapy; In general, these patients are unable to control cholesterol with alternative treatments. There is a great unmet medical need for new treatments that address the shortcomings of current treatment options.

Spezielle Populationen, die mit den erfindungsgemäßen therapeutischen Verfahren behandelt werden können, schließen Patienten ein, bei denen eine LDL-Apherese festgestellt wurde, Subjekte mit PCSK9-aktivierenden (GOF) Mutationen, heterozygoter familiärer Hypercholesterinämie (Heterozygous Familial Hypercholesterolemia, heFH); Subjekte mit primärer Hypercholesterinämie, die statinintolerant oder statinunkontrolliert sind; und Subjekte, bei denen ein Risiko des Auftretens von Hypercholesterinämie besteht und die präventativ behandelt werden können.Specific populations that can be treated with the therapeutic methods of the invention include subjects identified as having LDL apheresis, subjects with PCSK9 activating (GOF) mutations, heterozygous familial hypercholesterolemia (heFH); Subjects with primary hypercholesterolemia who are statin intolerant or statin uncontrolled; and subjects at risk of hypercholesterolemia who may be treated preventively.

Therapeutische Verabreichung und FormulierungenTherapeutic administration and formulations

Die Erfindung stellt therapeutische Zusammensetzungen bereit, die die Anti-PCSK9-Liganden, Antikörper oder antigenbindende Fragmente davon der vorliegenden Erfindung umfassen. Die Verabreichung von erfindungsgemäßen therapeutischen Zusammensetzungen wird mit geeigneten Trägern, Exzipienten und anderen Mitteln, die in Formulierungen eingearbeitet werden, um einen besseren Transfer, eine bessere Zuführung, eine bessere Toleranz und dergleichen bereitzustellen, verabreicht. Eine Vielzahl geeigneter Formulierungen findet sich in der allen pharmazeutischen Chemikern bekannten Formulierungssammlung: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa. Diese Formulierungen schließen zum Beispiel Pulver, Pasten, Salben, Gelees, Wachse, Öle, Lipide, (kationische oder anionische) Lipide enthaltende Vesikel (wie LIPOFECTINT^TM), DNA-Konjugate, wasserfreie Resorptionspasten, Öl-in-Wasser- und Wasser-in-Öl-Emulsionen, Emulsions-Carbowax (Polyethylenglykole unterschiedlicher Molekulargewichte), halbfeste Gele und halbfeste Mischungen, die Carbowax enthalten, ein. Siehe auch Powell et al. ”Compendium of excipients for parenteral formulations” PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238–311 .The invention provides therapeutic compositions comprising the anti-PCSK9 ligands, antibodies or antigen-binding fragments thereof of the present invention. The administration of therapeutic compositions of the invention is administered with suitable carriers, excipients, and other agents incorporated in formulations to provide better transfer, delivery, tolerance, and the like. A variety of suitable formulations are found in the formulation collection known to all pharmaceutical chemists: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa. These formulations include, for example, powders, pastes, ointments, jellies, waxes, oils, lipids, (cationic or anionic) lipid-containing vesicles (such as LIPOFECTINT ^™ ), DNA conjugates, anhydrous resorptive pastes, oil-in-water, and water-in Oil emulsions, emulsion carbowax (polyethyleneglycols of different molecular weights), semi-solid gels and semi-solid mixtures containing Carbowax. See also Powell et al. "Compendium of Excipients for Parenteral Formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52: 238-311 ,

Die Dosis kann in Abhängigkeit vom Alter und der Größe eines Subjekts, bei dem die Verabreichung erfolgen soll, der Zielkrankheit, den Bedingungen, der Verabreichungsroute und dergleichen schwanken. Verwendet man den Liganden, z. B. Antikörper, der vorliegenden Erfindung zur Behandlung verschiedener Leiden und Krankheiten, die mit PCSK9 assoziiert sind, einschließlich Hypercholesterinämie, mit LDL und Apolipoprotein B assoziierten Krankheiten und Störungen des Lipidstoffwechsels und dergleich, bei einem erwachsenen Patienten, so ist es vorteilhaft, den Liganden oder Antikörper der vorliegenden Erfindung intravenös zu verabreichen, normalerweise in einer Einzeldosis von etwa 0,01 bis etwa 20 mg/kg Körpergewicht, besonders bevorzugt etwa 0,02 bis etwa 7, etwa 0,03 bis etwa 5, oder etwa 0,05 bis etwa 3 mg/kg Körpergewicht. Häufigkeit und Dauer der Behandlung können entsprechend dem Schweregrad des Leidens eingestellt werden.The dose may vary depending on the age and size of a subject to be administered, the target disease, the conditions, the route of administration, and the like. If one uses the ligand, z. Antibodies, the present invention for the treatment of various conditions and diseases associated with PCSK9, including hypercholesterolemia, diseases associated with LDL and apolipoprotein B, and disorders of lipid metabolism and the like in an adult patient, it is advantageous to use the ligand or To administer antibodies of the present invention intravenously, usually at a single dose of about 0.01 to about 20 mg / kg of body weight, more preferably about 0.02 to about 7, about 0.03 to about 5, or about 0.05 to about 3 mg / kg body weight. Frequency and duration of treatment can be adjusted according to the severity of the condition.

Es sind verschiedene Verabreichungssysteme bekannt, die zur Verabreichung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung angewendet werden können; somit stellt die Zusammensetzungserfindung den Liganden z. B. durch Einkapseln in Liposomen, Mikropartikeln, Mikrokapseln, rekombinanten Zellen, die zur Expression der mutierten Viren fähig sind, rezeptorvermittelter Endozytose (siehe z. B. Wu et al. (1987) J. Biol. Chem. 262:4429–4432 ) bereit. Verfahren zur Einführung schließen, wobei dies nicht einschränkend ist, intradermale, intramuskuläre, intraperitoneale, intravenöse, subkutane, intranasale, epidurale und orale Routen ein. Die Zusammensetzung kann auf eine beliebige zweckmäßige Route verabreicht werden, zum Beispiel durch Infusion oder Bolusinjektion, durch Resorption über Epithel- oder Schleimhautauskleidungen (z. B. Mundschleimhaut, rektale und intestinale Schleimhaut usw.) und kann zusammen mit anderen biologisch aktiven Mitteln verabreicht werden. Die Verabreichung kann systemisch oder lokal sein. Various delivery systems are known which can be used to administer the pharmaceutical composition of the present invention; Thus, the composition invention provides the ligand z. By encapsulation in liposomes, microparticles, microcapsules, recombinant cells capable of expressing the mutant viruses, receptor-mediated endocytosis (see e.g. Wu et al. (1987) J. Biol. Chem. 262: 4429-4432 ) ready. Methods of introduction include, but are not limited to, intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, intranasal, epidural, and oral routes. The composition may be administered by any convenient route, for example by infusion or bolus injection, by absorption through epithelial or mucosal linings (e.g., oral mucosa, rectal and intestinal mucosa, etc.), and may be co-administered with other bioactive agents. The administration may be systemic or local.

Die pharmazeutische Zusammensetzung kann auch in einem Vesikel, insbesondere einem Liposom, verabreicht werden (siehe Langer (1990) Science 249:1527–1533 ; Treat et al. (1989) in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez Berestein und Fidler (Hrsg.), Liss, New York, S. 353–365 ; Lopez-Berestein, ibid., S. 317–327 ; siehe allgemein ibid.).The pharmaceutical composition can also be administered in a vesicle, in particular a liposome (see Langer (1990) Science 249: 1527-1533 ; Treat et al. (1989) in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez Berestein and Fidler (ed.), Liss, New York, pp. 353-365 ; Lopez-Berestein, ibid., Pp. 317-327 ; see general ibid.).

In bestimmten Situationen kann die pharmazeutische Zusammensetzung in einem System mit kontrollierter Freisetzung verabreicht werden. Gemäß einer Ausführungsform kann eine Pumpe zum Einsatz kommen (siehe Langer, oben; Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 ). Gemäß einer anderen Ausführungsform kann man polymere Materialien verwenden; siehe Medical Applications of Controlled Release, Langer und Wise (Hrsg.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974) . Gemäß noch einer anderen Ausführungsform kann man ein System mit kontrollierter Freisetzung in der Nähe des Ziels der Zusammensetzung platzieren, wodurch noch ein Bruchteil der systemischen Dosis erforderlich ist (siehe z. B. Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, oben, Band 2, S. 115–138, 1984 ).In certain situations, the pharmaceutical composition may be administered in a controlled release system. According to one embodiment, a pump may be used (see Langer, above; Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Closely. 14: 201 ). In another embodiment, one may use polymeric materials; please refer Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (ed.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974) , In yet another embodiment, a controlled release system may be placed near the target of the composition, thereby still requiring a fraction of the systemic dose (see, e.g. Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138, 1984 ).

Die injizierbaren Zubereitungen können Dosierungsformen für intravenöse, subkutane, intrakutane und intramuskuläre Injektionen, Tropfinfusionen usw. einschließen. Diese injizierbaren Zubereitungen können durch öffentlich bekannte Verfahren hergestellt werden. Die injizierbaren Zubereitungen lassen sich zum Beispiel herstellen, indem man z. B. den oben beschriebenen Antikörper oder sein Salz in einem sterilen wässrigen Medium oder einem öligen Medium, welches herkömmlicherweise für Injektionen verwendet wird, löst, suspendiert oder emulgiert. Als wässriges Medium für Injektionen gibt es zum Beispiel physiologische Kochsalzlösung, eine isotonische, Glucose und andere Hilfsstoffe enthaltende Lösung, usw., die in Kombination mit einem entsprechenden Solubilisierungsmittel wie einem Alkohol (z. B. Ethanol), einem Polyalkohol (z. B. Propylenglykol, Polyethylenglykol), einem nicht ionischen Tensid [z. B. Polysorbat 80, HCO-50 (Polyoxyethylen (50 mol) Addukt von hydriertem Rizinusöl)], usw. verwendet werden kann. Als öliges Medium werden z. B. Sesamöl, Sojabohnenöl usw. eingesetzt, die in Kombination mit einem Solubilisierungsmittel wie Benzoesäurenbenzylester, Benzylalkohol usw. eingesetzt werden können. Die auf diese Weise zubereitete Injektion wird vorzugsweise in eine entsprechende Ampulle gefüllt. Eine pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann subkutan oder intravenös mit einer Standardnadel und -spritze verabreicht werden. Darüber hinaus wird in Hinblick auf eine subkutane Verabreichung bei der Verabreichung einer pharmazeutischen Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung gerne ein stiftförmiges Verabreichungsgerät eingesetzt. Solch ein stiftförmiges Verabreichungsgerät ist wiederverwendbar oder für die einmalige Verwendung. Bei einem wiederverwendbaren stiftförmigen Verabreichungsgerät wird im Allgemeinen eine austauschbare Kartusche verwendet, die eine pharmazeutische Zusammensetzung enthält. Nachdem die gesamte pharmazeutische Zusammensetzung in der Kartusche verabreicht wurde und die Kartusche leer ist, kann die leere Kartusche leicht entsorgt und durch eine neue, die pharmazeutische Zusammensetzung enthaltende Kartusche ersetzt werden. Das stiftförmige Verabreichungsgerät kann dann wiederverwendet werden. Bei einem stiftförmigen Einweg-Verabreichungsgerät gibt es keine austauschbare Kartusche. Vielmehr wird das stiftförmige Einweg-Verabreichungsgerät vorgefüllt mit der pharmazeutischen Zusammensetzung, die sich in einem Reservoir im Gerät befindet, geliefert. Nachdem die pharmazeutische Zusammensetzung aus dem Reservoir geleert wurde, wird das gesamte Gerät entsorgt.The injectable preparations may include dosage forms for intravenous, subcutaneous, intracutaneous and intramuscular injections, drip infusions, etc. These injectable preparations can be prepared by publicly known methods. The injectable preparations can be prepared, for example, by z. For example, the antibody described above or its salt may be dissolved, suspended or emulsified in a sterile aqueous medium or oily medium conventionally used for injections. As the aqueous medium for injection there are, for example, physiological saline, an isotonic solution containing glucose and other excipients, etc., which are used in combination with a corresponding solubilizing agent such as an alcohol (e.g., ethanol), a polyhydric alcohol (e.g. Propylene glycol, polyethylene glycol), a nonionic surfactant [e.g. Polysorbate 80, HCO-50 (polyoxyethylene (50 moles) adduct of hydrogenated castor oil), etc., can be used. As an oily medium z. As sesame oil, soybean oil, etc., which can be used in combination with a solubilizing agent such as benzyl benzoate, benzyl alcohol, etc. The injection prepared in this way is preferably filled into a corresponding ampoule. A pharmaceutical composition of the present invention can be administered subcutaneously or intravenously with a standard needle and syringe. Moreover, from the viewpoint of subcutaneous administration in the administration of a pharmaceutical composition of the present invention, a pen-shaped administering device is often used. Such a stick-shaped administering device is reusable or for single use. A reusable stick-shaped delivery device generally uses a replaceable cartridge containing a pharmaceutical composition. After the entire pharmaceutical composition in the cartridge has been administered and the cartridge is empty, the empty cartridge can be easily discarded and replaced with a new cartridge containing the pharmaceutical composition. The pen-shaped administering device can then be reused. In a pen-shaped disposable delivery device, there is no replaceable cartridge. Rather, the pen-shaped disposable delivery device is prefilled with the pharmaceutical composition residing in a reservoir in the device. After the pharmaceutical composition has been emptied from the reservoir, the entire device is discarded.

Zahlreiche wiederverwendbare Stift- und Autoinjektor-Verabreichungsgeräte finden Anwendung bei der subkutanen Verabreichung einer pharmazeutischen Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung. Beispiele schließen, wobei dies bestimmt keine Einschränkung darstellt, AUTOPEN^TM (Owen Mumford, Inc., Woodstock, GB), DISETRONIC^TM pen (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Schweiz), HUMALOG MIX 75/25^TM pen, HUMALOG^TM pen, HUMALIN 70/30^TM pen (Eli Lilly and Co., Indianapolis, Ind., USA), NOVOPEN^TMI, II and III (Novo Nordisk, Kopenhagen, Dänemark), NOVOPEN JUNIOR^TM (Novo Nordisk, Kopenhagen, Dänemark), BD^TM pen (Becton Dickinson, Franklin Lakes, N.J., USA), OPTIPENT^TM, OPTIPEN PRO^TM, OPTIPEN STARLET^TM, and OPTICLIKT^TM (sanofi-aventis, Frankfurt, Deutschland) ein, um nur einige zu nennen. Beispiele für stiftförmige Einweg-Verabreichungsgeräte mit Anwendungen bei der subkutanen Verabreichung einer pharmazeutischen Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung schließen, wobei dies bestimmt keine Einschränkung darstellt, den SOLOSTAR^TM-Stift (sanofi-aventis), den FLEXPEN^TM (Novo Nordisk) und den KWIKPEN^TM (Eli Lilly) ein.Numerous reusable pen and autoinjector delivery devices find application in the subcutaneous administration of a pharmaceutical composition of the present invention. Examples include, but are not limited to, AUTOPEN ^™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC ^™ pen (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25 ^™ pen, HUMALOG ^™ pen, HUMALIN 70/30 ^™ pen (Eli Lilly and Co., Indianapolis, Ind., USA), NOVOPEN ^™ I, II and III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR ^™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD ^™ pen (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA), OPTIPENT ^™ , OPTIPEN PRO ^™ , OPTIPEN STARLET ^™ , and OPTICLIKT ^™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany), to name a few. Examples of single-use pen-shaped delivery devices include, but are not limited to, subcutaneous administration of a pharmaceutical composition of the present invention, the SOLOSTAR ^™ pen (sanofi-aventis), the FLEXPEN ^™ (Novo Nordisk), and the KWIKPEN ^™ ( Eli Lilly).

Vorteilhafterweise werden die oben beschriebenen pharmazeutischen Zusammensetzungen für die orale oder parenterale Anwendung als Dosierungsformen in einer Einheitsdosis, die sich dafür eignet, eine Dosis der Wirkstoffe aufzunehmen, hergestellt. Solche Dosierungsformen in einer Einheitsdosis schließen zum Beispiel Tabletten, Pillen, Kapseln, Injektionspräparate (Ampullen), Zäpfchen usw. ein. Die Menge an oben erwähntem Antikörper beträgt im Allgemeinen etwa 5 bis etwa 500 mg pro Dosierungsform in einer Einheitsdosis; insbesondere bei einer Form für die Injektion ist der oben erwähnte Antikörper vorzugsweise in einer Menge von etwa 5 bis etwa 100 mg enthalten, und bei den anderen Dosierungsformen in einer Menge von etwa 10 bis etwa 250 mg.Advantageously, the above-described pharmaceutical compositions for oral or parenteral use are prepared as dosage forms in a unit dose suitable for receiving a dose of the active ingredients. Such dosage forms in a unit dose include, for example, tablets, pills, capsules, injection preparations (ampoules), suppositories, etc. The amount of antibody mentioned above is generally about 5 to about 500 mg per dosage form in a unit dose; in particular, in one form for injection, the above-mentioned antibody is preferably contained in an amount of about 5 to about 100 mg, and in the other dosage forms in an amount of about 10 to about 250 mg.

Die Erfindung stellt therapeutische Verfahren bereit, bei denen der erfindungsgemäße Ligand, z. B. der Antikörper oder das Antikörperfragment, sich zur Behandlung von mit verschiedenen Leiden unter Beteiligung von hPCSK9 assoziierter Hypercholesterinämie eignet. Die erfindungsgemäßen Anti-PCSK9-Liganden, z. B. Antikörper oder Antikörperfragmente, eignen sich insbesondere zur Behandlung von Hypercholesterinämie und dergleichen. Kombinationstherapien können den erfindungsgemäßen Anti-PCSK9-Liganden zusammen mit zum Beispiel einem oder mehreren beliebigen Mitteln, die (1) eine zelluläre Depletion der Cholesterinsynthese durch Inhibieren von 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-(HMG)-Coenzym A-(CoA)-Reduktase wie Cerivastatin, Atorvastatin, Simvastatin, Pitavastatin, Rosuvastatin, Fluvastatin, Lovastatin, Pravastatin induzieren; (2) die Cholesterinaufnahme und/oder Gallensäurewiederaufnahme hemmen; (3) den Lipoproteinkatabolismus erhöhen (wie Niacin); und Aktivatoren des LXR-Transkriptionsfaktors, der eine Rolle bei der Cholesterineliminierung spielen, wie 22-Hydroxycholesterin oder fixe Kombinationen wie Ezetimib plus Simvastatin; ein Statin mit einem Gallenharz (z. B. Cholestyramin, Colestipol, Colesevelam), eine fixe Kombination von Niacin plus einem Statin (z. B. Niacin mit Lovastatin); oder mit anderen lipidsenkenden Mitteln wie Omega-3-fettsäureethylestern (zum Beispiel Omacor) einschließen.The invention provides therapeutic methods in which the ligand of the invention, for. , The antibody or antibody fragment is useful in the treatment of hypercholesterolemia associated with various conditions involving hPCSK9. The anti-PCSK9 ligands of the invention, e.g. As antibodies or antibody fragments, are particularly suitable for the treatment of hypercholesterolemia and the like. Combination therapies may use the anti-PCSK9 ligand of the present invention in conjunction with, for example, one or more agents which: (1) cellularly deplete cholesterol synthesis by inhibiting 3-hydroxy-3-methylglutaryl (HMG) coenzyme A (CoA); Reductase such as cerivastatin, atorvastatin, simvastatin, pitavastatin, rosuvastatin, fluvastatin, lovastatin, pravastatin; (2) inhibit cholesterol uptake and / or bile acid recovery; (3) increase lipoprotein catabolism (such as niacin); and activators of the LXR transcription factor that play a role in cholesterol elimination, such as 22-hydroxycholesterol or fixed combinations such as ezetimibe plus simvastatin; a statin with a bile resin (eg, cholestyramine, colestipol, colesevelam), a fixed combination of niacin plus a statin (eg, niacin with lovastatin); or with other lipid-lowering agents such as omega-3-fatty acid ethyl esters (for example, Omacor).

Die individuelle Anpassung von Antikörpern an seltene PCSK9-VariantenprofileIndividual adaptation of antibodies to rare PCSK9 variant profiles

Wie oben umrissen schließt die Erfindung die Möglichkeit ein, Behandlungen von Menschen weiter individuell anzupassen, indem man Liganden auf Antikörperbasis mit variablen Domänen basierend auf Gensegmenten, die gewöhnlich in Menschen der ethnischen Populationen, in denen man die PCSK9-Variantenformen findet, die die Auswahlkriterien der Erfindung erfüllen, anzutreffen sind, auswählt. Unten ist ein Beispiel für Liganden angeführt, die Antikörper-VH-Domänen umfassen, die sich aus einer Rekombination von humanem VH3-23 ableiten.As outlined above, the invention includes the ability to further customize human treatments by using antibody-based variable domain ligands based on gene segments commonly found in people of the ethnic populations where the PCSK9 variant forms meet the selection criteria of Meet invention, are encountered, selects. Below is an example of ligands comprising antibody VH domains derived from recombination of human VH3-23.

Der Erfinder analysierte die Häufigkeiten und die Verteilung verschiedener humaner VH3-23-Allele un derkannte die Wünschenswertigkeit des Einsatzes von Liganden basierend auf humanen VH3-23-Allelen, die SNP rs56069819 umfassen. Diese SNP entspricht einer Veränderung von Leucin in Position 24 in der codierten Proteinsequenz zu einem Valin in dieser Position (L24V-Veränderung) und die SNP findet sich bei Koordinate 106268889 auf dem humanen Chromosom 14.The inventor analyzed the abundances and distribution of various human VH3-23 alleles and recognized the desirability of using ligands based on human VH3-23 alleles comprising SNP rs56069819. This SNP corresponds to a change of leucine at position 24 in the encoded protein sequence to a valine in this position (L24V change) and the SNP is at coordinate 106268889 on human chromosome 14.

2 zeigt die kumulative Allelhäufigkeitsverteilung über die Datenbank des 1000 Genomes Project von humanen VH3-23-Allelen, die SNP rs56069819 umfassen (wobei solche Allele als ”C” bezeichnet werden und das am häufgsten vorkommende Allel (das diesen SNP nicht umfasst) als ”A” bezeichnet wird). Aus der Figur geht hervor, dass die VH3-23-Allele, die SNP rs56069819 umfassen, mit einer kumulativen Häufigkeit von 11% über alle humanen ethnischen Populationen zusammen genommen vorkommen, während bei bestimmten speziellen humanen ethnischen Unterpopulationen (ASW, LWK, YRI, CEU und GBR) solche Allele mit einer überdurchschnittlichen kumulativen Häufigkeit vorkommen. Angezeigt in der Figur sind die Formvarianten von humaner PCSK9 (als ”Varianten” gekennzeichnet), die sich in verschiedenen Unterpopulationen mit überdurchschnittlichem Auftreten von humanen VH3-23-Allelen mit SNP rs56069819 finden. Tabelle 7 zeigt die VH3-23-Varianten und die SNPs, die sie umfassen, sowie ihre kumulativen Allelhäufigkeiten, wie man sie in der Datenbank des 1000 Genomes Project findet. 2 Figure 10 shows the cumulative allele frequency distribution across the database of the 1000 Genome Project of human VH3-23 alleles comprising SNP rs56069819 (where such alleles are referred to as "C" and the most abundant allele (not including this SNP) as "A" referred to as). The figure shows that the VH3-23 alleles comprising SNP rs56069819 occur at a cumulative frequency of 11% across all human ethnic populations taken together, while in certain specific human ethnic subpopulations (ASW, LWK, YRI, CEU and GBR) such alleles with an above-average cumulative frequency occur. Shown in the figure are the variant forms of human PCSK9 (designated as "variants") found in various subpopulations with above-average occurrence of human VH3-23 alleles with SNP rs56069819. Table 7 shows the VH3-23 variants and the SNPs they comprise, as well as their cumulative allele frequencies, as found in the database of the 1000 Genome Project.

Bemerkenswerterweise fand man humane VH3-23 Allele mit SNP rs56069819 in der CEU-Population in einer Häufigkeit, die fast das Doppelte der Häufigkeit von 11% für alle Populationen beträgt. Bei den ASW- und YRI-Populationen betrug die Häufigkeit über ein Viertel der Population. Die Erfindung erlaubt es somit in vorteilhafter Weise, einen einen Antikörper oder ein Antikörperfragment umfassenden Liganden auszuwählen, wobei der Antikörper bzw. das Fragment eine VH-Domäne umfasst, die sich aus der Rekombination eines humanen VH-Gensegments, eines humanen D-Gensegments und eines humanen JH-Gensegments ableitet, wobei das VH-Gensegment eine Nukleotidsequenz umfasst, die SNP rs56069819 (dbSNP-Nummerierung, Baunummer wie oben angeführt) umfasst.Remarkably, human VH3-23 alleles with SNP rs56069819 were found in the CEU population at a frequency almost double that of 11% for all populations. In the ASW and YRI populations, the incidence was over one quarter of the population. The invention thus advantageously makes it possible to select a ligand comprising an antibody or an antibody fragment, wherein the antibody or fragment comprises a VH domain derived from the recombination of a human VH gene segment, a human D gene segment and a human JH gene segment, the VH gene segment comprising a nucleotide sequence comprising SNP rs56069819 ( dbSNP numbering, construction number as stated above).

Bei einem Beispiel kann man die Behandlung weiter anpassen, indem man einen Liganden auswählt, der spezifisch an eine humane PCSK9 ausgewählt aus den Formen: f, c, m, e, h, p, q und aj bindet, wobei es sich bei diesen Formen um die handelt, die in den menschlichen Populationen ASW, LWK, YRI, CEU und GBR auftreten.In one example, one can further tailor the treatment by selecting a ligand that specifically binds to a human PCSK9 selected from the forms: f, c, m, e, h, p, q, and aj, which forms those that occur in the human populations ASW, LWK, YRI, CEU and GBR.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst, wobei der Mensch ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung ist. Gegebenenfalls umfasst der Mensch das Gensegment VH3-23*04 und/oder eine Nukleotidsequenz, die für die PCSK9 codiert, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden darüber hinaus um einen Antörper oder ein Fragment, welcher bzw. welches eine VH-Domäne umfasst, die sich von der Rekombination des humanen Gensegments VH3-23*04 ableitet.In one example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1, wherein the human is of ASW, LWK, YRI, CEU or GBR descent. Optionally, the human comprises the gene segment VH3-23 * 04 and / or a nucleotide sequence encoding the PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1. In one example, the ligand is also an antibody or fragment comprising a VH domain derived from recombination of the human gene segment VH3-23 * 04.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 (z. B. Form f, r, p, e oder aj) umfasst, wobei der Mensch ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung ist. Gegebenenfalls umfasst der Mensch das Gensegment VH3-23*04 und/oder eine Nukleotidsequenz, die für die PCSK9 codiert, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden darüber hinaus um einen Antörper oder ein Fragment, welcher bzw. welches eine VH-Domäne umfasst, die sich von der Rekombination des humanen Gensegments VH3-23*04 ableitet. Gegebenenfalls ist der Ligand zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie bei dem Menschen vorgesehen, z. B. zum Reduzieren der Cholesterinkonzentration oder zur Aufrechterhaltung einer zuvor reduzierten Cholesterinkonzentration bei dem Menschen.In one example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1 (eg, form f, r, p, e or aj), wherein the human is ASW, LWK, YRI , CEU or GBR descent. Optionally, the human comprises the gene segment VH3-23 * 04 and / or a nucleotide sequence encoding the PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1. In one example, the ligand is also an antibody or fragment comprising a VH domain derived from recombination of the human gene segment VH3-23 * 04. Optionally, the ligand is for the treatment or prevention of dyslipidemia in humans, z. To reduce cholesterol concentration or to maintain a previously reduced cholesterol concentration in humans.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation E670G in SEQ ID NO: 1 (z. B. Form c, r oder q) umfasst, wobei der Mensch ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung ist. Gegebenenfalls umfasst der Mensch das Gensegment VH3-23*04 und/oder eine Nukleotidsequenz, die für die PCSK9 codiert, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden darüber hinaus um einen Antörper oder ein Fragment, welcher bzw. welches eine VH-Domäne umfasst, die sich von der Rekombination des humanen Gensegments VH3-23*04 ableitet. Gegebenenfalls ist der Ligand zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie bei dem Menschen vorgesehen, z. B. zum Reduzieren der Cholesterinkonzentration oder zur Aufrechterhaltung einer zuvor reduzierten Cholesterinkonzentration bei dem Menschen.In one example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising a mutation E670G in SEQ ID NO: 1 (eg, form c, r, or q), where the human being is ASW, LWK, YRI, CEU or GBR descent. Optionally, the human comprises the gene segment VH3-23 * 04 and / or a nucleotide sequence encoding the PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1. In one example, the ligand is also an antibody or fragment comprising a VH domain derived from recombination of the human gene segment VH3-23 * 04. Optionally, the ligand is for the treatment or prevention of dyslipidemia in humans, z. To reduce cholesterol concentration or to maintain a previously reduced cholesterol concentration in humans.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation Q619P in SEQ ID NO: 1 (z. B. Form h) umfasst, wobei der Mensch ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung ist. Gegebenenfalls umfasst der Mensch das Gensegment VH3-23*04 und/oder eine Nukleotidsequenz, die für die PCSK9 codiert, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden darüber hinaus um einen Antörper oder ein Fragment, welcher bzw. welches eine VH-Domäne umfasst, die sich von der Rekombination des humanen Gensegments VH3-23*04 ableitet. Gegebenenfalls ist der Ligand zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie bei dem Menschen vorgesehen, z. B. zum Reduzieren der Cholesterinkonzentration oder zur Aufrechterhaltung einer zuvor reduzierten Cholesterinkonzentration bei dem Menschen.In one example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising a Q619P mutation in SEQ ID NO: 1 (eg, form h), wherein the human is ASW, LWK, YRI, CEU or GBR descent is. Optionally, the human comprises the gene segment VH3-23 * 04 and / or a nucleotide sequence encoding the PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1. In one example, the ligand is also an antibody or fragment comprising a VH domain derived from recombination of the human gene segment VH3-23 * 04. Optionally, the ligand is for the treatment or prevention of dyslipidemia in humans, z. To reduce cholesterol concentration or to maintain a previously reduced cholesterol concentration in humans.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation N425S in SEQ ID NO: 1 (z. B. Form e) umfasst, wobei der Mensch ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung ist. Gegebenenfalls umfasst der Mensch das Gensegment VH3-23*04 und/oder eine Nukleotidsequenz, die für die PCSK9 codiert, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden darüber hinaus um einen Antörper oder ein Fragment, welcher bzw. welches eine VH-Domäne umfasst, die sich von der Rekombination des humanen Gensegments VH3-23*04 ableitet. Gegebenenfalls ist der Ligand zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie bei dem Menschen vorgesehen, z. B. zum Reduzieren der Cholesterinkonzentration oder zur Aufrechterhaltung einer zuvor reduzierten Cholesterinkonzentration bei dem Menschen.In one example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising a N425S mutation in SEQ ID NO: 1 (eg, Form e), where the human is ASW, LWK, YRI, CEU or GBR descent is. Optionally, the human comprises the gene segment VH3-23 * 04 and / or a nucleotide sequence which is suitable for encoding the PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1. In one example, the ligand is also an antibody or fragment comprising a VH domain derived from recombination of the human gene segment VH3-23 * 04. Optionally, the ligand is for the treatment or prevention of dyslipidemia in humans, z. To reduce cholesterol concentration or to maintain a previously reduced cholesterol concentration in humans.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation R46L in SEQ ID NO: 1 (z. B. Form aj) umfasst, wobei der Mensch ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung ist. Gegebenenfalls umfasst der Mensch das Gensegment VH3-23*04 und/oder eine Nukleotidsequenz, die für die PCSK9 codiert, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden darüber hinaus um einen Antörper oder ein Fragment, welcher bzw. welches eine VH-Domäne umfasst, die sich von der Rekombination des humanen Gensegments VH3-23*04 ableitet. Gegebenenfalls ist der Ligand zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie bei dem Menschen vorgesehen, z. B. zum Erhöhen der Cholesterinkonzentration bei dem Menschen.In one example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising a R46L mutation in SEQ ID NO: 1 (eg, form aj), wherein the human is ASW, LWK, YRI, CEU or GBR descent is. Optionally, the human comprises the gene segment VH3-23 * 04 and / or a nucleotide sequence encoding the PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1. In one example, the ligand is also an antibody or fragment comprising a VH domain derived from recombination of the human gene segment VH3-23 * 04. Optionally, the ligand is for the treatment or prevention of dyslipidemia in humans, z. To increase the cholesterol concentration in humans.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation A53V in SEQ ID NO: 1 (z. B. Form p oder q) umfasst, wobei der Mensch ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung ist. Gegebenenfalls umfasst der Mensch das Gensegment VH3-23*04 und/oder eine Nukleotidsequenz, die für die PCSK9 codiert, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden darüber hinaus um einen Antörper oder ein Fragment, welcher bzw. welches eine VH-Domäne umfasst, die sich von der Rekombination des humanen Gensegments VH3-23*04 ableitet. Gegebenenfalls ist der Ligand zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie bei dem Menschen vorgesehen, z. B. zum Erhöhen der Cholesterinkonzentration bei dem Menschen.In one example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising a mutation A53V in SEQ ID NO: 1 (eg, form p or q), wherein the human is ASW, LWK, YRI, CEU, or GBR -Abstammung is. Optionally, the human comprises the gene segment VH3-23 * 04 and / or a nucleotide sequence encoding the PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1. In one example, the ligand is also an antibody or fragment comprising a VH domain derived from recombination of the human gene segment VH3-23 * 04. Optionally, the ligand is for the treatment or prevention of dyslipidemia in humans, z. To increase the cholesterol concentration in humans.

Bei einem Beispiel bindet der Ligand spezifisch an eine humane PCSK9, die eine Mutation A443T in SEQ ID NO: 1 (z. B. Form m oder h) umfasst, wobei der Mensch ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung ist. Gegebenenfalls umfasst der Mensch das Gensegment VH3-23*04 und/oder eine Nukleotidsequenz, die für die PCSK9 codiert, die eine Mutation I474V in SEQ ID NO: 1 umfasst. Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem Liganden darüber hinaus um einen Antörper oder ein Fragment, welcher bzw. welches eine VH-Domäne umfasst, die sich von der Rekombination des humanen Gensegments VH3-23*04 ableitet. Gegebenenfalls ist der Ligand zur Behandlung oder Prävention von Dyslipidämie bei dem Menschen vorgesehen, z. B. zum Erhöhen der Cholesterinkonzentration bei dem Menschen.In one example, the ligand specifically binds to a human PCSK9 comprising a mutation A443T in SEQ ID NO: 1 (eg, form m or h), wherein the human is ASW, LWK, YRI, CEU, or GBR -Abstammung is. Optionally, the human comprises the gene segment VH3-23 * 04 and / or a nucleotide sequence encoding the PCSK9 comprising a mutation I474V in SEQ ID NO: 1. In one example, the ligand is also an antibody or fragment comprising a VH domain derived from recombination of the human gene segment VH3-23 * 04. Optionally, the ligand is for the treatment or prevention of dyslipidemia in humans, z. To increase the cholesterol concentration in humans.

Bei einem Beispiel handelt es sich bei dem VH-Gensegment um VH3-23*04, bei dem es sich um eine häufig vorkommende SNP rs56069819 umfassende Variante in den menschlichen Populationen ASW, LWK, YRI, CEU und GBR handelt.In one example, the VH gene segment is VH3-23 * 04, which is a common variant of SNP rs56069819 in the human populations ASW, LWK, YRI, CEU and GBR.

Bei einem Beispiel ist der Ligand zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens bei einem Menschen vorgesehen, der eine humane PCSK9 ausgewählt aus den Formen: f, c, m, e, h, p, q und aj exprimiert.In one example, the ligand is for use in the treatment and / or prevention of a PCSK9-mediated disease or a PCSK9-mediated condition in a human having a human PCSK9 selected from the forms: f, c, m, e, h, p, q and aj expressed.

Bei einem Beispiel ist der Ligand zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines durch PCSK9 vermittelten Leidens bei einem Menschen mit ASW-, LWK-, YRI-, CEU- oder GBR-Abstammung vorgesehen.In one example, the ligand is for the treatment and / or prevention of a PCSK9-mediated disease or a PCSK9-mediated condition in a human with ASW, LWK, YRI, CEU or GBR descent.

Gemäß einer Ausführungsform ist der Ligand zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines solchen Leidens in einem Menschen mit ASW-Abstammung vorgeschen, wobei der Mensch eine PCSK9 ausgewählt aus f, c, m, e, h, p und q exprimiert oder der Mensch eine entsprechende, wie in Tabelle 6 angeführte Nukleotid- oder Aminosäuresequenz umfasst. Gegebenenfalls umfasst dieser Ligand eine VH-Domäne, erhalten durch die Rekombination von humanem VH3-23*04.In one embodiment, the ligand is for the treatment and / or prevention of a PCSK9-mediated disease or condition in a human of ASW descent, wherein the human is a PCSK9 selected from f, c, m, e, h, p and q or the human comprises a corresponding nucleotide or amino acid sequence as listed in Table 6. Optionally, this ligand comprises a VH domain obtained by the recombination of human VH3-23 * 04.

Gemäß einer Ausführungsform ist der Ligand zur Behandlung und/oder Prävention einer durch PCSK9 vermittelten Krankheit oder eines solchen Leidens in einem Menschen mit LWK-Abstammung vorgeschen, wobei der Mensch eine PCSK9 ausgewählt aus f, c, m, e und h exprimiert oder der Mensch eine entsprechende, wie in Tabelle 6 angeführte Nukleotid- oder Aminosäuresequenz umfasst. Gegebenenfalls umfasst dieser Ligand eine VH-Domäne, erhalten durch die Rekombination von humanem VH3-23*04.According to one embodiment, the ligand is for the treatment and / or prevention of a PCSK9-mediated disease or condition in a human of LWK descent, wherein the human expresses a PCSK9 selected from f, c, m, e and h or human a corresponding nucleotide or amino acid sequence as listed in Table 6. Optionally, this ligand comprises a VH domain obtained by the recombination of human VH3-23 * 04.