WO2015159253A1 - Anti-her4 human antibody - Google Patents

Anti-her4 human antibody Download PDF

Info

Publication number
WO2015159253A1
WO2015159253A1 PCT/IB2015/052787 IB2015052787W WO2015159253A1 WO 2015159253 A1 WO2015159253 A1 WO 2015159253A1 IB 2015052787 W IB2015052787 W IB 2015052787W WO 2015159253 A1 WO2015159253 A1 WO 2015159253A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cdr
antibody
sequence seq
domain
cancer
Prior art date
Application number
PCT/IB2015/052787
Other languages
French (fr)
Inventor
Olivier Dubreuil
Original Assignee
Gamamabs Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Gamamabs Pharma filed Critical Gamamabs Pharma
Publication of WO2015159253A1 publication Critical patent/WO2015159253A1/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/04Immunostimulants
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55Fab or Fab'
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565Complementarity determining region [CDR]
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622Single chain antibody (scFv)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Definitions

  • the present invention relates to novel human antibodies directed against the human HER4 receptor. More particularly, the present invention relates to human antibodies that bind selectively to the extracellular domain of the human HER4 receptor and to their use as a medicine, especially for the prevention or treatment of cancer.
  • HER4 is a tyrosine kinase receptor of the EGFR subfamily
  • HER4 is a 180-kDa glycoprotein composed of an extracellular domain for different ligand binding, a transmembrane domain and an intracellular domain with tyrosine kinase activity.
  • the extracellular domain is composed of four subdomains (I, II, III, IV).
  • JM-a and JM-b are two isoforms at subdomain level IV and two isoforms at the intracellular domain level (CYT-1 and CYT-2).
  • HER4 is a functional receptor that can induce an intracellular signaling cascade by homo- and heterodimerization and by binding of these ligands (Plowman et al., 1993).
  • HER4 can be activated by a multitude of ligands: betacellulin, epiregulin,
  • HB-EGF iike Heparin Domain
  • neuregulins NRG-1, NRG-2, NRG-3, NRG-4
  • heregulin ligands ⁇ , ⁇ and ⁇ heregulin, neu-differentiation factors. .).
  • the activated intracellular signaling pathways may be the MAP kinase pathway (Ras / mitogen-activated protein kinase) and / or the PI3 kinase / Akt pathway.
  • MAP kinase pathway Ras / mitogen-activated protein kinase
  • PI3 kinase / Akt pathway as / mitogen-activated protein kinase pathway
  • the CYT-2 isoform that is deleted from a sequence of 16 amino acids compared to CYT-1 iso form can not activate the PDK / Akt pathway that is responsible for survival and cell migration.
  • Activation of HER4 can also be performed according to a singularity specific to this receptor at its activation mechanism.
  • the isoform JM-a has a sequence of 23 amino acids at the extracellular subdomain domain IV which can be cleaved by a protease (TACE). This cleavage induces the release of an extracellular domain with a solubility of 120 kDa.
  • TACE protease
  • the remaining truncated receptor inserted into the membrane 80 kDa
  • ⁇ -secretase intracellularly and cause the release of the intracellular domain (4ICD, Intra Cellular Domain).
  • This 4ICD domain has the ability to translocate into the nucleus and act as a co-activating or co-suppressing transcription factor. This mode of activation, independent of the ligand, increases the diversity of the biological functions of this receptor.
  • the isoform JM-b has a deletion of 10 amino acids at the recognition site of this protease, so it can not be cleaved.
  • HER4 is expressed in various adult and fetal tissues and several studies have shown HER4 expression in various epithelial cancers such as breast, ovarian, lung, colon, and melanoma cancers (Hollmen & Elenius, 2010) as well as in certain pediatric sarcoma and neuroblastoma cancers (M endoza-aran jo et al, 2013, Hua et al.
  • HER4 plays a role in resistance to anti-hormonal therapies in breast cancers (Hutcheson et al., 201 1, Sutherland et al., 201 1) and chemotherapies (Hua et al. 2 12).
  • HER4 In pediatric neuroblastoma tumors, it has been observed that a strong expression of HER4 was a poor prognosis in terms of survival. In this type of Tumor HER4 expression is induced by different cellular stresses and HER4 acts as an inhibitor of apoptosis (Hua et al., 2012). In another type of pediatric tumor - Ewing - HER4 sarcoma has also been identified as a marker of poor prognosis (Mendoza-Naranjo et al, 2013). In this study, strong expression of HER4 was shown in tumor cells resistant to chiomiotherapy and metastatic cells.
  • HER4 / 4ICD acted as a transcriptional coactivator of the estrogen receptor and promoted the expression of genes responsible for tumor cell proliferation (Han & Jones, 2014). In this same study, it is shown that 90% of ER positive tumors co-express the HER4 receptor.
  • the HER4 receptor also appears to be an important oncogene in malignant melanoma where several mutated forms have been identified; thus, somatic mutations activating HER4 have been reported in 19% of malignant melanomas (Prickett et al, 2009).
  • HER4 has been shown to be important markers for progression-free survival rates in malignant melanoma (Nielsen et al, 2014). ).
  • HER4 has been identified as a predictor of low survival and increased tumor growth in serous adenocarcinoma of the ovary (Paatero et al, 2 1). All of these recent data highlight the need for HER4 specific antibodies that can be used as a predictive and / or therapeutic tool.
  • the present invention relates to a human antibody selectively binding to the extracellular domain of the human HER4 receptor.
  • said antibody according to the invention is such that it preferably binds to the extracellular domain of each of JM-a isoforms and JM-b of domain IV of human HER4 receptor.
  • the present invention relates to a fragment of an antibody according to the invention, preferably chosen from the group comprising Fv, Fab,
  • the present invention relates to a nucleic acid encoding an antibody or an antibody fragment according to the invention.
  • the present invention relates to a vector comprising at least one nucleic acid according to the invention, said nucleic acid being under control of the elements allowing its expression.
  • the present invention relates to a host cell transformed with a nucleic acid or with a vector according to the invention.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition, and especially a vaccine composition, comprising at least one compound chosen from:
  • said composition may further comprise at least one anti-cancer agent distinct from a compound as defined above.
  • the present invention relates to a process for the preparation of a human antibody comprising a step of recovering an antibody produced by a host cell according to the invention.
  • the present invention relates to an antibody or an antibody fragment according to the invention:
  • HER4 receptor for its use for the prevention or treatment of a disease associated with the extracellular domain of the human HER4 receptor, in particular cancer.
  • the present invention relates to the use of an antibody, an antibody fragment or a compound comprising said antibody or said antibody fragment according to the invention:
  • a cancer for the preparation of a medicament for the treatment of a cancer, particularly selected from the group consisting of squamous cell cancer, breast cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, gastric cancer, glial cell tumors such as glioblastoma and neurofibromatosis, uterine cancer, ovarian cancer, lung cancer, testicular cancer, colon cancer, rectal cancer, pancreatic cancer, melanoma. multiple myeloma, colorectal cancer, endometrial carcinoma, carcinoma of the sacral glands, kidney cancer, prostate cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma, leukemia , hematopoietic cancer.
  • lymphomas including Hodgkin's disease and non-Hodgkin lymphoma, sarcoma, including Kaposi's sarcoma or Ewing's sarcoma. neuroblastoma and pediatric cancers, particularly of the sarcoma or neuroblastoma type;
  • the present invention relates to a diagnostic method for a disease associated with the extracellular domain of human HER4 receptor, in particular cancer, in a human biological sample, comprising at least the steps following:
  • the circulating level of the extracellular domain of the HER4 receptor considered above can in particular be determined after cleavage by TACE, as described above.
  • Figure 1 illustrates the alignment of the VH and VL variable domains of the human anti-HER4 antibodies of the invention.
  • Figure 2 illustrates the binding of phages-scFv to the recombinant human HER4-Fc protein.
  • the results obtained for HE4B-33, HE4B-1, HE4B-27, HE5B-35, HE5C-144 and HE5C-123 clones are presented.
  • FIGS. 3A and 3B illustrate the binding of the Fab of the anti-HER4 human antibody of the invention HE4B-33 to the recombinant human HER4-Fc protein.
  • Figure 3A expresses the specificity of the HE4B-33 antibody for the HER4 receptor compared to the HER3 receptor.
  • Figure 3B shows a dose-response curve of the HE4B-33 antibody to the HER4 target.
  • Figures 4A, 4B. 4C and 4D illustrate the determination of the recognition specificity for the anti-HER4 antibodies of the invention HE4B-33, HE4B-17. HE4B-27, HE5B-35, HE5C-144. HE5C-123 and HE3C-2 in format IgG compared to the FIER 3 receptor.
  • Figures SA, SB and 5C illustrate the determination of the relative affinities of the anti-HER4 antibodies of the invention with respect to the HER4 receptor.
  • FIG. 7 illustrates the binding capacity of the anti-HER4 human antibodies of the invention with respect to the JM-a and JM-b isoforms of the membrane HER4 receptor.
  • the inventors have identified human antibodies anti-HER4, particularly advantageous in terms of the prevention and / or treatment of cancer.
  • HER4 refers to the human HER4 receptor, which is a tyrosine kinase receptor of the EGFR subfamily, as previously indicated.
  • human anti-HER4 antibodies refers to any human antibody directed against the above-mentioned human IER4 receptor.
  • antibody is used here in the broadest sense.
  • antibody is therefore meant any polypeptide which comprises at least: (i) an Fc region and (ii) a polypeptide binding domain derived from a variable region of an immunoglobulin.
  • human antibody any polypeptide comprising at least parts (i) and (ii) above derived solely from human sequences, parts (i) and / or (ii) above may also come from mutated modified human sequences, in particular for the purpose of improving the CDC and / or the ADCC and / or the half-life of the resulting antibody.
  • Fc or “Fc region” is meant the cry stalli sand fragment generated during enzymatic digestion of immunoglobulins by papain.
  • the Fc fragment refers to the last two constant regions of the IgA, IgD, and IgG unipolar regions, at the last three constant regions of IgE and IgM.
  • Fc can include the J. chain for IgG.
  • Fc comprises the CgammaZ and Cgamma3 immunoglobulin domains (Cy2 and Cy3 which are the CH2 and CH3 domains, respectively).
  • the heavy chain of the Fc region of human IgG1 is defined here as comprising C226 residues at its carboxyl terminus, wherein the amino acid numbering of the Fc region is that of the EU index proposed by Kabat.
  • the CH2 domain refers to positions 237 to 340 and the CH3 domain refers to positions 341 to 447 according to the EU index proposed by Kabat.
  • polypeptide binding domain As for the aforementioned polypeptide binding domain, it is capable of binding specifically to a given target antigen or target antigen group.
  • a polypeptide binding domain that derives from a variable region of an immunoglobulin comprises one or more CDRs ("complementarity determining regions").
  • Antibodies include, but are not limited to, full-length immunoglobulins, monoclonal antibodies, multi-specific antibodies, Fc fusion proteins comprising at least one variable region, synthetic antibodies (sometimes referred to as "mimetic antibodies”), whole human antibodies, fusion-antibody proteins, antibody conjugates and their respective fragments.
  • full-length antibodies or “immunoglobulin” as used herein is meant the structure that constitutes the natural biological form of an antibody, including variable and constant regions.
  • Full-length antibodies cover monoclonal full-length antibodies, wild-type full-length antibodies, the list not being limiting.
  • full-length antibodies In most mammals, including humans, the structure of full-length antibodies is usually a tetrameric. Said tetramer is composed of two identical pairs of polypeptide chains, each pair having a "heavy" chain (typically having a molecular weight of about 50-70 kDa) and a "light” chain (typically having a molecular weight of about 25 kDa). In some mammals, for example camels and llamas, the full-length antibodies may consist of only two heavy chains, each heavy chain comprising a variable domain attached to the Fc region.
  • each chain comprises a variable region of about 100 to 10 amino acids responsible for antigen recognition.
  • three loops are pooled for each of the V domains of the heavy chain and the light chain to form an antigen binding site.
  • Each of these loops relates to a CDR, in which the variation of the amino acid sequence is the most important.
  • the carboxy-terminal portion of each chain defines a constant region primarily responsible for the effector function.
  • Kabat et al. has collected numerous primary sequences of variable regions, heavy chains and light chains. On the basis of the degree of conservation of the sequences, they classified the individual primary sequences in the CDRs and made a list of these (see Sequences of Immunological Interest, 5th Edition, IH Publication, No. 91-3242, EA Kabat incorporated herein by reference in its entirety).
  • IgM immunoglobulin
  • IgG has several subclasses, including but not limited to. IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4.
  • IgM has several subclasses, including but not limited to Ig 1 and IgM 2.
  • isotype as used here. we mean one of the immunoglobulin subclasses defined by the chemical and antigenic characteristics and their constant regions.
  • the known human immunoglobulin isotypes are IgG l. IgG2, IgG3, IgG4. IgA l. IgA2, IgM1, IgM2, IgD. and IgE.
  • IgG as used herein is meant a polypeptide belonging to the class of antibodies that is substantially encoded by a recognized immunoglobulin gamma gene. In humans. IgG comprises subclasses or isotypes IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4.
  • Full-length IgGs are tetramers and consist of two identical pairs of two immunoglobulin chains. each pair having a light chain and a heavy chain, each light chain comprising the VL and CL domains, and each heavy chain comprising the domains VH, C 1 (also called CH 1), C 2 (also called CH 2) and Cy 3 (also called CH3).
  • CH1 refers to positions 18 to 220.
  • the CH2 domain refers to positions 237 to 340 and the CH3 domain refers to positions 341 to 447 according to the EU index proposed by Kabat.
  • the IgG heavy chain also includes a hinge domain which refers to positions 221 to 236 in the case of IgG 1.
  • Fc region fragments is intended to denote polypeptides, which are identical or different, which comprise one or more polypeptides derived from a wild-type Fc region, preferably from the region. hinge of a wild-type IgG.
  • the Fc region fragments according to the invention are such that they retain their ability to recruit effector cells, in particular neutrophils and monocyte macrophages.
  • the Fc region fragments according to the invention have a dissociation constant for FcRn less than 1 ⁇ according to the SPR assay.
  • FcRn or "neonatal Fc receptor” is intended to denote a protein which binds to the Fc region of the IgG antibodies and is at least partly encoded by an FCRN gene.
  • FcRn can be from any organism, including but not limited to humans, mice, rats, rabbits, and monkeys. In view of the therapeutic indications considered in the present application, FcRn is that of man.
  • the functional FcRn protein comprises two polypeptides, often referred to as the heavy chain and the light chain. The light chain is beta-2-microglobulin and the heavy chain is encoded by the RRFC gene. Unless otherwise indicated, FcRn or the FcRn protein refers to the-chain complex with beta-2-microglobulin. In humans, the gene encoding FcRn is called FCGRT.
  • the Fc region or Fc region fragment of a human antibody according to the invention can exhibit improved affinity for FcRn compared to the Fc region of a fragment of a Fc region of a parent human antibody, this in particular to improve the in vivo half-life properties of the antibody.
  • parent as used herein is meant an unmodified polypeptide which is then modified to produce a variant.
  • fragment of an antibody according to the invention is meant a portion of said antibodies, but which retains its binding capacity to the antigen, m this case its binding capacity to human HER4 receptor .
  • Fab refers to an antibody fragment having a molecular weight of about 50,000 Da and having the antigen binding site called "paratope”, formed from the entire light chain (VL + C L ). and VH + CHI domains of the heavy chain. He is monovalent.
  • F (ab ') 2 refers to an antibody fragment having a molecular weight of about 100,000 Da and having the so-called antigen binding site.
  • "Paratope” which corresponds to the association of two Fab fragments linked via a sulphide bridge of the hinge region (or “hinge"), among fragments obtained by treatment of IgG with a protease, the pepsin. It has the same affinity as the antibody for the antigen and is di valent.
  • Fab refers to an antibody fragment having a molecular weight of about 50,000 Da and antigen binding activity, which is obtained by cutting a disulfide bridge from the hinge region of F (ab ') 2.
  • the single-chain Fv polypeptide is a co-valentially-linked VH :: VL heterodimer that is usually expressed from a gene fusion comprising the VH and VL encoding genes bound by a binder encoding a peptidc.
  • dsFv is a VH :: VL heterodimer stabilized by a disulfide bond.
  • Bivalent and multivalent antibody fragments may form spontaneously by association of monovalent scFvs, or may be generated by coupling monovalent scFvs with a binder peptide, such as divalent sc (Fv) 2.
  • diabodies refers to small antibody fragments with two antigen binding sites, these fragments comprising a heavy chain variable domain (VH) connected to a light chain variable domain (VL) in the same polypeptide chain (VH-VL).
  • VH heavy chain variable domain
  • VL light chain variable domain
  • linker that is too short to match the two domains on the same chain, the domains are forced to pair with the complementary domains of another chain and create two link sites. to the antigen.
  • purified and isolated is meant, when referring to an antibody according to the invention or to a nucleotide sequence. that the indicated molecule is present in the substantial absence of other biological macromolecules of the same type.
  • purified as used herein means that preferably at least 75% by weight, more preferably at least 85% by weight, still more preferably at least 95% by weight. and preferably at least 98% by weight of biological macromolecules of the same type are present.
  • nucleic acid molecule that encodes a particular polypeptide refers to a nucleic acid molecule that is substantially free of other nucleic acid molecules that do not encode the polypeptide; however, the molecule may comprise certain bases or groups which do not deleteriously affect the basic characteristics of the molecule under consideration.
  • polynucleotide is meant according to the invention a compound comprising a nucleotide polymer, which includes a ribonucleotide polymer (RNA) and a deoxyribonucleotide polymer (DNA), said nucleotides optionally being chemically modified.
  • a polynucleotide may advantageously have a length ranging from 5 to 3,000 nucleotides in length.
  • a polynucleotide conventionally encompasses poly-ribonucleotides and poly-deoxyribonucleotides, where appropriate chemically modified.
  • a polynucleotide is a nucleotide polymer. ribonucleotides or deso yri bon uel eot id es.
  • a nucleic acid consists essentially of a polymer of nucleotides and comprises a non-nucleotide portion, said non-nucleotide portion preferably being of reduced length compared to the length of the nucleotide portion, for example a length linear less than the length occupied by a chain of five nucleotides, ribonucleotides or deoxyribonucleotides.
  • the non-nucleotide portion is not of a polypeptide nature, or alternatively does not contain an amino acid residue.
  • a polynucleotide may comprise one or more modified nucleotides, such as methylated nucleotides, the modifications may be made before, during, or after the assembly of the nucleotide polymer.
  • the non-nucleotide portion may be a spacer chain comprising a free carboxy group or a spacer chain comprising a free amino group.
  • polynucleotide entity and “polynucleotide” are used interchangeably to refer to the same object.
  • polypeptide is meant according to the invention a chain of at least two amino acid residues, which encompasses a chain ranging from 2 to 1000 amino acid residues in length, said amino acid residues being linked together by covalent bonds, including peptide bonds.
  • polypeptide can be used to designate indifferently a protein, a peptide or an oligopeptide.
  • polypeptide encompasses polypeptides chemically modified by one or more functional groups or by one or more non-peptide molecules, except for modification by a polynucleotide.
  • polypeptide entity and “polypeptide” are used interchangeably to refer to the same object.
  • amino acid is meant any of the 22 naturally occurring amino acid residues, as well as their unnatural analogues.
  • Amino acids include the Alanine (Ala; A), Arginine (Arg; R), Asparagine (Asp; N), Aspartic acid (Asp; D) residues.
  • Amino acids include L-amino acids and D-amino acids.
  • the amino acids are L-amino acids.
  • an amino acid sequence of SEQ ID No. X having at least 80% amino acid identity with a reference amino acid sequence has at least 81%, 82%, 83%, 84% 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%,
  • nucleic acid of SEQ ID NO: X acid having at least 80% nucleotide identity with a reference nucleic acid sequence has at least 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%,
  • the present invention provides isolated human antibodies that selectively bind to the extracellular domain of the human HER4 receptor.
  • the present invention relates to a human antibody that selectively binds to the extracellular domain of the human HER4 receptor.
  • said antibody according to the invention is such that it advantageously binds to the extracellular domain of each of the JM-a and JM-b isoforms of the sub-domain IV of the human HER4 receptor.
  • an antibody according to the invention may comprise at least one antigen binding domain, said antigen binding domain possibly being chosen from:
  • a heavy chain CDR-H 1 domain selected from the following domains:
  • X 1 is an amino acid residue chosen from G and A,
  • X 2 is an amino acid residue selected from I and M, and
  • X3 is an amino acid residue selected from S and H.
  • a heavy chain CDR-H2 domain selected from the following domains:
  • a heavy chain CDR-H3 domain selected from the following domains:
  • a light chain CDR-L1 domain selected from the following domains: (ii) the CDR-L1 domain of the following formula (XIII): NH2-S-G-S-S-N-I-G-N-
  • a light chain CDR-L2 domain selected from the following domains: (i) the CDR-L2 domain of the following formula (XVI): NH2-X4-N-N-R-P-S-
  • X5 is an amino acid residue selected from A and T,
  • X6 is an amino acid residue selected from V and A, and
  • - X7 is a residue of amino acid selected from A, W and V.
  • an antibody according to the invention may comprise at least one antigen binding domain in which:
  • variable region of the heavy chain comprises the three CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, wherein: a) the heavy chain CDR-H1 domain is selected from the following domains:
  • XI is an amino acid residue selected from G and A,
  • X 2 is an amino acid residue selected from I and M, and
  • X3 is an amino acid residue chosen from S and H,
  • the heavy chain CDR-H2 domain is selected from the following domains:
  • the heavy chain CDR-H3 domain is selected from the following domains:
  • COOH (XVIII), and f) the CDR-L3 light chain domain is selected from the following fields:
  • X6 is an amino acid residue selected from V and A, and
  • X7 is an amino acid residue selected from A, W and V,
  • an antibody according to the invention may have a heavy chain comprising all three CDR-H CDRs.
  • an antibody according to the invention may have a light chain comprising the three CDRs CDR-Ll.
  • CDR-L2 and CDR-L3 selected from those defined above.
  • said antibodies may be more particularly defined according to the seven embodiments of "finite below,
  • an antibody according to the invention can be defined as follows.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the three CDR-H 1 CDRs.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID No. 7, and comprising CDR-H 1, CDR-H 2 and CDR-H 3, respectively of sequences SEQ ID No. 10, 11 and 12.
  • an antibody according to the invention may have a light chain comprising all three CDR-CDRs.
  • An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 9, and comprising CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, respectively, SEQ ID NO: 13, 14 and 15.
  • an antibody according to the invention can be defined as follows.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H 1, CDR-H 2 and CDR-H 3:
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with SEQ ID NO 17, comprising the CDR-H 1.
  • an antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
  • An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with SEQ ID NO 19, comprising the CDR-L1. CDR-L2 and CDR-L3. respectively, of SEQ ID NO 23, 24 and 25.
  • an antibody according to the invention can be defined as follows.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H 1, CDR-H2 and CDR-H3:
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 27, comprising the CDR-H I, CDR-H2 and CDR-H3, respectively SEQ ID Nos. 30, 31 and 32. Also, an antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
  • An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 29. and including CDR-L1. CDR-L2 and CDR-L3, respectively, of SEQ ID NOs 33, 34 and 35.
  • an antibody according to the invention can be defined as follows.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H 1, CDR-H 2 and CDR-H 3:
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 37, and comprising CDR-H 1.
  • an antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
  • An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID No. 39, and comprising CDR-L 1, CDR-L 2 and CDR-L 3, respectively of sequences SEQ ID Nos. 43, 44 and 45.
  • an antibody according to the invention can be defined as follows.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDR-CDR-H 1.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 47 and comprising CDR-H 1. CDR-H2 and CDR-H3. respectively, of SEQ ID NO 50, 51 and 52 sequences.
  • An antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
  • An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with SEQ ID NO 49, and comprising CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, respectively, SEQ ID NO 53, 54 and 55.
  • an antibody according to the invention can be defined as follows.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3:
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 57, and comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, respectively, SEQ ID NO 60, 61 and 62.
  • an antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L 1, CDR-L2 and CDR-L3:
  • An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 59, and comprising CDR-L 1, CDR-L 2 and CDR-L 3, respectively of SEQ ID NOs 63, 64 and 65.
  • an antibody according to the invention can be defined as follows.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the three CDR-H 1 CDRs.
  • An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 67 and including CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, respectively, SEQ ID NO 70, 71 and 72.
  • an antibody according to the invention may have a light chain comprising all three CDR-CDRs.
  • An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 69, and comprising CDR-LI, CDR-L2 and CDR-L3. respectively, of SEQ ID O 73 74 ct75.
  • a scion antibody of the invention is particularly advantageous in that it has further excellent affinity with respect to human HER4 receptor, HER4 receptor specificity for said human with respect to the human HER3 receptor (see, in particular, FIGS. 2, 3 A. 4A to D and 5A to C).
  • a scion antibody invention is preferably selected from the group consisting of antibodies designated HE4B-33. HE4B-17, HE4B-27. HE5B-35, HE5C-144, HE5C-123 and HE3C-29.
  • an antibody according to the invention is chosen from the group comprising the antibodies designated HE4B-33.
  • an antibody according to the invention is furthermore interesting in that it binds to the JM- ⁇ and JM-b isoforms of the sub-domain IV of the human HER4 receptor (see FIG. 7).
  • the present invention also relates to a fragment of an antibody according to the invention.
  • the present invention relates to any fragment of an antibody as defined in one of the seven embodiments above, subject of course that the said fragment according to the invention maintains its binding capacity to the antigen, namely to the human HER4 receptor.
  • a fragment of an antibody according to the invention may be chosen from the group comprising Fv, Fab, F (ab ') 2, Fab', dsFv, scFv, sc (Fv) 2 and diabodies.
  • the present invention provides an isolated human anti-HER4 antibody that selectively binds to the extracellular domain of the human HER4 receptor.
  • the so-called “epitope binning” technique can be used to identify antibodies that fall within the scope of the present invention.
  • the epitope binning technique refers to the use of competitive binding assays to identify antibody pairs that are, or are not, able to bind HER4 simultaneously, thereby identifying pairs of antibodies. antibodies that bind to the same HER4 epitope or on HER4 epitopes are overlapping. "Epitope binning" experiments provide evidence that antigenically distinct cells are present. Competition for HER4 binding can be assessed for any pair of antibodies or fragments.
  • the binding specificity of antibodies or binding fragments from any source can be compared to the binding specificity of an antibody according to the present invention.
  • the “epitope binning” technique can be performed with “isolated” antibodies or with cell culture supernatants. Often, the “epitope binning” technique is performed with the first rounds of clone supernatants to guide the choice of clones that will be developed later.
  • the antibodies to be compared should be substantially homogeneous at the level of the antigen binding domains. In the case of "bispecific” or “bifonetional” antibodies, the binding specificity of the two different binding sites must be evaluated independently.
  • Immunological assays that can be used include, but are not limited to, systems employing competitive assay techniques such as Western blots, radioimmunoassays, ELISA, sandwich immunoassays, assays, and assays. immunoprecipitation. precipitin assays, precipitin gel diffusion assays, immunoradiometric assays. fluorescent immunoassays, protein A immunoassays and complement fixation tests. Such assays are common and well known to those skilled in the art (see, for example, Ausubel et al., 1994.
  • anti-HER4 human antibodies according to the invention may be produced by any techniques known to those skilled in the art, such as, without limitation, any chemical, biological, genetic or enzymatic technique, either alone or in combination.
  • they can be synthesized using the well known solid phase method, preferably using a commercially available peptide synthesizer (such as Applied Biosystems, Poster City, CA) and following the instructions. from the manufacturer.
  • a commercially available peptide synthesizer such as Applied Biosystems, Poster City, CA
  • antibodies of the invention can be synthesized by also well known recombinant DNA techniques of the skilled artisan.
  • antibodies can be obtained as DNA expression products after incorporation of DNA sequences encoding the antibodies according to the invention into expression vectors and introduction of such vectors into hosts or euearyotes Suitable prokaryotes will express the desired antibodies, from which they can then be isolated using techniques also well known to those skilled in the art.
  • the present invention also relates to a nucleic acid encoding a human anti-HER4 antibody according to the invention or a fragment thereof, as indicated above.
  • said nucleic acid is a DNA or RNA molecule, which may be included in any suitable vector, such as a plasmid, a cosmid, an episome, an artificial chromosome, a phage or a viral vector .
  • vector means the vehicle by which an AD or RNA sequence (eg, a foreign gene) can be introduced into a host cell, so that transform the host and promote the expression (eg, transcription and translation) of the introduced sequence.
  • AD or RNA sequence eg, a foreign gene
  • expression vector eg, a vector comprising a nucleic acid of the invention.
  • Such vectors may include regulatory elements, such as a promoter, enhancer, terminator, and the like, to cause or guide the expression of antibodies when administered to a subject.
  • promoters and enhancers used in an animal cell expression vector include the SV40 early promoter and enhancer (Mizukami T. et al., 1987), the mouse leukemia virus LTR and enhancer promoter. Moloney (Kuwana Y et al., 1987), the promoter (Mason JO et al., 1985) and the enhancer (Gillies SD et al., 1998) of the immunoglobulin H chain and the like.
  • Any expression vector for animal cells can be used, provided that a gene encoding the C region of a human antibody can be inserted and expressed.
  • suitable vectors include pAGE107 (Miyaji H et al., 1990), pAGE103 (Mizukami T et al., 1987), pHSG274 (Brady G et al., 1984), pKCR (O'Hare K et al., 81). PSGL beta d2-4 (Miyaji H et al, 1990) and others.
  • Plasmids include replication plasmids comprising an origin of replication. or integrative plasmids, such as pUC, pcDNA, pBR. and others.
  • viral vectors include retroviruses. adenoviruses. Herpes virus and AAV vectors.
  • recombinant viruses can be produced by techniques known to those skilled in the art, for example by transfection of packaging cells or by transient transfection with plasmids or helper viruses.
  • Typical examples of virus packaging cells include PA317 cells, PsiCR1P cells. GPcnv + cells, 293 cells, etc.
  • Detailed protocols for the production of these recombinant viruses unable to replicate can be found for example in WO 95/14785, WO 96/22378, US 5,882,877, US 6,013,516. US 4,861,719, US 5,278,056 and WO 94/19478.
  • Another object of the present invention is a host cell which has been transfected, infected or transformed with a nucleic acid and / or a vector according to the invention.
  • transformation refers to the introduction of a "foreign” (ie extrinsic or extracellular) gene, DNA or "RNA" sequence into a host cell, so that the host cell will express the introduced gene or sequence. to produce a desired substance, typically a protein or an enzyme encoded by the introduced gene or sequence.
  • a host cell that receives and expresses the AD or introduced RNA has been "transformed".
  • the nucleic acids of the invention can be used to produce an antibody of the invention in an appropriate expression system.
  • expression system refers to a host cell and a compatible vector under appropriate conditions, for example for the expression of a protein encoded by a foreign DNA carried by the vector and introduced into the host cell.
  • Common expression systems include E. coli host cells and plasmid vectors, insect host cells and Baculovirus vectors and mammalian host and vector cells.
  • host cells include, but are not limited to, prokaryotic cells (bacteria) and eukaryotic cells (such as yeast cells, mammalian cells, insect cells, plant cells, etc.).
  • bacteria prokaryotic cells
  • eukaryotic cells such as yeast cells, mammalian cells, insect cells, plant cells, etc.
  • Specific examples include E. coli, Kluyveromyces or Saccharomyces yeasts, mammalian cell lines (e.g., Vero, CHO, 3T3, COS cells, etc.) as well as primary or established mammalian cell cultures (eg for example, produced from lymphoblasts, fibroblasts, embryonic cells, epithelial cells, nerve cells, adipocytes, etc.).
  • Examples also include mouse SP2 / 0-Agl4 cells (ATCC CRL1581), P3X63-Ag8.653 mouse cells (ATCC CRL 1580).
  • YB2 / 0 " examples also include mouse SP2 / 0-Agl4 cells (ATCC CRL1581), P3X63-Ag8.653 mouse cells (ATCC CRL 1580).
  • DHFR gene dihydrofolate reductase gene
  • YB2 / 3HL.P2.G1 1.16Ag.20 ATCC CRL1662, referred to as "cell”
  • YB2 / 0 " and others.
  • the present invention also relates to a method for the preparation of a human antibody comprising a step of recovering an antibody produced by a host cell as described above.
  • the present invention relates to a method for producing a recombinant host cell expressing an antibody according to the invention, said method comprising the steps of: (i) in vitro or ex vivo introduction of a nucleic acid or a recombinant vector as described above into a competent host cell; (ii) culturing in vitro or ex vivo the recombinant host cell obtained at the end of step (i); and (iii) optionally, selecting cells that express and / or secrete said antibodies.
  • recombinant host cells can be used for the production of the antibodies of the invention.
  • the antibodies of the invention are conveniently separated from the culture medium by immunoglobulin purification procedures such as, for example, protein A-Sepharose, hydroxyapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis or chromatography. 'affinity.
  • this may be any region that belongs to human immunoglobulin, but those of the IgG class are appropriate and any of the subclasses belonging to the IgG class such as IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 may also be used. Also, concerning the CL domain of a human antibody, this may be any region that belongs to an Ig, and those of the kappa class or the lambda class may be used.
  • the Fab according to the present invention can be obtained by treating an antibody that specifically reacts with human HER4 with a protease, papain.
  • the Fab can be produced by inserting the DNA encoding the Fab of the antibody into a vector for a prokaryotic expression system, or for a eukaryotic expression system. and introducing the vector into a prokaryotic or eukaryotic (as appropriate) to express Fab.
  • the F (ab ') 2 of the present invention can be obtained by treating an antibody that specifically reacts with human HER4 with a protease. pepsin.
  • F (ab ') 2 can be produced by the Fab' binding described below via a thioether bond or a disulfide bond.
  • the Fab 'according to the present invention can be obtained by treating F (ab') 2 which specifically reacts with human HER4 with a reducing agent, dithiothreitol. Also, the Fab 'fragment can be produced by inserting the DNA encoding the Fab' fragment of the antibody into a prokaryotic expression vector, or a eukaryotic expression vector, and introducing the vector into a prokaryote or eukaryote (scion case) to perform its expression.
  • the scFv of the present invention can be produced by obtaining cDNAs encoding the VH and VL domains described above, the DNA construct encoding the scFv, inserting the DNA into an expression vector for prokaryote. or an eukaryotic expression vector, and then introducing the expression vector into a prokaryotic or eukaryotic (if appropriate) to express scFv.
  • the hydropathic index of amino acids can be considered.
  • the importance of the amino acid hydropathy index for imparting an interactive biological function to a protein is generally understood in the art. It is accepted that the relative hydropathic nature of the amino acid contributes to the secondary structure of the resulting protein, which in turn defines the interaction of the protein with other molecules, for example, enzymes, substrates, receptors, DNA, antibodies, antigens, and others.
  • Each amino acid was assigned a hydropathic index on the basis of their hydrophobicity and charge characteristics: isoleucine (+4.5); valine (+4.2); leucine (3.8); phenylalanine (+2.8); cysteine cystine (+ 2.5); methionine (1, 9); alanine (1, 8); glycine (-0.4); threonine (-0.7); serine (-0.8); tryptophan (-0.9); tyrosine (-1, 3); proline (-1.6); histidine (-3.2); glutamate (-3.5); glutamine (-3.5); aspartate (-3.5); asparagine (-3.5); lysine (-3.9) and arginine (-4.5).
  • Another object of the present invention also encompasses variants that retain the functions of the antibodies of the present invention.
  • “Functional retaining variants” are those in which a given amino acid residue in a protein or enzyme has been modified without altering the overall conformation and function of the polypeptide including, but not limited to, replacement of an amino acid with another having the same property (such as, for example, polarity, hydrogen bonding potential, acidic, basic, hydrophobic, aromatic and the like). Amino acids other than those indicated as conserved may differ in a protein so that the percentage of sequence similarity of proteins or amino acids between two proteins of similar function may vary and may be, for example, 70% to 99%. % as determined according to an alignment scheme by the cluster method, in which the similarity is based on the MEGALIGN algorithm.
  • Variant with conserved function also includes a polypeptide which has an amino acid identity of at least 60% as determined by BLAST or FASTA algorithms, preferably at least 75%, more preferably at least 85%, still more preferably at least 90%, and even more preferably at least 95%, and which has properties or functions identical or substantially similar to those of the native or parent protein to which it is compared.
  • Two amino acid sequences are "substantially homologous” or “substantially similar” when more than 80%, preferably more than 85%, preferably more than 90% of the amino acids are identical, or more than 90%, more preferably 95%, are similar (functionally identical) throughout the length of the shortest sequence.
  • similar or homologous sequences are identified by alignment using, for example, GCG (i.e. "Genetics Computer Group", Program Manual for the GCG package, version 7, Madison, Wisconsin). the "pileup" program, or any other sequence comparison algorithm such as BLAST, FASTA, etc.
  • amino acids may be substituted by other amino acids in a protein structure without appreciable loss of activity. Since the interactive capacity and the nature of a protein define functional activity protein, certain amino acid substitutions can be made in a protein sequence, and. of course, in its DNA sequence coding for, while still obtaining a protein with similar properties. It is therefore contemplated that various modifications may be made in the antibody sequences of the invention, or the corresponding DNA sequences that encode said antibodies, without appreciable loss of their biological activity.
  • amino acid substitutions are therefore generally based on the relative similarity of amino acid side chain substituents, for example, their hydrophilic hydrophobicity, charge, size, and the like.
  • substitutions are well known to those skilled in the art and include: arginine and lysine; glutamate and aspartate; serine and threonine, glutamine and asparagine; and valine, leucine and isoleucine.
  • Another type of amino acid modification of the antibody of the invention may be useful for the alteration of the original glycosylation pattern of the antibody.
  • alteration is meant the removal of one or more carbohydrate moieties present in the antibody and / or by adding one or more glycosylation sites that are not present in the antibody.
  • the glycosylation of the antibodies is typically N-linked.
  • N-linked is meant to refer to the attachment of the carbohydrate moiety to the side chain of an asparagine residue.
  • the tripeptide sequences asparagine-X-serine and asparagine-X-threonine, wherein X represents any amino acid except proline, are the recognition sequences for the enzymatic attachment of the carbohydrate moiety to the asparagine side chain.
  • X represents any amino acid except proline
  • the sugar (s) can be attached to (a) arginine and histidine, (b) free carboxyl groups, (c) free sulfhydryl groups such as those of cysteine, ( d) free hydroxyl groups such as those of serine, threonine, 1 * orhydroxyprol ine, (e) aromatic residues such as those of phenylalanine, tyrosine or tryptophan. or (f) amide group of glutamine.
  • arginine and histidine (b) free carboxyl groups, (c) free sulfhydryl groups such as those of cysteine, ( d) free hydroxyl groups such as those of serine, threonine, 1 * orhydroxyprol ine, (e) aromatic residues such as those of phenylalanine, tyrosine or tryptophan. or (f) amide group of glutamine.
  • arginine and histidine arginine and histidine
  • free carboxyl groups
  • the removal of any carbohydrate moieties present on the antibody can be carried out chemically or enzymatically.
  • Chemical deglycosylation requires exposure of the trirluoromethanesulfonic acid antibody or an equivalent compound. This treatment results in the cleavage of most or all of the sugars with the exception of the binding sugar (N-acetylglucosamine or N-acetylgalactosamine), while leaving the antibody intact.
  • Another type of effective modification of the antibody involves binding of the antibody to one of the non-proteinaceous polymer varieties, for example, polyethylene glycol, polypropylene glycol, or polyoxyalkylenes, as described in US Pat. US 4,640,835; US 4,496,689; US 4,301,144; US 4,670,41 7; US 4,791,192 or US 4.1 79,337.
  • non-proteinaceous polymer varieties for example, polyethylene glycol, polypropylene glycol, or polyoxyalkylenes
  • ADCC antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
  • CDC complement-dependent cytotoxicity
  • ADCC antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
  • s cysteine residue
  • antibody The homodimeric nature thus generated may have enhanced internalization capacity and / or increased complement-mediated cell killing and / or antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) (Caron PC et al, 1992, Shopes et al., 1992). ).
  • an antibody according to the invention may have at least part of its Fc region. preferably the glycosylation pattern of at least a portion of the Fc region, which is modified / mutated so as to enhance its antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC).
  • ADCC antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
  • an antibody according to the invention can be characterized in that it has at its glycosylation site (Asn 297) Fcy glycan structures selected from the forms:
  • the present invention provides a human anti-HER4 antibodies according to the invention administered to a subject such as. e.g., a subject suffering from a cancer expressing HER4, in combination with at least one other therapeutic agent separate from said human anti-HER4 antibodies according to the invention.
  • a human anti-HER4 antibodies according to the invention may be administered to a subject such as, for example, a subject suffering from a cancer expressing HER4, in combination with at least one other therapeutic agent separate said antibodies Human HER4 according to the invention and represented by at least one tyrosine kinase inhibitor (TKI).
  • TKI tyrosine kinase inhibitor
  • An antibody of the invention may be conjugated to a detectable label to form an anti-HER4 immunoconjugate.
  • Suitable detectable markers include, for example, a radioisotope, a fluorescent label, a chemiluminescent label. an enzymatic marker, a bioluminescent marker or colloidal gold. Methods of making and detecting such detectably labeled immunoconjugates are well known to those skilled in the art, and are described in more detail below.
  • the detectable label may be a radioisotope that is detected by autoradiography.
  • Isotopes which are particularly useful for the purposes of the present invention are 3 H, 25 I, 131 I, 35 S and 14 C.
  • the anti-HER4 immunoconjugates can also be labeled with a fluorescent compound.
  • the presence of a fluorescently labeled antibody is determined by exposing the immunoconjugate to light at the appropriate wavelength and detecting the resulting fluorescence.
  • Fluorescent labeling compounds include fluorescein isothiocyanate. rhodamine, phycoerythrin. phycocyanin, allophycocyanin, o-phthaldehyde and fluorescamine.
  • the anti-HER4 immunoconjugates can be detectably labeled by coupling an antibody to a chemiluminescent compound.
  • the presence of the chemiluminescent labeled conjugate is determined by detecting the presence of luminescence that occurs during a chemical reaction.
  • chemiluminescent labeling compounds include luminol, isoluminol, aromatic acridinium ester, imidazole. an acridinium salt and an oxalate ester.
  • a bioluminescent compound can be used to label the anti-HER4 immunoconjugates of the present invention.
  • Bioluminescence is a type of chemiluminescence found in biological systems in which a catalytic protein increases the efficiency of the chemiluminescence reaction. The presence of a bioluminescent protein is determined by detecting the presence of luminescence.
  • Bioluminescent compounds that are useful for labeling include luciferin, luciferasc, and aequorin.
  • the anti-HER4 immunoconjugates can be detectably labeled by the binding of an anti-HER4 antibody to an enzyme.
  • the fraction of the enzyme reacts with the substrate to produce a chemical moiety that can be detected, for example, by spectrophotometry. fluorometry or visual means.
  • enzymes that can be used to detectably detect polyspecific immunoconjugates include ⁇ -galactosidase, glucose oxidase, peroxidase, and alkaline phosphatase.
  • the convenience and versatility of immunochemical detection can be improved by using anti-HER4 antibodies that have been conjugated with avidin.
  • streptavidin and biotin see, e.g., Wilchek et al (eds.), Methods in Enzymology (Vol 184) (Academic Press, 1990), Bayer et al, Methods in Molecular Biology, Vol 10, 149-162. (Manson, ed, The Humana Press, Inc., 1992)).
  • the present invention relates to an anti-HER4 antibody-drug conjugate.
  • An "anti-HER4 antibody-drug conjugate" as used herein refers to an anti-HER4 antibody according to the invention conjugated to a therapeutic agent.
  • Such anti-HER4 antibody-drug conjugates produce clinically beneficial effects on HER4-expressing cells when administered to a subject such as, for example, a subject suffering from HER4-expressing cancer, generally when administered alone. but also in combination with other therapeutic agents.
  • an anti-HER4 antibody is conjugated to a cytotoxic agent, such that the resulting antibody-drug conjugate exerts a cytotoxic or cytostatic effect on an HER4 expressing cell (e.g., an HER4 expressing cancer cell) when taken or internalized by the cell.
  • a cytotoxic agent such that the resulting antibody-drug conjugate exerts a cytotoxic or cytostatic effect on an HER4 expressing cell (e.g., an HER4 expressing cancer cell) when taken or internalized by the cell.
  • chemotherapeutic agents chemotherapeutic agents, prodrug converting enzymes, radioactive isotopes or compounds, or toxins.
  • an anti-HER4 antibody may be conjugated to a cytotoxic agent such as a chemotherapeutic agent or a toxin (for example, a cytostatic agent or cytocide, such as, for example, abrin, ricin A, Pseudomonas exotoxin, or diphtheria toxin).
  • a cytotoxic agent such as a chemotherapeutic agent or a toxin (for example, a cytostatic agent or cytocide, such as, for example, abrin, ricin A, Pseudomonas exotoxin, or diphtheria toxin).
  • cytotoxic agents include, for example, antitubulin agents. auristatins, minor groove ligands of DNA, DNA replication inhibitors, alkylating agents (eg, platinum complexes such as cisplatin, mono (platinum), bis (platinum) and tri-nuclear platinum and carboplatin complexes), anthracyclines, antibiotics, antifolates, antimetabolites, chemotherapy sensitizers, duoearmycins. etoposides. andoposides fluorinated pyrimidines, and ionophoreoposides. lexitropsins, nitrosoureas. platinols, pre-formed compounds, urine antimetabolites, puromycins. radiation sensitizers, steroids. taxanes. topoisomerase inhibitors, periwinkle alkaloids, or the like.
  • alkylating agents eg, platinum complexes such as cisplatin, mono (platinum), bis (platinum) and
  • cytotoxic agents include, for example, androgen, anthramycin (AMC), asparaginase, 5-azacytidine, azathioprine, bleomycin. busulfan, buthionine sulfoximine, camptothecin. carboplatin. Camiustine (BSNU), CC-1065 (Li et al Cancer Res 42: 999-1004, 1998). chlorambucil. the cisplatin, colchicine, cyclophosphamide.
  • cytarabine cytidine, arabinoside, cytochalasin B, dacarbazine, dactinomycin (previously actinomycin), daunorubicin, decarbazine, docetaxel, doxorubiein, estrogen, 5-fluordeoxyuridine, etoposide phosphate (VP) 16), 5-fluorouracil, gramicidin D. hydroxyurea, idarubicin, ifosfamide, irinotecan, lomustine (CCNU), mechlorethamine, melphalan, 6-mercaptopurine, methotrexate, mithramycin.
  • mitomycin C mitoxantrone, nitroimidazole, paclitaxel, plicamycin, procarbizine, streptozotocin, tenoposide (VM-26), 6-thioguanine.
  • thioTEPA topotecan, vinblastine, vincristine and vinorelbine.
  • cytotoxic agents include, for example, dolastatins (e.g., auristatin E, AFP, MMAF, MDAR), minor groove ligands of DNA (e.g., enediynes and lexitropsins), duocarmycins. taxanes (for example, paclitaxel and docetaxel). puromycin, periwinkle alkaloids, CC-1065, SN-38 (7-ethyl-1-hydroxyeamoteine), topotecan, morpholino-doxorubicin, rhizoxin. cyanomorpholino-doxorubicin, fecinomycin.
  • dolastatins e.g., auristatin E, AFP, MMAF, MDAR
  • minor groove ligands of DNA e.g., enediynes and lexitropsins
  • duocarmycins e.g., paclitaxel and docetaxel
  • taxanes for
  • combretastatin netropsin, epothilone A and B. estramustine. cryptophtins, coadotine. maytansinoids, the discodermolide, the éleuthcrobine and mitoxantrone.
  • a cytotoxic agent is a conventional chemotherapeutic agent, such as doxorubicin, paclitaxel. melphalan, vinca-alkaloids. methotrexate, mitomycin C or etoposide.
  • doxorubicin doxorubicin
  • melphalan melphalan
  • methotrexate methotrexate
  • mitomycin C mitomycin C or etoposide.
  • strong agents such as CC-1065 analogs, calichéamicin, maytansine, dolastatin 10 analogues, rhizoxine and palytoxine may be linked to an anti-HER4 antibody.
  • the cytotoxic or cytostatic agent is auristatin E (also known in the art as dolastatin-10) or a derivative thereof.
  • the auristatin E derivative is, for example, an ester formed between auristatin E and a keto acid.
  • auristatin E may be reacted with paraacetyl benzoic acid or benyloyleric acid to produce AEB and AEVB, respectively.
  • auristatin examples include AFP (dimethylvaline-valine-dolaisoline-dolphinolene-phenylalanine-p-phenylenediamine), MMAF (dovaline-valine-dolaisoleiline-dolphin-phenylalanine), and MAE (auristatin E). nionométhyle).
  • the cytotoxic agent is a minor groove binding agent of the DNA (see US 6, 130.237).
  • the agent is a CBI compound.
  • the agent is an enediyne (eg, calicheamicin).
  • an antibody-drug conjugate comprises an anti-tubulin agent.
  • anti-tubulin agents include, for example, taxanes (e.g., Taxol® (paclitaxel), Taxotere® (docetaxel)), T67 (Tularik), periwinkle alkaloids (e.g., vincristinc). , vinblastine, vindesine and vinorelbinc), and dolastatin (eg, auristatin E, AFP, MM AP, MDAE, AEB, AEVB).
  • Other anti-tubulin agents include, for example, baccatin derivatives, taxane analogs (e.g., epothilone A and B), nocodazole.
  • the cytotoxic agent is a maytansinoid, another group of anti-tubulin agents.
  • the maytansinoid is maytansine or DM-1 (ImmunoGen, Inc., see also Chari et al, Cancer Res 52: 127-131, 1992).
  • the cytotoxic agent is an antimetabolite.
  • the antimetabolite may be, for example, a purine antagonist (e.g., azothioprine or mycophenolate mofetil), an inhibitor of dihydrofolate reductase (e.g., methotrexate), acyclovir, gangeyelovir, zidovudine, vidarabine. ribavirin, azidothymidine, cytidine arabinoside. amantadine, dideoxyuridine, iododeoxyuridine, poscarnet. or trifluridine.
  • a purine antagonist e.g., azothioprine or mycophenolate mofetil
  • an inhibitor of dihydrofolate reductase e.g., methotrexate
  • acyclovir gangeyelovir
  • zidovudine vidarabine.
  • ribavirin azidothymidine
  • an anti-HER4 antibody is conjugated to a pro-drug conversion enzyme.
  • the prodrug converting enzyme may be recombinantly fused to the antibody or chemically conjugated to the this using known methods.
  • Examples of prodrug converting enzymes are carboxypeptidase G2. ⁇ -glucuronidase, penicillin-V-amidase, penicillin-G-amidase, ⁇ -lactamase, ⁇ -glucosidase, nitroreductase and carboxypeptidase A.
  • Another object of the invention relates to a human anti-HER4 antibody according to the invention for the diagnosis and / or monitoring of a cancerous disease associated with the expression of HER4.
  • the cancerous diseases associated with HER4 expression generally include, but are not limited to, squamous cell cancer, breast cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, gastric cancer, tumors of glial cells such as glioblastoma and neurofibromatosis.
  • multiple myeloma multiple myeloma, colorectal cancer, endometrial carcinoma, salivary gland carcinoma, kidney cancer, prostate cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma, leukemia , hematopoietic cancer.
  • lymphomas including Hodgkin's disease and non-Hodgkin's lymphoma.
  • sarcoma in particular Kaposi's sarcoma or Ewing's sarcoma, neuroblastoma and pediatric cancers, particularly of the sarcoma or neuroblastoma type.
  • the antibodies of the invention may be labeled with a detectable molecule or substance, such as a fluorescent molecule, a radioactive molecule or any other markers known in the art, as described above.
  • a detectable molecule or substance such as a fluorescent molecule, a radioactive molecule or any other markers known in the art, as described above.
  • an antibody of the invention may be labeled with a radioactive molecule by any method known in the art.
  • radioactive molecules include, but are not limited to, a radioactive atom for scintigraphic studies, such as 1123, 1124. lnl 1 1. Rel 86. Rel 88.
  • the antibodies of the invention may also be labeled with a "spin label" for nuclear magnetic resonance (NMR) imaging, such as iodine-123, iodine-131, indium-11, fluorine-19, carbon-13, nitrogen-15. oxygen-17, gadolinium, manganese or iron.
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • iodine-123, iodine-131, indium-11, fluorine-19, carbon-13, nitrogen-15. oxygen-17, gadolinium, manganese or iron After administration of the antibody, the distribution of the antibody within the patient is detected.
  • Methods for detecting the distribution of any specific marker are known to those skilled in the art and any suitable method may be used. Some non-limiting examples include computed tomography (CT), positron emission tomography. (PET), magnetic resonance imaging (MRI). fluorescence, chemiluminescence. and ultrasound.
  • the antibodies of the invention may be useful for the identification of cancerous diseases associated with HER4 expression (e.g., in radio imaging).
  • the antibodies of the invention may be useful for identifying cancer as mentioned above.
  • biological sample encompasses various types of samples obtained from a subject and may be used in a diagnostic or control analysis.
  • biological samples include, but are not limited to, blood and other biological samples, solid tissue samples such as a biopsy specimen or cell cultures or tissues derived therefrom. and the offspring of these.
  • the biological samples comprise cells obtained from a tissue sample taken from an individual suspected of having a cancerous disease associated with HER4 expression, and in a preferred embodiment breast cancer or breast cancer. ovary.
  • biological samples include clinical specimens, cultured cells, cell supernatants, cell lysates, serum, plasma, biological fluid, and tissue samples.
  • the invention is a method of diagnosing a cancer disease associated with expression of HER4 HER4 in a subject by detecting in cells from the subject using at least one antibody of the invention .
  • said diagnostic method may comprise the steps of:
  • the diagnostic method according to the invention can be repeated at different time intervals, in order to determine whether antibody binding to samples increases or decreases, whereby it is determined whether the cancerous disease progresses or regresses.
  • Antibodies, fragments or immunoconjugates of the invention may be useful for treating HER4-expressing cancer.
  • the antibodies of the invention may be used alone or in combination with any suitable agent.
  • HER4-expressing cancer include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma, sarcoma and leukemia. More specific examples of cancers include squamous cell cancer, gastric cancer cancer, pancreatic cancer, glial cell tumors such as glioblastoma and necurofibromatosis, cervical cancer, cancer of the uterus, ovarian, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, breast cancer, colon cancer, melanoma. colorectal cancer, carcinoma of the endometrium, carcinoma of the salivary glands.
  • a cancer treated using the methods of The present invention is breast cancer, ovarian cancer, lung cancer and certain pediatric sarcoma and neuroblastoma cancers.
  • an object of the invention relates to a method of treating a cancer, in particular a cancer associated with the expression of HER4. comprising administering to a subject in need of a therapeutically effective amount of an antibody, fragment or immunoconjugate of the invention.
  • the term “treat” or “treatment” as used herein means to reverse, relieve, inhibit the progression of, or prevent the disorder or condition to which this term applies, or one or more symptoms of this disorder or condition.
  • the term “patient” or “patient in need thereof” is intended for a human or non-human mammal affected or likely to be affected by cancer, including cancer associated with the expression of HER4.
  • terapéuticaally effective amount of the antibody of the invention is meant to designate a sufficient amount of the antibody to treat said cancer at a reasonable benefit / risk ratio applicable to any medical treatment. It will be understood, however, that the total daily use of the antibodies and compositions of the present invention will be decided by the attending physician within the scope of sound medical judgment.
  • the therapeutically effective dose level is specific for any patient, and will depend in particular on a variety of factors, including the disorder being treated and the severity of the disorder, the activity of the specific antibody used; the specific composition used, the age, body weight, general health, sex and diet of the patient, the time of administration, the route of administration, and the rate of excretion of the specific antibody used the duration of treatment, the drugs used in combination with the specific antibody employed, and similar factors well known in the medical field. For example, it is well known to those skilled in the art to start doses of the compound at levels lower than those required to achieve the desired therapeutic effect and to gradually increase the dosage until the desired effect is obtained.
  • a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate is used in combination with a second agent for the treatment of a disease or disorder.
  • a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention may be used in combination with conventional cancer therapies, such as, for example, surgery, radiotherapy, chemotherapy, or combinations of these.
  • These other therapeutic agents may include tyrosine kinase inhibitors, anti-angiogenic agents, an ektokine (e.g., a cytokine that stimulates an immune response against a tumor), or an antagonist of certain factors that are involved.
  • tumor growth such as, for example, EGFR (including Cetuximab, Erbitux, Panitumumab, Vectibix, Matuzumab, Zalutumumab, Nimotuzumab), HER2 (including Trastu / umab, Hcrceptin, Pertuzumab, Omnitarg).
  • HER3 in particular the antibodies described in WO 2007/077028, WO 2008/100624, WO 2012/022814, WO 2010/108127 or WO 2006/091209), IGF1-R, c- and. and their mixtures.
  • a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention may be used in combination with an antibody directed against at least one tyrosine kinase (RTK) receptor, particularly against at least one receptor with tyrosine kinase activity distinct from the HER4 receptor, or even against at least one receptor with tyrosine kinase activity distinct from a receptor belonging to the EGFR subfamily.
  • RTK tyrosine kinase
  • a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention is used in combination with a monocolonal anti-human-EGFR antibody, especially as defined above.
  • a human anti-HER4 antibody or anti-body-conjugate conjugate of the present invention is used in combination with an anti-human monoclonal antibody -HER2, such as trastuzumab or pertuzumab.
  • a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention is used in combination with an anti-human monoclonal antibody -HER3, especially as defined above.
  • a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention is used in combination with an anti-human monoclonal antibody -IGF! -R. especially as defined above.
  • a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention is used in combination with an anti-human monoclonal antibody -c-Met, especially as defined above.
  • a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate as described herein is used in combination with a tyrosine kinase inhibitor, especially as defined above.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition, and especially a vaccine composition, comprising at least one compound chosen from:
  • nucleic acid as defined above
  • composition according to the invention may further comprise at least one anti-cancer agent distinct from a compound as defined in the preceding claim.
  • the abovementioned compounds, and in particular the human anti-HER4 antibody is formulated as a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition comprising the aforementioned compounds, and especially the anti-HER4 human antibody, can be formulated according to known methods for preparing pharmaceutically useful compositions, whereby the therapeutic molecule is combined in a mixture with a pharmaceutically acceptable carrier or carrier.
  • a composition is said to be a "pharmaceutically acceptable carrier” or “pharmaceutically acceptable carrier” if its administration can be tolerated by a recipient patient.
  • Sterile saline phosphate buffered is an example of such a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the formulations may further include one or more excipients, preservatives, solubilizers, buffering agents, or albumin to prevent loss of protein on the wall of the vial.
  • compositions naturally depend on the condition to be treated, the severity of the disease, the age, weight and sex of the patient.
  • compositions of the invention may be formulated for a topical, oral, parenteral, intranasal, intravenous, intramuscular, subcutaneous or intraocular route and the like.
  • the pharmaceutical compositions contain pharmaceutically acceptable carriers for a formulation that can be injected.
  • pharmaceutically acceptable carriers for a formulation that can be injected.
  • It may be in particular sterile isotonic saline solutions (monosodium phosphate, disodium phosphate, sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride or magnesium chloride and the like or mixtures thereof), or dry, in particular lyophilized compositions which, when sterilized water or physiological saline is added, make it possible to form injectable solutions.
  • an effective amount of the antibody may be dissolved or dispersed in a pharmaceutically acceptable carrier or an aqueous medium.
  • compositions suitable for injectable use include sterile aqueous solutions or dispersions; formulations including sesame oil, aqueous peanut oil or propylene glycol, as well as sterile powders for the extemporaneous preparation of sterile injectable solutions or dispersions.
  • shape must be sterile and must be fluid to the extent that easy use with syringes exists. It must be stable under the conditions of manufacturing and storage and must be preserved against the contaminating action of microorganisms such as bacteria and fungi.
  • Solutions of active compounds in free base form or pharmaceutically acceptable salts may be prepared in water suitably mixed with a surfactant such as hydroxypropylcellulose.
  • Dispersions can also be prepared in glycerol, liquid polyethylene glycols and mixtures thereof and in oils. Under ordinary conditions of storage and use, these preparations contain a preservative to prevent the growth of microorganisms.
  • An antibody of the invention may be formulated into a composition in a neutral or salt form.
  • Pharmaceutically acceptable salts include acid addition salts (formed with free amino groups of the protein) and which are formed with inorganic acids such as, for example, hydrochloric or phosphoric acids, or organic acids such as acetic, oxalic, tartaric and mandelic acids. and others. Salts formed with free carboxyl groups may also be derived from inorganic bases such as sodium, potassium, ammonium, calcium, or ferric hydroxides, and organic bases such as isopropylamine, trimethylamine, histidine. the procam and others.
  • the support may also be a solvent or dispersion medium containing, for example, water, ethanol, a polyol (for example, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, and the like), suitable mixtures of those here, and vegetable oils.
  • a coating such as lecithin
  • surfactants for example, sodium sulfate, sodium sulfate, sodium sulfate, sodium sulfate, sodium sulfate, sodium stearate, and gelatin.
  • Sterile injectable solutions are prepared by incorporating the active compounds in the required amount in the appropriate solvent with various other ingredients enumerated above, as required, followed by filtration sterilization.
  • the dispersions are prepared by incorporating the various sterilized active ingredients into a sterile vehicle which contains the basic dispersion medium and the other required ingredients from those enumerated above.
  • the preferred methods of preparation are vacuum drying and lyophilization techniques which provide a powder of the active ingredient plus any additional desired ingredient from a solution previously sterilized by filtration thereof.
  • the solutions will be administered in a manner compatible with the dosage formulation and also in a therapeutically effective amount.
  • the formulations are easily administered in a variety of dosage forms, such as the type of injectable solutions described above, but drug release capsules and the like can also be employed.
  • aqueous solutions For parenteral administration in an aqueous solution, for example, the solution should be buffered appropriately if necessary and the liquid diluent first made isotonic with sufficient saline or glucose.
  • aqueous solutions are particularly suitable for intravenous, intramuscular, subcutaneous administration and intraperitoneal administration.
  • sterile aqueous media that can be employed will be known to those skilled in the art in light of the present disclosure.
  • one dosage could be dissolved in 1 ml of isotonic NaCl solution and either added to 1000 ml of hypodermocîyse or fluid injected at the proposed site of infusion, (see for example, "Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th edition. 1035-1038 and 1570-1580). Some variation of the dosage necessarily appears depending on the condition of the subject to be treated. The person responsible for administration will, in any case, determine the appropriate dose for the subject.
  • compositions formulated for parenteral administration include, for example, tablets or other solids for oral administration; controlled release capsules, and any other form currently used.
  • liposomes and / or nanoparticles are contemplated for introduction of antibodies into host cells.
  • the formation and use of liposomes and / or nanoparticles are known to those skilled in the art.
  • Nanocapsules can typically entrap compounds in a stable and reproducible manner.
  • ultrafine particles size around 0.1 ⁇
  • Biodegradable polyalkyl cyanoaerylate nanoparticles that meet these requirements are contemplated for use in the present invention, and such particles can be easily manufactured.
  • Liposomes are formed from phospholipids that are dispersed in an aqueous medium and spontaneously form multilamellar concentric bilayer vesicles (also called multilamellar vesicles (MLVs)).
  • MLVs generally have diameters of 25 nm to 4 ⁇ .
  • MLV sonication results in the formation of small unilamellar vesicles (SUVs) with diameters in the range of 200-500 ⁇ , containing an aqueous solution in the nucleus.
  • the physical characteristics of liposomes depend on pH, ionic strength and the presence of divalent cations.
  • the therapeutically effective amount of antibody according to the invention administered to a patient is in the range of about 0.07 mg to about 35000 mg, preferably about 0.7 mg to about 7000 mg. . preferably from about 0.7 mg to about 1400 mg, preferably from about 0.7 mg to about 700 mg, and more preferably from about 0.7 mg to about 70 mg.
  • a therapeutically effective (unit dose) amount of antibody can range from 0.01 mgkg to 500 mgkg, preferably from 0.1 mg / kg to 500 mg / kg. preferably from 0.1 mg / kg to 100 mg / kg, preferably from 0.1 mg / kg to 20 mg / kg, preferably from 0.1 mg / kg to 10 mg / kg, and more preferably 1 mg / kg at 10 mg / kg, in one or more weekly administrations for several weeks or months.
  • the effective unit dose can therefore easily be deduced from a calculated dose for an "average" patient whose weight is 70 kg. Kits
  • kits comprising at least one antibody of the invention.
  • Kits containing antibodies of the invention find use in the detection of HER4 expression, or in therapeutic or diagnostic assays.
  • the kits of the invention may contain an antibody coupled to a solid support, for example a tissue culture plate or beads (eg, sepharose beads).
  • the kits may contain antibodies for in vitro detection and quantification of HER4, for example in ELISA or Western blot.
  • Such an antibody useful for detection may be provided with a marker such as a fluorescent marker or a radio marker.
  • the human anti-HER4 antibodies according to the invention are expressed on the surface of filamentous phages in the form of fragment of the scFv (single chain Fragment variable) type.
  • the binding capacity of the human anti-HER4 antibodies according to the invention to the human HER4 receptor was performed with respect to the human HER4 protein (HER-ECD-Fc).
  • ErbB4 / Fc chimera, R & D Systems) Screening was performed using an ELI SA binding assay in the scFv-phage format, as defined below. Production of scFv-phages
  • the filamentous folds expressing on their surface the anti-HER4 human antibodies according to the invention are cultured in 2YT medium supplemented with ampicillin (100 ⁇ g / ml), tetracycline (15 ⁇ g / ml), and glucose 1. %. Each culture well corresponds to an individual clone expressing phages-scFv in the supernatant.
  • the cultures are made in 96-well plate and stirred at 37 ° C. for 2 hours to a OD 600 nm of 1.
  • the cultures are then supplemented with IPTG (1 mM) for the expression of the scFv and auxiliary folding fragments M l 3 O 7 (Biolabs # N0315S).
  • IPTG 1 mM
  • auxiliary folding fragments M l 3 O 7 Biolabs # N0315S
  • 40 ml of 2YT medium / Ampiciliine / Glucose / IPTG was added and the culture is at 26 ° C with stirring (230 rpm) for 2 hours.
  • the selection of the clones which had been infected by the helper phage is carried out by adding kanamycin (1 mg / ml). The culture is continued at 26 ° C with stirring on the night.
  • the cultures are centrifuged at 4 ° C.
  • the supernatants containing the scFv phages are recovered and can be used directly in an ELISA-phage type binding assay.
  • Culture supernatants pure or diluted with PBS IX are added to the wells of a 96-well microtiter plate previously coated with human HER4-Fc, HER3-Fc proteins (Recombinant Human ErbB4 / Fc Chimera) at 250 ng / well and of BSA (Euromedex) and saturated with 5% BSA solution in PBS I X.
  • HER3-Fc proteins and BSA are used as a specificity control.
  • phage-scFv were detected using an anti-M13 antibody coupled to peroxidase (GEHcalthcare). The revelation is carried out by adding TetramethylBenzidine (Sigma) and reading at 450 nm.
  • the cultures are then centrifuged and the periplasmic fractions prepared according to a standard protocol known to those skilled in the art (Skerra & Pluckthun, Science 240, 1988: 1038-1041). Purifications are performed by affinity chromatography using a Ni-NTA agarose resin (Qiagen). The yields obtained are of the order of 50 to 100 ⁇ g of Fab purified according to the clones produced.
  • Fabs are evaluated in an ELISA binding assay similar to that previously described.
  • Peroxidase-coupled V5 peptide antibody (Invitrogen) is used for detection of Fab-6xHis-V5 fragments.
  • Figures 3A and 3B show the results obtained for the HE4B-33 antibody.
  • FIG. 3A shows a remarkable specificity of the antibodies according to the invention for the HER4 receptor compared to the HER3 receptor.
  • VH and VL domains of the antibodies of the invention are assembled by overlapping PCR with eukaryotic signal peptides (heavy chain signal peptide and light chain signal peptide) and then inserted into the p vectors GM09-H for expression of the chain.
  • heavy human VH-CH1-CH2-CH3 and pMGM09-L for the expression of the Lambda VH-CL human light chain.
  • Eukaryotic vectors used allow expression of IgG isotype antibody 1 human under the dependence of a CMV promoter.
  • the production is effected using the FreeStyle MAX Expression System (Invitrogen) by transient transfection of HEK293 cells in suspension in serum-free culture media. The cultures are centrifuged 7 days after transfection and the supernatants are recovered for direct use in an ELISA binding assay or for a protein A affinity chromatography purification step. Evaluation of the relative affinities of the anti-HER4 antibodies of the invention
  • the purified anti-HER4 human antibodies are incubated for 2 hours at 37 ° C. in the wells of a 96-well microtiter plate previously coated with the human HER4-Fc proteins.
  • HER3-Fc at 50 n / well and BSA and saturated with 5% BSA solution in PBS IX.
  • the antibodies bound to the HER4-Fc protein are detected using an antihuman IgG antibody F (ab ') 2 specified (JacksonlmmunoResearch).
  • FIGS. 4A to 4D show the specific binding of the human antibodies according to the invention to the HER4-Fc protein. no cross reaction was observed for anti-HER4 antibodies of the invention.
  • FIGS. 5A to 5C establish the different relative affinities of the anti-HER4 human antibodies of the invention.
  • the antibodies HE4B-33, HE4B-17, HE4B-27 and HE5B-35 are the most affine of all the antibodies of the invention tested.
  • Anti-HER4 antibodies according to the invention designated HE4B-33, HE5B-35 and
  • HE5C-144 products in the IgG format and purified were biotinylated using the EZ-link NHS-PEO Solid Phase Biotinylation kit spin column kit (Pierce) according to the supplier's recommendations.
  • EZ-link NHS-PEO Solid Phase Biotinylation kit spin column kit (Pierce) according to the supplier's recommendations.
  • IgG format an increasing concentration range of unlabeled antibodies
  • washes are carried out and the detection of the biotinylated antibody is carried out using strept conjugate at e-pero yd asc (Pierce).
  • FIGS. 6A-6C Examples of competition results are shown in FIGS. 6A-6C for the competition between the biotinylated HE4B-33 and HE5C-144 antibodies versus a growing range of unlabeled anti-HER4 antibodies as well as an antibody control. raising »TR3. 4
  • the JM-b isoform was constructed from cDNA of the HER4 receptor (JM- ⁇ / CYT1 isoform) by overlapping PCR to delete the additional 10 amino acids of JM- ⁇ isoform.
  • the generated fragments were assembled and cloned into the vector pMGMl the (eucaryotic expression vector deleted extrachromosomal replication elements) for the genomic integration of sequences nuclcotidiqucs isoforms JM JM-a and-b. After transfection into adherent HEK293 cells, the selection pressure for hygromycin resistance is maintained for 1 month.
  • the cell cultures are carried out according to methods and protocols known to those skilled in the art.
  • the HEK293 cells overexpressing the JM- ⁇ and JM-b isoforms as well as the non-transfected HEK293 cells are prepared at 10 6 cells / ml in 20% RPMI-FCS medium and 100 ⁇ l per well are distributed in a 96-well plate (Falcon). . After 1 night at 37 ° C in 8% C02, 100 ⁇ / well of anti-HER4 antibodies diluted to 5 in RPMI-FCS 20% are added and incubated for 1 hour in the presence of the cells. After washing with 20% RPMI-FCS, the cell bound antibodies are revealed as previously described for LIS ELIS A in IgG format. The TR3 antibody is used as antibody "irrelevant.”
  • HE4B-17, HE5B-35, HE5C-144 and HE5C-123 have a strong binding capacity to the HER4 receptor expressed in its membrane context and this. substantially identically for the 2 isoforms JM-a and JM-b of the human HER4 receptor.
  • the inventors have observed that the HE4B-27 antibody is particularly interesting in that its ability to bind to the human HER4 receptor is much better when the latter is in a soluble (or non-membrane) form rather than in its membrane form. .
  • ⁇ 4 ⁇ -27 antibody could be particularly advantageous in that it would make it possible to distinguish a cleaved form of a membrane form from the human HER4 receptor.
  • SEQ IP NO 1 human HER4 receptor protein with its signal peptide
  • SEQ ID NO 4 Human HER4 Receptor Protein (Isoform JM-a CYT-2 (Q 15303-3))
  • SEQ ID NO 9 Protein of the VL variable domain of HE4B-33
  • SRGYYDPFDV SEQ ID NO 13: HE4B-33 Light Chain CDR-L1 Protein
  • SEQ ID NO 17 Protein of the VH variable domain of HE4B-17
  • SEQ ID NO 24 HE4B-17 Light Chain CDR-L2 Protein
  • GSWDIGLGAYV SEQ ID NO 26 VH variable domain DNA of HE4B-27
  • SEQ ID NO 29 Protein of the VL variable domain of HE4B-27
  • DNNKRPS SEQ ID NO. 35: HE4B-27 Light Chain CDR-L3 Protein
  • SEQ ID NQ 36 DNA of the VH variable domain of HE5B-35
  • SEQ ID NO 37 VH variable domain protein of HE5B-35
  • SEQ ID NO 38 VL variable domain DNA of HE5B-35
  • SEQ ID NO 39 Protein from the V ariable VL Domain of HE5B-35
  • SEQ ID NO. 41 HE5B-35 Heavy Chain CDR-H2 Protein
  • SEQ ID NO 45 HE5B-35 Light Chain CDR-L3 Protein
  • SEQ ID NO 46 VH variable domain DNA of HE5C-144
  • SEQ ID NO 47 VH variable domain protein of HE5C-144
  • SEQ ID NO 48 DNA of the VL variable domain of H ESC-144
  • SEQ ID NO. 50 CDR-H 1 Protein of the H ESC-144 Heavy Chain
  • SEQ ID NO 52 HE5C-144 heavy chain C-DR-113 protein
  • GGDNIGSKAVH SEQ ID NO 54: HE5C-144 DDSDRPS Light Chain CDR-L2 Protein
  • SEQ ID NO 56 VH variable domain DNA of HE5C-123
  • SEQ ID NO 57 VH variable domain protein of HE5C-123
  • SEQ ID NO 58 VL variable domain DNA of HE5C-123
  • SEQ ID NO 61 HE5C-123 Heavy Chain CDR-H2 Protein
  • SEQ ID NO 62 HE5C-123 Heavy Chain CDR-H3 Protein
  • GLRGVYYYFDY SEQ ID NO. 63 Protein of CDR-L1 of the H ESC-123 light chain
  • SEQ ID NO 64 CDR-L2 Protein of the H ESC-123 Light Chain
  • SEQ ID NO. 65 CDR-L3 Protein of the H ESC-123 Light Chain
  • SEQ ID NO 66 VH variable domain DNA of HE3C-29
  • SEQ ID NO 67 VH variable domain protein of HE3C-29
  • SEQ ID NO 70 HE3C-29 Heavy Chain CDR-H1 Protein
  • SEQ ID NO 71 HE3C-29 Heavy Chain CDR-H2 Protein
  • SEQ ID NO 73 HE3C-29 Light Chain CDR-L1 Protein
  • SEQ ID NO. 74 HE3C-29 Light Chain CDR-L2 Protein
  • SEQ ID NO 75 HE3C-29 Light Chain CDR-L3 Protein

Abstract

The present invention relates to novel human antibodies targeted against the human HER4 receptor. More particularly, the present invention relates to human antibodies that selectively bind to the extracellular domain of the human HER4 receptor and to the use thereof as medicament, in particular for preventing or treating cancer.

Description

ANTICORPS HUMAIN ANTI-HER4.  ANTI-HER4 HUMAN ANTIBODY.
DOMAINE DE L'INVENTION  FIELD OF THE INVENTION
La présente invention concerne de nouveaux anticorps humains dirigés contre le récepteur HER4 humain. Plus particulièrement, la présente invention concerne des anticorps humains se liant sélectivement au domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain et à leur mise en œuvre comme médicament, notamment pour la prévention ou le traitement du cancer.  The present invention relates to novel human antibodies directed against the human HER4 receptor. More particularly, the present invention relates to human antibodies that bind selectively to the extracellular domain of the human HER4 receptor and to their use as a medicine, especially for the prevention or treatment of cancer.
DESCRIPTION DE L'ART ANTERIEUR DESCRIPTION OF THE PRIOR ART
HER4 est un récepteur à tyrosine kinase de la sous famille EGFR HER4 is a tyrosine kinase receptor of the EGFR subfamily
(« Epidermal Growth Factor receptor ») qui inclut les récepteurs EGFR, HER2 et HER3. HER4 est une glycoprotéine de 180 kDa, composé d'un domaine extracellulaire de fixation à différents ligands, d'un domaine transmembranaire et d'un domaine intracellulaire à activité tyrosine kinase. Le domaine extracellulaire est composé de quatre sous-domaines (I, II, III, IV). ("Epidermal Growth Factor receptor") which includes EGFR, HER2 and HER3 receptors. HER4 is a 180-kDa glycoprotein composed of an extracellular domain for different ligand binding, a transmembrane domain and an intracellular domain with tyrosine kinase activity. The extracellular domain is composed of four subdomains (I, II, III, IV).
En comparaison des autres récepteurs de la famille HER, le fonctionnement biologique de HER4 est plus complexe ; ce récepteur peut en effet être généré par épissage alternatif sous la forme de 4 isoformes distinctes. Il existe deux isoformes au niveau du sous-domaine IV (JM-a et JM-b) et deux isoformes au niveau du domaine intracellulaire (CYT-1 et CYT-2).  Compared with other receptors of the HER family, the biological functioning of HER4 is more complex; this receptor can indeed be generated by alternative splicing in the form of 4 distinct isoforms. There are two isoforms at subdomain level IV (JM-a and JM-b) and two isoforms at the intracellular domain level (CYT-1 and CYT-2).
Contrairement au récepteur HER2 qui ne peut pas fixer de ligand et au récepteur HER3 dont le domaine kinase est inactif, HER4 est un récepteur fonctionnel qui peut induire une cascade de signalisation intracellulaire par homo- et hétéro-dimérisation et par fixation de ces ligands (Plowman et al., 1993).  Unlike the HER2 receptor that can not bind ligand and the HER3 receptor whose kinase domain is inactive, HER4 is a functional receptor that can induce an intracellular signaling cascade by homo- and heterodimerization and by binding of these ligands (Plowman et al., 1993).
HER4 peut être activé par une multitude de ligands : betacellulin, epireguline, HER4 can be activated by a multitude of ligands: betacellulin, epiregulin,
HB-EGF iike (Heparin Domain), les neurégulines (NRG-1, NRG-2, NRG-3, NRG-4), ainsi que la famille des ligands hérégulines (α, β et γ heregulin, neu-differentiation factors...). HB-EGF iike (Heparin Domain), neuregulins (NRG-1, NRG-2, NRG-3, NRG-4), as well as the family of heregulin ligands (α, β and γ heregulin, neu-differentiation factors. .).
L'activation du récepteur HER4 par homodimérisation ou hétérodimérisation avec un autre récepteur de la famille EGFR conduit à l'activation du domaine kinase et à l'autophosphorylation du récepteur. Les voies de signalisation intracellulaire activées peuvent être la voie des MAP kinases (Ras/mitogen-activated protein kinase) et/ou la voie PI3 kinase/ Akt. Plus précisément, l'isoforme CYT-2 qui est délété d'une séquence de 16 acides aminés par rapport à l'iso forme CYT- 1 ne peut pas activer la voie PDk/Akt qui est responsable de la survie et de la migration cellulaire. Activation of the HER4 receptor by homodimerization or heterodimerization with another receptor of the EGFR family leads to activation of the kinase domain and autophosphorylation of the receptor. The activated intracellular signaling pathways may be the MAP kinase pathway (Ras / mitogen-activated protein kinase) and / or the PI3 kinase / Akt pathway. Specifically, the CYT-2 isoform that is deleted from a sequence of 16 amino acids compared to CYT-1 iso form can not activate the PDK / Akt pathway that is responsible for survival and cell migration.
L'activation de HER4 peut également se réaliser selon une singularité propre à ce récepteur au niveau de son mécanisme d'activation. En effet, l'isoforme JM-a présente une séquence de 23 acides aminés au niveau du sous domaine IV extracellulaire pouvant être clivé par une protéase (TACE). Ce clivage induit le relargage d'un domaine extracellulairc so lubie de 120 kDa. Le récepteur tronqué restant inséré dans la membrane (80 kDa) peut à son tour être clivé par une seconde enzyme, la γ-secretase, au niveau intracellulaire et provoquer la libération du domaine intracellulaire (4ICD, Intra Cellular Domain). Ce domaine 4ICD a la faculté de pouvoir se transloquer dans le noyau et d'agir comme un facteur de transcription co-activatcur ou co-suppresseur. Ce mode d'activation, indépendant du ligand, augmente la diversité des fonctions biologiques de ce récepteur. L'isoforme JM-b présente une délétion de 10 acides aminés au niveau du site de reconnaissance de cette protéase, il ne peut donc pas être clivé.  Activation of HER4 can also be performed according to a singularity specific to this receptor at its activation mechanism. Indeed, the isoform JM-a has a sequence of 23 amino acids at the extracellular subdomain domain IV which can be cleaved by a protease (TACE). This cleavage induces the release of an extracellular domain with a solubility of 120 kDa. The remaining truncated receptor inserted into the membrane (80 kDa) can in turn be cleaved by a second enzyme, γ-secretase, intracellularly and cause the release of the intracellular domain (4ICD, Intra Cellular Domain). This 4ICD domain has the ability to translocate into the nucleus and act as a co-activating or co-suppressing transcription factor. This mode of activation, independent of the ligand, increases the diversity of the biological functions of this receptor. The isoform JM-b has a deletion of 10 amino acids at the recognition site of this protease, so it can not be cleaved.
HER4 est exprimé dans divers tissus adulte et fœtal et plusieurs études ont montré une expression de HER4 dans différents cancers de type épithélial tels que les cancers du sein, de l'ovaire, du poumon, du colon, et du mélanome (Hollmen & Elenius, 2010) ainsi que dans certains cancers pédiatriques de type sarcome et neuroblastome ( M endoza- aran j o et al , 2013 ; Hua et «/..2012).  HER4 is expressed in various adult and fetal tissues and several studies have shown HER4 expression in various epithelial cancers such as breast, ovarian, lung, colon, and melanoma cancers (Hollmen & Elenius, 2010) as well as in certain pediatric sarcoma and neuroblastoma cancers (M endoza-aran jo et al, 2013, Hua et al.
Bien que la diversité des isoformes de HER4 et de ces différents modes d'activation rendent difficiles la valeur prédictive de l'expression ou de la sur-expression de HER4. plusieurs études in vivo ont montré l'intérêt de bloquer le récepteur HER4 conduisant à des inhibitions significatives de la croissance tumorale (Hollmen et al, Although the diversity of HER4 isoforms and these different modes of activation make predictive value of HER4 expression or over-expression difficult. several in vivo studies have shown the interest of blocking the HER4 receptor leading to significant inhibitions of tumor growth (Hollmen et al,
2012 : Starr et al, 2006). 2012: Starr et al, 2006).
De plus, plusieurs études ont démontré une corrélation entre l'expression de In addition, several studies have demonstrated a correlation between the expression of
HER4 et la présence de métastases (Sassen et al. 2009 ; Mi 11 et al. 201 1 ; Mendoza et al,HER4 and the presence of metastases (Sassen et al, 2009, Mi 11 et al, 201 1, Mendoza et al,
201 3 ; Izycka-Swieszewska et al, 201 1). 201 3; Izycka-Swieszewska et al, 201 1).
Par ailleurs, il a également été montré un rôle de HER4 dans les phénomènes de résistance aux thérapies anti-hormonalcs dans les cancers du sein (Hutcheson et al, 201 1 ; Sutherland et al, 201 1 ) et aux chimiothérapies (Hua et al, 2 12).  Moreover, it has also been shown that HER4 plays a role in resistance to anti-hormonal therapies in breast cancers (Hutcheson et al., 201 1, Sutherland et al., 201 1) and chemotherapies (Hua et al. 2 12).
Dans des tumeurs pédiatriques de type neuroblastome, il a été observé qu'une forte expression de HER4 était un mauvais pronostic en terme de survie. Dans ce type de tumeur l'expression de HER4 est induite par différents stress cellulaires et HER4 agit comme un inhibiteur de l'apoptose (Hua et al., 2012). Dans un autre type de tumeur pédiatrique - le sarcome d'Ewing - HER4 a également été identifié comme marqueur de mauvais pronostic (Mendoza-Naranjo et al , 2013). Dans cette étude, il a été montré une forte expression de HER4 dans les cellules tumorales résistantes à la chiomiothérapie et les cellules métastatiques. In pediatric neuroblastoma tumors, it has been observed that a strong expression of HER4 was a poor prognosis in terms of survival. In this type of Tumor HER4 expression is induced by different cellular stresses and HER4 acts as an inhibitor of apoptosis (Hua et al., 2012). In another type of pediatric tumor - Ewing - HER4 sarcoma has also been identified as a marker of poor prognosis (Mendoza-Naranjo et al, 2013). In this study, strong expression of HER4 was shown in tumor cells resistant to chiomiotherapy and metastatic cells.
Outre le caractère prédictif de HER4 comme marqueur de métastases, ce récepteur apparaît comme une potentielle cible thérapeutique dans ces tumeurs pédiatriques.  In addition to the predictive character of HER4 as a marker of metastasis, this receptor appears as a potential therapeutic target in these pediatric tumors.
Dans les cancers du sein, il a été montré récemment que le domaine In breast cancers, it has recently been shown that the field
HER4/4ICD agissait comme un co-activateur transcriptionnel du récepteur à l'œstrogène et favorisait l'expression des gènes responsables de la prolifération des cellules tumorales (Han & Jones, 2014). Dans cette même étude, il est montré que 90 % des tumeurs ER positive co-exprime le récepteur HER4. HER4 / 4ICD acted as a transcriptional coactivator of the estrogen receptor and promoted the expression of genes responsible for tumor cell proliferation (Han & Jones, 2014). In this same study, it is shown that 90% of ER positive tumors co-express the HER4 receptor.
L'importance de la corrélation avec l'expression des récepteurs hormonaux a été également montré dans une étude récente (Machleidt et al, 2013) où dans le cas de tumeurs du sein triple négatives (ER-, PR-, HER2-), l'expression de HER4, et ce quelque soit le ratio entre les isoformes CYT-1 et CYT2, avait ici plutôt un impact positif sur la survie globale et la survie sans progression.  The importance of the correlation with the expression of hormone receptors has also been shown in a recent study (Machleidt et al, 2013) where in the case of triple negative breast tumors (ER-, PR-, HER2-), The expression of HER4, whatever the ratio between CYT-1 and CYT2 isoforms, had a positive impact on overall survival and progression-free survival.
Le récepteur HER4 apparaît également comme un oncogenc important dans le mélanome malin où plusieurs formes mutées ont été identifiées ; il a ainsi été reporté des mutations somatiques activatrices de HER4 dans 19% des mélanomes malins (Prickett et al, 2009).  The HER4 receptor also appears to be an important oncogene in malignant melanoma where several mutated forms have been identified; thus, somatic mutations activating HER4 have been reported in 19% of malignant melanomas (Prickett et al, 2009).
Récemment, l'expression de HER4, et plus particulièrement l'expression différentielle des isoformes intracellulaires (CYT1 versus CYT-2), se sont révélées être des marqueurs importants pour les taux de survie sans progression dans le mélanome malin (Nielsen et al, 2014).  Recently, the expression of HER4, and more particularly the differential expression of intracellular isoforms (CYT1 versus CYT-2), have been shown to be important markers for progression-free survival rates in malignant melanoma (Nielsen et al, 2014). ).
La sur-expression de HER4, et plus particulièrement de Γ isoforme CYT-1. a été identifiée comme un facteur prédictif de faible survie et d'augmentation de la croissance tumorale dans les adénocarcinomes séreux de l'ovaire (Paatero et al, 2 1 ). L'ensemble de ces données récentes met en exergue la nécessité de disposer d'anticorps spécifiques de HER4 qui puissent être utilisé comme outil prédictif et/ou thérapeutique. RESUME DE L'INVENTION The overexpression of HER4, and more particularly of CYT-1 isoform. has been identified as a predictor of low survival and increased tumor growth in serous adenocarcinoma of the ovary (Paatero et al, 2 1). All of these recent data highlight the need for HER4 specific antibodies that can be used as a predictive and / or therapeutic tool. SUMMARY OF THE INVENTION
Contre toutes attentes, les inventeurs ont identifié des anticorps humains anti- HER4. A la connaissance des inventeurs, il s'agit des premiers anticorps spécifiques du récepteur HER4 humain à caractère entièrement humain.  Against all expectations, the inventors have identified human anti-HER4 antibodies. To the inventors' knowledge, these are the first antibodies specific for the human HER4 receptor of entirely human nature.
Ainsi, selon un premier de ses aspects, la présente invention concerne un anticorps humain se liant sélectivement au domaine cxtracellulaire du récepteur HER4 humain.  Thus, according to a first aspect, the present invention relates to a human antibody selectively binding to the extracellular domain of the human HER4 receptor.
Egalement, ledit anticorps selon l'invention est tel qu'il se lie avantageusement au domaine extracellulaire de chacune des isoformes JM-a et JM-b du sous-domaine IV du récepteur HER4 humain. Also, said antibody according to the invention is such that it preferably binds to the extracellular domain of each of JM-a isoforms and JM-b of domain IV of human HER4 receptor.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne un fragment d'un anticorps selon l'invention, de préférence choisi parmi le group comprenant Fv, Fab, According to another of its aspects, the present invention relates to a fragment of an antibody according to the invention, preferably chosen from the group comprising Fv, Fab,
F(ab')2, Fab', dsFv, scFv, sc(Fv)2 et diabodies. F (ab ') 2, Fab', dsFv, scFv, sc (Fv) 2 and diabodies.
Selon u autre de ses aspects, la présente invention concerne un acide nucléique codant un anticorps ou un fragment d'anticorps selon l'invention.  According to another of its aspects, the present invention relates to a nucleic acid encoding an antibody or an antibody fragment according to the invention.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne un vecteur comprenant au moins un acide nucléique selon l'invention, ledit acide nucléique étant sous contrôle des éléments permettant son expression.  According to another of its aspects, the present invention relates to a vector comprising at least one nucleic acid according to the invention, said nucleic acid being under control of the elements allowing its expression.
Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne une cellule hôte transformée avec un acide nucléique ou avec un vecteur selon l'invention.  According to yet another of its aspects, the present invention relates to a host cell transformed with a nucleic acid or with a vector according to the invention.
Egalement, et selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne une composition pharmaceutique, et notamment vaccinale, comprenant au moins un composé choisi parmi :  Also, and according to another of its aspects, the present invention relates to a pharmaceutical composition, and especially a vaccine composition, comprising at least one compound chosen from:
- un anticorps humain selon l'invention ; - a human antibody according to the invention;
- un fragment selon l'invention ;  a fragment according to the invention;
- un acide nucléique selon l'invention ;  a nucleic acid according to the invention;
- un vecteur selon l'invention ; ou  a vector according to the invention; or
- un de leur mélange. en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. - one of their mixture. in combination with a pharmaceutically acceptable carrier.
De préférence, ladite composition peut comprendre en outre au moins un agent anticancéreux distinct d'un composé tel que défini précédemment.  Preferably, said composition may further comprise at least one anti-cancer agent distinct from a compound as defined above.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne un procédé pour la préparation d'un anticorps humain comprenant une étape de récupération d'un anticorps produit par une cellule hôte selon l'invention.  According to another of its aspects, the present invention relates to a process for the preparation of a human antibody comprising a step of recovering an antibody produced by a host cell according to the invention.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne un anticorps ou un fragment d'anticorps selon l'invention :  According to another of its aspects, the present invention relates to an antibody or an antibody fragment according to the invention:
- comme principe actif de médicament ; ou  as active ingredient of medicament; or
- pour son utilisation pour la prévention ou le traitement d'une maladie associée au domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain, en particulier d'un cancer.  for its use for the prevention or treatment of a disease associated with the extracellular domain of the human HER4 receptor, in particular cancer.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'un anticorps, d'un fragment d'anticorps ou d'un composé comprenant ledit anticorps ou ledit fragment d'anticorps selon l'invention :  According to another of its aspects, the present invention relates to the use of an antibody, an antibody fragment or a compound comprising said antibody or said antibody fragment according to the invention:
- pour la préparation d'un médicament pour le traitement d'un cancer, en particulier choisi parmi le groupe comprenant le cancer à cellules squameuses, le cancer du sein, le cancer du foie, le cancer de la vessie, l'hépatome, le cancer gastrique, les tumeurs des cellules gliales telles que le glioblastome et la neurofibromatose, le cancer de l'utérus, le cancer de l'ovaire, le cancer du poumon, le cancer des testicules, le cancer du côlon, le cancer du rectum, le cancer du pancréas, le mélanome. le myélome multiple, le cancer colorectal, le carcinome de î'endomètre, le carcinome des glandes saîivaires, le cancer du rein, le cancer de la prostate, le cancer de la vulve, le cancer de la thyroïde, le carcinome hépatique, les leucémies, le cancer hématopoïétique. les lymphomes, notamment la maladie de Hodgkin et le lymphome non-hodgkinien, le sarcome, notamment le sarcome de Kaposi ou le sarcome d'Ewing. le neuroblastome et les cancers pédiatriques, notamment de type sarcome ou neuroblastome ; - for the preparation of a medicament for the treatment of a cancer, particularly selected from the group consisting of squamous cell cancer, breast cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, gastric cancer, glial cell tumors such as glioblastoma and neurofibromatosis, uterine cancer, ovarian cancer, lung cancer, testicular cancer, colon cancer, rectal cancer, pancreatic cancer, melanoma. multiple myeloma, colorectal cancer, endometrial carcinoma, carcinoma of the sacral glands, kidney cancer, prostate cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma, leukemia , hematopoietic cancer. lymphomas, including Hodgkin's disease and non-Hodgkin lymphoma, sarcoma, including Kaposi's sarcoma or Ewing's sarcoma. neuroblastoma and pediatric cancers, particularly of the sarcoma or neuroblastoma type;
- pour la préparation d'un médicament pour la prévention de l'apparition et/ou le traitement de métastases ;  for the preparation of a medicament for preventing the appearance and / or treatment of metastases;
- dans une méthode de détection ou de quantification du récepteur HER4 humain, ou du domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain ; ou  in a method for detecting or quantifying the human HER4 receptor, or the extracellular domain of the human HER4 receptor; or
- dans une méthode de détection ou de quantification de métastases. Enfin, et selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne un procédé de diagnostique d'une maladie associée au domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain, en particulier d'un cancer, sur un échantillon biologique humain, comprenant au moins les étapes suivantes : in a method for detecting or quantifying metastases. Finally, and according to yet another of its aspects, the present invention relates to a diagnostic method for a disease associated with the extracellular domain of human HER4 receptor, in particular cancer, in a human biological sample, comprising at least the steps following:
- marquage d'une biopsie préalablement prélevée sur un patient avec un anticorps et/ou un fragment d'anticorps selon l'invention, et  marking a biopsy previously taken from a patient with an antibody and / or an antibody fragment according to the invention, and
- détermination de la présence du domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain.  determination of the presence of the extracellular domain of the human HER4 receptor.
Le taux circulant du domaine extracellulaire du récepteur HER4 considérée ci- dessus peut notamment être déterminé après clivage par la TACE, tel que décrit précédemment.  The circulating level of the extracellular domain of the HER4 receptor considered above can in particular be determined after cleavage by TACE, as described above.
DESCRIPTION DES FIGURES DESCRIPTION OF THE FIGURES
La figure 1 illustre l'alignement des domaines variables VH et VL des anticorps humains anti-HER4 de l'invention.  Figure 1 illustrates the alignment of the VH and VL variable domains of the human anti-HER4 antibodies of the invention.
La figure 2 illustre la liaison des phages-scFv à la protéine recombinante humaine HER4-Fc. Les résultats obtenus pour les clones HE4B-33, HE4B- 1 7. HE4B-27, HE5B-35, HE5C-144 et HE5C- 123 sont présentés.  Figure 2 illustrates the binding of phages-scFv to the recombinant human HER4-Fc protein. The results obtained for HE4B-33, HE4B-1, HE4B-27, HE5B-35, HE5C-144 and HE5C-123 clones are presented.
Les figures 3 A et 3B illustrent la liaison du Fab de l'anticorps humain anti- HER4 de l'invention HE4B-33 à la protéine recombinante humaine HER4-Fc. La figure 3 A traduit la spécificité de l'anticorps HE4B-33 pour le récepteur HER4 par comparaison au récepteur HER3. La figure 3B montre une courbe dose-réponse de l'anticorps HE4B-33 vis-à-vis de la cible HER4.  FIGS. 3A and 3B illustrate the binding of the Fab of the anti-HER4 human antibody of the invention HE4B-33 to the recombinant human HER4-Fc protein. Figure 3A expresses the specificity of the HE4B-33 antibody for the HER4 receptor compared to the HER3 receptor. Figure 3B shows a dose-response curve of the HE4B-33 antibody to the HER4 target.
Les figures 4 A, 4B. 4C et 4D illustrent la détermination de la spécificité de reconnaissance pour les anticorps anti-HER4 de l'invention HE4B-33, HE4B- 17. HE4B-27, HE5B-35, HE5C- 144. HE5C-123 et HE3C-2 sous format IgG par comparaison au récepteur FIER 3.  Figures 4A, 4B. 4C and 4D illustrate the determination of the recognition specificity for the anti-HER4 antibodies of the invention HE4B-33, HE4B-17. HE4B-27, HE5B-35, HE5C-144. HE5C-123 and HE3C-2 in format IgG compared to the FIER 3 receptor.
Les figures SA, SB et 5C illustrent la détermination des affinités relatives des anticorps anti-HER4 de l'invention à l'égard du récepteur HER4.  Figures SA, SB and 5C illustrate the determination of the relative affinities of the anti-HER4 antibodies of the invention with respect to the HER4 receptor.
Les figures 6A, 6B et 6C illustrent les expériences de compétition entre les anticorps, pour la fixation à HER4. La figure 7 illustre la capacité de liaison des anticorps humains anti-HER4 de l'invention vis-à-vis des isoformes JM-a et JM-b du récepteur HER4 membranaire. Figures 6A, 6B and 6C illustrate the competition experiments between the antibodies, for HER4 binding. FIG. 7 illustrates the binding capacity of the anti-HER4 human antibodies of the invention with respect to the JM-a and JM-b isoforms of the membrane HER4 receptor.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Comme indiqué ci-dessus et illustré dans les exemples ci-après, les inventeurs ont identifié des anticorps humains anti-HER4, particulièrement avantageux sur le plan de la prévention et/ou du traitement du cancer.  As indicated above and illustrated in the examples below, the inventors have identified human antibodies anti-HER4, particularly advantageous in terms of the prevention and / or treatment of cancer.
Définitions Definitions
Préliminairement, pour que la présente invention puisse être mieux comprise, plusieurs définitions sont énoncées ci-dessous. Ces définitions sont censées englober les équivalents grammaticaux.  Preliminarily, for the present invention to be better understood, several definitions are set forth below. These definitions are meant to include grammatical equivalents.
Le terme « HER4 » se rapporte au récepteur humain HER4, qui est un récepteur à tyrosine kinase de la sous famille EGFR, comme indiqué précédemment.  The term "HER4" refers to the human HER4 receptor, which is a tyrosine kinase receptor of the EGFR subfamily, as previously indicated.
Le terme « anticorps humains anti-HER4 », désigne tout anticorps humain dirigé contre le récepteur I IER4 humain susmentionné.  The term "human anti-HER4 antibodies" refers to any human antibody directed against the above-mentioned human IER4 receptor.
Le terme « anticorps » est utilisé ici dans le sens le plus large. Par « anticorps », on entend donc désigner tout polypeptide qui comprend au moins: (i) une région Fc et (ii) un domaine de liaison polypeptidique dérivé d'une région variable d'une immunoglobuline.  The term "antibody" is used here in the broadest sense. By "antibody" is therefore meant any polypeptide which comprises at least: (i) an Fc region and (ii) a polypeptide binding domain derived from a variable region of an immunoglobulin.
Par « anticorps humain », on entend désigner tout polypeptide comprenant au moins les parties (i) et (ii) ci-dessus provenant uniquement de séquences humaines, les parties (i) et/ou (ii) ci-dessus pouvant également provenir de séquences humaines modifiées 'mutées, notamment à des fins d'amélioration du CDC et/ou de l'ADCC et/ou de la demi-vie de l'anticorps résultant.  By "human antibody" is meant any polypeptide comprising at least parts (i) and (ii) above derived solely from human sequences, parts (i) and / or (ii) above may also come from mutated modified human sequences, in particular for the purpose of improving the CDC and / or the ADCC and / or the half-life of the resulting antibody.
Par « Fc » ou « région Fc », on entend désigner le fragment cri stalli sable généré lors de la digestion enzymatique des immunoglobulines par la papaïne. Le fragment Fc se réfère aux deu dernières régions constantes des i mm unogl obu l i nés IgA, IgD, et IgG, aux trois dernières régions constantes des IgE et IgM. Pour IgA et IgM, Fc peut comprendre la chaîne de J. Pour les IgG. Fc comprend les domaines d'immunoglobuline CgammaZ et Cgamma3 (Cy2 et Cy3 qui sont les domaines CH2 et CH3, respectivement). La chaîne lourde de la région Fc de l'IgG l humaine est définie ici comme comprenant des résidus C226 à son extrémité carboxyle, où la numérotation des acides aminés de la région Fc est celle de l'index UE proposé par Kabat. Dans le cadre de l'IgGl humaine, le domaine CH2 se réfère aux positions 237 à 340 et le domaine CH3 se réfère aux positions 341 à 447 selon l'index UE proposé par Kabat. By "Fc" or "Fc region" is meant the cry stalli sand fragment generated during enzymatic digestion of immunoglobulins by papain. The Fc fragment refers to the last two constant regions of the IgA, IgD, and IgG unipolar regions, at the last three constant regions of IgE and IgM. For IgA and IgM, Fc can include the J. chain for IgG. Fc comprises the CgammaZ and Cgamma3 immunoglobulin domains (Cy2 and Cy3 which are the CH2 and CH3 domains, respectively). The heavy chain of the Fc region of human IgG1 is defined here as comprising C226 residues at its carboxyl terminus, wherein the amino acid numbering of the Fc region is that of the EU index proposed by Kabat. In the context of human IgG1, the CH2 domain refers to positions 237 to 340 and the CH3 domain refers to positions 341 to 447 according to the EU index proposed by Kabat.
Quant au domaine de liaison polypeptidique susmentionné, il est capable de se lier spécifiquement à un antigène cible donnée ou d'un groupe d'antigènes cibles. Un domaine de liaison polypeptidique qui dérive d'une région variable d'une immunoglobuline comprend une ou plusieurs CDR (« complementarity determining régions »). Les anticorps comprennent, mais ne sont pas limités, aux immunoglobulines pleine longueur, aux anticorps monoclonaux, aux anticorps multi-spécifiques, aux protéines de fusion Fc comprenant au moins une région variable, aux anticorps synthétiques (parfois appelés « anticorps mimétiques »), aux anticorps humains entier, aux protéines de fusion-anticorps, aux conjugués d'anticorps et à leur fragments respectif.  As for the aforementioned polypeptide binding domain, it is capable of binding specifically to a given target antigen or target antigen group. A polypeptide binding domain that derives from a variable region of an immunoglobulin comprises one or more CDRs ("complementarity determining regions"). Antibodies include, but are not limited to, full-length immunoglobulins, monoclonal antibodies, multi-specific antibodies, Fc fusion proteins comprising at least one variable region, synthetic antibodies (sometimes referred to as "mimetic antibodies"), whole human antibodies, fusion-antibody proteins, antibody conjugates and their respective fragments.
Par « anticorps pleine longueur » ou « immunoglobuline » tel qu'il est utilisé ici, on entend la structure qui constitue la forme biologique naturelle d'un anticorps, comprenant les régions variables et constantes. Les « anticorps pleine longueur » couvrent les anticorps pleine longueur monoclonaux, les anticorps pleine longueur de type sauvage, la liste n'étant pas limitative.  By "full-length antibodies" or "immunoglobulin" as used herein is meant the structure that constitutes the natural biological form of an antibody, including variable and constant regions. "Full-length antibodies" cover monoclonal full-length antibodies, wild-type full-length antibodies, the list not being limiting.
Chez la plupart des mammifères, dont les humains, la structure des anticorps pleine longueur est généralement un tétramere. Ledit tétramère est composé de deux paires identiques de chaînes polypeptidiques, chaque paire ayant une chaîne « lourde » (ayant typiquement une masse moléculaire d'environ 50-70 kDa) et une chaîne « légère » (ayant typiquement une masse moléculaire d'environ 25 kDa). Chez certains mammifères, par exemple chez les chameaux et des lamas, les anticorps pleine longueur peuvent n'être constitués que de deux chaînes lourdes, chaque chaîne lourde comprenant un domaine variable attachée à la région Fc.  In most mammals, including humans, the structure of full-length antibodies is usually a tetrameric. Said tetramer is composed of two identical pairs of polypeptide chains, each pair having a "heavy" chain (typically having a molecular weight of about 50-70 kDa) and a "light" chain (typically having a molecular weight of about 25 kDa). In some mammals, for example camels and llamas, the full-length antibodies may consist of only two heavy chains, each heavy chain comprising a variable domain attached to the Fc region.
La partie amino-terminale de chaque chaîne comprend une région variable d'environ 100 à 1 10 acides aminés responsable de la reconnaissance de l'antigène. Dans la région variable, trois boucles sont rassemblées pour chacun des domaines V de la chaîne lourde et de la chaîne légère pour former un site de liaison à l'antigène. Chacune de ces boucles se rapporte à un CDR, dans laquelle la variation de la séquence d'acides aminés est la plus importante. La partie carboxy-terminale de chaque chaîne définit une région constante principalement responsable de la fonction effectrice. Kabat et al. a collecté de nombreuses séquences primaires de régions variables, de chaînes lourdes et de chaînes légères. Sur la base du degré de conservation des séquences, ils ont classé les séquences primaires individuelles dans les CDR et ont fait une liste de celles-ci (voir Séquences of immunological Interest, 5e édition. IH Publication, n° 91 -3242, EA Kabat. incorporé dans la présente par référence dans son intégralité). The amino-terminal portion of each chain comprises a variable region of about 100 to 10 amino acids responsible for antigen recognition. In the variable region, three loops are pooled for each of the V domains of the heavy chain and the light chain to form an antigen binding site. Each of these loops relates to a CDR, in which the variation of the amino acid sequence is the most important. The carboxy-terminal portion of each chain defines a constant region primarily responsible for the effector function. Kabat et al. has collected numerous primary sequences of variable regions, heavy chains and light chains. On the basis of the degree of conservation of the sequences, they classified the individual primary sequences in the CDRs and made a list of these (see Sequences of Immunological Interest, 5th Edition, IH Publication, No. 91-3242, EA Kabat incorporated herein by reference in its entirety).
Dans le cas des immunoglobulines humaines, les chaînes légères sont classées comme des chaînes légères kappa et lambda. Les chaînes lourdes sont classées comme mu, delta, gamma, alpha, ou epsilon, et définissent l'isotype de l'anticorps tel que IgM, IgD, IgG, IgA et IgE, respectivement. IgG a plusieurs sous-classes, y compris, mais sans s'y limiter. IgGl, IgG2, IgG3, et IgG4. IgM a plusieurs sous-classes, y compris, mais sans s'y limiter, Ig 1 et IgM2. Ainsi, par « isotype » tel qu'il est utilisé ici. on entend l'une des sous-classes d'immunoglobulines définies par les caractéristiques chimiques et antigéniques et de leurs régions constantes. Les isotypes d'immunoglobulines humaines connues sont IgG l . IgG2, IgG3, IgG4. IgA l . IgA2, IgMl , IgM2, IgD. et IgE.  In the case of human immunoglobulins, light chains are classified as kappa and lambda light chains. Heavy chains are classified as mu, delta, gamma, alpha, or epsilon, and define the isotype of the antibody such as IgM, IgD, IgG, IgA, and IgE, respectively. IgG has several subclasses, including but not limited to. IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4. IgM has several subclasses, including but not limited to Ig 1 and IgM 2. Thus, by "isotype" as used here. we mean one of the immunoglobulin subclasses defined by the chemical and antigenic characteristics and their constant regions. The known human immunoglobulin isotypes are IgG l. IgG2, IgG3, IgG4. IgA l. IgA2, IgM1, IgM2, IgD. and IgE.
Par « IgG » tel qu'utilisé ici, on entend un polypeptide appartenance à la classe des anticorps qui est substantiellement codé par un gène gamma d'immunoglobuline reconnue. Chez l'homme. î'IgG comprend les sous-classes ou isotypes IgGl, IgG 2. IgG3, et IgG4.  By "IgG" as used herein is meant a polypeptide belonging to the class of antibodies that is substantially encoded by a recognized immunoglobulin gamma gene. In humans. IgG comprises subclasses or isotypes IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4.
Les IgG pleine longueur sont des tétramères et se composent de deux paires identiques de deux chaînes d'immunoglobuline. chaque paire ayant une chaîne légère et une chaîne lourde, chaque chaîne légère comprenant les domaines VL et CL, et chaque chaîne lourde comprenant les domaines VH, C 1 (également appelé CH1 ), C 2 (également appelé CH2) et Cy3 (appelée aussi CH3). Dans le cadre de l'IgGl humaine, « CH1 » renvoie aux positions 1 18 à 220. le domaine CH2 se réfère aux positions 237 à 340 et le domaine CH3 se réfère aux positions 341 à 447 selon l'index UE proposé par Kabat. La chaîne lourde d'IgG comprend également une région charnière (« hinge domain ») qui se réfère aux positions 221 à 236 dans le cas de l'IgG l .  Full-length IgGs are tetramers and consist of two identical pairs of two immunoglobulin chains. each pair having a light chain and a heavy chain, each light chain comprising the VL and CL domains, and each heavy chain comprising the domains VH, C 1 (also called CH 1), C 2 (also called CH 2) and Cy 3 (also called CH3). In the context of human IgG1, "CH1" refers to positions 18 to 220. The CH2 domain refers to positions 237 to 340 and the CH3 domain refers to positions 341 to 447 according to the EU index proposed by Kabat. The IgG heavy chain also includes a hinge domain which refers to positions 221 to 236 in the case of IgG 1.
Par « fragments de région Fc », on entend désigner, au sens de la présente invention, des polvpeptides, identiques ou différents, qui comprennent un ou plusieurs polvpeptides dérivés d'une région Fc de type sauvage, de préférence à partir de la région charnière d'une IgG de type sauvage. Les fragments de région Fc selon l'invention sont tels qu'ils conservent leur capacité à recruter les cellules effectrices, en particulier les polynucléaires neutrophiles et les monocytes macrophages. A cet effet, les fragments de région Fc selon l'invention ont une constante de dissociation pour FcRn inférieure à 1 μΜ selon le dosage SPR. For the purposes of the present invention, the term "Fc region fragments" is intended to denote polypeptides, which are identical or different, which comprise one or more polypeptides derived from a wild-type Fc region, preferably from the region. hinge of a wild-type IgG. The Fc region fragments according to the invention are such that they retain their ability to recruit effector cells, in particular neutrophils and monocyte macrophages. For this purpose, the Fc region fragments according to the invention have a dissociation constant for FcRn less than 1 μΜ according to the SPR assay.
Par « FcRn » ou « récepteur Fc néonatal », on entend désigner, au sens de la présente invention, une protéine qui se lie à la région Fc des anticorps IgG et est codé au moins en partie par un gène FCRN. Le FcRn peut être de n'importe quel organisme, y compris mais non limité à l'homme, souris, rats, lapins et singes. Au vu des indications thérapeutiques considérées dans la présente demande, le FcRn est celui de l'homme. Comme il est connu dans l'art, la protéine de FcRn fonctionnelle comprend deux polypeptides, souvent désignés comme la chaîne lourde et la chaîne légère. La chaîne légère est la bêta-2-microglobuline et la chaîne lourde est codée par le gène RRFC. Sauf indication contraire, FcRn ou la protéine FcRn se réfère au complexe des -chaîne avec bêta-2-microglobulinc. Chez l'homme, le gène codant pour FcRn est appelé FCGRT.  For the purposes of the present invention, the term "FcRn" or "neonatal Fc receptor" is intended to denote a protein which binds to the Fc region of the IgG antibodies and is at least partly encoded by an FCRN gene. FcRn can be from any organism, including but not limited to humans, mice, rats, rabbits, and monkeys. In view of the therapeutic indications considered in the present application, FcRn is that of man. As is known in the art, the functional FcRn protein comprises two polypeptides, often referred to as the heavy chain and the light chain. The light chain is beta-2-microglobulin and the heavy chain is encoded by the RRFC gene. Unless otherwise indicated, FcRn or the FcRn protein refers to the-chain complex with beta-2-microglobulin. In humans, the gene encoding FcRn is called FCGRT.
Comme indiqué ci-dessus, selon un mode de réalisation particulier, la région Fc ou le fragment de région Fc d'un anticorps humain selon l'invention peut présenter une affinité améliorée pour FcRn comparée à la région Fc d'un fragment d'une région Fc d'un anticorps humain parent, ceci afin, notamment, d'améliorer les propriétés de demi-vie in vivo de l'anticorps. As mentioned above, according to a particular embodiment, the Fc region or Fc region fragment of a human antibody according to the invention can exhibit improved affinity for FcRn compared to the Fc region of a fragment of a Fc region of a parent human antibody, this in particular to improve the in vivo half-life properties of the antibody.
Par « parent » tel qu'utilisé ici, on entend un polypeptide non modifié qui est ensuite modifié pour produire un variant.  By "parent" as used herein is meant an unmodified polypeptide which is then modified to produce a variant.
De manière générale, par le terme « fragment » d'un anticorps selon l'invention, on entend désigner une partie dudit anticorps mais qui conserve sa capacité de liaison à l'antigène, en m 'espèce sa capacité de liaison au récepteur HER4 humain. In general, the term "fragment" of an antibody according to the invention is meant a portion of said antibodies, but which retains its binding capacity to the antigen, m this case its binding capacity to human HER4 receptor .
Le terme « Fab » désigne un fragment d'anticorps ayant un poids moléculaire d'environ 50 000 Da et possédant le site de liaison à l'antigène dénommé « paratope », formé de la chaîne légère dans son intégralité (VL+CL) et des domaines VH+CHI de la chaîne lourde. Il est monovalent. The term "Fab" refers to an antibody fragment having a molecular weight of about 50,000 Da and having the antigen binding site called "paratope", formed from the entire light chain (VL + C L ). and VH + CHI domains of the heavy chain. He is monovalent.
Le terme « F(ab')2 » fait référence à un fragment d'anticorps ayant un poids moléculaire d'environ 100 000 Da et possédant le site de liaison à l'antigène dénommé « paratope », qui correspond à l'association de deux fragments Fab liés par l'intermédiaire d'un pont di sulfure de la région charnière (ou « hinge »), parmi des fragments obtenus par traitement d'IgG avec une protéase, la pepsine. Il a la même affinité que l'anticorps pour l'antigène et est di valent. The term "F (ab ') 2" refers to an antibody fragment having a molecular weight of about 100,000 Da and having the so-called antigen binding site. "Paratope", which corresponds to the association of two Fab fragments linked via a sulphide bridge of the hinge region (or "hinge"), among fragments obtained by treatment of IgG with a protease, the pepsin. It has the same affinity as the antibody for the antigen and is di valent.
Le terme « Fab' » fait référence à un fragment d'anticorps ayant un poids moléculaire d'environ 50 000 Da et une activité de liaison à l'antigène, qui est obtenu par découpage d'un pont disulfure de la région charnière de F(ab')2.  The term "Fab" refers to an antibody fragment having a molecular weight of about 50,000 Da and antigen binding activity, which is obtained by cutting a disulfide bridge from the hinge region of F (ab ') 2.
Le polypeptidc à chaîne unique Fv (« scFv ») est un hétérodimère VH::VL lié par co valence qui est habituellement exprimé à partir d'une fusion de gènes comprenant les gènes codant VH et VL liés par un liant codant pour un peptidc.  The single-chain Fv polypeptide ("scFv") is a co-valentially-linked VH :: VL heterodimer that is usually expressed from a gene fusion comprising the VH and VL encoding genes bound by a binder encoding a peptidc.
Le terme « dsFv » est un hétérodimère VH::VL stabilisé par une liaison disulfure. Des fragments d'anticorps bivalents et multivalents peuvent se former spontanément par association de scFvs monovalents, ou peuvent être générés en couplant des scFvs monovalents par un peptidique liant, comme le sc(Fv)2 divalent.  The term "dsFv" is a VH :: VL heterodimer stabilized by a disulfide bond. Bivalent and multivalent antibody fragments may form spontaneously by association of monovalent scFvs, or may be generated by coupling monovalent scFvs with a binder peptide, such as divalent sc (Fv) 2.
Le terme «diabodies» désigne de petits fragments d'anticorps avec deux sites de liaison à l'antigène, ces fragments comprenant un domaine variable de chaîne lourde (VH) connecté à un domaine variable de chaîne légère (VL) dans la même chaîne polypeptidique (VH-VL). En utilisant un liant (« linker ») qui est trop court pour permettre un appariement entre les deux domaines sur la même chaîne, les domaines sont contraints à s'apparier avec les domaines complémentaires d'une autre chaîne et de créer deux sites de liaison à l'antigène.  The term "diabodies" refers to small antibody fragments with two antigen binding sites, these fragments comprising a heavy chain variable domain (VH) connected to a light chain variable domain (VL) in the same polypeptide chain (VH-VL). By using a linker that is too short to match the two domains on the same chain, the domains are forced to pair with the complementary domains of another chain and create two link sites. to the antigen.
Par « purifié » et « isolé », il est signifié, lorsqu'on se réfère à un anticorps selon l'invention ou à une séquence nucléotidique. que la molécule indiquée est présente en l'absence substantielle d'autres macromolécules biologiques du même type. Le terme «purifié» tel qu'il est utilisé ici signifie que, de préférence, au moins 75 % en poids, de préférence encore au moins 85 % en poids, encore plus préfèrent i el 1 em en t au moins 95 % en poids, et de préférence au moins 98 % en poids, de macromolécules biologiques du même type sont présentes. Une molécule d'acide nucléique « isolée » qui code pour un polypeptidc particulier fait référence à une molécule d'acide nucléique qui est pratiquement exempte d'autres molécules d'acides nucléiques qui ne codent pas pour le polypeptidc: toutefois, la molécule peut comprendre certaines bases ou groupements qui n'affectent pas de manière délétère les caractéristiques de base de la molécule considérée. Par « polynucléotide », on entend selon l'invention un composé comprenant un polymère de nucléotides, ce qui englobe un polymère de ribonucléotides (ARN) et un polymère de désoxyribonucléotides (ADN), lesdits nucléotides étant éventuellement modifiés chimiquement. Selon l'invention, un polynucléotide peut avoir avantageusement une longueur allant de 5 à 3 000 nucléotides de longueur. Un polynucléotide englobe classiquement les poly-ribonucléotides et les poly-désoxyribonucléotides, le cas échéant chimiquement modifiés. Dans certains modes de réalisation, un polynucléotide consiste en un polymère de nucléotides. ribonucléotides ou déso yri bon uel éot id es . Dans d'autres modes de réalisation, un acide nucléique consiste essentiellement en un polymère de nucléotides et comprend une partie non-nucléotidique, ladite partie non-nucléotidique étant préférentiellement de longueur réduite, comparée à la longueur de la partie nucléotidique, par exemple une longueur linéaire inférieure à la longueur occupée par une chaîne de cinq nucléotides, ribonucléotides ou désoxyribonucléotides. Préférenti el l em en t , la partie non-nucléotidique n'est pas de nature polypeptidique, ou alternativement ne contient pas de résidu d'acide aminé. Un polynucléotide peut comprendre un ou plusieurs nucléotides modifiés, tels que des nucléotides méthylés, les modifications pouvant être réalisées avant, pendant, ou après l'assemblage du polymère de nucléotides. Dans certains modes de réalisation, la partie non nucléotidique peut consister en une chaîne espaceur comprenant un groupe carbo yle libre ou en une chaîne espaceur comprenant un groupe aminé libre. By "purified" and "isolated" is meant, when referring to an antibody according to the invention or to a nucleotide sequence. that the indicated molecule is present in the substantial absence of other biological macromolecules of the same type. The term "purified" as used herein means that preferably at least 75% by weight, more preferably at least 85% by weight, still more preferably at least 95% by weight. and preferably at least 98% by weight of biological macromolecules of the same type are present. An "isolated" nucleic acid molecule that encodes a particular polypeptide refers to a nucleic acid molecule that is substantially free of other nucleic acid molecules that do not encode the polypeptide; however, the molecule may comprise certain bases or groups which do not deleteriously affect the basic characteristics of the molecule under consideration. By "polynucleotide" is meant according to the invention a compound comprising a nucleotide polymer, which includes a ribonucleotide polymer (RNA) and a deoxyribonucleotide polymer (DNA), said nucleotides optionally being chemically modified. According to the invention, a polynucleotide may advantageously have a length ranging from 5 to 3,000 nucleotides in length. A polynucleotide conventionally encompasses poly-ribonucleotides and poly-deoxyribonucleotides, where appropriate chemically modified. In some embodiments, a polynucleotide is a nucleotide polymer. ribonucleotides or deso yri bon uel eot id es. In other embodiments, a nucleic acid consists essentially of a polymer of nucleotides and comprises a non-nucleotide portion, said non-nucleotide portion preferably being of reduced length compared to the length of the nucleotide portion, for example a length linear less than the length occupied by a chain of five nucleotides, ribonucleotides or deoxyribonucleotides. Preferably, the non-nucleotide portion is not of a polypeptide nature, or alternatively does not contain an amino acid residue. A polynucleotide may comprise one or more modified nucleotides, such as methylated nucleotides, the modifications may be made before, during, or after the assembly of the nucleotide polymer. In some embodiments, the non-nucleotide portion may be a spacer chain comprising a free carboxy group or a spacer chain comprising a free amino group.
Aux fins de la présente description, les termes « entité polynucléotidique » et « polynucléotide » sont utilisés indifféremment pour désigner le même objet.  For purposes of the present description, the terms "polynucleotide entity" and "polynucleotide" are used interchangeably to refer to the same object.
Par « polypeptide », on entend selon l'invention une chaîne d'au moins deux résidus d'acides aminés, ce qui englobe une chaîne allant de 2 à 1 000 résidus d'acides aminés de longueur, lesdits résidus d'acides aminés étant liés entre eux par des liaisons covalentes, y compris par des liaisons peptidiques. Dans la présente description, le terme « polypeptide » peut être utilisé pour désigner indifféremment une protéine, un peptide ou un oligopeptide. Le terme « polypeptide » englobe les polypeptides chimiquement modifiés par un ou plusieurs groupes fonctionnels ou par une ou plusieurs molécules non peptidiques, à l'exception d'une modification par un polynucléotide.  By "polypeptide" is meant according to the invention a chain of at least two amino acid residues, which encompasses a chain ranging from 2 to 1000 amino acid residues in length, said amino acid residues being linked together by covalent bonds, including peptide bonds. In the present description, the term "polypeptide" can be used to designate indifferently a protein, a peptide or an oligopeptide. The term "polypeptide" encompasses polypeptides chemically modified by one or more functional groups or by one or more non-peptide molecules, except for modification by a polynucleotide.
Aux fins de la présente description, les termes « entité polypeptidique » et « polypeptide » sont utilisés indifféremment pour désigner le même objet. 3 For purposes of this disclosure, the terms "polypeptide entity" and "polypeptide" are used interchangeably to refer to the same object. 3
Par « acide aminé », on englobe l'un quelconque des 22 résidus d'acides aminés naturels, ainsi que leurs analogues non naturels. Les acides aminés englobent les résidus Alanine (Ala; A), Arginine (Arg; R), Asparagine (Asp; N), acide Aspartique (Asp; D). Cystéine (Cys; C), acide Glutamique (Glu; E), Glutaminc (Gin; Q), Glycine (Gly; G), Histidine (His; H). Isoleucine (Ile; I), Leucine (Leu; L), Lysine (Lys; K), Methionine (Met; M), Phénylalanine (Phe; F), Proline (Pro; P), Serine (Ser; S), Thréonine (Thr; T), Tryptophane (Trp; W), Tyrosine (Tyr; Y). Valine (Val; V), Pyrrolysine et Sélénocystéine. Les acides aminés englobent le L-acides aminés et les D-acides aminés. Préféren ti cl 1 cm ent , les acides aminés sont les L-acides aminés. By "amino acid" is meant any of the 22 naturally occurring amino acid residues, as well as their unnatural analogues. Amino acids include the Alanine (Ala; A), Arginine (Arg; R), Asparagine (Asp; N), Aspartic acid (Asp; D) residues. Cysteine (Cys; C), Glutamic acid (Glu; E), Glutaminc (Gin; Q), Glycine (Gly; G), Histidine (His; H). Isoleucine (Ile; I), Leucine (Leu; L), Lysine (Lys; K), Methionine (Met; M), Phenylalanine (Phe; F), Proline (Pro; P), Serine (Ser; S), Threonine (Thr; T), Tryptophan (Trp, W), Tyrosine (Tyr, Y). Valine (Val, V), Pyrrolysine and Selenocysteine. Amino acids include L-amino acids and D-amino acids. Preferably, the amino acids are L-amino acids.
De manière générale, une séquence d'acides aminés de SEQ ID N°X ayant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec une séquence d'acides aminés de référence possède au moins 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %,In general, an amino acid sequence of SEQ ID No. X having at least 80% amino acid identity with a reference amino acid sequence has at least 81%, 82%, 83%, 84% 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%,
92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % d'identité en acides aminés avec ladite séquence nucléique de référence. 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% amino acid identity with said reference nucleic sequence.
Par ailleurs, de manière générale, un acide nucléique de SEQ ID N°X ayant au moins 80 % d'identité en nucléotides avec une séquence nucléique de référence possède au moins 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %,Furthermore, in general, a nucleic acid of SEQ ID NO: X acid having at least 80% nucleotide identity with a reference nucleic acid sequence has at least 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%,
93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % d'identité en nucléotides avec ladite séquence nucléique de référence. 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% nucleotide identity with said reference nucleic sequence.
Anticorps humain anti-HER4 selon invention Human anti-HER4 antibody according to invention
La présente invention fournie des anticorps humain isolés se liant sélectivement au domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain.  The present invention provides isolated human antibodies that selectively bind to the extracellular domain of the human HER4 receptor.
Contre toutes attentes, les inventeurs ont identifié des anticorps humains anti- Against all expectations, the inventors have identified anti-human antibodies
HER4. A la connaissance des inventeurs, il s'agit des premiers anticorps spécifiques du récepteur HER4 humain à caractère entièrement humain. HER4. To the inventors' knowledge, these are the first antibodies specific for the human HER4 receptor of entirely human nature.
Ainsi, selon un premier de ses aspects, la présente invention concerne un anticorps humain se liant sélectivement au domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain. Egalement, ledit anticorps selon l'invention est tel qu'il se lie avantageusement au domaine extracellulaire de chacune des isoformes JM-a et JM-b du sous-domaine IV du récepteur HER4 humain. Thus, according to a first of its aspects, the present invention relates to a human antibody that selectively binds to the extracellular domain of the human HER4 receptor. Also, said antibody according to the invention is such that it advantageously binds to the extracellular domain of each of the JM-a and JM-b isoforms of the sub-domain IV of the human HER4 receptor.
Plus particulièrement, un anticorps selon l'invention peut comprendre au moins un domaine de liaison à l'antigène, ledit domaine de liaison à l'antigène pouvant être de préférence choisi parmi :  More particularly, an antibody according to the invention may comprise at least one antigen binding domain, said antigen binding domain possibly being chosen from:
a) un domaine CDR-H 1 de chaîne lourde choisi parmi les domaines suivants : a) a heavy chain CDR-H 1 domain selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-H 1 de formule (I) suivante : NH2-S-Y-X1-X2-X3-COOH (I), dans laquelle : (i) the CDR-H 1 domain of the following formula (I): NH 2 -S-Y-X 1 -X 2 -X 3 -COOH (I), in which:
- X 1 est un résidu d'acide aminé choisi parmi G et A,  X 1 is an amino acid residue chosen from G and A,
- X2 est un résidu d'acide aminé choisi parmi I et M, et  X 2 is an amino acid residue selected from I and M, and
- X3 est un résidu d'acide aminé choisi parmi S et H.  X3 is an amino acid residue selected from S and H.
et  and
(ii) le domaine CDR-H 1 de formule (II) suivante : NH2-S-S-N-W-W-S- COOH (II)  (ii) the CDR-H 1 domain of the following formula (II): NH 2 -S-S-N-W-W-S-COOH (II)
b) un domaine CDR-H2 de chaîne lourde choisi parmi les domaines suivants : b) a heavy chain CDR-H2 domain selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-H2 de formule (III) suivante : NH2-G-I-I-P-1-F-G-T-A-N- Y-A-Q- -F-Q-G-COOH (III), (i) the CDR-H2 domain of the following formula (III): NH2-G-I-I-P-1-F-G-T-A-N-Y-A-Q-F-Q-G-COOH (III),
(ii) le domaine CDR-H2 de formule ( IV) suivante : NH2-E-I-Y-H-S-G-S-T-N- Y-N-P-S-L- -S-COOH ( IV).  (ii) the CDR-H2 domain of the following formula (IV): NH2-E-I-Y-H-S-G-S-T-N-Y-N-P-S-L-S-COOH (IV).
(iii) le domaine CDR-H2 de formule (V) suivante : NH2-G-I-N-P-A-D-G-G- T-I-Y-S-Q-K-F-R-D-COOH (V), et  (iii) the CDR-H2 domain of the following formula (V): NH2-G-I-N-P-A-D-G-G-T-I-Y-S-Q-K-F-R-D-COOH (V), and
(iv) le domaine CDR-H2 de formule (VI) suivante : NH2-A-I-S-G-S-G-G-S- T-Y-Y-A-D-S-V-K-G-COOH (VI),  (iv) the CDR-H2 domain of the following formula (VI): NH2-A-I-S-G-S-G-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G-COOH (VI),
c) un domaine CDR-H3 de chaîne lourde choisi parmi les domaines suivants : c) a heavy chain CDR-H3 domain selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-H3 de formule (VII) suivante : NH2-S-R-G-Y-Y-D-P-F- D-V-COOH (VII). (i) the following CDR-H3 domain of formula (VII): NH2-S-R-G-Y-Y-D-P-F-D-V-COOH (VII).
(ii) le domaine CDR-H3 de formule (VIII) suivante : NH2-S-A-R-S-D-A-F-D- (ii) the CDR-H3 domain of the following formula (VIII): NH 2 -S-A-R-S-D-A-F-D-
I (VIII), I (VIII),
(îii)le domaine CDR-H3 de formule (IX) suivante : NH2-G-L-S-W-G-G-S-G- (iii) the CDR-H3 domain of the following formula (IX): NH2-G-L-S-W-G-G-S-G-
D-Y-C OH (IX), (iv) le domaine CDR-H3 de formule (X) suivante : NH2-E-R-D-Y-W-S-D-F- D-Y-COOH (X), DYC OH (IX), (iv) the CDR-H3 domain of the following formula (X): NH2-ERDYWSDF-DY-COOH (X),
(v) le domaine CDR-I13 de formule (XI) suivante : NH2-G-L-R-G-V-Y-Y-Y- (v) the CDR-I13 domain of the following formula (XI): NH2-G-L-R-G-V-Y-Y-Y-
F-D-Y-COOH (XI), et F-D-Y-COOH (XI), and
(vi) le domaine CDR-H3 de formule (XII) suivante : NH2-D-V-G-L-F-L-P-Y- (vi) the CDR-H3 domain of the following formula (XII): NH 2 -D-V-G-L-F-L-P-Y-
Y-Y-G-M-D-V-COOH (XII), Y-Y-G-M-D-V-COOH (XII),
d) un domaine CDR-Ll de chaîne légère choisi parmi les domaines suivants : (ii) le domaine CDR-Ll de formule (XIII) suivante : NH2-S-G-S-S-N-I-G-N- d) a light chain CDR-L1 domain selected from the following domains: (ii) the CDR-L1 domain of the following formula (XIII): NH2-S-G-S-S-N-I-G-N-
N-Y-V-S-COOH (XIII), N-Y-V-S-COOH (XIII),
(iii) le domaine CDR-Ll de formule (XIV) suivante : NH2-G-G-D-N-I-G-S- (iii) the CDR-L1 domain of the following formula (XIV): NH2-G-G-D-N-I-G-S-
K-A-V-H-COOH (XIV), et K-A-V-H-COOH (XIV), and
(iv) le domaine CDR-Ll de formule (XV) suivante : NH2-S-G-S-R-S-N-I-G-I- N-L-V-N-COOH (XV),  (iv) the CDR-L1 domain of the following formula (XV): NH2-S-G-S-R-S-N-I-G-I-N-L-V-N-COOH (XV),
e) un domaine CDR-L2 de chaîne légère choisi parmi les domaines suivants : (i) le domaine CDR-L2 de formule (XVI) suivante : NH2-X4-N-N- -R-P-S- e) a light chain CDR-L2 domain selected from the following domains: (i) the CDR-L2 domain of the following formula (XVI): NH2-X4-N-N-R-P-S-
COOH (XVI), dans laquelle X4 est un résidu d'acide aminé choisi parmi D et K COOH (XVI), wherein X4 is an amino acid residue selected from D and K
(ii) le domaine CDR-L2 de formule (XVII) suivante : H2-D-D-S-D-R-P-S- COOH (XVII). et  (ii) the CDR-L2 domain of the following formula (XVII): H2-D-D-S-D-R-P-S-COOH (XVII). and
(iii) le domaine CDR-L2 de formule (XVIII) suivante : NH2-A-N-D-Q-R-P-S- COOH (XVIII). ou  (iii) the CDR-L 2 domain of the following formula (XVIII): NH 2 -A-N-D-Q-R-P-S-COOH (XVIII). or
f) un domaine CDR-L3 de chaîne légère choisi parmi les domaines suivants : f) a light chain CDR-L3 domain selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-L3 de formule (XIX) suivante : NH2-G-X5-W-D-S-S-L- S-X6-X7-V-COOH (XIX), dans laquelle : (i) the CDR-L3 domain of the following formula (XIX): NH2-G-X5-W-D-S-S-L-S-X6-X7-V-COOH (XIX), in which:
- X5 est un résidu d'acide aminé choisi parmi A et T,  X5 is an amino acid residue selected from A and T,
- X6 est un résidu d'acide aminé choisi parmi V et A, et  X6 is an amino acid residue selected from V and A, and
- X7 est un résidu d'acide aminé choisi parmi A, W et V. - X7 is a residue of amino acid selected from A, W and V.
(ii) le domaine CDR-L3 de formule (XX) suivante : NH2-G-S-W-D-I-G-L-G- A-Y-V-COOH (XX).  (ii) the CDR-L3 domain of the following formula (XX): NH 2 -G-S-W-D-I-G-L-G-A-Y-V-COOH (XX).
(iii) le domaine CDR-L3 de formule (XXI) suivante : NH2-Q-V-W-D-N-R-S- D-Q-V-V-COOH (XXI), et  (iii) the CDR-L3 domain of the following formula (XXI): ## STR2 ##
(iv) le domaine CDR-L3 de formule (XXII) suivante : NH2-A-A-W-D-D-T-L- S-G-Y-V-COOH (XXII). Plus particulièrement, un anticorps selon l'invention peut comprendre au moins un domaine de liaison à l'antigène dans lequel : (iv) the CDR-L3 domain of the following formula (XXII): NH2-AAWDDTL-SGYV-COOH (XXII). More particularly, an antibody according to the invention may comprise at least one antigen binding domain in which:
- la région variable de la chaîne lourde comprend les trois CDR-Hl, CDR-H2 et CDR-H3, dans laquelle : a) le domaine CDR-Hl de chaîne lourde est choisi parmi les domaines suivants : the variable region of the heavy chain comprises the three CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, wherein: a) the heavy chain CDR-H1 domain is selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-H l de formule (I) suivante : NH2-S-Y-X 1 -X2-X3-COOH (I). dans laquelle : (i) the CDR-H 1 domain of the following formula (I): NH 2 -S-Y-X 1 -X 2 -X 3 -COOH (I). in which :
- XI est un résidu d'acide aminé choisi parmi G et A, XI is an amino acid residue selected from G and A,
- X2 est un résidu d'acide aminé choisi parmi I et M, et  X 2 is an amino acid residue selected from I and M, and
- X3 est un résidu d'acide aminé choisi parmi S et H,  X3 is an amino acid residue chosen from S and H,
et  and
(ii) le domaine CDR-H 1 de formule (II) suivante : NH2-S-S-N-W-W-S- (ii) the CDR-H 1 domain of the following formula (II): NH 2 -S-S-N-W-W-S-
COOH (II), COOH (II),
b) le domaine CDR-H2 de chaîne lourde est choisi parmi les domaines suivants :  b) the heavy chain CDR-H2 domain is selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-H2 de formule (III) suivante : NH2-G-I-I-P-I-F-G-T-A-N- Y-A-Q-K-F-Q-G-COOH (III),  (i) the CDR-H2 domain of the following formula (III): NH2-G-I-I-P-I-F-G-T-A-N-Y-A-Q-K-F-Q-G-COOH (III),
(ii) le domaine CDR-H2 de formule (IV) suivante : NH2-E-I-Y-H-S-G-S-T-N- Y-N-P-S-L-K-S-COOH (IV).  (ii) the CDR-H2 domain of the following formula (IV): NH2-E-I-Y-H-S-G-S-T-N-Y-N-P-S-L-K-S-COOH (IV).
(iii) le domaine CDR-H2 de formule (V) suivante : NH2-G-I-N-P-A-D-G-G- T-I-Y-S-Q-K-F-R-D-C OOH (V), et  (iii) the CDR-H2 domain of the following formula (V): NH2-G-I-N-P-A-D-G-G-T-I-Y-S-Q-K-F-R-D-C OH (V), and
(iv) le domaine CDR-H2 de formule (VI) suivante : NH2-A-I-S-G-S-G-G-S- T-Y-Y-A-D-S-V-K-G-C OH (VI), et  (iv) the CDR-H2 domain of the following formula (VI): NH2-A-I-S-G-S-G-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G-C OH (VI), and
c) le domaine CDR-H3 de chaîne lourde est choisi parmi les domaines suivants :  c) the heavy chain CDR-H3 domain is selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-H3 de formule (VII) suivante : NH2-S-R-G-Y-Y-D-P-F- (i) the CDR-H3 domain of the following formula (VII): NH2-S-R-G-Y-Y-D-P-F-
D-V-COOH (VII), D-V-COOH (VII),
(ii) le domaine CDR-H3 de formule (VIII) suivante : NH2-S-A-R-S-D-A-F-D- I (VIII), (iii) le domaine CDR-H3 de formule (IX) suivante : H2-G-L-S-W-G-G-S-G- D-Y-COOH (IX), (ii) the CDR-H3 domain of the following formula (VIII): NH2-SARSDAFD-I (VIII), (iii) the CDR-H3 domain of the following formula (IX): H2-GLSWGGSG-DY-COOH (IX),
(iv) le domaine CDR-H3 de formule (X) suivante : NH2-E-R-D-Y-W-S-D-F- D-Y-COOH (X),  (iv) the CDR-H3 domain of the following formula (X): NH2-E-R-D-Y-W-S-D-F-D-Y-COOH (X),
(v) le domaine CDR-H3 de formule (XI) suivante : NH2-G-L-R-G-V-Y-Y-Y- (v) the CDR-H3 domain of the following formula (XI): NH2-G-L-R-G-V-Y-Y-Y-
F-D-Y-COOH (XI), et F-D-Y-COOH (XI), and
(vi) le domaine CDR-H3 de formule (XII) suivante : NH2-D-V-G-L-F-L-P-Y- Y-Y-G-M-D-V-COOH (XII), et/ou - la région variable de la chaîne légère comprend au moins un CDR, de préférence au moins deu CDRs, et mieux les trois CDRs, choisi(s) parmi les CDR-L l , CDR-L2 et CDR-L3, dans laquelle : d) le domaine CDR-L l de chaîne légère est choisi parmi les domaines suivants : (ii) le domaine CDR-L l de formule (XIII) suivante : NH2-S-G-S-S- -I-G-N- (vi) the CDR-H3 domain of the following formula (XII): NH2-DVGLFLPY-YYGMDV-COOH (XII), and / or the variable light chain region comprises at least one CDR, preferably at least two CDRs, and better the three CDRs, selected from CDR-L 1, CDR-L2 and CDR-L3, wherein: d) the light chain CDR-L 1 domain is selected from the following domains: (ii) CDR-L 1 domain of the following formula (XIII): NH2-SGSS--IGN-
N-Y-V-S-COOH (XIII), N-Y-V-S-COOH (XIII),
(iii) le domaine CDR-Ll de formule (XIV) suivante : NH2-G-G-D-N-I-G-S- K-A-V-H-COOH (XIV), et (iii) the CDR-L1 domain of the following formula (XIV): NH 2 -G-G-D-N-I-G-S-K-A-V-H-COOH (XIV), and
(iv) le domaine CDR-LL de formule (XV) suivante : NH2-S-G-S-R-S-N-I-G-I- N-L-V-N-COOH (XV), e) le domaine CDR-L2 de chaîne légère est choisi parmi les domaines suivants : (iv) the CDR-LL domain of the following formula (XV): NH2-S-G-S-R-S-N-I-G-I-N-L-V-N-COOH (XV), e) the CDR-L2 light chain domain is selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-L2 de formule (XVI) suivante : NH2-X4-N-N-K-R-P-S- COOH (XVI). dans laquelle X4 est un résidu d'acide aminé choisi parmi D et K  (i) the CDR-L 2 domain of the following formula (XVI): NH 2 -X 4 -N-N-K-R-P-S-COOH (XVI). wherein X4 is an amino acid residue selected from D and K
(ii) le domaine CDR-L2 de formule (XVII) suivante : NH2-D-D-S-D-R-P-S- (ii) the CDR-L2 domain of the following formula (XVII): NH2-D-D-S-D-R-P-S-
COOH (XVII), et COOH (XVII), and
(iii) le domaine CDR-L2 de formule (XVIII) suivante : NH2-A-N-D-Q-R-P-S-(iii) the CDR-L2 domain of the following formula (XVIII): NH2-A-N-D-Q-R-P-S-
COOH (XVIII), et f) le domaine CDR-L3 de chaîne légère est choisi parmi les domaines suivants : COOH (XVIII), and f) the CDR-L3 light chain domain is selected from the following fields:
(i) le domaine CDR-L3 de formule (XIX) suivante : NH2-G-X5-W-D-S-S-L- S-X6-X7-V-COOH (XIX). dans laquelle : - X5 est un résidu d'acide aminé choisi parmi A et T. (i) the CDR-L3 domain of the following formula (XIX): NH2-G-X5-W-D-S-S-L-S-X6-X7-V-COOH (XIX). wherein: X5 is an amino acid residue selected from A and T.
- X6 est un résidu d'acide aminé choisi parmi V et A, et X6 is an amino acid residue selected from V and A, and
- X7 est un résidu d'acide aminé choisi parmi A, W et V, X7 is an amino acid residue selected from A, W and V,
(ii) le domaine CDR-L3 de formule (XX) suivante : NH2-G-S-W-D-I-G-L-G- A-Y-V-COOH (XX),  (ii) the CDR-L3 domain of the following formula (XX): NH 2 -G-S-W-D-I-G-L-G-A-Y-V-COOH (XX),
(iii) le domaine CDR-L3 de formule (XXI) suivante : NH2-Q-V-W-D-N-R-S- (iii) the CDR-L3 domain of the following formula (XXI): NH 2 -Q-V-W-D-N-R-S-
D-Q-V-V-COOH (XXI), et D-Q-V-V-COOH (XXI), and
(iv) le domaine CDR-L3 de formule (XXII) suivante : NH2-A-A-W-D-D-T-L- (iv) the CDR-L3 domain of the following formula (XXII): NH 2 -A-A-W-D-D-T-L-
S-G-Y-V-COOH (XXII). De préférence, un anticorps selon l'invention peut avoir une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H l . CDR-H2 et CDR-H3 choisis parmi ceux définis ci- dessus. S-G-Y-V-COOH (XXII). Preferably, an antibody according to the invention may have a heavy chain comprising all three CDR-H CDRs. CDR-H2 and CDR-H3 selected from those defined above.
De préférence, un anticorps selon l'invention peut avoir une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-Ll . CDR-L2 et CDR-L3 choisis parmi ceux définis ci- dessus. Preferably, an antibody according to the invention may have a light chain comprising the three CDRs CDR-Ll. CDR-L2 and CDR-L3 selected from those defined above.
Eu égard au domaine de liaison à l'antigène caractérisant un anticorps selon l'invention, ledit anticorps peut être plus particulièrement définis selon les sept variantes de réalisation dé »finies ci-après, In view of the binding domain to the antigen characterizing an antibody according to the invention, said antibodies may be more particularly defined according to the seven embodiments of "finite below,
Bien entendu, au vu de ce qui précède, la présente invention n'a pas pour vocation à être limitée à ces seules sept variantes de réalisation.  Of course, in view of the above, the present invention is not intended to be limited to these seven variants.
Anticorps désigné « HE4B-33 » Antibody designated "HE4B-33"
Selon une première variante de réalisation, un anticorps selon l'invention peut être défini comme suit. Un anticorps selon invention peut avoir une chaine lourde comprenant les trois CDRs CDR-H 1 . CDR-H2 et CDR-H3 suivants : According to a first variant embodiment, an antibody according to the invention can be defined as follows. An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the three CDR-H 1 CDRs. CDR-H2 and CDR-H3:
a. CDR-H 1 de séquence SEQ ID NO 10,  at. CDR-H 1 of sequence SEQ ID No. 10,
b. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 1 1 , et  b. CDR-H2 of SEQ ID NO 1 1 sequence, and
c. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 12.  vs. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 12.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaine lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 7, et comprenant les CDR-H 1 , CDR-H2 et CDR-H3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 10, 1 1 et 12.  An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID No. 7, and comprising CDR-H 1, CDR-H 2 and CDR-H 3, respectively of sequences SEQ ID No. 10, 11 and 12.
Egalement, un anticorps selon l'invention peut avoir une chaine légère comprenant les trois CDRs CDR-L1. CDR-L2 et CDR-L3 suivants : Also, an antibody according to the invention may have a light chain comprising all three CDR-CDRs. CDR-L2 and CDR-L3 following:
d. CDR-L1 de séquence SEQ ID NO 13.  d. CDR-L1 of sequence SEQ ID No. 13.
e. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 14, et  e. CDR-L2 of sequence SEQ ID No. 14, and
f. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 15.  f. CDR-L3 of sequence SEQ ID NO 15.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaine légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 9, et comprenant les CDR-L1, CDR-L2 et CDR-L3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 13, 14 et 15.  An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 9, and comprising CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, respectively, SEQ ID NO: 13, 14 and 15.
Anticorps désigné « HE4B- 1 7 » Antibody designated "HE4B-1 7"
Selon une seconde variante de réalisation, un anticorps selon l'invention peut être défini comme suit.  According to a second variant embodiment, an antibody according to the invention can be defined as follows.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une chaine lourde comprenant les trois CDRs CDR-H 1 , CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H 1, CDR-H 2 and CDR-H 3:
g. CDR-H 1 de séquence SEQ ID NO 20.  boy Wut. CDR-H 1 of sequence SEQ ID No. 20.
h. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 21. et  h. CDR-H2 sequence SEQ ID NO 21. and
i. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 22.  i. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 22.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaine lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 17, et comprenant les CDR-H 1. CDR-H2 et CDR-H3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 20, 21 et 22. 0 An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with SEQ ID NO 17, comprising the CDR-H 1. CDR-H2 and CDR-H3, respectively of sequences SEQ ID No. 20, 21 and 22. 0
Egalement, un anticorps selon l'invention peut avoir une chaine légère comprenant les trois CDRs CDR-L1 , CDR-L2 et CDR-L3 suivants : Also, an antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
j. CDR-L1 de séquence SEQ ID NO 23,  j. CDR-L1 of sequence SEQ ID NO 23,
k. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 24, et  k. CDR-L2 of sequence SEQ ID NO 24, and
1. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 25.  1. CDR-L3 of sequence SEQ ID No. 25.
Un anticorps selon l 'invention peut avoir une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 19, et comprenant les CDR-L1 . CDR-L2 et CDR-L3. respectivement, de séquences SEQ ID NO 23, 24 et 25. An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with SEQ ID NO 19, comprising the CDR-L1. CDR-L2 and CDR-L3. respectively, of SEQ ID NO 23, 24 and 25.
Anticorps désigné « HE4B-27 » Antibody designated "HE4B-27"
Selon une troisième variante de réalisation, un anticorps selon l 'invention peut être défini comme suit. According to a third alternative embodiment, an antibody according to the invention can be defined as follows.
Un anticorps selon l 'invention peut avoir une chaine lourde comprenant les trois CDRs CDR-H 1 , CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H 1, CDR-H2 and CDR-H3:
m. CDR-H l de séquence SEQ ID NO 30.  m. CDR-H l of sequence SEQ ID NO 30.
n. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 31. et  not. CDR-H2 sequence SEQ ID NO 31. and
o. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 32.  o. CDR-H3 of sequence SEQ ID NO 32.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaine lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 27, et comprenant les CDR-H I , CDR-H2 et CDR-H3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 30, 3 1 et 32. Egalement, un anticorps selon l'invention peut avoir une chaine légère comprenant les trois CDRs CDR-L1 , CDR-L2 et CDR-L3 suivants : An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 27, comprising the CDR-H I, CDR-H2 and CDR-H3, respectively SEQ ID Nos. 30, 31 and 32. Also, an antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
p. CDR-L1 de séquence SEQ ID NO 33.  p. CDR-L1 of sequence SEQ ID NO 33.
q. CDR-L2 de séquence 34, et  q. CDR-L2 of sequence 34, and
r. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 35.  r. CDR-L3 of SEQ ID NO 35 sequence.
Un anticorps selon l' invention peut avoir une région variable de chaine légère possédant au moins 80% d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 29. et comprenant les CDR-L1. CDR-L2 et CDR-L3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 33, 34 et 35. An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 29. and including CDR-L1. CDR-L2 and CDR-L3, respectively, of SEQ ID NOs 33, 34 and 35.
Anticorps désigné « HE5B-35 » Antibody designated "HE5B-35"
Selon une quatrième variante de réalisation, un anticorps selon l'invention peut être défini comme suit.  According to a fourth variant embodiment, an antibody according to the invention can be defined as follows.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H 1 , CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H 1, CDR-H 2 and CDR-H 3:
s. CDR-H 1 de séquence SEQ ID NO 40,  s. CDR-H 1 of sequence SEQ ID NO 40,
t. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 41 . et  t. CDR-H2 of sequence SEQ ID NO 41. and
u. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 42.  u. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 42.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaine lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 37, et comprenant les CDR-H 1. CDR-H2 et CDR-H3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 40, 41 et 42.  An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 37, and comprising CDR-H 1. CDR-H2 and CDR-H3, respectively of sequences SEQ ID No. 40, 41 and 42.
Egalement, un anticorps selon l'invention peut avoir une chaine légère comprenant les trois CDRs CDR-L1 , CDR-L2 et CDR-L3 suivants :  Also, an antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
v. CDR-L1 de séquence SEQ ID O 43.  v. CDR-L1 sequence SEQ ID O 43.
w. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 44, et  w. CDR-L2 of sequence SEQ ID NO 44, and
X. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 45.  X. CDR-L3 of sequence SEQ ID No. 45.
Un anticoips selon l'invention peut avoir une région variable de chaine légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 39, et comprenant les CDR-L 1 , CDR-L2 et CDR-L3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 43, 44 et 45.  An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID No. 39, and comprising CDR-L 1, CDR-L 2 and CDR-L 3, respectively of sequences SEQ ID Nos. 43, 44 and 45.
Anticorps désigné « HE5C-144 » Antibody designated "HE5C-144"
Selon une cinquième variante de réalisation, un anticorps selon l'invention peut être défini comme suit.  According to a fifth variant embodiment, an antibody according to the invention can be defined as follows.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une chaine lourde comprenant les trois CDRs CDR-H 1. CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDR-CDR-H 1. CDR-H2 and CDR-H3:
y. CDR-H1 de séquence SEQ ID NO 50,  there. CDR-H1 of sequence SEQ ID NO 50,
?.. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 51 , et aa. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 52. CDR-H2 of sequence SEQ ID NO 51, and aa. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 52.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 47. et comprenant les CDR-H 1 . CDR-H2 et CDR-H3. respectivement, de séquences SEQ ID NO 50, 51 et 52.  An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 47 and comprising CDR-H 1. CDR-H2 and CDR-H3. respectively, of SEQ ID NO 50, 51 and 52 sequences.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-L1 , CDR-L2 et CDR-L3 suivants : An antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
bb. CDR-L1 de séquence SEQ ID NO 53,  bb. CDR-L1 of sequence SEQ ID NO 53,
ce. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 54. et  this. CDR-L2 of sequence SEQ ID NO 54. and
dd. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 55.  dd. CDR-L3 of sequence SEQ ID No. 55.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 49, et comprenant les CDR-L1 , CDR-L2 et CDR-L3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 53, 54 et 55. An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with SEQ ID NO 49, and comprising CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3, respectively, SEQ ID NO 53, 54 and 55.
Anticorps désigné « HE5C-123 »  Antibody designated "HE5C-123"
Selon une sixième variante de réalisation, un anticorps selon l'invention peut être défini comme suit.  According to a sixth variant embodiment, an antibody according to the invention can be defined as follows.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H1 , CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3:
ee. CDR-H 1 de séquence SEQ ID NO 60,  ee. CDR-H 1 of sequence SEQ ID NO 60,
ff. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 61 , et  ff. CDR-H2 of sequence SEQ ID NO 61, and
gg. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 62.  gg. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 62.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 57, et comprenant les CDR-H1, CDR-H2 et CDR-H3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 60, 61 et 62.  An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 57, and comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, respectively, SEQ ID NO 60, 61 and 62.
Egalement, un anticorps selon l'invention peut avoir une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-L 1 , CDR-L2 et CDR-L3 suivants : Also, an antibody according to the invention may have a light chain comprising the following three CDRs CDR-L 1, CDR-L2 and CDR-L3:
hh. CDR-Ll de séquence SEQ ID NO 63,  hh. CDR-L1 of sequence SEQ ID NO 63,
ii. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 64. et jj. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 65. ii. CDR-L2 of sequence SEQ ID NO 64. and not a word. CDR-L3 of sequence SEQ ID No. 65.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 59, et comprenant les CDR-L 1 , CDR-L2 et CDR-L3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 63, 64 et 65.  An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 59, and comprising CDR-L 1, CDR-L 2 and CDR-L 3, respectively of SEQ ID NOs 63, 64 and 65.
Anticorps désigné « HE3C-29 » Antibody designated "HE3C-29"
Selon une septième variante de réalisation, un anticorps selon l'invention peut être défini comme suit.  According to a seventh embodiment variant, an antibody according to the invention can be defined as follows.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H 1 . CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  An antibody according to the invention may have a heavy chain comprising the three CDR-H 1 CDRs. CDR-H2 and CDR-H3:
kk. CDR-H 1 de séquence SEQ ID NO 70,  kk. CDR-H 1 of sequence SEQ ID NO 70,
11. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 71. et  11. CDR-H2 of sequence SEQ ID No. 71. and
mm. CDR-H3 de séquence SEQ ID O 72.  mm. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 72.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 67. et comprenant les CDR-H1, CDR-H2 et CDR-H3, respectivement, de séquences SEQ ID NO 70. 71 et 72.  An antibody according to the invention may have a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 67 and including CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3, respectively, SEQ ID NO 70, 71 and 72.
Egalement, un anticorps scion l'invention peut avoir une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-LI . CDR-L2 et CDR-L3 suivants :  Also, an antibody according to the invention may have a light chain comprising all three CDR-CDRs. CDR-L2 and CDR-L3 following:
nn. CDR-LI de séquence SEQ ID NO 73.  nn. CDR-LI of sequence SEQ ID No. 73.
oo. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 74. et  oo. CDR-L2 of sequence SEQ ID No. 74. and
pp. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 75.  pp. CDR-L3 of sequence SEQ ID No. 75.
Un anticorps selon l'invention peut avoir une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 69, et comprenant les CDR-LI , CDR-L2 et CDR-L3. respectivement, de séquences SEQ ID O 73. 74 ct75.  An antibody according to the invention may have a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 69, and comprising CDR-LI, CDR-L2 and CDR-L3. respectively, of SEQ ID O 73 74 ct75.
Comme il ressort des exemples et figures ci-après, un anticorps scion l'invention est particulièrement avantageux en ce qu'il présente, outre une excellente affinité à l'égard du récepteur HER4 humain, une spécificité pour ledit récepteur HER4 humain par rapport au récepteur HER3 humain (voir, notamment, figures 2, 3 A. 4A à D et 5A à C). As appears from the examples and figures below, a scion antibody of the invention is particularly advantageous in that it has further excellent affinity with respect to human HER4 receptor, HER4 receptor specificity for said human with respect to the human HER3 receptor (see, in particular, FIGS. 2, 3 A. 4A to D and 5A to C).
Au vu de ce qui précède, et comme il ressort des exemples et figures ci-après, un anticorps scion invention est de préférence choisi parmi le groupe comprenant les anticorps désignés HE4B-33. HE4B-17, HE4B-27. HE5B-35, HE5C-144, HE5C- 123 et HE3C-29.  In view of the above, and as is apparent from the examples and figures below, a scion antibody invention is preferably selected from the group consisting of antibodies designated HE4B-33. HE4B-17, HE4B-27. HE5B-35, HE5C-144, HE5C-123 and HE3C-29.
Encore plus préférentiellement, un anticorps selon l'invention est choisi parmi le groupe comprenant les anticorps désignés HE4B-33. HE4B- 17, HE4B-27 et HE5B-35, et plus particulièrement HE4B-33 et HE4B- 1 7.  Even more preferably, an antibody according to the invention is chosen from the group comprising the antibodies designated HE4B-33. HE4B-17, HE4B-27 and HE5B-35, and more particularly HE4B-33 and HE4B-17.
En effet, il s'agit des anticorps selon l'invention pour lesquels une affinité particulièrement significative à l'égard du récepteur HER4 humain a été observée (voir figures 5 A à 5C).  Indeed, it is antibodies according to the invention for which a particularly significant affinity for the human HER4 receptor has been observed (see FIGS. 5A to 5C).
Enfin, un anticorps scion l'invention est en outre intéressant en ce qu'il se lie aux isoformes JM-a et JM-b du sous-domaine IV du récepteur HER4 humain (voir figure 7).  Finally, an antibody according to the invention is furthermore interesting in that it binds to the JM-α and JM-b isoforms of the sub-domain IV of the human HER4 receptor (see FIG. 7).
Scion un autre de ses aspects, et comme indiqué précédemment, la présente invention concerne également un fragment d'un anticorps selon l'invention.  In another aspect, and as indicated previously, the present invention also relates to a fragment of an antibody according to the invention.
Ainsi, la présente invention concerne tout fragment d'un anticorps tel que défini dans l'une des sept variantes de réalisation ci-dessus, sous réserve bien entendu que le dit fragment selon l'invention conserve sa capacité de liaison à l'antigène, à savoir au récepteur HER4 humain. Thus, the present invention relates to any fragment of an antibody as defined in one of the seven embodiments above, subject of course that the said fragment according to the invention maintains its binding capacity to the antigen, namely to the human HER4 receptor.
De préférence, un fragment d'un anticorps selon l'invention peut être choisi parmi le groupe comprenant Fv, Fab, F(ab')2, Fab', dsFv, scFv, sc(Fv)2 et diabodies. Evaluation de liaison compétitive  Preferably, a fragment of an antibody according to the invention may be chosen from the group comprising Fv, Fab, F (ab ') 2, Fab', dsFv, scFv, sc (Fv) 2 and diabodies. Competitive Binding Evaluation
La présente invention vise un anticorps humain anti-HER4 isolé se liant sélectivement au domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain. La technique dite de l'« epitope binning » peut être utilisée pour identifier des anticorps qui entrent dans le champ d'application de la présente invention. La technique de l'« epitope binning » se réfère à l'utilisation d'analyses de liaison compétitive pour identifier des paires d'anticorps qui sont, ou ne sont pas, capables de se lier simultanément à HER4, identifiant ainsi des paires d'anticorps qui se lient au même épitope d'HER4 ou sur des épitopes d'HER4 se chevauchant. Les expérimentations d'« epitope binning » fournissent la preuve que des cpi topes distincts sur le plan antigcnique sont présents. La compétition pour la liaison à HER4 peut être évaluée pour n'importe quelle paire d'anticorps ou de fragments. Par exemple, en utilisant les réactifs de détection appropriés, la spécificité de liaison des anticorps ou des fragments de liaison à partir de n'importe quelle source peut être comparée à la spécificité de liaison d'un anticorps scion la présente invention. La technique de l'« epitope binning » peut être effectuée avec des anticorps « isolés » ou avec des surnageants de culture de cellules. Souvent, la technique de l'« epitope binning » est réalisée avec les premiers tours de surnageants de clones pour guider le choix des clones qui seront développés ultérieurement. Les anticorps à comparer doivent être sensiblement homogènes au niveau des domaines de liaison à l'antigène. Dans le cas d'anticorps « bispécifiques » ou « bifonetionnels », la spécificité de liaison des deux sites de liaison différents doit être évaluée de façon indépendante. The present invention provides an isolated human anti-HER4 antibody that selectively binds to the extracellular domain of the human HER4 receptor. The so-called "epitope binning" technique can be used to identify antibodies that fall within the scope of the present invention. The epitope binning technique refers to the use of competitive binding assays to identify antibody pairs that are, or are not, able to bind HER4 simultaneously, thereby identifying pairs of antibodies. antibodies that bind to the same HER4 epitope or on HER4 epitopes are overlapping. "Epitope binning" experiments provide evidence that antigenically distinct cells are present. Competition for HER4 binding can be assessed for any pair of antibodies or fragments. For example, by using the appropriate detection reagents, the binding specificity of antibodies or binding fragments from any source can be compared to the binding specificity of an antibody according to the present invention. The "epitope binning" technique can be performed with "isolated" antibodies or with cell culture supernatants. Often, the "epitope binning" technique is performed with the first rounds of clone supernatants to guide the choice of clones that will be developed later. The antibodies to be compared should be substantially homogeneous at the level of the antigen binding domains. In the case of "bispecific" or "bifonetional" antibodies, the binding specificity of the two different binding sites must be evaluated independently.
Les anticorps de la présente invention peuvent être testés pour la liaison spécifique par tout procédé quelconque connu de l'homme de l'art. De nombreux formats d'évaluation de liaison compétitive peuvent être utilisés pour P« epitope binning ». Les essais immunologiques qui peuvent être utilisés comprennent, mais ne sont pas limités, à des systèmes utilisant des techniques de dosages compétitifs telles que le Western blots, les dosages radioimmunologiques, l 'ELIS A, les dosages immunologiques en « sandwich », les dosages d'immunoprécipitation. les dosages de précipitine, les dosages de précipitine par gel diffusion, les dosages immunoradiométriques. les dosages immunologiques fluorescents, les immunoessais sur protéines A et les tests de fixation au complément. Ces analyses sont courantes et bien connues de l'homme de l'art (voir, par exemple, Ausubel et al., eds. 1994 Current Protocols in Moleeular Biology, vol. 1 , John Wiley & Sons. Inc.. New York). En outre, des essais de routine de type « cross-blocking » tels que décrits dans Antibodics (A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow et David Lane, 1988) peuvent être effectués. Méthodes de production des anticorps humains anti-H ER4 selon l'invention The antibodies of the present invention can be tested for specific binding by any method known to those skilled in the art. Many competitive binding evaluation formats can be used for epitope binning. Immunological assays that can be used include, but are not limited to, systems employing competitive assay techniques such as Western blots, radioimmunoassays, ELISA, sandwich immunoassays, assays, and assays. immunoprecipitation. precipitin assays, precipitin gel diffusion assays, immunoradiometric assays. fluorescent immunoassays, protein A immunoassays and complement fixation tests. Such assays are common and well known to those skilled in the art (see, for example, Ausubel et al., 1994. Current Protocols in Molecular Biology, Vol 1, John Wiley & Sons, Inc., New York). . In addition, cross-blocking routine assays as described in Antibodics (A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane, 1988) can be performed. Methods of producing human anti-H ER4 antibodies according to the invention
Les anticorps humains anti-HER4 selon l' invention peuvent être produits par toutes techniques connues de l'homme de l'art, telles que, sans limitation, toute technique chimique, biologique, génétique ou enzymatique, soit seule, soit en combinaison.  The anti-HER4 human antibodies according to the invention may be produced by any techniques known to those skilled in the art, such as, without limitation, any chemical, biological, genetic or enzymatic technique, either alone or in combination.
Connaissant la séquence d'acides aminés de la séquence souhaitée, l'homme de l'art peut aisément produire ces anticorps, par des techniques classiques pour la production de polypeptides.  Knowing the amino acid sequence of the desired sequence, those skilled in the art can readily produce these antibodies by conventional techniques for the production of polypeptides.
Par exemple, ils peuvent être synthétisés en utilisant la méthode en phase solide bien connues, de préférence en utilisant un appareil de synthèse de peptides disponibles dans le commerce (tel que celui d'Applied Biosystems, Poster City. Californie) et en suivant les instructions du fabricant.  For example, they can be synthesized using the well known solid phase method, preferably using a commercially available peptide synthesizer (such as Applied Biosystems, Poster City, CA) and following the instructions. from the manufacturer.
En variante, les anticorps de l'invention peuvent être synthétisés par des techniques d'ADN recombinant également bien connues de l 'homme de l'art. Par exemple, les anticorps peuvent être obtenus en tant que produits d'expression d'ADN après incorporation de séquences d'ADN' codant pour les anticorps selon l'invention dans des vecteurs d'expression et introduction de ces vecteurs dans des hôtes euearyotes ou procaryotes appropriées qui exprimeront les anticorps souhaités, à partir desquels ils pourront être ensuite isolés en utilisant des techniques également bien connues de l'homme de l'art. Alternatively, antibodies of the invention can be synthesized by also well known recombinant DNA techniques of the skilled artisan. For example, antibodies can be obtained as DNA expression products after incorporation of DNA sequences encoding the antibodies according to the invention into expression vectors and introduction of such vectors into hosts or euearyotes Suitable prokaryotes will express the desired antibodies, from which they can then be isolated using techniques also well known to those skilled in the art.
En conséquence, la présente invention vise également un acide nucléique codant un anticorps humain anti-HER4 selon l'invention ou un de ses fragments, comme indiqué précédemment.  Accordingly, the present invention also relates to a nucleic acid encoding a human anti-HER4 antibody according to the invention or a fragment thereof, as indicated above.
Typiquement, ledit acide nucléique est une molécule d'ADN ou d'ARN, qui peut être inclus dans n'importe quel vecteur approprié, tel qu'un plasmide, un cosmide, un épisome, un chromosome artificiel, un phage ou un vecteur viral.  Typically, said nucleic acid is a DNA or RNA molecule, which may be included in any suitable vector, such as a plasmid, a cosmid, an episome, an artificial chromosome, a phage or a viral vector .
Les termes « vecteur », « vecteur de clonage » et « vecteur d'expression » signifient le véhicule par lequel une séquence d'AD ou d'ARN (par exemple un gène étranger) peut être introduite dans une cellule hôte, de manière à transformer l'hôte et promouvoir l'expression (par exemple, la transcription et la traduction) de la séquence introduite. Ainsi, un autre objet de l'invention concerne un vecteur comprenant un acide nucléique de l'invention. The terms "vector", "cloning vector" and "expression vector" mean the vehicle by which an AD or RNA sequence (eg, a foreign gene) can be introduced into a host cell, so that transform the host and promote the expression (eg, transcription and translation) of the introduced sequence. Thus, another subject of the invention relates to a vector comprising a nucleic acid of the invention.
De tels vecteurs peuvent comprendre des éléments régulateurs, tels qu'un promoteur, un amplificateur, un terminateur et autres, pour provoquer ou orienter l'expression des anticorps lors de l'administration à un sujet. Des exemples de promoteurs et d'amplificateurs utilisés dans un vecteur d'expression pour cellules animales comprennent le promoteur précoce et Γ amplificateur de SV40 (Mizukami T. et al. 1987), le promoteur LTR et Γ amplificateur du virus de la leucémie de souris Moloney (Kuwana Y et al. 1987), le promoteur (Mason JO et al. 1985) et l'amplificateur (Gillies SD et al. 1 983) de la chaîne H d'immunoglobuline et autres.  Such vectors may include regulatory elements, such as a promoter, enhancer, terminator, and the like, to cause or guide the expression of antibodies when administered to a subject. Examples of promoters and enhancers used in an animal cell expression vector include the SV40 early promoter and enhancer (Mizukami T. et al., 1987), the mouse leukemia virus LTR and enhancer promoter. Moloney (Kuwana Y et al., 1987), the promoter (Mason JO et al., 1985) and the enhancer (Gillies SD et al., 1998) of the immunoglobulin H chain and the like.
Tout vecteur d'expression pour cellules animales peut être utilisé, à condition qu'un gène codant pour la région C d'un anticorps humain puisse être insérée et exprimée. Des exemples de vecteurs appropriés comprennent pAGE107 (Miyaji H et al , 1990), pAGE103 (Mizukami T et al, 1987), pHSG274 (Brady G et al , 1984), pKCR (O'Hare K ét al , 1 81 ). PSGL bêta d2-4 (Miyaji H et al , 1990) et autres.  Any expression vector for animal cells can be used, provided that a gene encoding the C region of a human antibody can be inserted and expressed. Examples of suitable vectors include pAGE107 (Miyaji H et al., 1990), pAGE103 (Mizukami T et al., 1987), pHSG274 (Brady G et al., 1984), pKCR (O'Hare K et al., 81). PSGL beta d2-4 (Miyaji H et al, 1990) and others.
D'autres exemples de plasmides comprennent des plasmides de réplication comprenant une origine de réplication. ou des plasmides integratifs, tels que pUC, pcDNA, pBR. et autres.  Other examples of plasmids include replication plasmids comprising an origin of replication. or integrative plasmids, such as pUC, pcDNA, pBR. and others.
D'autres exemples de vecteurs viraux comprennent les rétrovirus. les adénovirus. le virus de l'herpès et les vecteurs AAV. De tels virus recombinants peuvent être produits par des techniques connues de l'homme de l'art, par exemple par transfection de cellules d'encapsidation ou par transfection transitoire avec des plasmides ou des virus auxiliaires. Des exemples typiques de cellules d'encapsidation du virus comprennent des cellules PA317, cellules PsiCRlP. cellules GPcnv +, cellules 293, etc. Des protocoles détaillés pour la production de ces virus recombinants incapables de se répliquer peuvent être trouvés par exemple dans WO 95/14785, WO 96/22378, US 5,882,877, US 6,013.5 16. US 4,861 ,719, US 5,278,056 et WO 94/19478.  Other examples of viral vectors include retroviruses. adenoviruses. Herpes virus and AAV vectors. Such recombinant viruses can be produced by techniques known to those skilled in the art, for example by transfection of packaging cells or by transient transfection with plasmids or helper viruses. Typical examples of virus packaging cells include PA317 cells, PsiCR1P cells. GPcnv + cells, 293 cells, etc. Detailed protocols for the production of these recombinant viruses unable to replicate can be found for example in WO 95/14785, WO 96/22378, US 5,882,877, US 6,013,516. US 4,861,719, US 5,278,056 and WO 94/19478.
Un autre objet de la présente invention concerne une cellule hôte qui a été transfectée, infectée ou transformée par un acide nucléique et/ou un v ecteur selon l'invention. Le terme « transformation » désigne l'introduction d'un gène, ADN ou séquence d'ARN « étranger » (i.e. extrinsèque ou extracellulaire) dans une cellule hôte, de sorte que la cellule hôte exprimera le gène ou la séquence introduit(e) pour produire une substance souhaitée, typiquement une protéine ou une enzyme codée par le gène ou la séquence introduit(e). Une cellule hôte qui reçoit et exprime l'AD ou l'ARN introduit a été « transformé ». Another object of the present invention is a host cell which has been transfected, infected or transformed with a nucleic acid and / or a vector according to the invention. The term "transformation" refers to the introduction of a "foreign" (ie extrinsic or extracellular) gene, DNA or "RNA" sequence into a host cell, so that the host cell will express the introduced gene or sequence. to produce a desired substance, typically a protein or an enzyme encoded by the introduced gene or sequence. A host cell that receives and expresses the AD or introduced RNA has been "transformed".
Les acides nucléiques de l'invention peuvent être utilisés pour produire un anticorps de l'invention dans un système d'expression approprié. Le terme « système d'expression » désigne une cellule hôte et un vecteur compatible dans des conditions appropriées, par exemple pour l'expression d'une protéine codée par un ADN étranger porté par le vecteur et introduit dans la cellule hôte.  The nucleic acids of the invention can be used to produce an antibody of the invention in an appropriate expression system. The term "expression system" refers to a host cell and a compatible vector under appropriate conditions, for example for the expression of a protein encoded by a foreign DNA carried by the vector and introduced into the host cell.
Les systèmes d'expression courants comprennent des cellules hôtes E. coli et des vecteurs plasmidiques, des cellules hôtes d'insectes et des vecteurs de Baculovirus et des cellules hôtes et vecteurs de mammifères. D'autres exemples de cellules hôtes comprennent, sans limitation, des cellules procaryotes (bactéries) et des cellules eucaryotes (telles que des cellules de levure, cellules de mammifères, cellules d'insectes, cellules végétales, etc). Des exemples spécifiques comprennent E. coli, des levures du genre Kluyveromyces ou Saccharomyces, des lignées cellulaires de mammifères (par exemple, les cellules Vero, CHO, 3T3, COS, etc.) ainsi que des cultures cellulaires de mammifères primaires ou établies (par exemple, produites à partir de lymphoblastes, de fibroblastes, cellules embryonnaires, cellules épithéliales, cellules nerveuses, adipocytes, etc.). Des exemples comprennent également des cellules de souris SP2/0-Agl4 (ATCC CRL1581 ), des cellules de souris P3X63-Ag8.653 (ATCC CRL 1580). des cellules CHO dans lesquelles un gène de la dihydrofolate reductase (« gène DHFR ») est défectueux (Urlaub G et al, 1980), des cellules de rat YB2/3HL.P2.G1 1.16Ag.20 (ATCC CRL1662, dénommé « cellule YB2/0 »), et autres.  Common expression systems include E. coli host cells and plasmid vectors, insect host cells and Baculovirus vectors and mammalian host and vector cells. Other examples of host cells include, but are not limited to, prokaryotic cells (bacteria) and eukaryotic cells (such as yeast cells, mammalian cells, insect cells, plant cells, etc.). Specific examples include E. coli, Kluyveromyces or Saccharomyces yeasts, mammalian cell lines (e.g., Vero, CHO, 3T3, COS cells, etc.) as well as primary or established mammalian cell cultures (eg for example, produced from lymphoblasts, fibroblasts, embryonic cells, epithelial cells, nerve cells, adipocytes, etc.). Examples also include mouse SP2 / 0-Agl4 cells (ATCC CRL1581), P3X63-Ag8.653 mouse cells (ATCC CRL 1580). CHO cells in which a dihydrofolate reductase gene ("DHFR gene") is defective (Urlaub G et al, 1980), rat cells YB2 / 3HL.P2.G1 1.16Ag.20 (ATCC CRL1662, referred to as "cell"). YB2 / 0 "), and others.
La présente invention concerne également un procédé pour la préparation d'un anticorps humain comprenant une étape de récupération d'un anticorps produit par une cellule hôte telle que décrite ci-dessus. The present invention also relates to a method for the preparation of a human antibody comprising a step of recovering an antibody produced by a host cell as described above.
Egalement, la présente invention concerne un procédé de production d'une cellule hôte recombinante exprimant un anticorps selon l'invention, ledit procédé comprenant les étapes consistant à : (i) l'introduction in vitro ou ex vivo d'un acide nucléique ou un vecteur recombinant tel que décrit ci-dessus dans un cellule hôte compétente ; (ii) la mise en culture in vitro ou ex vivo de la cellule hôte recombinante obtenue à l'issue de l'étape (i) ; et (iii ) éventuellement, la sélection des cellules qui expriment et/ou sécrètent lesdits anticorps. De telles cellules hôtes recombinantes peuvent être utilisées pour la production des anticorps de l'invention. Also, the present invention relates to a method for producing a recombinant host cell expressing an antibody according to the invention, said method comprising the steps of: (i) in vitro or ex vivo introduction of a nucleic acid or a recombinant vector as described above into a competent host cell; (ii) culturing in vitro or ex vivo the recombinant host cell obtained at the end of step (i); and (iii) optionally, selecting cells that express and / or secrete said antibodies. Such recombinant host cells can be used for the production of the antibodies of the invention.
Les anticorps de l'invention sont séparés convenablement du milieu de culture par des procédures de purification d'immunoglobulines telles que, par exemple, la protéine A-Sépharose, la chromatographie sur hydroxyapatite, l'électrophorèse sur gel, la dialyse ou la chromatographie d'affinité. The antibodies of the invention are conveniently separated from the culture medium by immunoglobulin purification procedures such as, for example, protein A-Sepharose, hydroxyapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis or chromatography. 'affinity.
Concernant le domaine CH d'un anticorps humain, cela peut être n'importe quelle région qui appartient à l'immunoglobuline humaine, mais celles de la classe des IgG sont appropriées et l'une quelconque des sous-classes appartenant à la classe des IgG, comme IgGl, IgG2, IgG3 et IgG4, peut également être utilisée. Egalement, concernant le domaine CL d'un anticorps humain, cela peut être n'importe quelle région qui appartient à une Ig, et celles de la classe kappa ou de la classe lambda peut être utilisée.  Regarding the CH domain of a human antibody, this may be any region that belongs to human immunoglobulin, but those of the IgG class are appropriate and any of the subclasses belonging to the IgG class such as IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 may also be used. Also, concerning the CL domain of a human antibody, this may be any region that belongs to an Ig, and those of the kappa class or the lambda class may be used.
Des procédés pour produire des anticorps recombinants impliquent des techniques classiques de transfection d'ADN recombinant et de gènes recombinant bien connus de homme de l'art (Morrison SL et al ( 1984) ; US 5,202,238 ; US 5.204.244).  Methods for producing recombinant antibodies involve conventional recombinant DNA and recombinant gene transfection techniques well known to those skilled in the art (Morrison SL et al (1984) US 5,202,238; US 5,204,244).
Des méthodes de production d'un anticorps selon l'invention basées sur des techniques classiques de transfection d'ADN et de gènes recombinants sont bien connus de l'homme de l'art (Rieehmann L. et al, 1988; Neuberger MS et al 1985). Methods of producing an antibody according to the invention based on standard DNA transfection and recombinant gene techniques are well known to those skilled in the art (Rieehmann L. et al., 1988; Neuberger MS et al. 1985).
Le Fab selon la présente invention peut être obtenu en traitant un anticorps qui réagit spécifiquement avec HER4 humain avec une protéase, la papaïne. De plus, le Fab peut être produit par insertion de l'ADN codant le Fab de l'anticorps dans un vecteur pour un système d'expression procaryote, ou pour un système d'expression eucaryote. et en introduisant le vecteur dans un procaryote ou eucaryote (selon le cas) pour exprimer le Fab.  The Fab according to the present invention can be obtained by treating an antibody that specifically reacts with human HER4 with a protease, papain. In addition, the Fab can be produced by inserting the DNA encoding the Fab of the antibody into a vector for a prokaryotic expression system, or for a eukaryotic expression system. and introducing the vector into a prokaryotic or eukaryotic (as appropriate) to express Fab.
Le F(ab')2 de la présente invention peut être obtenu en traitant un anticorps qui réagit spécifiquement avec HER4 humain avec une protéase. la pepsine. De plus, le F(ab')2 peut être produit par la liaison de Fab' décrit ci-dessous par l'intermédiaire d'une liaison thioéther ou d'une liaison disulfure. The F (ab ') 2 of the present invention can be obtained by treating an antibody that specifically reacts with human HER4 with a protease. pepsin. In addition, F (ab ') 2 can be produced by the Fab' binding described below via a thioether bond or a disulfide bond.
Le Fab' selon la présente invention peut être obtenu en traitant F(ab')2 qui réagit spécifiquement avec HER4 humain avec un agent réducteur, le dithiothréitol. Egalement, le fragment Fab' peut être produit par l'insertion de l'ADN codant le fragment Fab' de l'anticorps dans un vecteur d'expression pour procaryote, ou un vecteur d'expression pour eucaryote, et en introduisant le vecteur dans un procaryote ou eucaryote (scion le cas) pour effectuer son expression.  The Fab 'according to the present invention can be obtained by treating F (ab') 2 which specifically reacts with human HER4 with a reducing agent, dithiothreitol. Also, the Fab 'fragment can be produced by inserting the DNA encoding the Fab' fragment of the antibody into a prokaryotic expression vector, or a eukaryotic expression vector, and introducing the vector into a prokaryote or eukaryote (scion case) to perform its expression.
Le scFv de la présente invention peut être produit par l'obtention d'ADNc codant pour les domaines VH et VL décrits précédemment, la construction d'ADN codant pour le scFv, l'insertion de l'ADN dans un vecteur d'expression pour procaryote. ou un vecteur d'expression pour eucaryote, et en introduisant ensuite le vecteur d'expression dans un procaryote ou eucaryote (le cas échéant) pour exprimer le scFv.  The scFv of the present invention can be produced by obtaining cDNAs encoding the VH and VL domains described above, the DNA construct encoding the scFv, inserting the DNA into an expression vector for prokaryote. or an eukaryotic expression vector, and then introducing the expression vector into a prokaryotic or eukaryotic (if appropriate) to express scFv.
Des modifications de la séquence d'acides aminés(s) des anticorps décrits dans la présente description sont également envisagées. Par exemple, il peut être souhaitable d'améliorer l'affinité de liaison et/ou d'autres propriétés biologiques de l'anticorps.  Modifications of the amino acid sequence (s) of the antibodies described in the present description are also contemplated. For example, it may be desirable to improve the binding affinity and / or other biological properties of the antibody.
Des modifications et des changements peuvent être apportés à la structure des anticorps de la présente invention, et dans les séquences d'ADN les codant, mais toujours dans l'idée d'obtenir une molécule fonctionnelle qui code pour un anticorps ayant les caractéristiques souhaitables.  Modifications and changes can be made to the structure of the antibodies of the present invention, and to the DNA sequences encoding them, but still with the idea of obtaining a functional molecule that encodes an antibody having the desirable characteristics.
En procédant à des changements dans les séquences d'acides aminés, l'index d'hydropathie des acides aminés peut être considéré. L'importance de l'index d'hydropathie d'acide aminé pour conférer une fonction biologique interactive à une protéine est généralement comprise dans la technique. Il est accepté que le caractère hydropathique relatif de l'acide aminé contribue à la structure secondaire de la protéine résultante, qui à son tour définit l'interaction de la protéine avec d'autres molécules, par exemple, des enzymes, des substrats, des récepteurs, de l'ADN, des anticorps, des antigènes, et autres. Chaque acide aminé s'est vu attribuer un index d'hydropathie sur la base de leurs caractéristiques d'hydrophobicité et de charge : isoleucine (+4,5) ; valine (+4,2) ; leucine (3.8) ; phenylalanine (+2,8) ; cystéine cystine (+ 2.5) ; méthionine (1 ,9) ; alanine (1 ,8) ; glycine (-0,4) ; thréonine (-0,7) ; serine (-0,8) ; tryptophane (-0,9) ; tyrosine (-1 ,3) ; proline (-1,6) ; histidine (-3.2) ; glutamate (-3,5) ; glutamine (-3,5) ; aspartate (-3,5) ; asparagine (-3,5) ; lysine (-3,9) et l'arginine (-4.5). By making changes in the amino acid sequences, the hydropathic index of amino acids can be considered. The importance of the amino acid hydropathy index for imparting an interactive biological function to a protein is generally understood in the art. It is accepted that the relative hydropathic nature of the amino acid contributes to the secondary structure of the resulting protein, which in turn defines the interaction of the protein with other molecules, for example, enzymes, substrates, receptors, DNA, antibodies, antigens, and others. Each amino acid was assigned a hydropathic index on the basis of their hydrophobicity and charge characteristics: isoleucine (+4.5); valine (+4.2); leucine (3.8); phenylalanine (+2.8); cysteine cystine (+ 2.5); methionine (1, 9); alanine (1, 8); glycine (-0.4); threonine (-0.7); serine (-0.8); tryptophan (-0.9); tyrosine (-1, 3); proline (-1.6); histidine (-3.2); glutamate (-3.5); glutamine (-3.5); aspartate (-3.5); asparagine (-3.5); lysine (-3.9) and arginine (-4.5).
Un autre objet de la présente invention englobe également des variants conservant les fonctions des anticorps de la présente invention.  Another object of the present invention also encompasses variants that retain the functions of the antibodies of the present invention.
Des « variants conservant les fonctions » sont ceu dans lesquels un résidu d'acide aminé donné dans une protéine ou une enzyme a été modifié sans altérer la conformation globale et la fonction du polypeptide y compris, mais sans s'y limiter, le remplacement d'un acide aminé par un autre ayant la même propriété (telles que. par exemple, la polarité, le potentiel de liaison hydrogène, acide, basique, hydrophobe, aromatique et similaires). Les acides aminés autres que ceux indiqués comme conservés peuvent différer dans une protéine de sorte que le pourcentage de similarité de séquence de protéines ou d'acides aminés entre deux protéines de fonction similaire peut varier et peut être, par exemple, de 70 % à 99 % telle que déterminée selon un schéma d'alignement par la méthode de cluster, dans lequel la similarité est basée sur l'algorithme MEGALIGN. Un «variant ayant sa fonction conservée» comprend également un polypeptide qui présente une identité d'acides aminés d'au moins 60 % telle que déterminée par les algorithmes BLAST ou FASTA, de préférence au moins 75 %, plus préférablement au moins 85 %, encore de préférence au moins 90 %, et même plus préférablement au moins 95 %, et qui possède des propriétés ou des fonctions identiques ou sensiblement similaires à celles de la protéine native ou parente à laquelle elle est comparée.  "Functional retaining variants" are those in which a given amino acid residue in a protein or enzyme has been modified without altering the overall conformation and function of the polypeptide including, but not limited to, replacement of an amino acid with another having the same property (such as, for example, polarity, hydrogen bonding potential, acidic, basic, hydrophobic, aromatic and the like). Amino acids other than those indicated as conserved may differ in a protein so that the percentage of sequence similarity of proteins or amino acids between two proteins of similar function may vary and may be, for example, 70% to 99%. % as determined according to an alignment scheme by the cluster method, in which the similarity is based on the MEGALIGN algorithm. "Variant with conserved function" also includes a polypeptide which has an amino acid identity of at least 60% as determined by BLAST or FASTA algorithms, preferably at least 75%, more preferably at least 85%, still more preferably at least 90%, and even more preferably at least 95%, and which has properties or functions identical or substantially similar to those of the native or parent protein to which it is compared.
Deux séquences d'acides aminés sont « sensiblement homologues » ou « sensiblement similaires » lorsque plus de 80 %, de préférence plus de 85 %, de préférence plus de 90 % des acides aminés sont identiques, ou plus de 90 %, de préférence plus de 95 %, sont similaires (fonctionnellement identiques) sur toute la longueur de la séquence la plus courte. De préférence, les séquences similaires ou homologues sont identi iées par alignement à l'aide, par exemple, de GCG (i.e. « Genetics Computer Group », Program Manual for the GCG package, version 7, Madison. Wisconsin). le programme « pileup », ou tout autre algorithmes de comparaison de séquences tels que BLAST, FASTA, etc.  Two amino acid sequences are "substantially homologous" or "substantially similar" when more than 80%, preferably more than 85%, preferably more than 90% of the amino acids are identical, or more than 90%, more preferably 95%, are similar (functionally identical) throughout the length of the shortest sequence. Preferably, similar or homologous sequences are identified by alignment using, for example, GCG (i.e. "Genetics Computer Group", Program Manual for the GCG package, version 7, Madison, Wisconsin). the "pileup" program, or any other sequence comparison algorithm such as BLAST, FASTA, etc.
Par exemple, certains acides aminés peuvent être substitués par d'autres acides aminés dans une structure protéique sans perte appréciable d'activité. Etant donné que la capacité interactive et la nature d'une protéine définissent l'activité fonctionnelle biologique de la protéine, certaines substitutions d'acides aminés peuvent être faites dans une séquence protéique, et. bien entendu, dans sa séquence d'ADN codant pour, tout en obtenant néanmoins une protéine avec des propriétés similaires. Il est donc envisagé que diverses modifications peuvent être apportées dans les séquences d'anticorps de l'invention, ou des séquences d'ADN correspondantes qui codent pour lesdits anticorps, sans perte appréciable de leur activité biologique. For example, some amino acids may be substituted by other amino acids in a protein structure without appreciable loss of activity. Since the interactive capacity and the nature of a protein define functional activity protein, certain amino acid substitutions can be made in a protein sequence, and. of course, in its DNA sequence coding for, while still obtaining a protein with similar properties. It is therefore contemplated that various modifications may be made in the antibody sequences of the invention, or the corresponding DNA sequences that encode said antibodies, without appreciable loss of their biological activity.
Il est connu de la technique que certains acides aminés peuvent être substitués par d'autres acides aminés ayant un index ou score hydropathique similaire et encore conduisent à une protéine avec une activité biologique similaire, c'est à dire d'obtenir toujours une protéine biologique fonctionnellement équivalente.  It is known in the art that certain amino acids may be substituted with other amino acids having a similar hydropathic index or score and still lead to a protein with a similar biological activity, i.e. still obtain a biological protein. functionally equivalent.
Comme indiqué ci-dessus, les substitutions d' acides aminés sont donc généralement basées sur la similarité relative des substituants de chaîne latérale d'acide aminé, par exemple, leur hydrophobie hydrophilic, charge, taille, et autres. Des exemples de telles substitutions sont bien connus de l'homme de l'art et concernent notamment : arginine et lysine; glutamate et aspartate ; serine et thréonine, glutamine et asparagine ; et valine, leucine et isoleucine.  As indicated above, amino acid substitutions are therefore generally based on the relative similarity of amino acid side chain substituents, for example, their hydrophilic hydrophobicity, charge, size, and the like. Examples of such substitutions are well known to those skilled in the art and include: arginine and lysine; glutamate and aspartate; serine and threonine, glutamine and asparagine; and valine, leucine and isoleucine.
Un autre type de modification d'acides aminés de l'anticorps de l'invention peut être utile pour l 'altération du motif de glycosylation initial de l'anticorps. Another type of amino acid modification of the antibody of the invention may be useful for the alteration of the original glycosylation pattern of the antibody.
Par « altération », on entend la suppression d'un ou plusieurs groupements glucidiques présents dans l'anticorps et/ou en ajoutant un ou plusieurs sites de glycosylation qui ne sont pas présents dans l'anticorps.  By "alteration" is meant the removal of one or more carbohydrate moieties present in the antibody and / or by adding one or more glycosylation sites that are not present in the antibody.
La glycosylation des anticorps est typiquement N- liée.  The glycosylation of the antibodies is typically N-linked.
Par « N-lié », on entend faire référence à la fixation du groupement glucidique à la chaîne latérale d'un résidu asparagine. Les séquences tripeptidiques asparagine- X - sérine et asparagine -X- thréonine, dans lesquelles X représente n'importe quel acide aminé sauf la proline, sont les séquences de reconnaissance pour la fixation enzymatique du groupement glucidique à la chaîne latérale de asparagine. Ainsi, la présence de l'une de ces séquences tripeptidiques dans un polypeptide crée un site de glycosylation potentiel. L'addition de sites de glycosylation à l'anticorps est effectuée convenablement en modifiant la séquence d'acides aminés telle qu'elle contient une ou plusieurs des séquences tripeptidiques décrites ci -dessus (pour les sites de glycosylation N-liés). Un autre type de modification co val ente implique le couplage par voie chimique ou enzymatique de glycosides à l'anticorps. Ces procédures sont avantageuses en ce qu'elles ne nécessitent pas de production de l'anticorps dans une cellule hôte qui a des capacités de glycosylation pour une glycosylation N- ou O- lié. En fonction du mode de couplage utilisé, le sucre (s) peut être attachée à (a) l'arginine et Γ histidine, (b) aux groupes carboxyle libres, (c) aux groupes sulfhydryle libres tels que ceux de la cystéinc, (d) aux groupes hydroxyle libres tels que ceux de la sérine, de la thréonine, de 1 * orhydroxyprol ine, (e) aux résidus aromatiques tels que ceux de la phénylalanine, de la tyrosine ou du tryptophane. ou (f) au groupe amide de la glutamine. Par exemple, de tels procédés sont décrits dans WO 87/05330. By "N-linked" is meant to refer to the attachment of the carbohydrate moiety to the side chain of an asparagine residue. The tripeptide sequences asparagine-X-serine and asparagine-X-threonine, wherein X represents any amino acid except proline, are the recognition sequences for the enzymatic attachment of the carbohydrate moiety to the asparagine side chain. Thus, the presence of one of these tripeptide sequences in a polypeptide creates a potential glycosylation site. The addition of glycosylation sites to the antibody is conveniently accomplished by modifying the amino acid sequence as it contains one or more of the tripeptide sequences described above (for N-linked glycosylation sites). Another type of co-valent modification involves the chemical or enzymatic coupling of glycosides to the antibody. These procedures are advantageous in that they do not require production of the antibody in a host cell that has glycosylation capabilities for N- or O-linked glycosylation. Depending on the coupling method used, the sugar (s) can be attached to (a) arginine and histidine, (b) free carboxyl groups, (c) free sulfhydryl groups such as those of cysteine, ( d) free hydroxyl groups such as those of serine, threonine, 1 * orhydroxyprol ine, (e) aromatic residues such as those of phenylalanine, tyrosine or tryptophan. or (f) amide group of glutamine. For example, such methods are described in WO 87/05330.
L'élimination de tous groupements glucidiques présents sur l'anticorps peut être effectuée chimiquement ou enzymatiquement. La déglycosylation chimique nécessite l'exposition de l'anticorps à acide trirluorométhancsulfonique ou un composé équivalent. Ce traitement résulte dans le clivage de la plupart ou de la totalité des sucres à l'exception du sucre de liaison (N- acétylglucosamine ou N- acétylgalactosamine), tout en laissant l'anticorps intact.  The removal of any carbohydrate moieties present on the antibody can be carried out chemically or enzymatically. Chemical deglycosylation requires exposure of the trirluoromethanesulfonic acid antibody or an equivalent compound. This treatment results in the cleavage of most or all of the sugars with the exception of the binding sugar (N-acetylglucosamine or N-acetylgalactosamine), while leaving the antibody intact.
La déglycosylation chimique est décrite par Sojahr H. et al, (1987) et par Edge, AS. et al. (1981). Le clivage enzymatique de groupements glucidiques sur des anticorps peut être réalisée par l'utilisation de diverses endo- et exo-glycosidases de la manière décrite par Thotakura. NR. et al. ( 1987).  Chemical deglycosylation is described by Sojahr H. et al. (1987) and Edge, AS. et al. (nineteen eighty one). Enzymatic cleavage of carbohydrate moieties on antibodies can be achieved by the use of various endo- and exo-glycosidases as described by Thotakura. NR. et al. (1987).
Un autre type de modification co val ente de l'anticorps comprend la liaison de l'anticorps à l'une des variétés de polymères non protéiques, par exemple, le Polyéthylène glycol, le polypropylène glycol, ou les polyoxyalkylènes, à la manière décrite dans US 4,640,835 ; US 4,496,689 ; US 4.301.144 ; US 4,670.41 7 ; US 4,791 ,192 ou US 4.1 79.337.  Another type of effective modification of the antibody involves binding of the antibody to one of the non-proteinaceous polymer varieties, for example, polyethylene glycol, polypropylene glycol, or polyoxyalkylenes, as described in US Pat. US 4,640,835; US 4,496,689; US 4,301,144; US 4,670,41 7; US 4,791,192 or US 4.1 79,337.
Il peut aussi être souhaitable de modifier l'anticorps de invention en ce qui concerne sa fonction effectrice. par exemple, de manière à améliorer la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC) et/ou la cytotoxicité dépendante du complément (CDC) de nticorps. Ceci peut être réalisé en introduisant une ou plusieurs substitutions d'acides aminés dans une région Fc de l'anticorps. En variante ou en outre, un ou plusieurs résidu(s) cystéinc peu(ven)t être introduit (s) dans la région Fc. pennettant ainsi la formation de liaisons disulfure inter-chaîne dans cette région. L'anticorps homodimérique ainsi engendré peut avoir une capacité d'internalisation améliorée et/ou une augmentation de la destruction cellulaire médiée par le complément et/ou de la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC) (Caron PC et al , 1992 ; Shopes ct B. 1992). It may also be desirable to modify the antibody of the invention with respect to its effector function. for example, to enhance antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) and / or complement-dependent cytotoxicity (CDC) of antibody. This can be accomplished by introducing one or more amino acid substitutions into an Fc region of the antibody. Alternatively or additionally, one or more cysteine residue (s) may be introduced into the Fc region. thus allowing the formation of inter-chain disulfide bonds in this region. antibody The homodimeric nature thus generated may have enhanced internalization capacity and / or increased complement-mediated cell killing and / or antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) (Caron PC et al, 1992, Shopes et al., 1992). ).
Selon un mode de réalisation avantageux, un anticorps selon l'invention peut avoir au moins une partie de sa région Fc. de préférence le profil de glycosylation d'au moins une partie de la région Fc, qui est modifiée/mutée de manière à améliorer sa cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC). A ce titre, il est plus particulièrement fait référence à la technologie EMABling® et notamment au document U.S. 7,931,895 ou encore à la brochure disponible sur le lien suivant : \vwvv. libbiomanufacturing.com/fr/brochure.  According to an advantageous embodiment, an antibody according to the invention may have at least part of its Fc region. preferably the glycosylation pattern of at least a portion of the Fc region, which is modified / mutated so as to enhance its antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC). As such, reference is made more particularly to the EMABling® technology and in particular to U.S. 7,931,895 or to the brochure available on the following link: \ vwvv. libbiomanufacturing.com/fr/brochure.
Ainsi, avantageusement, un anticorps selon l'invention peut être caractérisé en ce qu'il possède sur son site de glycosylation (Asn 297) du Fcy des structures glycanniques sélectionnées parmi les formes :  Thus, advantageously, an antibody according to the invention can be characterized in that it has at its glycosylation site (Asn 297) Fcy glycan structures selected from the forms:
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000035_0001
GO, GOF, 01 et GI F.  GO, GOF, 01 and GI F.
f§j GlcNAc φ Mtumo.se φ Galactose Fucose dans lequel la teneur en formes GO + G 1 + GOF + G I F est supérieure à 60 % et la teneur en formes GOF + GI F est inférieure à 50 %, de préférence la teneur en G 1 F est inférieure à 60 %, voire même inférieure à 30 %, et mieux comprise entre 20 et 45 % ou encore entre 25 et 40 %.  Glucose Fucose in which the content of forms GO + G 1 + GOF + GIF is greater than 60% and the content of forms GOF + GI F is less than 50%, preferably the content of G 1 F is less than 60%, or even less than 30%, and more preferably between 20 and 45% or between 25 and 40%.
Dans un autre aspect, la présente invention concerne un anticorps anti-HER4 humain selon l'invention administré à un sujet tel que. par exemple, un sujet souffrant d'un cancer exprimant HER4, en combinaison avec au moins un autre agent thérapeutique distinct dudit anticorps anti-HER4 humain selon l'invention. In another aspect, the present invention provides a human anti-HER4 antibodies according to the invention administered to a subject such as. e.g., a subject suffering from a cancer expressing HER4, in combination with at least one other therapeutic agent separate from said human anti-HER4 antibodies according to the invention.
Ces autres agents thérapeutiques, notamment figurés par des agents cytotoxiques, sont définis plus en détails ci-après. Selon une variante préférée, un anticorps anti-HER4 humain selon l'invention peut être administré à un sujet tel que, par exemple, un sujet souffrant d'un cancer exprimant HER4, en combinaison avec au moins un autre agent thérapeutique distinct dudit anticorps anti-HER4 humain selon l'invention et figuré par au moins un inhibiteur de tyrosine kinase (TKI). These other therapeutic agents, in particular represented by cytotoxic agents, are defined in more detail below. In a preferred embodiment, a human anti-HER4 antibodies according to the invention may be administered to a subject such as, for example, a subject suffering from a cancer expressing HER4, in combination with at least one other therapeutic agent separate said antibodies Human HER4 according to the invention and represented by at least one tyrosine kinase inhibitor (TKI).
Immunoconjugués immunoconjugates
Un anticorps de l'invention peut être conjugué à un marqueur détectable pour former un immunoconjugué anti-HER4. Des marqueurs détectables convenables comprennent, par exemple, un radio-isotope, un marqueur fluorescent, un marqueur chimioluminescent. un marqueur enzymatique, un marqueur bioluminescent ou l'or colloïdal. Des procédés de fabrication et de détection de tels imm unoconj ugués marqués de façon détectable sont bien connus de l'homme de l'art, et sont décrits plus en détail ci- dessous.  An antibody of the invention may be conjugated to a detectable label to form an anti-HER4 immunoconjugate. Suitable detectable markers include, for example, a radioisotope, a fluorescent label, a chemiluminescent label. an enzymatic marker, a bioluminescent marker or colloidal gold. Methods of making and detecting such detectably labeled immunoconjugates are well known to those skilled in the art, and are described in more detail below.
Le marqueur détectable peut être un radio-isotope qui est détecté par autoradiographie.  The detectable label may be a radioisotope that is detected by autoradiography.
Les isotopes qui sont particulièrement utiles aux fins de la présente invention sont 3H, ,25I, 131I, 35S et 14C. Isotopes which are particularly useful for the purposes of the present invention are 3 H, 25 I, 131 I, 35 S and 14 C.
Les immunoconjugués anti-HER4 peuvent aussi être marqués avec un composé fluorescent. La présence d'un anticorps marqué par fluorescence est déterminée en exposant 1 ' immunoconjugué à la lumière à la longueur d'onde appropriée et en détectant la fluorescence résultante. Des composés de marquage fluorescents comprennent l'isothiocyanate de fluorescéine. la rhodamine, phycoérythrine. phycocyanine, l'allophycocyanine, l'o- phtaldéhyde et la fluorescamine.  The anti-HER4 immunoconjugates can also be labeled with a fluorescent compound. The presence of a fluorescently labeled antibody is determined by exposing the immunoconjugate to light at the appropriate wavelength and detecting the resulting fluorescence. Fluorescent labeling compounds include fluorescein isothiocyanate. rhodamine, phycoerythrin. phycocyanin, allophycocyanin, o-phthaldehyde and fluorescamine.
Alternativement, les immunoconjugués anti-HER4 peuvent être marqués de manière détectable par couplage d'un anticorps à un composé chimioluminescent. La présence de l 'i mmunoconj ugué marqué par chimioluminescence est déterminée en détectant la présence de luminescence qui apparaît au cours d'une réaction chimique. Des exemples de composés de marquage chimioluminescents comprennent le luminol, l'isoluminol, un ester d'acridinium aromatique, un imidazolc. un sel d'acridinium et un ester d'oxalate. De même, un composé bioluminescent peut être utilisé pour marquer les immunoconjugués anti-HER4 de la présente invention. La bioluminescenee est un type de chimioluminescencc trouvée dans des systèmes biologiques dans lesquels une protéine catalytique augmente l'efficacité de la réaction de chimioluminescence. La présence d'une protéine bioluminescente est déterminée en détectant la présence de luminescence. Des composés bioluminescents qui sont utiles pour le marquage comprennent la luciférine, la luciférasc et l'aequorine. Alternatively, the anti-HER4 immunoconjugates can be detectably labeled by coupling an antibody to a chemiluminescent compound. The presence of the chemiluminescent labeled conjugate is determined by detecting the presence of luminescence that occurs during a chemical reaction. Examples of chemiluminescent labeling compounds include luminol, isoluminol, aromatic acridinium ester, imidazole. an acridinium salt and an oxalate ester. Similarly, a bioluminescent compound can be used to label the anti-HER4 immunoconjugates of the present invention. Bioluminescence is a type of chemiluminescence found in biological systems in which a catalytic protein increases the efficiency of the chemiluminescence reaction. The presence of a bioluminescent protein is determined by detecting the presence of luminescence. Bioluminescent compounds that are useful for labeling include luciferin, luciferasc, and aequorin.
Alternativement, les immunoconjugués anti-HER4 peuvent être marqués de manière détectable par la liaison d'un anticorps anti-HER4 à une enzyme. Lorsque le conjugué anti-HER4-enzyme est incubé en présence du substrat approprié, la fraction de l'enzyme réagit avec le substrat pour produire un fragment chimique qui peut être détecté, par exemple, par spectrophotométrie. fiuorométrie ou des moyens visuels. Des exemples d'enzymes qui peuvent être utilisées pour marquer de manière détectable des immunoconjugués polyspécifiques comprennent la β-galactosidase, la glucose oxydase, la peroxydase et la phosphatase alcaline.  Alternatively, the anti-HER4 immunoconjugates can be detectably labeled by the binding of an anti-HER4 antibody to an enzyme. When the anti-HER4-enzyme conjugate is incubated in the presence of the appropriate substrate, the fraction of the enzyme reacts with the substrate to produce a chemical moiety that can be detected, for example, by spectrophotometry. fluorometry or visual means. Examples of enzymes that can be used to detectably detect polyspecific immunoconjugates include β-galactosidase, glucose oxidase, peroxidase, and alkaline phosphatase.
L'homme de l'art connaîtra tout autre marqueur approprié qui peut être utilisé conformément à la présente invention. La liaison de groupements marqueurs au anticorps anti-HER4 peut être accomplie en utilisant des techniques classiques connues de l'homme de l'art (Kennedy et al, Clin. Chim. Aeta 70 : 1 , 1976 ; Schurs et al, Clin. Chim. Acta 81 : 1 , 1977 ; Shih et al, Int'l J. Cancer 46 : 1101 , 1990 ; Stein et al, Cancer Res. 50 : 1330, 1 90).  Those skilled in the art will know any other suitable marker that can be used in accordance with the present invention. The binding of marker groups to the anti-HER4 antibody can be accomplished using standard techniques known to those skilled in the art (Kennedy et al., Clin Chem Aeta 70: 1, 1976; Schurs et al, Clin Chim Acta 81: 1, 1977, Shih et al, Int'l J. Cancer 46: 1101, 1990, Stein et al, Cancer Res 50: 1330, 1990).
En outre, la commodité et la polyvalence de la détection immunochimique peut être améliorée en utilisant des anticorps anti-HER4 qui ont été conjugués avec l'avidinc. la streptavidinc et la biotine (voir, par exemple, Wilchek et al (eds.), Methods in Enzymology (Vol. 184) (Académie Press, 1990) ; Bayer et al, Methods in Molecular Biology, Vol. 10, 149 - 162 (Manson, ed, The Humana Press, Inc., 1992)).  In addition, the convenience and versatility of immunochemical detection can be improved by using anti-HER4 antibodies that have been conjugated with avidin. streptavidin and biotin (see, e.g., Wilchek et al (eds.), Methods in Enzymology (Vol 184) (Academic Press, 1990), Bayer et al, Methods in Molecular Biology, Vol 10, 149-162. (Manson, ed, The Humana Press, Inc., 1992)).
Des méthodes pour effectuer des dosages immunologiques sont bien établies (Cook et Self.Monoclonal Antibodies : Production, Engineering and Clinical Application. 180-208 (Rittcr et Ladyman, eds, Cambridge University Press, 1995) ; Perry. Monoclonal Antibodies : Principles and Applications. 107-120 (Birch et Lennox, eds, Wiley-Liss. Inc. 1995) ; Diamandis, Immunoassay (Académie Press, Inc., 1996)). Dans un autre aspect, la présente invention concerne un conjugué anticorps- médicament anti-HER4. Un « conjugué anticorps-médicament anti-HER4 », tel qu'utilisé ici, se réfère à un anticorps anti-HER4 selon l'invention conjugué à un agent thérapeutique. De tels conjugué anticorps-médicament anti-HER4 produisent des effets bénéfiques cliniquement sur les cellules exprimant HER4 lorsqu'ils sont administrés à un sujet tel que, par exemple, un sujet souffrant d'un cancer exprimant HER4, en général quand ils sont administrés seuls, mais aussi en combinaison avec d'autres agents thérapeutiques. Methods for performing immunological assays are well established (Cook and Self.Monoclonal Antibodies: Production, Engineering and Clinical Application, 180-208 (Rittcr and Ladyman, eds, Cambridge University Press, 1995); Perry Monoclonal Antibodies: Principles and Applications 107-120 (Birch and Lennox, eds, Wiley-Liss, Inc. 1995), Diamandis, Immunoassay (Academy Press, Inc., 1996)). In another aspect, the present invention relates to an anti-HER4 antibody-drug conjugate. An "anti-HER4 antibody-drug conjugate" as used herein refers to an anti-HER4 antibody according to the invention conjugated to a therapeutic agent. Such anti-HER4 antibody-drug conjugates produce clinically beneficial effects on HER4-expressing cells when administered to a subject such as, for example, a subject suffering from HER4-expressing cancer, generally when administered alone. but also in combination with other therapeutic agents.
Dans des modes de réalisation typiques, un anticorps anti-HER4 est conjugué à un agent cytotoxique, tel que le conjugué anticorps-médicament résultant exerce un effet cytotoxique ou cytostatique sur une cellule exprimant HER4 (par exemple, une cellule cancéreuse exprimant HER4) lorsque pris ou intemalisé par la cellule. Des groupements particulièrement appropriés pour la conjugaison à des anticorps sont des agents chimiothérapeutiques, des enzymes de conversion en promédicament, des isotopes ou composés radioactifs, ou des toxines. Par exemple, un anticorps anti-HER4 peut être conjugué à un agent cytotoxique tel qu'un agent chimiothérapeutique ou une toxine (par exemple, un agent cytostatique ou cytocide, tels que. par exemple, l'abrine, la ricine A, l'exotoxine de Pseudomonas, ou la toxine diphtérique).  In typical embodiments, an anti-HER4 antibody is conjugated to a cytotoxic agent, such that the resulting antibody-drug conjugate exerts a cytotoxic or cytostatic effect on an HER4 expressing cell (e.g., an HER4 expressing cancer cell) when taken or internalized by the cell. Particularly suitable groups for conjugation to antibodies are chemotherapeutic agents, prodrug converting enzymes, radioactive isotopes or compounds, or toxins. For example, an anti-HER4 antibody may be conjugated to a cytotoxic agent such as a chemotherapeutic agent or a toxin (for example, a cytostatic agent or cytocide, such as, for example, abrin, ricin A, Pseudomonas exotoxin, or diphtheria toxin).
Des classes utiles d'agents cytotoxiques comprennent, par exemple, des agents antitubuline. des auristatines, des ligands de sillon mineur de l'ADN, des inhibiteurs de réplication de l'ADN, des agents aîkylants (par exemple, des complexes de platine tels que le cisplatine. le mono(platine), le bis(platine) et des complexes de platine tri-nucléaire et carboplatine), des anthracyclines, des antibiotiques, des antifolates, des antimétabolites, des sensibilisateurs de chimiothérapie, des duoearmycines. des étoposides. etoposides pyrimidines fluorées, etoposides ionophores. des lexitropsines, des nitrosourées. des platinols, des composés pré-formés, des antimétabolites de la p urine, des puromycines. des sensibilisateurs de rayonnement, des stéroïdes. des taxanes. des inhibiteurs de topoisomérase, des alcaloïdes de la pervenche, ou autres.  Useful classes of cytotoxic agents include, for example, antitubulin agents. auristatins, minor groove ligands of DNA, DNA replication inhibitors, alkylating agents (eg, platinum complexes such as cisplatin, mono (platinum), bis (platinum) and tri-nuclear platinum and carboplatin complexes), anthracyclines, antibiotics, antifolates, antimetabolites, chemotherapy sensitizers, duoearmycins. etoposides. andoposides fluorinated pyrimidines, and ionophoreoposides. lexitropsins, nitrosoureas. platinols, pre-formed compounds, urine antimetabolites, puromycins. radiation sensitizers, steroids. taxanes. topoisomerase inhibitors, periwinkle alkaloids, or the like.
Des agents cytotoxiques individuels comprennent, par exemple, un androgène, l'anthramycine (AMC), l'asparaginase, la 5-azacytidine, l'azathioprine, la bléomycine. le busulfan, la buthionine sulfoximine, la camptothécine. le carboplatine. la camiustine (BSNU), le CC- 1065 (Li et al. Cancer Res. 42: 999-1004, 1 982). le chlorambucil. la cisplatin, la colchicine, le cyclophosphamide. la cytarabine, la cytidine, l'arabinoside, la cytochalasine B, la dacarbazine, la dactinomycine (auparavant actinomycine), la daunorubicine, la décarbazine, le docétaxel, la doxorubieine, un oestrogène, la 5- fluordéoxyuridine, l'étoposide phosphate (VP-16), le 5-fluorouracile, la gramicidine D. l'hydroxyurée, l'idarubicine, l'ifosfamide, l'irinotécan, la lomustine (CCNU), la méchloréthamine, le melphalan, la 6-mercaptopurine, le méthotrexate, la mithramycine. la mitomycine C, la mitoxantrone, la nitroimidazole, le paclitaxel, la plicamycine, la procarbizine, la streptozotocine, le ténoposidc (VM-26), la 6-thioguanine. le thioTEPA, le topotécan, la vinblastine, la vincristine et la vinorelbine. Individual cytotoxic agents include, for example, androgen, anthramycin (AMC), asparaginase, 5-azacytidine, azathioprine, bleomycin. busulfan, buthionine sulfoximine, camptothecin. carboplatin. Camiustine (BSNU), CC-1065 (Li et al Cancer Res 42: 999-1004, 1998). chlorambucil. the cisplatin, colchicine, cyclophosphamide. cytarabine, cytidine, arabinoside, cytochalasin B, dacarbazine, dactinomycin (previously actinomycin), daunorubicin, decarbazine, docetaxel, doxorubiein, estrogen, 5-fluordeoxyuridine, etoposide phosphate (VP) 16), 5-fluorouracil, gramicidin D. hydroxyurea, idarubicin, ifosfamide, irinotecan, lomustine (CCNU), mechlorethamine, melphalan, 6-mercaptopurine, methotrexate, mithramycin. mitomycin C, mitoxantrone, nitroimidazole, paclitaxel, plicamycin, procarbizine, streptozotocin, tenoposide (VM-26), 6-thioguanine. thioTEPA, topotecan, vinblastine, vincristine and vinorelbine.
Des agents cytotoxiques particulièrement appropriés comprennent, par exemple, les dolastatincs (par exemple, auristatine E, AFP, MMAF, MDAR), ligands de sillon mineur de l'ADN (par exemple, énédiynes et lexitropsines), les duocarmycincs. les taxanes (par exemple, le paclitaxel et le docétaxel). les puromycines, les alcaloïdes de la pervenche, le CC- 1065. le SN-38 (7-cthyl- 1 -hydroxy-eamptothéine), le topotécan, la morpholino-doxorubicine, la rhizoxine. la cyanomorpholino-doxorubicine, Féchinomycine. la combrétastatine, la nétropsine, l'épothilone A et B. l'estramustine. les crvptophysines, cémadotiné. les maytansinoïdes, la discodermolide, l'éleuthcrobine et la mitoxantrone. Particularly suitable cytotoxic agents include, for example, dolastatins (e.g., auristatin E, AFP, MMAF, MDAR), minor groove ligands of DNA (e.g., enediynes and lexitropsins), duocarmycins. taxanes (for example, paclitaxel and docetaxel). puromycin, periwinkle alkaloids, CC-1065, SN-38 (7-ethyl-1-hydroxyeamoteine), topotecan, morpholino-doxorubicin, rhizoxin. cyanomorpholino-doxorubicin, fecinomycin. combretastatin, netropsin, epothilone A and B. estramustine. cryptophtins, coadotine. maytansinoids, the discodermolide, the éleuthcrobine and mitoxantrone.
Dans certains modes de réalisation, un agent cytotoxique est un agent chimiothérapcutique conventionnel, tel que la doxorubieine, le paclitaxel. le melphalan, les vinca-alcaloïdes. le méthotrexate, la mitomycine C ou l'étoposide. En outre, des agents puissants tels que des analogues de CC- 1065. la calichéamicine, la maytansine, les analogues de la dolastatine 10, la rhizoxine et la palytoxine peuvent être liés à un anticorps anti-HER4.  In some embodiments, a cytotoxic agent is a conventional chemotherapeutic agent, such as doxorubicin, paclitaxel. melphalan, vinca-alkaloids. methotrexate, mitomycin C or etoposide. In addition, strong agents such as CC-1065 analogs, calichéamicin, maytansine, dolastatin 10 analogues, rhizoxine and palytoxine may be linked to an anti-HER4 antibody.
Dans des variantes spécifiques, l'agent cytotoxique ou cytostatique est l'auristatine E (également connu dans l'art comme la dolastatine- 10) ou un de ses dérivés. En règle générale, le dérivé d'auristatine E est, par exemple, un ester formé entre l'auristatine E et d'un céto-acide. Par exemple, l'auristatine E peut être mis à réagir avec de l'acide benzoïque paraacétyle ou de l'acide ben/.oylvalérique pour produire AEB et AEVB, respectivement. D'autres dérivés typiques de l'auristatine comprennent l'AFP (diméthylvaline-valine-dolaisoléuine-dolaproine-phénylalanine-p-phénylènediamine), MMAF (dovaline-valine-dolaisoléunine-dolaproine-phénylalanine), et MAE (auristatine E nionométhyle). La synthèse et la structure de l'auristatine E et ses dérivés sont décrits dans US 2003/0083263 ; WO 2002/088 1 72 et WO 2004/010957 ; US 6,884,869 ; US 6,323,315 ; US 6,239,104 ; US 6,034065 ; US 5,780,588 ; US 5,665,860 ; US 5,663,149 ; US 5,635,483 ; US 5,599,902 ; US 5,554,725 ; US 5,530,097 ; US 5,521,284 ; US 5.504, 191 ; US 5.410,024 ; US 5,138,036 ; US 5,076,973 ; US 4,986,988 ; US 4.978.744 ; US 4,879,278 ; US 4,816,444 et US 4,486.414 . In specific variants, the cytotoxic or cytostatic agent is auristatin E (also known in the art as dolastatin-10) or a derivative thereof. As a rule, the auristatin E derivative is, for example, an ester formed between auristatin E and a keto acid. For example, auristatin E may be reacted with paraacetyl benzoic acid or benyloyleric acid to produce AEB and AEVB, respectively. Other typical derivatives of auristatin include AFP (dimethylvaline-valine-dolaisoline-dolphinolene-phenylalanine-p-phenylenediamine), MMAF (dovaline-valine-dolaisoleiline-dolphin-phenylalanine), and MAE (auristatin E). nionométhyle). The synthesis and structure of auristatin E and its derivatives are described in US 2003/0083263; WO 2002/088172 and WO 2004/010957; US 6,884,869; US 6,323,315; US 6,239,104; US 6,03,4065; US 5,780,588; US 5,665,860; US 5,663,149; US 5,635,483; US 5,599,902; US 5,554,725; US 5,530,097; US 5,521,284; US 5,504,191; US 5,410,024; US 5,138,036; US 5,076,973; US 4,986,988; US 4,978,744; US 4,879,278; US 4,816,444 and US 4,486,414.
Dans d'autres variantes, l'agent cytotoxique est un agent de liaison au sillon mineur de l'ADN (voir US 6, 130.237). Par exemple, dans certains modes de réalisation, l'agent est un composé CBI. Dans d'autres modes de réalisation, l'agent est un ènediyne (par exemple, la calichéamicine).  In other variants, the cytotoxic agent is a minor groove binding agent of the DNA (see US 6, 130.237). For example, in some embodiments, the agent is a CBI compound. In other embodiments, the agent is an enediyne (eg, calicheamicin).
Dans certains modes de réalisation, un conjugué anticorps-médicament comprend un agent anti-tubuline. Des exemples d'agents anti-tubuline comprennent, par exemple, les taxanes (par exemple, le Taxol® (paclitaxel). le Taxotère® (docetaxel)), T67 (Tularik), les alcaloïdes de la pervenche (par exemple, la vincristinc, la vinblastine, la vindésine et la vinorelbinc), et les dolastat ines (par exemple, auristatine E, AFP, M M AP. MDAE, AEB, AEVB). D'autres agents anti -tubuline comprennent, par exemple, les dérivés de baccatine, des analogues de taxanes (par exemple, l'épothilone A et B), nocodazole. colchicine et colcimide. estramustine, cryptophysines, cémadotine, maytansinoïdes. combrétastatines, discodermolide, et éleutherobine. Dans certains modes de réalisation, l'agent cytotoxique est un maytansinoïde, un autre groupe d'agents anti- tubuline. Par exemple, dans des modes de réalisation spécifiques, le maytansinoïde est la maytansine ou le DM-1 (ImmunoGen, Inc. ; voir aussi Chari et al, Cancer Res. 52 : 127- 131, 1992).  In some embodiments, an antibody-drug conjugate comprises an anti-tubulin agent. Examples of anti-tubulin agents include, for example, taxanes (e.g., Taxol® (paclitaxel), Taxotere® (docetaxel)), T67 (Tularik), periwinkle alkaloids (e.g., vincristinc). , vinblastine, vindesine and vinorelbinc), and dolastatin (eg, auristatin E, AFP, MM AP, MDAE, AEB, AEVB). Other anti-tubulin agents include, for example, baccatin derivatives, taxane analogs (e.g., epothilone A and B), nocodazole. colchicine and colcimide. estramustine, cryptophysines, cemadotine, maytansinoids. combretastatines, discodermolide, and eleutherobine. In some embodiments, the cytotoxic agent is a maytansinoid, another group of anti-tubulin agents. For example, in specific embodiments, the maytansinoid is maytansine or DM-1 (ImmunoGen, Inc., see also Chari et al, Cancer Res 52: 127-131, 1992).
Dans d'autres modes de réalisation, l'agent cytotoxique est un antimetabolite. L'antimétabolite peut être, par exemple, un antagoniste de purine (par exemple, l'azothioprine ou le mycophénolate mofétil), un inhibiteur de la dihydrofolate réductase (par exemple, le méthotrexate), l'acyclovir, le gangeyelovir, la zidovudine, la vidarabine. la ribavirine, l'azidothymidine, la cytidine arabinoside. l'amantadine, la didésoxyuridine, 1 ' iododésoxyuridine, le poscarnet. ou la trifluridine.  In other embodiments, the cytotoxic agent is an antimetabolite. The antimetabolite may be, for example, a purine antagonist (e.g., azothioprine or mycophenolate mofetil), an inhibitor of dihydrofolate reductase (e.g., methotrexate), acyclovir, gangeyelovir, zidovudine, vidarabine. ribavirin, azidothymidine, cytidine arabinoside. amantadine, dideoxyuridine, iododeoxyuridine, poscarnet. or trifluridine.
Dans d'autres modes de réalisation, un anticorps anti-HER4 est conjugué à une enzyme de conversion de pro-médicament. L'enzyme de conversion de pro-médicament peut être fusionne de manière recombinante à l'anticorps ou conjugué chimiquement à celui-ci en utilisant des procédés connus. Des exemplaires d'enzymes de conversion promédicament sont la carboxypeptidase G2. β-glucuronidase, la pénicilline- V-amidase, la pénicilline-G-amidase, la β-lactamase, la β-glucosidase, la nitroréductasc et la carboxypeptidase A. In other embodiments, an anti-HER4 antibody is conjugated to a pro-drug conversion enzyme. The prodrug converting enzyme may be recombinantly fused to the antibody or chemically conjugated to the this using known methods. Examples of prodrug converting enzymes are carboxypeptidase G2. β-glucuronidase, penicillin-V-amidase, penicillin-G-amidase, β-lactamase, β-glucosidase, nitroreductase and carboxypeptidase A.
Des techniques pour la conjugaison d'agents thérapeutiques à des protéines, et en particulier des anticorps, sont bien connues (A mon et al, Monoclonal Antibodies And Cancer Thcrapy (Reisfeld et al. eds. Alan R. Liss, Inc., 1985) ; Hcllstrom et al, Controlled Drug Delivery (Robinson et al Eds, Marcel Deiker, Inc., 2e éd., 1987) ; Thorpe, Monoclonal Antibodies '84 : Biological And Cl i ni cal Applications (Pinchera et al eds, 1985) ; Monoclonal Antibodies For Cancer Détection And Thcrapy (Baldwin et al eds, Académie Press, 1985) ; Thorpe et al, 1982, Immunol. Rev. 62: 119-58 ; WO 89/12624).  Techniques for the conjugation of therapeutic agents to proteins, and particularly antibodies, are well known (A mon et al, Monoclonal Antibodies and Cancer Thcrapy (Reisfeld et al., Alan R. Liss, Inc., 1985). Hcllstrom et al, Controlled Drug Delivery (Robinson et al Eds, Marcel Deiker, Inc., 2nd ed., 1987) Thorpe, Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications (Pinchera et al., 1985); Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Thcrapy (Baldwin et al., Academy Press, 1985), Thorpe et al, 1982, Immunol.Rev .: 62-51-58, WO 89/12624).
Utilisations diagnostiques Diagnostic uses
Un autre objet de l'invention concerne un anticorps humain anti-HER4 selon l'invention pour le diagnostic et/ou la surveillance d'une maladie cancéreuse associée à l'expression de HER4. Les maladies cancéreuses associées à l'expression de HER4 comprennent généralement, mais ne sont pas limités, à un cancer à cellules squameuses, le cancer du sein, le cancer du foie, le cancer de la vessie, l'hépatome, le cancer gastrique, les tumeurs des cellules glialcs telles que le glioblastome et la neurofibromat .se. le cancer de l'utérus, le cancer de l'ovaire, le cancer du poumon, le cancer des testicules, le cancer du côlon, le cancer du rectum, le cancer du pancréas, le mélanornc. le myélome multiple, le cancer colorectal, le carcinome de l'endomètre, le carcinome des glandes salivaires, le cancer du rein, le cancer de la prostate, le cancer de la vulve, le cancer de la thyroïde, le carcinome hépatique, les leucémies, le cancer hématopoïétique. les lymphomes. notamment la maladie de Hodgkin et le lymphome non-hodgkinien. le sarcome, notamment le sarcome de Kaposi ou le sarcome d'Ewing, le neuroblastome et les cancers pédiatriques, notamment de type sarcome ou neuroblastome.  Another object of the invention relates to a human anti-HER4 antibody according to the invention for the diagnosis and / or monitoring of a cancerous disease associated with the expression of HER4. The cancerous diseases associated with HER4 expression generally include, but are not limited to, squamous cell cancer, breast cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, gastric cancer, tumors of glial cells such as glioblastoma and neurofibromatosis. uterine cancer, ovarian cancer, lung cancer, testicular cancer, colon cancer, rectal cancer, pancreatic cancer, melanoma. multiple myeloma, colorectal cancer, endometrial carcinoma, salivary gland carcinoma, kidney cancer, prostate cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma, leukemia , hematopoietic cancer. lymphomas. including Hodgkin's disease and non-Hodgkin's lymphoma. sarcoma, in particular Kaposi's sarcoma or Ewing's sarcoma, neuroblastoma and pediatric cancers, particularly of the sarcoma or neuroblastoma type.
Dans un mode de réalisation préféré, les anticorps de l'invention peuvent être marqués avec une molécule ou une substance détectable, tel qu'une molécule fluorescente, une molécule radioactive ou tout autres marqueurs connus dans l'art, comme décrit ci- dessus. Par exemple, un anticorps de l'invention peut être marqué avec une molécule radioactive par toute méthode connue de l'art. Par exemple, les molécules radioactives incluent, mais ne sont pas limités, à un atome radioactif pour des études scintigraphiques, tels que 1123, 1124. lnl 1 1. Rel 86. Rel 88. Les anticorps de l'invention peuvent également être marqués avec un « spin label » pour l'imagerie par résonance magnétique nucléaire (RMN), tel que l'iode- 123, l'iode- 131. l'indium- 1 1 1 , la fluorine- 19, le carbone- 13. l'azote- 15. l'oxygène- 17, le gadolinium, le manganèse ou le fer. Après administration de l'anticorps, la distribution de l'anticorps à l'intérieur du patient est détectée. Des procédés pour détecter la distribution de tout marqueur spécifique sont connus de l'homme de l'art et n'importe quel procédé approprié peut être utilisé. Quelques exemples non limitatifs comprennent la tomodensitométrie (CT), la tomographie à émission de positons. (TEP), l'imagerie par résonance magnétique (IRM). la fluorescence, la chimioluminescence. et l'échographie. In a preferred embodiment, the antibodies of the invention may be labeled with a detectable molecule or substance, such as a fluorescent molecule, a radioactive molecule or any other markers known in the art, as described above. For example, an antibody of the invention may be labeled with a radioactive molecule by any method known in the art. For example, radioactive molecules include, but are not limited to, a radioactive atom for scintigraphic studies, such as 1123, 1124. lnl 1 1. Rel 86. Rel 88. The antibodies of the invention may also be labeled with a "spin label" for nuclear magnetic resonance (NMR) imaging, such as iodine-123, iodine-131, indium-11, fluorine-19, carbon-13, nitrogen-15. oxygen-17, gadolinium, manganese or iron. After administration of the antibody, the distribution of the antibody within the patient is detected. Methods for detecting the distribution of any specific marker are known to those skilled in the art and any suitable method may be used. Some non-limiting examples include computed tomography (CT), positron emission tomography. (PET), magnetic resonance imaging (MRI). fluorescence, chemiluminescence. and ultrasound.
Les anticorps de l'invention peuvent être utiles pour l'identification de maladies cancéreuses associées à l'expression de HER4 (par exemple, en imagerie par radio). Par exemple, les anticorps de l'invention peuvent être utiles pour identifier un cancer tel que ceu susmentionnés. The antibodies of the invention may be useful for the identification of cancerous diseases associated with HER4 expression (e.g., in radio imaging). For example, the antibodies of the invention may be useful for identifying cancer as mentioned above.
Ils peuvent être utilisés seuls ou en combinaison avec d'autres marqueurs du cancer considéré, notamment du cancer du sein ou du cancer de l'ovaire, y compris, mais sans s'y limiter, HER2, HER3, CA1 25 et mésothéline. En général, ces méthodes diagnostiques impliquent l'utilisation d'échantillon biologique obtenu à partir du patient. Tel qu'il est utilisé ici. le terme « échantillon biologique » englobe divers types d'échantillons obtenus à partir d'un sujet et peut être utilisé dans une analyse de diagnostic ou de contrôle. Les échantillons biologiques comprennent, mais ne sont pas limités, à du sang et d'autres échantillons liquides d'origine biologique, des échantillons de tissus solides tels qu'un spécimen de biopsie ou des cultures de cellules ou des tissus qui en sont dérivés, et la descendance de ceux-ci. Par exemple, les échantillons biologiques comprennent des cellules obtenues à partir d'un échantillon de tissu prélevé sur un individu suspecté d'avoir une maladie cancéreuse associée à l'expression de HER4, et dans un mode de réalisation préféré un cancer du sein ou de l'ovaire. Par conséquent, les échantillons biologiques comprennent des échantillons cliniques, des cellules en culture, des surnageants cellulaires, des lysats cellulaires, du sérum, du plasma, un fluide biologique et des échantillons de tissus. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention est un procédé de diagnostic d'une maladie cancéreuse associée à l'expression de HER4 chez un sujet par détection de HER4 sur des cellules provenant du sujet en utilisant au moins un anticorps de l'invention. En particulier, ledit procédé de diagnostic peut comprendre les étapes consistant à : They may be used alone or in combination with other markers of the cancer of interest, including breast cancer or ovarian cancer, including but not limited to HER2, HER3, CA1, and mesothelin. In general, these diagnostic methods involve the use of biological sample obtained from the patient. As used here. the term "biological sample" encompasses various types of samples obtained from a subject and may be used in a diagnostic or control analysis. Biological samples include, but are not limited to, blood and other biological samples, solid tissue samples such as a biopsy specimen or cell cultures or tissues derived therefrom. and the offspring of these. For example, the biological samples comprise cells obtained from a tissue sample taken from an individual suspected of having a cancerous disease associated with HER4 expression, and in a preferred embodiment breast cancer or breast cancer. ovary. Therefore, biological samples include clinical specimens, cultured cells, cell supernatants, cell lysates, serum, plasma, biological fluid, and tissue samples. In a particular embodiment, the invention is a method of diagnosing a cancer disease associated with expression of HER4 HER4 in a subject by detecting in cells from the subject using at least one antibody of the invention . In particular, said diagnostic method may comprise the steps of:
(a) mettre en contact un échantillon biologique d'un sujet susceptible de souffrir d'une maladie cancéreuse associée à l'expression de HER4 avec au moins un anticorps selon l'invention dans des conditions suffisantes pour que l'anticorps forme des complexes avec des cellules de l'échantillon biologique qui expriment HER4 ;  (a) contacting a biological sample of a subject susceptible to a cancerous disease associated with the expression of HER4 with at least one antibody according to the invention under conditions sufficient for the antibody to form complexes with biological sample cells that express HER4;
(b) détecter et/ou quantifier lesdits complexes, de sorte que la détection desdits complexes est indicatrice d'une maladie cancéreuse associée à l'expression de HER4.  (b) detecting and / or quantifying said complexes, so that the detection of said complexes is indicative of a cancerous disease associated with the expression of HER4.
Afin de contrôler la maladie cancéreuse, le procédé de diagnostic selon l'invention peut être répété à différents intervalles de temps, afin de déterminer si la liaison d'anticorps à des échantillons augmente ou diminue, grâce à quoi il est déterminé si la maladie cancéreuse progresse ou régresse.  In order to control the cancerous disease, the diagnostic method according to the invention can be repeated at different time intervals, in order to determine whether antibody binding to samples increases or decreases, whereby it is determined whether the cancerous disease progresses or regresses.
Utilisations thérapeutiques Therapeutic uses
Des anticorps, des fragments ou des immunocon j ugués de l'invention peuvent être utiles pour traiter un cancer exprimant HER4. Les anticorps de l'invention peuvent être utilisés seuls ou en combinaison avec n'importe quel agent approprié. Des exemples de cancer exprimant HER4 comprennent, mais ne sont pas limités, à un carcinome, un lymphome, un blastome, un sarcome et une leucémie. Des exemples plus particuliers de cancers comprennent le cancer à cellules squameuses, le cancer du le cancer gastrique, le cancer du pancréas, les tumeurs des cellules gliales telles que le glioblastome et la ncurofibromatose, le cancer du col de l'utérus, le cancer des ovaires, le cancer du foie, le cancer de la vessie, l'hépatome, le cancer du sein, le cancer du côlon, le mélanome. le cancer colorectal, le carcinome de l'endomètre, le carcinome des glandes salivaires. le cancer du rein, le cancer de la prostate, le cancer de la vulve, le cancer de la thyroïde, le carcinome hépatique et certains cancers pédiatriques de type sarcome et neuroblastome. Dans un mode de réalisation particulier, un cancer traité à l'aide des procédés de la présente invention est le cancer du sein, le cancer de l'ovaire, le cancer du poumon et certains cancers pédiatriques de type sarcome et neuroblastome. Antibodies, fragments or immunoconjugates of the invention may be useful for treating HER4-expressing cancer. The antibodies of the invention may be used alone or in combination with any suitable agent. Examples of HER4-expressing cancer include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma, sarcoma and leukemia. More specific examples of cancers include squamous cell cancer, gastric cancer cancer, pancreatic cancer, glial cell tumors such as glioblastoma and necurofibromatosis, cervical cancer, cancer of the uterus, ovarian, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, breast cancer, colon cancer, melanoma. colorectal cancer, carcinoma of the endometrium, carcinoma of the salivary glands. kidney cancer, prostate cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma and some pediatric sarcoma and neuroblastoma cancers. In a particular embodiment, a cancer treated using the methods of The present invention is breast cancer, ovarian cancer, lung cancer and certain pediatric sarcoma and neuroblastoma cancers.
Ainsi, un objet de l'invention concerne un procédé de traitement d'un cancer, notamment un cancer associé à l'expression de HER4. comprenant l'administration à un sujet en ayant besoin d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un anticorps, fragment ou immunoconjugué de l'invention.  Thus, an object of the invention relates to a method of treating a cancer, in particular a cancer associated with the expression of HER4. comprising administering to a subject in need of a therapeutically effective amount of an antibody, fragment or immunoconjugate of the invention.
Dans le contexte de l'invention, le terme « traiter » ou « traitement », tel qu'utilisé ici, signifie inverser, soulager, inhiber la progression de, ou prévenir le trouble ou l'état auquel ce terme s'applique, ou un ou plusieurs symptômes de ce trouble ou un état. Selon l'invention, le terme « patient » ou « patient ayant besoin de celui-ci » est destiné à un mammifère humain ou non humain affecté ou susceptible d'être affecté d'un cancer, notamment un cancer associé à l'expression de HER4.  In the context of the invention, the term "treat" or "treatment" as used herein means to reverse, relieve, inhibit the progression of, or prevent the disorder or condition to which this term applies, or one or more symptoms of this disorder or condition. According to the invention, the term "patient" or "patient in need thereof" is intended for a human or non-human mammal affected or likely to be affected by cancer, including cancer associated with the expression of HER4.
Par « quantité thérapeutiquement efficace » de l'anticorps de l'invention, on entend désigner une quantité suffisante de l'anticorps pour traiter ledit cancer, à un rapport bénéfice/risque raisonnable applicable à tout traitement médical. Il sera entendu, cependant, que l'utilisation journalière totale des anticorps et des compositions de la présente invention sera décidée par le médecin traitant dans la portée d'un jugement médical sain. Le niveau de dose thérapeutiquement efficace est spécifique pour tout patient, et dépendra en particulier d' une variété de facteurs, y compris le trouble qui est traité et la sévérité du trouble, l'activité de l'anticorps spécifique utilisé; la composition spécifique employée, l'âge, le poids corporel, la santé générale, le sexe et le régime alimentaire du patient, le temps d'administration, la voie d'administration, et le taux d'excrétion de l'anticorps spécifique utilisé, la durée du traitement, les médicaments utilisés en combinaison avec l'anticorps spécifique employé, et des facteurs analogues bien connus du domaine médical. Par exemple, il est bien connu pour l'homme de l'art de commencer à des doses du composé à des niveaux inférieurs à ceux requis pour atteindre l'effet thérapeutique souhaité et d'augmenter progressivement la posologie jusqu'à ce que l'effet souhaité soit obtenu.  By "therapeutically effective amount" of the antibody of the invention is meant to designate a sufficient amount of the antibody to treat said cancer at a reasonable benefit / risk ratio applicable to any medical treatment. It will be understood, however, that the total daily use of the antibodies and compositions of the present invention will be decided by the attending physician within the scope of sound medical judgment. The therapeutically effective dose level is specific for any patient, and will depend in particular on a variety of factors, including the disorder being treated and the severity of the disorder, the activity of the specific antibody used; the specific composition used, the age, body weight, general health, sex and diet of the patient, the time of administration, the route of administration, and the rate of excretion of the specific antibody used the duration of treatment, the drugs used in combination with the specific antibody employed, and similar factors well known in the medical field. For example, it is well known to those skilled in the art to start doses of the compound at levels lower than those required to achieve the desired therapeutic effect and to gradually increase the dosage until the desired effect is obtained.
Dans certains modes de réalisation, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anticorps-médicament est utilisé en combinaison avec un second agent pour le traitement d'une maladie ou d'un trouble. Lorsqu'il est utilisé pour traiter le cancer, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anticorps-médicament de la présente invention peuvent être utilisés en combinaison avec des thérapies classiques du cancer, tels que, par exemple, la chirurgie, la radiothérapie, la chimiothérapie, ou des combinaisons de ceux-ci. In some embodiments, a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate is used in combination with a second agent for the treatment of a disease or disorder. When used to treat cancer, a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention may be used in combination with conventional cancer therapies, such as, for example, surgery, radiotherapy, chemotherapy, or combinations of these.
De préférence, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anticorps- médicament peut être utilisé en combinaison avec au moins un autre agent thérapeutique distinct dudit anticorps anti-HER4 humain selon Γ invention, comme indiqué précédemment.  Preferably, a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate may be used in combination with at least one other therapeutic agent distinct from said human anti-HER4 antibody according to the invention, as indicated above.
Ces autres agents thérapeutiques peuvent comprendre des inhibiteurs de tyrosine kinase, des agents ant i -angi gén i q ues , une eytokine (par exemple, une cytokine qui stimule une réponse immunitaire contre une tumeur), ou encore un antagoniste de certains facteurs qui sont impliqués dans la croissance tumorale tel que, par exemple, EGFR (notamment Cetuximab, Erbitux ; Panitumumab, Vectibix ; Matuzumab ; Zalutumumab ; Nimotuzumab), HER2 (notamment Trastu/umab, Hcrceptin ; Pertuzumab, Omnitarg). HER3 (notamment les anticorps décrits dans WO 2007/077028, WO 2008/100624, WO 2012/022814, WO 2010/108127 ou WO 2006/091209), IGF1-R, c- et. et leurs mélanges.  These other therapeutic agents may include tyrosine kinase inhibitors, anti-angiogenic agents, an ektokine (e.g., a cytokine that stimulates an immune response against a tumor), or an antagonist of certain factors that are involved. in tumor growth such as, for example, EGFR (including Cetuximab, Erbitux, Panitumumab, Vectibix, Matuzumab, Zalutumumab, Nimotuzumab), HER2 (including Trastu / umab, Hcrceptin, Pertuzumab, Omnitarg). HER3 (in particular the antibodies described in WO 2007/077028, WO 2008/100624, WO 2012/022814, WO 2010/108127 or WO 2006/091209), IGF1-R, c- and. and their mixtures.
Dans un mode de réalisation préféré, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anticorps-médicament de la présente invention peut être utilisé en combinaison avec un anticorps dirigé contre au moins un récepteur à activité tyrosine kinase (RTK), notamment contre au moins un récepteur à activité tyrosine kinase distinct du récepteur HER4, voire contre au moins un récepteur à activité tyrosine kinase distinct d'un récepteur appartenant à la sous famille EGFR.  In a preferred embodiment, a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention may be used in combination with an antibody directed against at least one tyrosine kinase (RTK) receptor, particularly against at least one receptor with tyrosine kinase activity distinct from the HER4 receptor, or even against at least one receptor with tyrosine kinase activity distinct from a receptor belonging to the EGFR subfamily.
Dans un mode de réalisation préféré, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anticorps-médicament de la présente invention est utilisé en combinaison avec un anticorps monocolonal anti-humain -EGFR, notamment tel que défini ci-dessus.  In a preferred embodiment, a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention is used in combination with a monocolonal anti-human-EGFR antibody, especially as defined above.
Dans un mode de réalisation préféré, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anti corps-médi cament de la présente invention est utilisé en combinaison avec un anticorps monocolonal anti-humain -HER2, tels que le trastuzumab ou le pertuzumab.  In a preferred embodiment, a human anti-HER4 antibody or anti-body-conjugate conjugate of the present invention is used in combination with an anti-human monoclonal antibody -HER2, such as trastuzumab or pertuzumab.
Dans un mode de réalisation préféré, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anticorps-médicament de la présente invention est utilisé en combinaison avec un anticorps monocolonal anti-humain -HER3, notamment tel que défini ci-dessus. Dans un mode de réalisation préféré, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anticorps-médicament de la présente invention est utilisé en combinaison avec un anticorps monocolonal anti-humain -IGF ! -R. notamment tel que défini ci-dessus. In a preferred embodiment, a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention is used in combination with an anti-human monoclonal antibody -HER3, especially as defined above. In a preferred embodiment, a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention is used in combination with an anti-human monoclonal antibody -IGF! -R. especially as defined above.
Dans un mode de réalisation préféré, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anticorps-médicament de la présente invention est utilisé en combinaison avec un anticorps monocolonal anti-humain -c-Met, notamment tel que défini ci-dessus.  In a preferred embodiment, a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate of the present invention is used in combination with an anti-human monoclonal antibody -c-Met, especially as defined above.
Dans certains modes de réalisation, un anticorps humain anti-HER4 ou un conjugué anticorps-médicament tel que décrit ici est utilisé en combinaison avec un inhibiteur de tyrosine kinase, notamment tel que définis ci-dessus.  In some embodiments, a human anti-HER4 antibody or an antibody-drug conjugate as described herein is used in combination with a tyrosine kinase inhibitor, especially as defined above.
Compositions pharmaceutiques Pharmaceutical compositions
Comme indiqué précédemment, selon un de ses aspects, la présente invention concerne une composition pharmaceutique, et notamment vaccinale, comprenant au moins un composé choisi parmi :  As indicated above, according to one of its aspects, the present invention relates to a pharmaceutical composition, and especially a vaccine composition, comprising at least one compound chosen from:
- un anticorps humain tel que défini précédemment ;  a human antibody as defined above;
- un fragment tel que défini précédemment;  a fragment as defined above;
- un acide nucléique tel que défini précédemment;  a nucleic acid as defined above;
- un vecteur selon tel que défini précédemment; ou  a vector according to as defined previously; or
- un de leur mélange,  - one of their mix,
en association avec un véhicule pharmaccutiquement acceptable. in combination with a pharmaceutically acceptable vehicle.
De préférence, une composition selon l'invention peut comprendre en outre au moins un agent anti cancéreux distinct d'un composé tel que défini en revendication précédente. Preferably, a composition according to the invention may further comprise at least one anti-cancer agent distinct from a compound as defined in the preceding claim.
Pour l'administration, les composés susmentionnés, et notamment l'anticorps humain anti-HER4, est formulé comme une composition pharmaceutique. Une composition pharmaceutique comprenant les composés susmentionnés, et notamment l'anticorps humain anti-HER4, peut être formulée selon des méthodes connues pour préparer des compositions pharmaccutiquement utiles, moyennant quoi la molécule thérapeutique est combinée dans un mélange avec un support ou véhicule pharmaccutiquement acceptable. Une composition est dite être un « support pharmaceutiquement acceptable » ou «véhicule pharmaceutiquement acceptable » si son administration peut être tolérée par un patient receveur. Une solution saline stérile tamponnée au phosphate est un exemple d'un tel support pharmaceutiquement acceptable. D'autres supports appropriés sont bien connus de l'homme du métier (Voir, par exemple, Gennaro, Remington's pharmaceutical sciences (Mack Publishing Company, 19e éd.. 1995)). Les formulations peuvent comprendre en outre un ou plusieurs excipients, conservateurs, agents de solubilisation, agents tampons, ou de l'albumine pour empêcher la perte de protéines sur la paroi du flacon. For administration, the abovementioned compounds, and in particular the human anti-HER4 antibody, is formulated as a pharmaceutical composition. A pharmaceutical composition comprising the aforementioned compounds, and especially the anti-HER4 human antibody, can be formulated according to known methods for preparing pharmaceutically useful compositions, whereby the therapeutic molecule is combined in a mixture with a pharmaceutically acceptable carrier or carrier. A composition is said to be a "pharmaceutically acceptable carrier" or "pharmaceutically acceptable carrier" if its administration can be tolerated by a recipient patient. Sterile saline phosphate buffered is an example of such a pharmaceutically acceptable carrier. Other suitable carriers are well known to those skilled in the art (See, for example, Gennaro, Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, 19th ed., 1995)). The formulations may further include one or more excipients, preservatives, solubilizers, buffering agents, or albumin to prevent loss of protein on the wall of the vial.
La forme des compositions pharmaceutiques, la voie d'administration, la dose et le schéma posologique dépendent naturellement de l'état à traiter, de la gravité de la maladie, de l'âge, du poids et du sexe du patient.  The form of the pharmaceutical compositions, the route of administration, the dose and the dosage regimen naturally depend on the condition to be treated, the severity of the disease, the age, weight and sex of the patient.
Les compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent être formulées pour une voie topique, orale, parentérale, intranasale, intraveineuse, intramusculaire, sous- cutanée ou intraoculaire et autres.  The pharmaceutical compositions of the invention may be formulated for a topical, oral, parenteral, intranasal, intravenous, intramuscular, subcutaneous or intraocular route and the like.
De préférence, les compositions pharmaceutiques contiennent des véhicules pharmaceutiquement acceptables pour une formulation susceptible d'être injectée. Il peut s'agir en particulier des solutions salines isotoniques stériles (phosphate de monosodium, phosphate de disodium. chlorure de sodium, chlorure de potassium, chlorure de calcium ou chlorure de magnésium et similaires ou leurs mélanges), ou à sec, en particulier des compositions lyophilisées qui lors de l'addition, selon le cas, d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables.  Preferably, the pharmaceutical compositions contain pharmaceutically acceptable carriers for a formulation that can be injected. It may be in particular sterile isotonic saline solutions (monosodium phosphate, disodium phosphate, sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride or magnesium chloride and the like or mixtures thereof), or dry, in particular lyophilized compositions which, when sterilized water or physiological saline is added, make it possible to form injectable solutions.
Les doses utilisées pour l'administration peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée ou encore de la durée du traitement recherchée.  The doses used for the administration can be adapted according to various parameters, and in particular according to the mode of administration used, the pathology concerned or the duration of the desired treatment.
Pour préparer des compositions pharmaceutiques, une quantité efficace de l'anticorps peut être dissous ou dispersée dans un support pharmaceutiquement acceptable ou un milieu aqueux.  To prepare pharmaceutical compositions, an effective amount of the antibody may be dissolved or dispersed in a pharmaceutically acceptable carrier or an aqueous medium.
Les formes pharmaceutiques appropriées pour une utilisation injectable comprennent des solutions ou dispersions aqueuses stériles ; des formulations incluant l'huile de sésame, l'huile d'arachide ou du propylène glycol aqueux, ainsi que des poudres stériles pour la préparation extemporanéc de solutions ou dispersions injectables stériles. Dans tous les cas. la forme doit être stérile et doit être fluide dans la mesure où une utilisation aisée avec des seringues existe. Elle doit être stable dans les conditions de fabrication et de stockage et doit être préservée contre l'action contaminante de microorganismes tels que les bactéries et les champignons. Pharmaceutical forms suitable for injectable use include sterile aqueous solutions or dispersions; formulations including sesame oil, aqueous peanut oil or propylene glycol, as well as sterile powders for the extemporaneous preparation of sterile injectable solutions or dispersions. In all cases. the shape must be sterile and must be fluid to the extent that easy use with syringes exists. It must be stable under the conditions of manufacturing and storage and must be preserved against the contaminating action of microorganisms such as bacteria and fungi.
Des solutions de composés actifs sous forme de base libre ou de sels pharmacoîogiquement acceptables peuvent être préparées dans l'eau convenablement mélangée avec un tensioactif tel que l'hydroxypropylcellulose. Des dispersions peuvent également être préparées dans du glycérol, des polyéthylène glycols liquides et des mélanges de ceux-ci et dans des huiles. Dans des conditions ordinaires de stockage et d'utilisation, ces préparations contiennent un conservateur pour empêcher la croissance de micro-organismes.  Solutions of active compounds in free base form or pharmaceutically acceptable salts may be prepared in water suitably mixed with a surfactant such as hydroxypropylcellulose. Dispersions can also be prepared in glycerol, liquid polyethylene glycols and mixtures thereof and in oils. Under ordinary conditions of storage and use, these preparations contain a preservative to prevent the growth of microorganisms.
Un anticorps de l'invention peut être formulé en une composition sous une forme neutre ou de sel. Les sels pharmaceutiquement acceptables comprennent les sels d'addition d'acides (formés avec les groupes amino libres de la protéine) et qui sont formés avec des acides inorganiques tels que, par exemple, les acides chlorhydrique ou phosphorique, ou des acides organiques tels que les acides acétique, oxalique, tartrique, mandélique. et autres. Les sels formés avec les groupes carboxyle libres peuvent également être dérivés de bases inorganiques telles que sodium, potassium, ammonium, calcium, ou les hydroxydes ferriques, et des bases organiques telles que l'isopropylamine, la triméthylamine, l'histidine. la procame et autres.  An antibody of the invention may be formulated into a composition in a neutral or salt form. Pharmaceutically acceptable salts include acid addition salts (formed with free amino groups of the protein) and which are formed with inorganic acids such as, for example, hydrochloric or phosphoric acids, or organic acids such as acetic, oxalic, tartaric and mandelic acids. and others. Salts formed with free carboxyl groups may also be derived from inorganic bases such as sodium, potassium, ammonium, calcium, or ferric hydroxides, and organic bases such as isopropylamine, trimethylamine, histidine. the procam and others.
Le support peut également être un solvant ou milieu de dispersion contenant, par exemple, de l'eau, de l'éthanol, un polyol (par exemple, glycérol, propylène glycol, polyéthylène glycol liquide, et autres), des mélanges appropriés de ceux-ci, et des huiles végétales. La fluidité appropriée peut être maintenue, par exemple, par l'utilisation d'un enrobage, tel que la lécithine, par le maintien de la taille de particule requise dans le cas d'une dispersion et par l'utilisation de tensioactifs. La prévention de l'action des microorganismes peut être réalisée par divers agents antibactériens et antifongiques, par exemple les parabénes, le chlorobutanol. le phénol, l'acide sorbique, le thimérosal. et autres. Dans de nombreux cas. il sera préférable d'inclure des agents isotoniques, par exemple des sucres ou du chlorure de sodium. L'absorption prolongée des compositions injectables peut être provoquée par l'utilisation dans les compositions d'agents retardant l'absorption, par exemple, le monostéarate d'aluminium et la gélatine.  The support may also be a solvent or dispersion medium containing, for example, water, ethanol, a polyol (for example, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, and the like), suitable mixtures of those here, and vegetable oils. The appropriate fluidity can be maintained, for example, by the use of a coating, such as lecithin, by maintaining the required particle size in the case of dispersion and by the use of surfactants. Prevention of the action of microorganisms can be achieved by various antibacterial and antifungal agents, for example parabens, chlorobutanol. phenol, sorbic acid, thimerosal. and others. In many cases. it will be preferable to include isotonic agents, for example sugars or sodium chloride. Prolonged absorption of the injectable compositions can be caused by the use in the compositions of agents delaying absorption, for example, aluminum monostearate and gelatin.
Les solutions injectables stériles sont préparées en incorporant les composés actifs dans la quantité requise dans le solvant approprié avec divers autres ingrédients énumérés ci-dessus, comme requis, puis stérilisation par fïltration. Généralement, les dispersions sont préparées en incorporant les divers ingrédients actifs stérilisés dans un véhicule stérile qui contient le milieu de dispersion basique et les autres ingrédients requis parmi ceux énumérés ci -dessus. Dans le cas de poudres stériles pour la préparation de solutions injectables stériles, les procédés préférés de préparation sont le séchage sous vide et les techniques de lyophilisation qui donnent une poudre de l'ingrédient actif plus n'importe quel ingrédient désiré supplémentaire à partir d'une solution préalablement stérilisée par filtration de celui-ci. Sterile injectable solutions are prepared by incorporating the active compounds in the required amount in the appropriate solvent with various other ingredients enumerated above, as required, followed by filtration sterilization. Generally, the dispersions are prepared by incorporating the various sterilized active ingredients into a sterile vehicle which contains the basic dispersion medium and the other required ingredients from those enumerated above. In the case of sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions, the preferred methods of preparation are vacuum drying and lyophilization techniques which provide a powder of the active ingredient plus any additional desired ingredient from a solution previously sterilized by filtration thereof.
La préparation de plusieurs solutions, ou de solutions fortement concentrées, pour une injection directe est également envisagée, où l'utilisation de DMSO comme solvant est envisagée pour entraîner une pénétration extrêmement rapide, délivrant de fortes concentrations en agents actifs à une petite zone de la tumeur.  The preparation of several solutions, or highly concentrated solutions, for direct injection is also envisaged, where the use of DMSO as solvent is envisaged to result in extremely rapid penetration, delivering high concentrations of active agents to a small area of the tumor.
Lors de la formulation, les solutions seront administrées d'une manière compatible avec la formulation posologique et également en une quantité thérapeutiquement efficace. Les formulations sont facilement administrées sous une variété de formes de dosage, comme le type de solutions injectables décrites ci-dessus, mais des capsules de libération de médicament et similaires peuvent aussi être employées.  During formulation, the solutions will be administered in a manner compatible with the dosage formulation and also in a therapeutically effective amount. The formulations are easily administered in a variety of dosage forms, such as the type of injectable solutions described above, but drug release capsules and the like can also be employed.
Pour une administration parentérale dans une solution aqueuse, par exemple, la solution doit être tamponnée de manière appropriée si nécessaire et le diluant liquide d'abord rendu isotonique avec suffisamment de solution saline ou de glucose. Ces solutions aqueuses particulières sont particulièrement appropriées pour une administration intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée et l'administration intrapéritonéale. A cet égard, des milieux aqueux stériles qui peuvent être employés seront connus de l'homme de l'art à la lumière de la présente description. Par exemple, une dose peut être dissoute dans 1 ml de solution isotonique de NaCl et soit ajoutée à 1 000 ml de fluide d'hypodermocîyse ou injectée au site de perfusion proposé, (voir par exemple, « Remington's Pharmaceutical Sciences » 15eme édition. 1035- 1038 et 1 570-1580). Une certaine variation de la posologie apparaît nécessairement selon l'état du sujet à traiter. La personne responsable de l'administration saura, en tout état de cause, déterminer la dose appropriée pour le sujet considéré. For parenteral administration in an aqueous solution, for example, the solution should be buffered appropriately if necessary and the liquid diluent first made isotonic with sufficient saline or glucose. These particular aqueous solutions are particularly suitable for intravenous, intramuscular, subcutaneous administration and intraperitoneal administration. In this regard, sterile aqueous media that can be employed will be known to those skilled in the art in light of the present disclosure. For example, one dosage could be dissolved in 1 ml of isotonic NaCl solution and either added to 1000 ml of hypodermocîyse or fluid injected at the proposed site of infusion, (see for example, "Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th edition. 1035-1038 and 1570-1580). Some variation of the dosage necessarily appears depending on the condition of the subject to be treated. The person responsible for administration will, in any case, determine the appropriate dose for the subject.
En plus des composés formulés pour l'administration parentérale, comme l'injection intraveineuse ou intramusculaire, d'autres formes pharmaecutiquement acceptables comprennent, par exemple, les comprimés ou autres solides pour une administration orale ; les capsules à libération contrôlée, et toute autre forme actuellement utilisés. In addition to compounds formulated for parenteral administration, such as intravenous or intramuscular injection, other pharmaceutical forms acceptable include, for example, tablets or other solids for oral administration; controlled release capsules, and any other form currently used.
Dans certains modes de réalisation, l'utilisation de liposomes et/ou de nanoparticules est envisagée pour l'introduction d'anticorps dans des cellules hôtes. La formation et l'utilisation des liposomes et/ou des nanoparticules sont connues de l'homme de l'art.  In some embodiments, the use of liposomes and / or nanoparticles is contemplated for introduction of antibodies into host cells. The formation and use of liposomes and / or nanoparticles are known to those skilled in the art.
Les nanocapsules peuvent généralement piéger des composés d'une manière stable et reproductible. Pour éviter les effets secondaires dus à une surcharge intracellulaire en polymère, de telles particules ultrafines (taille autour de 0,1 μιη) sont généralement conçues en utilisant des polymères capables d'être dégradés in vivo. Des nanoparticules biodégradables de polyalkyl- cyanoaerylatc qui répondent à ces exigences sont envisagées pour une utilisation dans la présente invention, et de telles particules peuvent être facilement fabriquées.  Nanocapsules can typically entrap compounds in a stable and reproducible manner. To avoid the side effects due to intracellular polymer overload, such ultrafine particles (size around 0.1 μιη) are generally designed using polymers capable of being degraded in vivo. Biodegradable polyalkyl cyanoaerylate nanoparticles that meet these requirements are contemplated for use in the present invention, and such particles can be easily manufactured.
Les liposomes sont formés à partir de phospholipides qui sont dispersés dans un milieu aqueux et forment spontanément des vésicules bicouches concentriques multilamellaires (également appelées vésicules multilamellaires (MLV)). Les MLV ont généralement des diamètres de 25 nm à 4 μιη. La sonication des MLV entraîne la formation de petites vésicules unilamellaires (SUV) avec des diamètres dans la gamme de 200 à 500 À, contenant une solution aqueuse dans le noyau. Les caractéristiques physiques des liposomes dépendent du pH, de la force ionique et de la présence de cations divalents.  Liposomes are formed from phospholipids that are dispersed in an aqueous medium and spontaneously form multilamellar concentric bilayer vesicles (also called multilamellar vesicles (MLVs)). MLVs generally have diameters of 25 nm to 4 μιη. MLV sonication results in the formation of small unilamellar vesicles (SUVs) with diameters in the range of 200-500 Å, containing an aqueous solution in the nucleus. The physical characteristics of liposomes depend on pH, ionic strength and the presence of divalent cations.
Avantageusement, la quantité thérapeutiquement efficace d'anticorps selon l'invention administrée à un patient est comprise dans une gamme d'environ 0,07 mg à environ 35 000 mg, de préférence d'environ 0,7 mg à environ 7 000 m g. de préférence d'environ 0,7 mg à environ 1 400 mg, de préférence d'environ 0,7 mg à environ 700 mg, et plus préférentiellement d'environ 0,7 m g à environ 70 mg.  Advantageously, the therapeutically effective amount of antibody according to the invention administered to a patient is in the range of about 0.07 mg to about 35000 mg, preferably about 0.7 mg to about 7000 mg. . preferably from about 0.7 mg to about 1400 mg, preferably from about 0.7 mg to about 700 mg, and more preferably from about 0.7 mg to about 70 mg.
Le dosage de la substance active dépend particulièrement du mode d'administration, et est aisément déterminé par l'homme de métier. Une quantité thérapeutiquement (dose unitaire) efficace d'anticorps peut varier de 0,01 mg'kg à 500 mg'kg, préférablement de 0,1 mg/kg à 500 m g/k . préférablement de 0,1 mg/kg à 100 mg/kg, préférablement de 0,1 mg/kg à 20 mg/kg, préférablement de 0,1 mg/kg à 10 mg/kg, et plus préférablement de 1 mg/kg à 10 mg/kg, en une ou plusieurs administrations hebdomadaire, pendant plusieurs semaines ou mois. La dose unitaire efficace peut donc aisément être déduite d'une dose calculée pour un patient « moyen » dont le poids est de 70 kg. Kits The dosage of the active substance is particularly dependent on the mode of administration, and is readily determined by those skilled in the art. A therapeutically effective (unit dose) amount of antibody can range from 0.01 mgkg to 500 mgkg, preferably from 0.1 mg / kg to 500 mg / kg. preferably from 0.1 mg / kg to 100 mg / kg, preferably from 0.1 mg / kg to 20 mg / kg, preferably from 0.1 mg / kg to 10 mg / kg, and more preferably 1 mg / kg at 10 mg / kg, in one or more weekly administrations for several weeks or months. The effective unit dose can therefore easily be deduced from a calculated dose for an "average" patient whose weight is 70 kg. Kits
Enfin, l'invention concerne également des kits comprenant au moins un anticorps de l'invention. Des kits contenant des anticorps de l'invention trouvent une utilisation dans la détection de l'expression de HER4, ou dans des essais thérapeutiques ou diagnostiques. Les kits de l'invention peuvent contenir un anticorps couplé à un support solide, par exemple une plaque de culture tissulaire ou de perles (par exemple, des billes de sépharose). Les kits peuvent contenir des anticorps pour la détection et la quantification in vitro de HER4, par exemple dans un ELIS A ou un Western blot. Un tel anticorps utile pour la détection peut être muni d'un marqueur tel qu'un marqueur fluorescent ou un marqueur radio.  Finally, the invention also relates to kits comprising at least one antibody of the invention. Kits containing antibodies of the invention find use in the detection of HER4 expression, or in therapeutic or diagnostic assays. The kits of the invention may contain an antibody coupled to a solid support, for example a tissue culture plate or beads (eg, sepharose beads). The kits may contain antibodies for in vitro detection and quantification of HER4, for example in ELISA or Western blot. Such an antibody useful for detection may be provided with a marker such as a fluorescent marker or a radio marker.
Dans toute la description, y compris les revendications, l'expression « comportant un » doit être comprise comme étant synonyme de « comportant au moins un », sauf si le contraire est spécifié. Throughout the description, including the claims, the phrase "having one" should be understood as being synonymous with "having at least one", unless the opposite is specified.
Les expressions « compris entre... et . . . » et « allant de ... à .. . » doivent se comprendre bornes incluses, sauf si le contraire est spécifié.  The expressions "between ... and. . . And "going from ... to ... Must be understood inclusive, unless the opposite is specified.
Les exemples et figures qui suivent sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l 'invention.  The examples and figures which follow are presented for illustrative and not limiting of the invention.
EXEMPLES EXAMPLES
Préparation des anticorps humains anti-H ER4 selon l'invention Preparation of Human Anti-H ER4 Antibodies According to the Invention
Les anticorps humains anti-HER4 selon l'invention sont exprimés à la surface de phages filamenteux sous la forme de fragment de type scFv (single chain Fragment variable). La capacité de liaison des anticorps humains anti-HER4 selon l'invention au récepteur HER4 humain a été opérée vis-à-vis de la protéine humaine HER4 (HER-ECD- Fc. domaine cxtracellulaire du récepteur HER4 fusionné au fragment Fc (recombinant hum an ErbB4/Fc chimera, R&D Systems). Le criblage a été réalisé au moyen d'un test de liaison de type ELI SA sous le format scFv-phages, comme défini ci-après. Production des scFv-phages The human anti-HER4 antibodies according to the invention are expressed on the surface of filamentous phages in the form of fragment of the scFv (single chain Fragment variable) type. The binding capacity of the human anti-HER4 antibodies according to the invention to the human HER4 receptor was performed with respect to the human HER4 protein (HER-ECD-Fc). The HER4 receptor extracellular domain fused to the Fc fragment (recombinant human). ErbB4 / Fc chimera, R & D Systems) Screening was performed using an ELI SA binding assay in the scFv-phage format, as defined below. Production of scFv-phages
Les pliages filamenteux exprimant à leur surface les anticorps humains anti- HER4 selon l'invention sont mis en culture dans du milieu 2YT supplément é d'ampicilline (100 pg/ml), de tctracyclinc ( 15 μg/ml), et de glucose 1 %. Chaque puits de culture correspond à un clone individuel exprimant les phages-scFv dans le surnageant.  The filamentous folds expressing on their surface the anti-HER4 human antibodies according to the invention are cultured in 2YT medium supplemented with ampicillin (100 μg / ml), tetracycline (15 μg / ml), and glucose 1. %. Each culture well corresponds to an individual clone expressing phages-scFv in the supernatant.
Les cultures sont réalisées en plaque 96 puits deppwell et mises sous agitation à 37°C pendant 2 heures jusqu'à une DOeoonm de 1 . Les cultures sont alors supplémentées en IPTG ( 1 mM) pour Γ expression des fragments scFv et en pliages auxiliaires M l 3 O 7 (Biolabs #N0315S). Après 20 minutes d'infection par les phages auxilaires, 40 ml de milieu 2YT/Ampiciliine/Glucose/IPTG sont ajoutés et la culture est mise à 26°C sous agitation (230 rpm) pendant 2 heures. La sélection des clones ayant été infecté par le phage auxiliaire est réalisée par ajout de kanamycine (1 m g/ml ). La culture est poursuivie à 26°C avec agitation sur la nuit. The cultures are made in 96-well plate and stirred at 37 ° C. for 2 hours to a OD 600 nm of 1. The cultures are then supplemented with IPTG (1 mM) for the expression of the scFv and auxiliary folding fragments M l 3 O 7 (Biolabs # N0315S). After 20 minutes of infection with the auxiliaries phage, 40 ml of 2YT medium / Ampiciliine / Glucose / IPTG was added and the culture is at 26 ° C with stirring (230 rpm) for 2 hours. The selection of the clones which had been infected by the helper phage is carried out by adding kanamycin (1 mg / ml). The culture is continued at 26 ° C with stirring on the night.
A l'issue, les cultures sont centrifugées à 4°C. Les surnageants contenant les phages-scFv sont récupérés et peuvent être utilisés directement dans un test de liaison de type ELISA-phages.  At the end, the cultures are centrifuged at 4 ° C. The supernatants containing the scFv phages are recovered and can be used directly in an ELISA-phage type binding assay.
Evaluation de la liaison spécifique par ELISA-phages Evaluation of the specific binding by ELISA-phages
Les surnageants de culture purs ou dilués en PBS I X sont ajoutés dans les puits d'une plaque de microtitration 96 puits préalablement coatés avec les protéines humaines HER4-Fc, HER3-Fc (Recombinant Human ErbB4/Fc Chimera) à 250 ng/puits et de la BSA (Euromedex) et saturés avec une solution de BSA à 5 % en PBS I X. Les protéines HER3-Fc et la BSA sont utilisées comme contrôle de spécificité. Après incubation 2 heures à 37°C et lavages en PBS 1 X-Tween20 0,1 %, les phages-scFv sont détectés à l'aide d'un anticorps anti-M13 couplé à la peroxydase (GEHcalthcare). La révélation est réalisée par ajout de TétraMéthylBenzidine (Sigma) et lecture à 450 nm. Culture supernatants pure or diluted with PBS IX are added to the wells of a 96-well microtiter plate previously coated with human HER4-Fc, HER3-Fc proteins (Recombinant Human ErbB4 / Fc Chimera) at 250 ng / well and of BSA (Euromedex) and saturated with 5% BSA solution in PBS I X. HER3-Fc proteins and BSA are used as a specificity control. After incubation for 2 hours at 37 ° C and washes in PBS 1X-Tween 20 0.1%, phage-scFv were detected using an anti-M13 antibody coupled to peroxidase (GEHcalthcare). The revelation is carried out by adding TetramethylBenzidine (Sigma) and reading at 450 nm.
Les 7 clones désignés HE4B-33, HE4B-17, HE4B-27. HE5B-35. HE5C-144, HE5C-123 et HE3C-29 ont montré une liaison spécifique à la protéine recombinante HER4-FC (voir figure 2). Reformatage des fragments scFv sous le format Fab, production et earactérisation The 7 clones designated HE4B-33, HE4B-17, HE4B-27. HE5B-35. HE5C-144, HE5C-123 and HE3C-29 showed specific binding to the recombinant HER4-FC protein (see Figure 2). Reformatting scFv fragments in Fab, Production and Characterization
Les séquences nucléotidiques des régions VH et VL des anticorps susmentionnés HE4B-33, HE4B-17. HE4B-27, HE5B-35, HE5C- 144, HE5C-123 et HE3C-29 ont été sous clonées dans un vecteur d'expression bactérien bicistronique p G92 permettant l'expression périplasmique de fragment Fab fusionnés à une étiquette histidine (x6) et une étiquette peptide-V5. Les domaines VH sont cloués en utilisant les sites de restriction Ncol/Xhol et les domaines VL en utilisant les sites de restriction BamHI/'Sall. L'expression des fragments Fab est réalisée dans des souches E.coli HB215 I sous induction à l'IPTG pendant 16 heures à 20°C. Les cultures sont ensuite centrifugées et les fractions périplasmiques préparées selon un protocole standard connu de l'homme du métier (Skerra & Plûckthun, Science 240, 1988 : 1038-1041 ). Les purifications sont réalisées par chromatographie d'affinité en utilisant une résine Ni-NTA agarose (Qiagen). Les rendements obtenus sont de l'ordre de 50 à 100 \ig de Fab purifiés selon les clones produits.  The nucleotide sequences of the VH and VL regions of the abovementioned antibodies HE4B-33, HE4B-17. HE4B-27, HE5B-35, HE5C-144, HE5C-123 and HE3C-29 were subcloned into a G92 bicistronic bacterial expression vector permitting the periplasmic expression of Fab fragment fused to a histidine tag (x6) and a peptide-V5 tag. VH domains are nailed using NcoI / XhoI restriction sites and VL domains using BamHI / SalI restriction sites. Expression of the Fab fragments is carried out in E. coli HB215 I strains under induction with IPTG for 16 hours at 20 ° C. The cultures are then centrifuged and the periplasmic fractions prepared according to a standard protocol known to those skilled in the art (Skerra & Pluckthun, Science 240, 1988: 1038-1041). Purifications are performed by affinity chromatography using a Ni-NTA agarose resin (Qiagen). The yields obtained are of the order of 50 to 100 μg of Fab purified according to the clones produced.
Les Fab sont évalués dans un test de liaison ELISA similaire à celui décrit précédemment. L'anticorps anti-peptide V5 couplé à la peroxydase (Invitrogen) est utilisé pour la détection des fragments Fab-6xHis-V5. Les figures 3 A et 3B montrent les résultats obtenus pour l'anticorps HE4B-33.  The Fabs are evaluated in an ELISA binding assay similar to that previously described. Peroxidase-coupled V5 peptide antibody (Invitrogen) is used for detection of Fab-6xHis-V5 fragments. Figures 3A and 3B show the results obtained for the HE4B-33 antibody.
La figure 3 A, notamment, montre une spécificité remarquable des anticorps selon l'invention pour la récepteur HER4 comparée au récepteur HER3.  In particular, FIG. 3A shows a remarkable specificity of the antibodies according to the invention for the HER4 receptor compared to the HER3 receptor.
Construction des anticorps anti-HER4 sous le format IgG et productionConstruction of anti-HER4 antibodies in IgG format and production
Les domaines VH et VL des anticorps de l'invention sont assemblés par PCR chevauchante avec des peptides signaux eucaryotes (peptide signal de chaîne lourde et peptide signal de chaîne légère) puis insérés dans les vecteurs p GM09-H pour l'expression de la chaîne lourde humaine VH-CH 1-CH2-CH3 et pMGM09-L pour l'expression de la chaîne légère humaine de type Lambda VH-CL. Les vecteurs eucaryotes utilisés permettent l'expression d'anticorps d'isotype IgG 1 humain sous la dépendance d'un promoteur CMV. La production s'effectue à l'aide du système FreeStyle MAX Expression System (Invitrogen) par transfection transitoire de cellules HEK293 en suspension dans un milieu de culture sans sérum. Les cultures sont centrifugées 7 jours après transfection et les surnageants sont récupérés pour être utilisés directement dans un test de liaison ELISA ou pour une étape de purification par chromatographie d'affinité sur protéine A. Evaluation des affinités relatives des anticorps anti-HER4 de l'inventionThe VH and VL domains of the antibodies of the invention are assembled by overlapping PCR with eukaryotic signal peptides (heavy chain signal peptide and light chain signal peptide) and then inserted into the p vectors GM09-H for expression of the chain. heavy human VH-CH1-CH2-CH3 and pMGM09-L for the expression of the Lambda VH-CL human light chain. Eukaryotic vectors used allow expression of IgG isotype antibody 1 human under the dependence of a CMV promoter. The production is effected using the FreeStyle MAX Expression System (Invitrogen) by transient transfection of HEK293 cells in suspension in serum-free culture media. The cultures are centrifuged 7 days after transfection and the supernatants are recovered for direct use in an ELISA binding assay or for a protein A affinity chromatography purification step. Evaluation of the relative affinities of the anti-HER4 antibodies of the invention
Les anticorps humains anti-HER4 purifiés sont incubés 2 heures à 37°C dans les puits d'une plaque de microtitration 96 puits préalablement coatés avec les protéines humaines HER4-Fc. HER3-Fc à 50 n /puits et de la BSA et saturés avec une solution de BSA à 5 % en PBS IX. Les anticorps liés à la protéine HER4-Fc sont détectés en utilisant un anticorps anti hum an IgG F(ab')2 spécifie (JacksonlmmunoResearch). The purified anti-HER4 human antibodies are incubated for 2 hours at 37 ° C. in the wells of a 96-well microtiter plate previously coated with the human HER4-Fc proteins. HER3-Fc at 50 n / well and BSA and saturated with 5% BSA solution in PBS IX. The antibodies bound to the HER4-Fc protein are detected using an antihuman IgG antibody F (ab ') 2 specified (JacksonlmmunoResearch).
Les résultats présentés en figures 4 A à 4D montrent la liaison spécifique des anticorps humains selon l'invention à la protéine HER4-Fc. aucune réaction croisée n'est observée pour les anticorps anti-HER4 de l 'invention. The results presented in FIGS. 4A to 4D show the specific binding of the human antibodies according to the invention to the HER4-Fc protein. no cross reaction was observed for anti-HER4 antibodies of the invention.
Les résultats présentés en figures 5 A à 5C établissent les différentes affinités relatives des anticorps humains anti-HER4 de l'invention.  The results presented in FIGS. 5A to 5C establish the different relative affinities of the anti-HER4 human antibodies of the invention.
Les anticorps HE4B-33, HE4B- 17, HE4B-27 et HE5B-35 sont les plus affins parmi l'ensemble des anticorps de l'invention testés.  The antibodies HE4B-33, HE4B-17, HE4B-27 and HE5B-35 are the most affine of all the antibodies of the invention tested.
Expériences de compétition Competition experiences
Les anticorps anti-HER4 selon l'invention désignés HE4B-33, HE5B-35 etAnti-HER4 antibodies according to the invention designated HE4B-33, HE5B-35 and
HE5C-144 produits sous le format IgG et purifiés ont été biotinylés à l'aide du kit EZ-link NHS-PEO Solid Phase Biotinylation kit spin column (Pierce) selon les recommandations du fournisseur. Pour les expériences de compétition, une quantité fixe d'anticorps biotinylé est mise en présence d'une gamme de concentration croissante d'anticorps (format IgG) non marqués. Après 2 heures d'incubation de l'anticorps biotinylé et des anticorps compétiteurs pour la fixation à la protéine recombinante HER4-Fc immobilisée sur plaque de microtitration, plusieurs lavages sont effectués et la détection de l'anticorps biotinylé est réalisée à l'aide d'un conjugué strept a vi d i n e-pero yd asc (Pierce). HE5C-144 products in the IgG format and purified were biotinylated using the EZ-link NHS-PEO Solid Phase Biotinylation kit spin column kit (Pierce) according to the supplier's recommendations. For competitive experiments, a fixed amount of biotinylated antibody is brought into the presence of an increasing concentration range of unlabeled antibodies (IgG format). After 2 hours of incubation of the biotinylated antibody and competing antibodies for binding to the recombinant HER4-Fc protein immobilized on a microtiter plate, several washes are carried out and the detection of the biotinylated antibody is carried out using strept conjugate at e-pero yd asc (Pierce).
Des exemples de résultats de compétition sont présentés en figures 6 A à 6C pour la compétition entre les anticorps HE4B-33 et HE5C- 144 biotinylés versus une gamme croissante des anticorps anti-HER4 de Γ invention non marqués ainsi qu'un témoin anticorps « irr élevant » TR3. 4 Examples of competition results are shown in FIGS. 6A-6C for the competition between the biotinylated HE4B-33 and HE5C-144 antibodies versus a growing range of unlabeled anti-HER4 antibodies as well as an antibody control. raising »TR3. 4
En conclusion, de ces expériences de compétition, il est apparu que les anticorps HE4B-33, HE4B-17. HE5B-35, HE3C-29 et HEC-144 sont capables de se déplacer mutuellement, ce qui suggère un épi tope commun ou chevauchant. Construction de lignées stables exprimant les isoformes JM-a et JM-b du récepteur HER4 In conclusion, from these competition experiments, it appeared that the antibodies HE4B-33, HE4B-17. HE5B-35, HE3C-29 and HEC-144 are able to move mutually, suggesting a common or overlapping epiple. Construction of stable lines expressing HER4 receptor JM-a and JM-b isoforms
L 'isoforme JM-b a été construit à partir de PADNc du récepteur HER4 (isoforme JM-a/CYTl) par PCR chevauchante de manière à déléter les 10 acides aminés supplémentaires de Γ isoforme JM-a. Les fragments générés ont été assemblés puis clonés dans le vecteur pMGMl l (vecteur d'expression eucaryote délété des éléments de replication extrachromosomique) permettant l'intégration génomique des séquences nuclcotidiqucs des isoformes JM-a et JM-b. Après transfection dans des cellules adhérentes HEK293, la pression de sélection pour la résistance à Phygromycine est maintenue pendant 1 mois. Les cultures cellulaires sont réalisées selon des méthodes et protocoles connus de l'homme du métier. The JM-b isoform was constructed from cDNA of the HER4 receptor (JM-α / CYT1 isoform) by overlapping PCR to delete the additional 10 amino acids of JM-α isoform. The generated fragments were assembled and cloned into the vector pMGMl the (eucaryotic expression vector deleted extrachromosomal replication elements) for the genomic integration of sequences nuclcotidiqucs isoforms JM JM-a and-b. After transfection into adherent HEK293 cells, the selection pressure for hygromycin resistance is maintained for 1 month. The cell cultures are carried out according to methods and protocols known to those skilled in the art.
Evaluation de la liaison des anticorps sur cellules Evaluation of antibody binding on cells
Les cellules HEK293 surexprimant les isoformes JM-a et JM-b ainsi que des cellules HEK293 non transfectées sont préparées à 106 cellules/ml en milieu RPMI-SVF 20 % et 100 μΐ par puits sont distribués dans une plaque 96 puits (Falcon). Après 1 nuit à 37°C sous 8 % C02, 100 μΐ/puits d'anticorps anti-HER4 dilués à 5
Figure imgf000055_0001
en RPMI-SVF 20 % sont ajoutés et incubés pendant 1 heure en présence des cellules. Après lavages en RPMI-SVF 20 %, les anticorps liés aux cellules sont révélés comme décrit précédemment pour Γ ELIS A en format IgG. L'anticorps TR3 est utilisé comme anticorps « irrelevant ».
The HEK293 cells overexpressing the JM-α and JM-b isoforms as well as the non-transfected HEK293 cells are prepared at 10 6 cells / ml in 20% RPMI-FCS medium and 100 μl per well are distributed in a 96-well plate (Falcon). . After 1 night at 37 ° C in 8% C02, 100 μΐ / well of anti-HER4 antibodies diluted to 5
Figure imgf000055_0001
in RPMI-FCS 20% are added and incubated for 1 hour in the presence of the cells. After washing with 20% RPMI-FCS, the cell bound antibodies are revealed as previously described for LIS ELIS A in IgG format. The TR3 antibody is used as antibody "irrelevant."
Les résultats, présentés en figure 7 indiquent que les anticorps HE4B-33, The results, shown in Figure 7, indicate that HE4B-33 antibodies,
HE4B- 17, HE5B-35, HE5C- 144 et HE5C- 123 ont une capacité de liaison forte au récepteur HER4 exprimé dans son contexte membranaire et ce. de manière sensiblement identique pour les 2 isoformes JM-a et JM-b du récepteur HER4 humain. HE4B-17, HE5B-35, HE5C-144 and HE5C-123 have a strong binding capacity to the HER4 receptor expressed in its membrane context and this. substantially identically for the 2 isoforms JM-a and JM-b of the human HER4 receptor.
Par ailleurs, les inventeurs ont observé que l'anticorps HE4B-27 est particulièrement intéressant en ce que sa capacité de liaison au récepteur HER4 humain est bien meilleure lorsque ce dernier est sous une forme soluble (ou non membranaire) plutôt que sous sa forme membranaire. En d'autres termes, il peut déduit de cette observation que Γ anticorps ΗΕ4Β-27 pourrait être particulièrement avantageux en ce qu'il permettrait de distinguer une forme solublc clivée d'une forme membranaire du récepteur HER4 humain. Moreover, the inventors have observed that the HE4B-27 antibody is particularly interesting in that its ability to bind to the human HER4 receptor is much better when the latter is in a soluble (or non-membrane) form rather than in its membrane form. . In other words, he can deduce from this observation that Γ4Β-27 antibody could be particularly advantageous in that it would make it possible to distinguish a cleaved form of a membrane form from the human HER4 receptor.
LISTAGE DE SEQUENCES SEQUENCE LISTING
SEQ IP NO 1 : protéine du récepteur HER4 humain avec son peptide signal SEQ IP NO 1: human HER4 receptor protein with its signal peptide
MKPATGLWVWVSLLVAAGTVQPSDSQSVCAGTENKLSSLSDLEQQYRALRKYY ENCEVVMGNLEITSIEHNRDLSFLRSVREVTGYVLVALNQFRYLPLENLRIIRGTKL YEDRYALAffLNYRKDGNFGLQELGLKNLTEILNGGVYVDQNKFLCYADTIHWQ DIVRNP WP SNLTLVSTNGS SGCGRCHKS CTGRC WGPTENHC QTLTRTVC AEQCD GRCYGPYVSDCCHRECAGGCSGPKDTDCFACMNFNDSGACVTQCPQTFVYNPTT FQLEHNFNAKYTYGAFCVKKCPHNFVVDSSSCVRACPSSKMEVEENGIKMCKPC TDICPKACDGIGTGSLMSAQTVDSS ID FINCTKINGNLIFLVTGIHGDPYNAIEAI DPEKLNVFRTVREITGFLNIQSWPPNMTDFSVFSNLVTIGGRVLYSGLSLLILKQQG ITS LQFQ SLKEIS AGNIYITDNSNLC YYHTINWTTLF S TINQRIVIRDNRKAENCT AE GMVCNHLCSSDGCWGPGPDQCLSCRRFSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVEC DPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCSHFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYAD PDRECHPCHPNCTQGCNGPTSHDCIYYPWTGHSTLPQHARTPLIAAGVIGGLFILVI VGLTFAVYVRRKSIKKKRALRRFLETELVEPLTPSGTAPNQAQLRILKETEL RV VLGS G AFGTVYKG rw VPEGETVKIP V ADQLNETTGPKANVEFMDE ALEVLASMDH PHLVRLLGVCLSPTIQLVTQLMPHGCLLEYVHEHKDNIGSQLLLN CVQIAKGM MYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLEGDEKEYNADGGKMPIK WMALECIHYRKFTHQSDVWSYGVTIWEL TFGGKPYDGIPTREIPDLLEKGERLP QPPICTmVYMVMVKCWMIDADSRPKFKELAAEFSRMARDPQRYLVIQGDDRMK LPSPNDSKFFQNLLDEEDLEDMMDAEEYLVPQAFNIPPPIYTSRARIDS RSEIGHS PPPAYTPMSGNQFVYRDGGFAAEQGVSVPYRAPTSTIPEAPVAQGATAEIFDDSCC NGTLRKPVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFAPERSPRGELDEEGYMTPMRDKPKQE YL. PVEENPFVSRRKNGDLQALDNPEYHNAS GPPKAEDEYVNEPLYLNTFANTL GKAEYL NN'n.SMPEKAKKAFDNPDYWNHSLPPRSTLQHPDYLQEYSTKYFYKQ NGRIRP IV AENPE YLS EF S LKP GT VLPPPP YRHRNT V V MKPATGLWVWVSLLVAAGTVQPSDSQSVCAGTENKLSSLSDLEQQYRALRKYY ENCEVVMGNLEITSIEHNRDLSFLRSVREVTGYVLVALNQFRYLPLENLRIIRGTKL YEDRYALAffLNYRKDGNFGLQELGLKNLTEILNGGVYVDQNKFLCYADTIHWQ DIVRNP WP SNLTLVSTNGS SGCGRCHKS CTGRC WGPTENHC QTLTRTVC AEQCD GRCYGPYVSDCCHRECAGGCSGPKDTDCFACMNFNDSGACVTQCPQTFVYNPTT FQLEHNFNAKYTYGAFCVKKCPHNFVVDSSSCVRACPSSKMEVEENGIKMCKPC TDICPKACDGIGTGSLMSAQTVDSS ID FINCTKINGNLIFLVTGIHGDPYNAIEAI DPEKLNVFRTVREITGFLNIQSWPPNMTDFSVFSNLVTIGGRVLYSGLSLLILKQQG ITS LQFQ SLKEIS AGNIYITDNSNLC YYHTINWTTLF S TINQRIVIRDNRKAENCT AE GMVCNHLCSSDGCWGPGPDQCLSCRRFSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVEC DPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCSHFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYAD PDRECHPCHPNCTQGCNGPTSHDCIYYPWTGHSTLPQHARTPLIAAGVIGGLFILVI VGLTFAVYVRRKSIKKKRALRRFLETELVEPLTPSGTAPNQAQLRILKETEL VLGS RV G AFGTVYKG rw VPEGETVKIP V ADQLNETTGPKANVEFMDE ALEVLASMDH PHLVRLLGVCLSPTIQLVTQLMPHGCLLEYVHEHKDNIGSQLLLN CVQIAKGM MYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLEGDEKEYNADGGKMPIK WMALECIHYRKFTHQSDVWSYGVTIWEL TFGGKPYDGIPTREIPDLLEKGERLP QPPICTmVYMVMVKCWMIDADSR PKFKELAAEFSRMARDPQRYLVIQGDDRMK LPSPNDSKFFQNLLDEEDLEDMMDAEEYLVPQAFNIPPPIYTSRARIDS RSEIGHS PPPAYTPMSGNQFVYRDGGFAAEQGVSVPYRAPTSTIPEAPVAQGATAEIFDDSCC NGTLRKPVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFAPERSPRGELDEEGYMTPMRDKPKQE YL. PVEENPFVSRRKNGDLQALDNPEYHNAS GPPKAEDEYVNEPLYLNTFANTL GKAEYL NN ' n.SMPEKAKKAFDNPDYWNHSLPPRSTLQHPDYLQEYSTKYFYKQ NGRIRP IV AENPE YLS EF LKP GT VLPPPP YRHRNT VV
SEO ID NO 2: protéine du récepteur HER4 humain (Isoforme JM-a CYT-1 (Q 15303-1)) SEO ID NO 2: Human HER4 Receptor Protein (Isoform JM-a CYT-1 (Q 15303-1))
OSVCAGTEN LSSLSDLEOQYRALRKYYENCEVVMGNLEITSIEHNRDLSFLRSV REVTGYVLVAL QFRYLPLENLRIIRGTKLYEDRYALAIFLNYRKDGNFGLQELGL K\a.TEILNGGVYVDQ KFLCYADTIHWQDIVRNPWPS LTLVSTNGSSGCGRCH KS CTGRC WGPTENHCQTLTRT VC AEQCDGRC YGP YV SDCCHREC AGGC S GPKDT DCFACMNFNDSGACVTQCPQTFVYNPTTFQLEHNFNA YTYGAFCVKKCPHNFV VD S S S C VRACP S SKME VEENGIKM CKPCTDICPKACDGIGTGS LMS AQT VD S SNID KFL CTKL GNLIFLVTGIHGDPYNAIEAIDPE LNVFRTVREITGFLNIQSWPPNMT DFSVFSNLVTIGGRVLYSGLSLLILKQQGITSLQFQSLKEISAGNIYITDNSNLCYYH TINWTTLF S TINQRrVIRDNRKAENCT AEGM VCNHLC S SDGC WGPGPDQCLS CRR FSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVECDPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCS HFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYADPDRECHPCHPNCTQGCNGPTSHDCIYY PWTGHSTLPQHARTPLIAAGVIGGLFILVIVGLTFAVYV^RR SI KRALRRFLETE LVEPLTPSGTAPNQAQLRILKETELKRVKVLGSGAFGTVYKGIWVPEGETVKIPVA IKILNETTGPI ANVEFMDEALIMASMDHPHLVRLLGVCLSPTIQLVTQLMPHGCLL EYVHEHKDNIGSQLLL WCVOIAKGMMYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHV I TDFGLARLLEGDEKEY ADGGKMPI WMALECIHYR FTHQSDVWSYGVTIWEL MTFGGKPYDGIPTREIPDLLEKGERLPQPPICTIDVYMVMV CWMIDADSRPKFKE LAAEFSRMARDPQRYLVIQGDDRMI LPSPNDSKFFQNLLDEEDLEDMMDAEEYL VPQAFN IPPP I YTSR ARIDSN RS E IGH SPPP AYTPMSGNQF VY RDGGFAA EQGVSVP YRAPTSTIPEAPVAQGATAEIFDDSCCNGTLR PVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFA PERSPRGELDEEGYMTPMRD PKQEYLNPVEENPFVSRRK GDLQALDNPEYH ASNGPPKAEDEYVNEPLYLNTFANTLGKAEYLKNNILSMPEKAKKAFDNPDYWN HSLPPRSTLQHPDYLQEYSTKYFYKQNGRIRPIVAENPEYLSEFSLKPGTVLPPPPY RHRNTVV OSVCAGTEN LSSLSDLEOQYRALRKYYENCEVVMGNLEITSIEHNRDLSFLRSV REVTGYVLVAL QFRYLPLENLRIIRGTKLYEDRYALAIFLNYRKDGNFGLQELGL K \ a.TEILNGGVYVDQ KFLCYADTIHWQDIVRNPWPS LTLVSTNGSSGCGRCH KS CTGRC WGPTENHCQTLTRT VC AEQCDGRC YGP YV SDCCHREC CAFM S GPKDT DCFACMNFNDSGACVTQCPQTFVYNPTTFQLEHNFNA YTYGAFCVKKCPHNFV VD SSSC VRACP S SKME VEENGIKM CKPCTDICPKACDGIGTGS LMS AQT VD S SNID KFL CTKL GNLIFLVTGIHGDPYNAIEAIDPE LNVFRTVREITGFLNIQSWPPNMT DFSVFSNLVTIGGRVLYSGLSLLILKQQGITSLQFQSLKEISAGNIYITDNSNLCYYH TINWTTLF S TINQRrVIRDNRKAENCT AEGM VCNHLC S SDGC WGPGPDQCLS RRC FSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVECDPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCS HFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYADPDRECHPCHPNCTQGCNGPTSHDCIYY PWTGHSTLPQHARTPLIAAGVIGGLFILVIVGLTFAVYV ^ RR IF KRALRRFLETE LVEPLTPSGTAPNQAQLRILKETELKRVKVLGSGAFGTVYKGIWVPEGETVKIPVA IKILNETTGPI ANVEFMDEALIMASMDHPHLVRLLGVCLSPTIQLVTQLMPHGCLL EYVHEHKDNIGSQLLL WCVOIAKGMMYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHV I TDFGLARLLEGDEKEY ADGGKMPI WMALECIHYR FTHQSDVWSYGVTIWEL MTFGGKPYDGIPTREIPDLLEKGERLPQPPICTIDVYMVMV CWMIDADSRPKFKE LAAEFSRMARDPQRYLVIQGDDRMI LPSPNDSKFFQNLLDEEDLEDMMDAEEYL VPQAFN IPPP I YTSR ARIDSN RS E IGH SPPP AYTPMSGNQF VY RDGGFAA EQG VSVP YRAPTSTIPEAPVAQGATAEIFDDSCCNGTLR PVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFA PERSPRGELDEEGYMTPMRD PKQEYLNPVEENPFVSRRK GDLQALDNPEYH ASNGPPKAEDEYVNEPLYLNTFANTLGKAEYLKNNILSMPEKAKKAFDNPDYWN HSLPPRSTLQHPDYLQEYSTKYFYKQNGRIRPIVAENPEYLSEFSLKPGTVLPPPPY RHRNTVV
SEQ ID NO 3: protéine du récepteur HER4 humain (Isoforme JM-b CYT-1 (Q 15303-2)) SEQ ID NO: 3 Human HER4 Receptor Protein (Isoform JM-b CYT-1 (Q 15303-2))
QSVCAGTENKLSSLSDLEQQYRALRKYYENCEWMGNLEITSIEHNRDLSFLRSV REVTGYVLVALNQFRYLPLENLRIIRGT LYEDRYALAIFLNYRKDGNFGLQELGL QSVCAGTENKLSSLSDLEQQYRALRKYYENCEWMGNLEITSIEHNRDLSFLRSV REVTGYVLVALNQFRYLPLENLRIIRGT LYEDRYALAIFLNYRKDGNFGLQELGL
KNLTEILNGGVYVDQNKFLCYADTIHWQDIVRNPWPSNLTLVSTNGSSGCGRCH KSCTGRCWGPTENHCQTLTRTVCAEQCDGRCYGPYVSDCCHRECAGGCSGPKDT DCFACM FNDSGACVTQCPQTFV^^ PTTFQLEH FNAKYTYGAFCVKKCPHNFV VDSSSCVRACPSSKMEVEENGIKMCKPCTDICPKACDGIGTGSLMSAQTVDSSNID KFINCTKn^GNLIFLVTGIHGDPYNAIEAIDPEKLNVFRTVREITGFLNIQSWPPNMT DFS SNLVTIGGRVLYSGLSLLILKQQG1TSLQFQSLKEISAGNIYITDNSNLCYYH TINWTTLFSTINQRIVIRDNRKAENCTAEGMVCNHLCSSDGCWGPGPDQCLSCR FSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVECDPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCS HFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYADPDRECHPCHPNCTQGCIGSSIEDCIGLM DRTPLlAAGVIGGLFlL\nVGLTFA\^VRRKSl KKRALRRFLF;TELVEPLTPSGTAP NQAQLRILKETELKRVKVLGSGAFGTVYKGIWVPEGETVKJPVA1KILNETTGPKA NVEFMDEALF ASMDHPHLVRLLGVCLSPT1QLVTQLMPHGCLLEYVHEHKDNIG SQLLLNWCVQIAKGMMYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLEG DEKEYNADGGKMPIKWMALECIHYRKFTFIQSDVWSYGVTrWELMTFGGKPYDG ffTREIPDLLEKGERLPQPPICTroVYMVMVKCWMIDADSRPI FKELAAEFSRMAR DPQRYLVIQGDDRMKLPSP DSKFFQNLLDEEDLEDMMDAEEYLVPQAFNIPPPI YTSRARIDSNRSEIGHSPPPAYTPMSGNQFVYRDGGFAAEQGVSVPYRAPTSTIPE APVAQGATAEIFDDSCCNGTLRKPVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFAPERSPRGEL DEEGYMTPMRDKP QEYLNPVEENPFVSRRKNGDLQALDNPEYHNASNGPPKAE DEYVNEPLYLNTFANTLG AEYLKNNILSMPEKAK AFDNPDYWNHSLPPRSTL QHPDYLQEYSTKYFYKQNGRIRPrVAENPEYLSEFSLKPGTVLPPPPYRHRNTVV KNLTEILNGGVYVDQNKFLCYADTIHWQDIVRNPWPSNLTLVSTNGSSGCGRCH KSCTGRCWGPTENHCQTLTRTVCAEQCDGRCYGPYVSDCCHRECAGGCSGPKDT DCFACM FNDSGACVTQCPQTFV ^ ^ ^ PTTFQLEH FNAKYTYGAFCVKKCPHNFV VDSSSCVRACPSSKMEVEENGIKMCKPCTDICPKACDGIGTGSLMSAQTVDSSNID KFINCTKn GNLIFLVTGIHGDPYNAIEAIDPEKLNVFRTVREITGFLNIQSWPPNMT DFS SNLVTIGGRVLYSGLSLLILKQQG1TSLQFQSLKEISAGNIYITDNSNLCYYH TINWTTLFSTINQRIVIRDNRKAENCTAEGMVCNHLCSSDGCWGPGPDQCLSCR FSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVECDPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCS HFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYADPDRECHPCHPNCTQGCIGSSIEDCIGLM DRTPLlAAGVIGGLFlL \ nVGLTFA \ ^ VRRKSl KKRALRRFLF; TELVEPLTPSGTAP NQAQLRILKETELKRVKVLGSGAFGTVYKGIWVPEGETVKJPVA1KILNETTGPKA NVEFMDEALF ASMDHPHLVRLLGVCLSPT1QLVTQLMPHGCLLEYVHEHKDNIG SQLLLNWCVQIAKGMMYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLEG DEKEYNADGGKMPIKWMALECIHYRKFTFIQSDVWSYGVTrWELMTFGGKPYDG ffTREIPDLLEKGERLPQPPICTroVYMVMVKCWMIDADSRPI FKELAAEFSRMAR DPQRYLVIQGDDRMKLPSP DSKFFQNLLDEEDLEDMMDAEEYLVPQAFNIPPPI YTSRARIDSNRSEIGHSPPPAYTPMSGNQFVYRDGGFAAEQGVSVPYRAPTSTIPE APVAQGATAEIFDDSCCNGTLRKPVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFAPERSPRGEL DEEGYMTPMRDKP QEYLNPVEENPFVSRRKNGDLQALDNPEYHNASNGPPKAE DEYVNEPLYLNTFANTLG AEYLKNNILSMPEKAK AFDNPDYWNHSLPPRSTL QHPDYLQEYSTKYFYKQNGRIRPrVAENPEYLSEFSLKPGTVLPPPPYRHRNTVV
SEQ ID NO 4: protéine du récepteur HER4 humain (Isoforme JM-a CYT-2 (Q 15303-3)) SEQ ID NO 4: Human HER4 Receptor Protein (Isoform JM-a CYT-2 (Q 15303-3))
QSVCAGTE LSSLSDLEQQYRALRKYYENCEVVMGNLEITSIEHNRDLSFLRSV REVTGYVLVALNQFRYLPLENLRIIRGT LYEDRYALAIFLNYRKDGNFGLQELGL KNLTEILNGGVYVDQNKFLCYADTIHWQDIVRNPWPSNLTLVSTNGSSGCGRCH KS CTGRC WGPTENHCQTLTRT VC AEQCDGRC YGP YVSDCCHREC AGGC S GPKDT DCFACMNFNDSGACVTQCPQTFVTOPTTFQLEHNFNAKYTYGAFCVKKCPH FV VDSSSCVRACPSSKMEVEENGIKMCKPCTDICPKACDGIGTGSLMSAQTVDSSNID KFLNCTKINGNLIFLVTGIHGDPYNAIEAIDPEKLNVFRTVREITGFLNIQSWPPNMT DFSVFSNLVTIGGRVLYSGLSLLILKQQGITSLQFQSLKEISAGNIYITDNSNLCYYH QSVCAGTE LSSLSDLEQQYRALRKYYENCEVVMGNLEITSIEHNRDLSFLRSV REVTGYVLVALNQFRYLPLENLRIIRGT LYEDRYALAIFLNYRKDGNFGLQELGL KNLTEILNGGVYVDQNKFLCYADTIHWQDIVRNPWPSNLTLVSTNGSSGCGRCH KS CTGRC WGPTENHCQTLTRT VC AEQCDGRC YGP YVSDCCHREC CAFM S GPKDT DCFACMNFNDSGACVTQCPQTFVTOPTTFQLEHNFNAKYTYGAFCVKKCPH FV VDSSSCVRACPSSKMEVEENGIKMCKPCTDICPKACDGIGTGSLMSAQTVDSSNID KFLNCTKINGNLIFLVTGIHGDPYNAIEAIDPEKLNVFRTVREITGFLNIQSWPPNMT DFSVFSNLVTIGGRVLYSGLSLLILKQQGITSLQFQSLKEISAGNIYITDNSNLCYYH
Tn TWTTLFSTLNQRIVIRDNRKAENCTAEGMVCNHLCSSDGCWGPGPDQCLSCRR FSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVECDPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCS HFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYADPDRECHPCHPNCTQGCNGPTSHDCIYY PWTGHSTLPQHARTPLlAAGVlGGLFILVnVGLTFAVYVRRKSlKKKRALRRFLETE LVEPLTPSGTAPNQAQLRILKETELKRVKVLGSGAFGTVYKGIWVPEGETVKIPVA IKILNETTGPB ANVEFMDEAL ASMDHPHLVRLLGVCLSPTIQLVTQLMPHGCLL EYVHEHKDNIGSQLLLNWCVQIAKGMMYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKI TDFGLARLLEGDEKEYNADGGKMPIKWMALECIHYRKFTHQSDVWSYGVTIWEL MTFGGKPYDGIPTREIPDLLE GERLPQPPICTIDVYMVMVKCWMIDADSRPKFKE LAAEFSRMARDPQRYLVIQGDDRMKLPSPNDSKFFQNLLDEEDLEDMMDAEEYL VPQAFNIPPPIYTSRARIDSNRNQFVYRDGGFAAEQGVSVPYRAPTSTIPEAPVAQG ATAEIFDDSCCNGTLRKPVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFAPERSPRGELDEEGYM TPMRDKP QEYLNPVEENPFVSPJ KNGDLQALDNPEYFINASNGPPKAEDEYVNE PLYLNTFANTLGKAEYLK NILSMPEKAKKAFDNPDYWNHSLPPRSTLQHPDYLQ EYSTKYFYKQNGRIRPIVAE PEYLSEFSL PGTVLPPPPYRHRNTVV Tn TWTTLFSTLNQRIVIRDNRKAENCTAEGMVCNHLCSSDGCWGPGPDQCLSCRR FSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVECDPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCS HFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYADPDRECHPCHPNCTQGCNGPTSHDCIYY PWTGHSTLPQHARTPLlAAGVlGGLFILVnVGLTFAVYVRRKSlKKKRALRRFLETE LVEPLTPSGTAPNQAQLRILKETELKRVKVLGSGAFGTVYKGIWVPEGETVKIPVA IKILNETTGPB ANVEFMDEAL ASMDHPHLVRLLGVCLSPTIQLVTQLMPHGCLL EYVHEHKDNIGSQLLLNWCVQIAKGMMYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKI TDFGLARLLEGDEKEYNADGGKMPIKWMALECIHYRKFTHQSDVWSYGVTIWEL MTFGGKPYDGIPTREIPDLLE GERLPQPPICTIDVYMVMVKCWMIDADSRPKFKE LAAEFSRMARDPQRYLVIQGDDRMKLPSPNDSKFFQNLLDEEDLEDMMDAEEYL VPQAFNIPPPIYTSRARIDSNRNQFVYRDGGFAAEQGVSVPYRAPTSTIPEAPVAQG ATAEIFDDSCCNGTLRKPVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFAPERSPRGELDEEGYM TPMRDKP QEYLNPVEENPFVSPJ KNGDLQALDNPEYFINASNGPPKAEDEYVNE PLYLNTFANTLGKAEYLK NILSMPEKAKKAFDNPDYWNHSLPPRSTLQHPDYLQ EYSTKYFYKQNGRIRPIVAE PEYLSEFSL PGTVLPPPPYRHRNTVV
SEQ ID NO 5: protéine du récepteur HER4 humain (Isoforme JM-b CYT-2 (Q 15303-4)) SEQ ID NO: 5 Human HER4 Receptor Protein (Isoform JM-b CYT-2 (Q 15303-4))
QSVCAGTEN LSSLSDLEQQYRALRKYYENCEVVMGNLEITSIEHNRDLSFLRSV REVTGYVLVALNQFRYLPLENLRIERGTKLYEDRYALAIFLNYRKDGNFGLQELGL KNLTEILNGG VDQN FLCYADTIHWQDIVRNPWPSNLTLVSTNGSSGCGRCH SCTGRCWGPTENHCQTLTRTVCAEQCDGRCYGPYVSDCCHRECAGGCSGPKDT DCFACMNFNDSGACVTQCPQTFVYNPTTFQLEHNFNAKYTYGAFCVKKCPH FV VD S S S C VRACP S SKME VEENGIKMCKPCTDICPKACDGIGTGS LMS AQT VD S SNID KFI CTKlNG LIFLVTGIHGDPYNAlEAIDPEKLNV 'RTVREITGFLNlQSWPPN T DFS SNLVT1GGRVLYSGLSLLILKQQGITSLQFQSLKEISAGNIYITDNSNLCYYH TLNWTTLFSTr QRrVIRDNRKAENCTAEGMVC HLCSSDGCWGPGPDQCLSCRR FSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVECDPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCS HFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYADPDRECHPCHPNCTQGCIGSSIEDCIGLM DRTPLLAAGVIGGLFILVIVGLTFAV RRKSIKKKRALRRFLETELVEPLTPSGTAP NQAQLRILKETELKRVKVLGSGAFGTVYKGIWVPEGETVKLPVAIKILNETTGPKA NVEFMDEALIMASMDHPHLVRLLGVCLSPTIQLVTQLMPHGCLLEYVHEHKDNIG SQLLLNWCVQIAKGMMYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLEG DEKEYNADGGKMPIKWMALECfflYRKFTHQSDVWSYGVTr ELMTFGGKPYDG IPTREIPDLLEKGERLPQPPICTroVYMVMVKCWMroADSRPKFKELAAEFSRMAR DPQRYLVIQGDDRMKLPSPNDSKFFQNLLDEEDLEDMMDAEEYLVPQAFNIPPPI YTSRARIDSNRNQFVYRDGGFAAEQGVSVPYRAPTSTIPEAPVAQGATAEIFDDSC CNGTLRKPVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFAPERSPRGELDEEGYMTPMRDKPKQE YLNPVEENPFVSRRKNGDLQALD PEYHNASNGPPKAEDEYVNEPLYLNTFANTL GKAEYLK NILSMPEKAKKAFDNPDYWNHSLPPRSTLQHPDYLQEYSTKYFYKQ NGRIRPIVAENPEYLSEFSLKPGTVLPPPPYRHRNTVV QSVCAGTEN LSSLSDLEQQYRALRKYYENCEVVMGNLEITSIEHNRDLSFLRSV REVTGYVLVALNQFRYLPLENLRIERGTKLYEDRYALAIFLNYRKDGNFGLQELGL KNLTEILNGG VDQN FLCYADTIHWQDIVRNPWPSNLTLVSTNGSSGCGRCH SCTGRCWGPTENHCQTLTRTVCAEQCDGRCYGPYVSDCCHRECAGGCSGPKDT DCFACMNFNDSGACVTQCPQTFVYNPTTFQLEHNFNAKYTYGAFCVKKCPH FV VD SSSC VRACP S SKME VEENGIKMCKPCTDICPKACDGIGTGS LMS AQT VD S SNID KFI CTKlNG LIFLVTGIHGDPYNAlEAIDPEKLNV 'RTVREITGFLNlQSWPPN T DFS SNLVT1GGRVLYSGLSLLILKQQGITSLQFQSLKEISAGNIYITDNSNLCYYH TLNWTTLFSTr QRrVIRDNRKAENCTAEGMVC HLCSSDGCWGPGPDQCLSCRR FSRGRICIESCNLYDGEFREFENGSICVECDPQCEKMEDGLLTCHGPGPDNCTKCS HFKDGPNCVEKCPDGLQGANSFIFKYADPDRECHPCHPNCTQGCIGSSIEDCIGLM DRTPLLAAGVIGGLFILVIVGLTFAV RRKSIKKKRALRRFLETELVEPLTPSGTAP NQAQLRILKETELKRVKVLGSGAFGTVYKGIWVPEGETVKLPVAIKILNETTGPKA NVEFMDEALIMASMDHPHLVRLLGVCLSPTIQLVTQLMPHGCLLEYVHEHKDNIG SQLLLNWCVQIAKGMMYLEERRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLEG DEKEYNADGGKMPIKWMALECfflYRKFTHQSDVWSYGVTr ELMTFGGKPYDG IPTREIPDLLEKGERLPQPPICTroVYMVMVKCWMroADSRPKFKELAAEFSRMAR DPQRYLVIQGDDRMKLPSPNDSKFFQNLLD EEDLEDMMDAEEYLVPQAFNIPPPI YTSRARIDSNRNQFVYRDGGFAAEQGVSVPYRAPTSTIPEAPVAQGATAEIFDDSC CNGTLRKPVAPHVQEDSSTQRYSADPTVFAPERSPRGELDEEGYMTPMRDKPKQE YLNPVEENPFVSRRKNGDLQALD PEYHNASNGPPKAEDEYVNEPLYLNTFANTL GKAEYLK NILSMPEKAKKAFDNPDYWNHSLPPRSTLQHPDYLQEYSTKYFYKQ NGRIRPIVAENPEYLSEFSLKPGTVLPPPPYRHRNTVV
SEQ II) NO 6: ADN du domaine variable VH de HE4B-33 SEQ II) NO. 6: VH variable domain DNA of HE4B-33
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAG TGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCT GGGTGCGACAGGCCCCTGGGCAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCC TATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTA CCGCGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGATC TGAGGACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGAAGTCGTGGTTATTATGATCCTTT TGATGTCTGGGGCCAGGGCACTCTGGTGACCGTCTCGAGC SEQ 1D NO 7: Protéine du domaine variable VH de HE4B-33  GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAG TGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCT GGGTGCGACAGGCCCCTGGGCAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCC TATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTA CCGCGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGATC TGAGGACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGAAGTCGTGGTTATTATGATCCTTT TGATGTCTGGGGCCAGGGCACTCTGGTGACCGTCTCGAGC SEQ 1D NO 7: Protein variable domain VH HE4B-33
EVQLVQSGAEVKKPGASV VSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEW GGIIP1F GTANYAQKFQGRVTITADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARSRGYYDPFDVW GQGTLVTVSS SEQ ID NO 8: ADN du domaine variable VL de HE4B-33  EVQLVQSGAEVKKPGASV VSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEW GGIIP1F GTANYAQKFQGRVTITADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARSRGYYDPFDVW GQGTLVTVSS SEQ ID NO 8: HE4B-33 Variable Domain DNA VL
CAGTCTGTCGTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGT CACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAAT AAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGCCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGACATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCCATTATTACT GCGGAGCGTGGGATAGCAGCCTGAGTGTTGCGG 1TTCGGCGGAGGGACCAA GCTGACCGTCCTA  CAGTCTGTCGTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGT CACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAAT AAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGCCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGACATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCCATTATTACT GCGGAGCGTGGGATAGCAGCCTGAGTGTTGCGG 1TTCGGCGGAGGGACCAA GCTGACCGTCCTA
SEQ ID NO 9: Protéine du domaine variable VL de HE4B-33 SEQ ID NO 9: Protein of the VL variable domain of HE4B-33
QSVVTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNN SWYQQLPGTAPKLLIYDNN RPQSVVTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNN SWYQQLPGTAPKLLIYDNN RP
SGIPDRFSASKSGTSATLDITGLQTGDEAHYYCGAWDSSLSVAVFGGGTKLTVL SEQ ID NQ 10: Protéine du CD -H1 de la chaîne lourde de HE4B-33 SYGIS SGIPDRFSASKSGTSATLDITGLQTGDEAHYYCGAWDSSLSVAVFGGGTKLTVL SEQ ID NQ 10: HE4B-33 Heavy Chain CD -H1 Protein SYGIS
SEQ ID NO 11: Protéine du CDR-H2 de la chaîne lourde de HE4B-33 SEQ ID NO. 11: HE4B-33 Heavy Chain CDR-H2 Protein
GIIPIFGTANYAQKFQG GIIPIFGTANYAQKFQG
SEQ ID NQ 12: Protéine du CDR-H3 de la chaîne lourde de HE4B-33 SEQ ID NQ 12: HE4B-33 Heavy Chain CDR-H3 Protein
SRGYYDPFDV SEQ ID NO 13: Protéine du CDR-L1 de la chaîne légère de HE4B-33 SRGYYDPFDV SEQ ID NO 13: HE4B-33 Light Chain CDR-L1 Protein
SGSSSNIGNNYVS  SGSSSNIGNNYVS
SEQ ID NQ 14: Protéine du CDR-L2 de la chaîne légère de HE4B-33 SEQ ID NQ 14: HE4B-33 Light Chain CDR-L2 Protein
DNN RPS DNN RPS
SEQ ID NO 15: Protéine du CDR-L3 de la chaîne légère de HE4B-33 SEQ ID NO 15: HE4B-33 Light Chain CDR-L3 Protein
GAWDSSLSVAV  GAWDSSLSVAV
SEQ ID NO 16: ADN du domaine variable VH de HE4B-17 SEQ ID NO: 16 VH Domain Variable Domain of HE4B-17
CAGGTCCAGCTTGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAGGCCTGGGTCCTCGGT GAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCT GGGTGCGACAGACCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCC TATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTA CCGCGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGATC TGAGGACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGAAGTCGTGGTTATTATGATCCTTT TGATGTCTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC CAGGTCCAGCTTGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAGGCCTGGGTCCTCGGT GAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCT GGGTGCGACAGACCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCC TATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTA CCGCGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGATC TGAGGACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGAAGTCGTGGTTATTATGATCCTTT TGATGTCTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC
SEQ ID NO 17: Protéine du domaine variable VH de HE4B-17 SEQ ID NO 17: Protein of the VH variable domain of HE4B-17
QVQLVQSGAEVKRPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQTPGQGLEWMGGIIPIF GTANYAQKFQGRVTITADTSTSTVYMELSSLRSEDTAWFCARSRGYYDPFDVW GQGTLVÏVSS SEQ ID NO 18: ADN du domaine variable VL de HE4B-17 QVQLVQSGAEVKRPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQTPGQGLEWMGGIIPIF GTANYAQKFQGRVTITADTSTSTVYMELSSLRSEDTAWFCARSRGYYDPFDVW GQGTLVIVSS SEQ ID NO 18: VL variable domain DNA of HE4B-17
CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGT CACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAACTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAAT AAACGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACT GCGGATCATGGGATATCGGCCTGGGTGCTTATGTCTTCGCAGCTGGGACCAAG CTGACCGTCCTA SEQ ID NO 19: Protéine du domaine variable V L de HE4B-17  CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGT CACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAACTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAAT AAACGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACT GCGGATCATGGGATATCGGCCTGGGTGCTTATGTCTTCGCAGCTGGGACCAAG CTGACCGTCCTA SEQ ID NO 19: A protein of the variable domain V L HE4B-17
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSNSNIGN YVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRP SGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGSWDIGLGAYYFAAGTKLTVL  QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSNSNIGN YVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRP SGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGSWDIGLGAYYFAAGTKLTVL
SEQ ID NO 20: Protéine du CDR-H1 de la chaîne lourde de HE4B-17 SEQ ID NO. 20: HE4B-17 Heavy Chain CDR-H1 Protein
SYAIS SYAIS
SEQ ID NO 21: Protéine du CDR-H2 de la chaîne lourde de HE4B-17 SEQ ID NO 21: HE4B-17 Heavy Chain CDR-H2 Protein
G 11 P I FGT AN Y AQ FQG SEQ ID NO 22: Protéine du CDR-H3 de la chaîne lourde de HE4B-17  G 11 P I FGT Y FQG SEQ ID NO 22: HE4B-17 Heavy Chain CDR-H3 Protein
SRGYYDPFDV  SRGYYDPFDV
SEQ ID NO 23: Protéine du CDR-L1 de la chaîne légère de HE4B-17 SEQ ID NO 23: HE4B-17 Light Chain CDR-L1 Protein
SGSNSNIGNNYVS SGSNSNIGNNYVS
SEQ ID NO 24: Protéine du CDR-L2 de la chaîne légère de HE4B-17 SEQ ID NO 24: HE4B-17 Light Chain CDR-L2 Protein
DNNKRPS DNNKRPS
SEQ ID NO 25: Protéine du CDR-L3 de la chaîne légère de HE4B-17 SEQ ID NO: 25 HE4B-17 Light Chain CDR-L3 Protein
GSWDIGLGAYV SEQ ID NO 26: ADN du domaine variable VH de HE4B-27 GSWDIGLGAYV SEQ ID NO 26: VH variable domain DNA of HE4B-27
CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGAATCGTGAAGCCTTCACAGACCC TGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAACTGGTGG AGTTGGGTCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCT ATCATAGTGGGAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATA TCAGTAGACAAGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGC CGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGCTCAGCGAGGTCTGATGCTTTTG ATATCTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC SEQ ID NO 27: Protéine du domaine variable VH de HE4B-27  CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGAATCGTGAAGCCTTCACAGACCC TGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAACTGGTGG AGTTGGGTCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCT ATCATAGTGGGAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATA TCAGTAGACAAGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGC CGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGCTCAGCGAGGTCTGATGCTTTTG ATATCTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC SEQ ID NO 27: Protein variable domain VH HE4B-27
QLQLQES GPGIVKP SQTLS LTCTVS GGS ISS SNW WS W VRQPPGKGLE WIGEIYHS G STNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASSARSDAFDIWGQG TLVTVSS SEQ ID NO 28: ADN du domaine variable VL de HE4B-27  QLQLQES GPGIVKP SQTLS LTCTVS GGS ISS SNW WS VRQPPGKGLE WIGEIYHS G STNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASSARSDAFDIWGQG TLVTVSS SEQ ID NO 28: DNA of the variable domain VL of HE4B-27
CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGT CACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAAT AAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACT GCGGATCATGGGATATCGGCCTGGGTGCTTATGTCTTCGCAGCCGGGACCAAG CTGACCGTCCTA  CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGT CACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAAT AAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACT GCGGATCATGGGATATCGGCCTGGGTGCTTATGTCTTCGCAGCCGGGACCAAG CTGACCGTCCTA
SEQ ID NO 29: Protéine du domaine variable VL de HE4B-27 SEQ ID NO 29: Protein of the VL variable domain of HE4B-27
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNWSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRP SGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGSWDIGLGAYVFAAGTKLTVL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNWSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRP SGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGSWDIGLGAYVFAAGTKLTVL
SEQ ID NO 30: Protéine du CDR-H 1 de la chaîne lourde de HE4B-27 SEQ ID NO: 30 HE4B-27 Heavy Chain CDR-H 1 Protein
SSNWWS  SSNWWS
SEQ ID NO 31: Protéine du CDR-H2 de la chaîne lourde de HE4B-27 SEQ ID NO 31: HE4B-27 Heavy Chain CDR-H2 Protein
EIYHSGST TNPSLKS SEQ ID NO 32: Protéine du CDR-H3 de la chaîne lourde de HE4B-27EIYHSGST TNPSLKS SEQ ID NO 32: HE4B-27 Heavy Chain CDR-H3 Protein
SARSDAFDI SARSDAFDI
SEQ ID NO 33: Protéine du CDR-L1 de la chaine légère de HE4B-27 SEQ ID NO 33: HE4B-27 Light Chain CDR-L1 Protein
SGSSSN1GNNYVS SGSSSN1GNNYVS
SEQ ID NO 34: Protéine du CDR-L2 de la chaîne légère de HE4B-27 SEQ ID NO 34: HE4B-27 Light Chain CDR-L2 Protein
DNNKRPS SEQ ID NO 35: Protéine du CDR-L3 de la chaîne légère de HE4B-27 DNNKRPS SEQ ID NO. 35: HE4B-27 Light Chain CDR-L3 Protein
GSWDIGLGAYV GSWDIGLGAYV
SEQ ID NQ 36: ADN du domaine variable VH de HE5B-35 SEQ ID NQ 36: DNA of the VH variable domain of HE5B-35
CAGATGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGG TGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCC CTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGACAGAGTCACGATT ACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGC GAGCAGCCTGAGGT CAGATGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGG TGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCC CTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGACAGAGTCACGATT ACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGC GAGCAGCCTGAGGT
CTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCTGTCCTGGGGGGGATCG GGGGACTACTGGGGCCAGGGCACTCTGGTGACCGTCTCGAGC CTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCTGTCCTGGGGGGGATCG GGGGACTACTGGGGCCAGGGCACTCTGGTGACCGTCTCGAGC
SEQ ID NO 37: Protéine du domaine variable VH de HE5B-35 SEQ ID NO 37: VH variable domain protein of HE5B-35
QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIF GTAN Y AQKFQDRV T ITADESTSTAYM E LSSLRSEDTAVYYCARGLSWGGSGDYW GQGTLVTVSS  QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIF GTAN Y AQKFQDRV T ITADESTSTAYM E LSSLRSEDTAVYYCARGLSWGGSGDYW GQGTLVTVSS
SEQ ID NO 38: ADN du domaine variable VL de HE5B-35 SEQ ID NO 38: VL variable domain DNA of HE5B-35
CAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAACGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGT CACCATCCCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAAT AAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACT GCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAA GCTGACCGTCCTA CAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAACGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGT CACCATCCCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAAT AAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACT GCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAA GCTGACCGTCCTA
SEQ ID NO 39: Protéine du domaine v ariable VL de HE5B-35 SEQ ID NO 39: Protein from the V ariable VL Domain of HE5B-35
QPVLTQPPSTSGTPGQRVTIPCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPS GIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAWVFGGGTKLTVL QPVLTQPPSTSGTPGQRVTIPCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPS GIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAWVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO 40: Protéine du CDR-H1 de la chaîne lourde de HE5B-35 SEQ ID NO 40: HE5B-35 Heavy Chain CDR-H1 Protein
SYAIS  SYAIS
SEQ ID NO 41: Protéine du CDR-H2 de la chaîne lourde de HE5B-35 SEQ ID NO. 41: HE5B-35 Heavy Chain CDR-H2 Protein
GIIPIFGTANYAQ FQD GIIPIFGTANYAQ FQD
SEQ ID NO 42: Protéine du CDR-H3 de la chaîne lourde de HE5B-35 SEQ ID NO 42: HE5B-35 Heavy Chain CDR-H3 Protein
GLSWGGSGDY GLSWGGSGDY
SEQ ID NO 43: Protéine du CDR-L1 de la chaîne légère de HE5B-35 SEQ ID NO 43: HE5B-35 Light Chain CDR-L1 Protein
SGSSSNIGNNYVS SEQ ID NO 44: Protéine du CDR-L2 de la chaîne légère de HE5B-35  SGSSSNIGNNYVS SEQ ID NO 44: HE5B-35 Light Chain CDR-L2 Protein
DNN RPS DNN RPS
SEQ ID NO 45: Protéine du CDR-L3 de la chaîne légère de HE5B-35 SEQ ID NO 45: HE5B-35 Light Chain CDR-L3 Protein
GTWDSSLSAWV GTWDSSLSAWV
SEQ ID NO 46: ADN du domaine variable VH de HE5C-144 SEQ ID NO 46: VH variable domain DNA of HE5C-144
CAGGTCCAGCTTGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGT GAAGGTTTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACTAGCTATGCTATGCATTG GGTGCGCCAGGCCCCCGGACAAAGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCAACCCT GCCGACGGTGGCACAATTTATTCCCAGAAGTTCCGGGACAGAGTCACCTTTAC CAGGGACACATCCGCGAACACAGCGTCCATGGAGCTGAGCAGCCTCAGACCT GAAGACACGGCTGTGTATTACTGTACGAAAGAGAGGGATTACTGGTCAGACTT TGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA CAGGTCCAGCTTGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGT GAAGGTTTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACTAGCTATGCTATGCATTG GGTGCGCCAGGCCCCCGGACAAAGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCAACCCT GCCGACGGTGGCACAATTTATTCCCAGAAGTTCCGGGACAGAGTCACCTTTAC CAGGGACACATCCGCGAACACAGCGTCCATGGAGCTGAGCAGCCTCAGACCT GAAGACACGGCTGTGTATTACTGTACGAAAGAGAGGGATTACTGGTCAGACTT TGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO 47: Protéine du domaine variable VH de HE5C-144 SEQ ID NO 47: VH variable domain protein of HE5C-144
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMGGINP ADGGTIYSQKFRDRVTFTRDTSANTASMELSSLRPEDTAVYYCTKERDYWSDFDY WGQGTLVT VS S QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMGGINP ADGGTIYSQKFRDRVTFTRDTSANTASMELSSLRPEDTAVYYCTKERDYWSDFDY WGQGTLVT VS S
SEQ ID NO 48: ADN du domaine variable VL de H ESC- 144 SEQ ID NO 48: DNA of the VL variable domain of H ESC-144
CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGGCAGACGGC CACGATTACCTGTGGGGGCGATAACATTGGAAGTAAAGCTGTCCACTGGTATC AGCTGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGG CCCTCAGGAATCCCTGAGCGAATCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCAC CCTGACTATCAGCAAGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTATTGTCAGG TGTGGGATAATAGGAGTGATCAAGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCCAGCTCACC GTTTTA CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGGCAGACGGC CACGATTACCTGTGGGGGCGATAACATTGGAAGTAAAGCTGTCCACTGGTATC AGCTGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGG CCCTCAGGAATCCCTGAGCGAATCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCAC CCTGACTATCAGCAAGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTATTGTCAGG TGTGGGATAATAGGAGTGATCAAGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCCAGCTCACC GTTTTA
SEQ ID NO 49: Protéine du domaine variable VL de HE5C-144 SEQ ID NO 49: HE5C-144 VL Variable Domain Protein
QSVLTQPPSVSVAPGQTATITCGGDNIGSKAVHWYQLKPGQAPVLVA^YDDSDRPS GIPERISGSNSGNTATLTISKVEAGDEADYYCQVWDNRSDQWFGGGTQLTVL  QSVLTQPPSVSVAPGQTATITCGGDNIGSKAVHWYQLKPGQAPVLVA ^ YDDSDRPS GIPERISGSNSGNTATLTISKVEAGDEADYYCQVWDNRSDQWFGGGTQLTVL
SEQ ID NO 50: Protéine du CDR-H 1 de la chaîne lourde de H ESC- 144 SEQ ID NO. 50: CDR-H 1 Protein of the H ESC-144 Heavy Chain
SYAMH SEQ ID NO 51: Protéine du CDR-H2 de la chaîne lourde de HE5C-144  SYAMH SEQ ID NO 51: HE5C-144 Heavy Chain CDR-H2 Protein
GINPADGGTIYSQKFRD GINPADGGTIYSQKFRD
SEQ ID NO 52: Protéine du C DR- 113 de la chaîne lourde de HE5C-144 SEQ ID NO 52: HE5C-144 heavy chain C-DR-113 protein
ERDYWSDFDY  ERDYWSDFDY
SEQ ID NO 53: Protéine du CDR-L 1 de la chaîne légère de HE5C-144 SEQ ID NO 53: HE5C-144 Light Chain CDR-L 1 Protein
GGDNIGSKAVH SEQ ID NO 54: Protéine du CDR-L2 de la chaîne légère de HE5C-144 DDSDRPS GGDNIGSKAVH SEQ ID NO 54: HE5C-144 DDSDRPS Light Chain CDR-L2 Protein
SEQ ID NO 55: Protéine du CDR-L3 de la chaîne légère de HE5C-144 SEQ ID NO 55: HE5C-144 Light Chain CDR-L3 Protein
QVWDNRSDQVV QVWDNRSDQVV
SEQ ID NO 56: ADN du domaine variable VH de HE5C-123 SEQ ID NO 56: VH variable domain DNA of HE5C-123
CAGATGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGG CAGATGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGG
TGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCC CTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATT ACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAT CTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGTCTTCGGGGAGTATACTAC TACTTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACTGTCTCCTCA TGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCC CTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATT ACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAT CTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGTCTTCGGGGAGTATACTAC TACTTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACTGTCTCCTCA
SEQ ID NO 57: Protéine du domaine variable VH de HE5C-123 SEQ ID NO 57: VH variable domain protein of HE5C-123
QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPff GTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLRGVYYYFDY WGQGTLVTVSS  QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPff GTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLRGVYYYFDY WGQGTLVTVSS
SEQ ID NO 58: ADN du domaine variable VL de HE5C-123 SEQ ID NO 58: VL variable domain DNA of HE5C-123
CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGT CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGT
CACCATTTCATGTTCTGGAAGCAGGTCCAACATCGGAATTAATCTTGTAAACT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAATGAT CAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTTTCTGGCTCCAGGTCTGGCACTTCT GCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGGCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTG TGCAGCGTGGGATGATACTTTGAGTGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCCAGC TCACCGTTTTA SEQ ID NO 59: Protéine du domaine variable VL de HE5C-123 CACCATTTCATGTTCTGGAAGCAGGTCCAACATCGGAATTAATCTTGTAAACT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAATGAT CAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTTTCTGGCTCCAGGTCTGGCACTTCT GCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGGCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTG TGCAGCGTGGGATGATACTTTGAGTGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCCAGC TCACCGTTTTA SEQ ID NO 59: Protein of the variable domain VL of HE5C-123
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGINLVNWYQQLPGTAPKLLIYANDQRPS GVPDRF S GSRS GTS ASL AIS GLRAEDE AD YYC AAWDDTLS G YVFGTGTQLTVL SEQ ID NO 60: Protéine du C DR- III de la chaîne lourde de HE5C-123 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGINLVNWYQQLPGTAPKLLIYANDQRPS GVPDRF S GSRS GTS ASL AIS GLRAEDE AD YYC AAWDDTLS G YVFGTGTQLTVL SEQ ID NO. 60: HE5C-123 Heavy Chain C-DR-III Protein
SYAIS  SYAIS
SEQ ID NO 61: Protéine du CDR-H2 de la chaîne lourde de HE5C-123 SEQ ID NO 61: HE5C-123 Heavy Chain CDR-H2 Protein
G 11 P I FGT AN Y A QKFQG G 11 P I FGT Y Y QKFQG
SEQ ID NO 62: Protéine du CDR-H3 de la chaîne lourde de HE5C-123 SEQ ID NO 62: HE5C-123 Heavy Chain CDR-H3 Protein
GLRGVYYYFDY SEQ ID NO 63: Protéine du CDR-L1 de la chaîne légère de H ESC- 123 GLRGVYYYFDY SEQ ID NO. 63: Protein of CDR-L1 of the H ESC-123 light chain
SGSRSNIGINLVN SGSRSNIGINLVN
SEQ ID NO 64: Protéine du CDR-L2 de la chaîne légère de H ESC- 123 SEQ ID NO 64: CDR-L2 Protein of the H ESC-123 Light Chain
ANDQRPS ANDQRPS
SEQ ID NO 65: Protéine du CDR-L3 de la chaîne légère de H ESC- 123 SEQ ID NO. 65: CDR-L3 Protein of the H ESC-123 Light Chain
AAWDDTLSGYV  AAWDDTLSGYV
SEQ ID NO 66: ADN du domaine variable VH de HE3C-29 SEQ ID NO 66: VH variable domain DNA of HE3C-29
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCT
GAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCT GGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGC I AFTAGTGG TAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCT CCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGC CGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAAGATGTTGGACTATTTTTGCCCT ACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA GAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCT GGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGC I AFTAGTGG TAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCT CCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGC CGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAAGATGTTGGACTATTTTTGCCCT ACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO 67: Protéine du domaine variable VH de HE3C-29 SEQ ID NO 67: VH variable domain protein of HE3C-29
EVQLLESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKCLEWVSAISGSG GSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDVGLFLPYYYG MD VWGQGTTVTVS S SEQ ID NO 68: ADN du domaine variable VL de HE3C-29 EVQLLESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKCLEWVSAISGSG GSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDVGLFLPYYYG MD VWGQGTTVTVS S SEQ ID NO 68: VL variable domain DNA of HE3C-29
CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGT CACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATAAAAATAAT AAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACT GCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTGTAGTATTCGGCGGAGGGACCAA GCTGACCGTCCTA SEQ ID NO 69: Protéine du domaine variable VL de HE3C-29  CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGT CACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCT GGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATAAAAATAAT AAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTC AGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACT GCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTGTAGTATTCGGCGGAGGGACCAA GCTGACCGTCCTA SEQ ID NO 69: Protein of the variable domain VL of HE3C-29
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYKNNKRP SGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVL  QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYKNNKRP SGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO 70: Protéine du CDR-H1 de la chaîne lourde de HE3C-29 SEQ ID NO 70: HE3C-29 Heavy Chain CDR-H1 Protein
SYAMS SYAMS
SEQ ID NO 71 : Protéine du CDR-H2 de la chaîne lourde de HE3C-29 SEQ ID NO 71: HE3C-29 Heavy Chain CDR-H2 Protein
AISGSGGSTYYADSV G SEQ ID NO 72: Protéine du CDR-H3 de la chaîne lourde de HE3C-29 AISGSGGSTYYADSV G SEQ ID NO. 72: HE3C-29 Heavy Chain CDR-H3 Protein
DVGLFLPYYYGMDV DVGLFLPYYYGMDV
SEQ ID NO 73: Protéine du CDR-L1 de la chaîne légère de HE3C-29 SEQ ID NO 73: HE3C-29 Light Chain CDR-L1 Protein
SGSSSNIGNNYVS SGSSSNIGNNYVS
SEQ ID NO 74: Protéine du CDR-L2 de la chaîne légère de HE3C-29 SEQ ID NO. 74: HE3C-29 Light Chain CDR-L2 Protein
KNNKRPS KNNKRPS
SEQ ID NO 75: Protéine du CDR-L3 de la chaîne légère de HE3C-29 SEQ ID NO 75: HE3C-29 Light Chain CDR-L3 Protein
GTWDSSLSAVV GTWDSSLSAVV

Claims

REVENDICATIONS
1 . Anticorps humain se liant sélectivement au domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain. 1. Human antibody selectively binding to the extracellular domain of the human HER4 receptor.
2. Anticorps selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il se lie au domaine extracellulaire de chacune des isoformes JM-a et JM-b du sous-domaine IV du récepteur HER4 humain.  2. Antibody according to claim 1, characterized in that it binds to the extracellular domain of each of the JM-a and JM-b isoforms of the sub-domain IV of the human HER4 receptor.
3. Anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, comprenant au moins un domaine de liaison à l'antigène choisi parmi :  An antibody according to any of claims 1 or 2, comprising at least one antigen binding domain selected from:
a) un domaine CDR-H1 de chaîne lourde choisi parmi les domaines suivants : a) a heavy chain CDR-H1 domain selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-H 1 de formule (I) suivante : H2-S-Y-X 1 -X2-X3-COOH (I), dans laquelle : (i) the CDR-H 1 domain of the following formula (I): H 2 -S-Y-X 1 -X 2 -X 3 -COOH (I), in which:
- XI est un résidu d'acide aminé choisi parmi G et A,  XI is an amino acid residue selected from G and A,
- X2 est un résidu d'acide aminé choisi parmi I et M, et  X 2 is an amino acid residue selected from I and M, and
- X3 est un résidu d'acide aminé choisi parmi S et H,  X3 is an amino acid residue chosen from S and H,
et  and
(ii) le domaine CDR-H1 de formule (II) suivante : NH2-S-S-N-W-W-S- (ii) the CDR-H1 domain of the following formula (II): NH2-S-S-N-W-W-S-
COOH (II) COOH (II)
b) un domaine CDR-I12 de chaîne lourde choisi parmi les domaines suivants : (i) le domaine CDR-H2 de formule (III) suivante : H2-G-I-I-P-I-F-G-T-A-N- b) a heavy chain CDR-I12 domain selected from the following domains: (i) the CDR-H2 domain of the following formula (III): H2-G-I-I-P-I-F-G-T-A-N-
Y-A-Q-K-F-Q-G-COOH (III), Y-A-Q-K-F-Q-G-COOH (III),
(ii) le domaine CDR-H2 de formule ( IV) suivante : NH2-E-I-Y-H-S-G-S-T-N- Y-N-P-S-L-K-S-COOH (IV),  (ii) the CDR-H2 domain of the following formula (IV): NH2-E-I-Y-H-S-G-S-T-N-Y-N-P-S-L-K-S-COOH (IV),
(iii) le domaine CDR-H2 de formule (V) suivante : NH2-G-I-N-P-A-D-G-G- T-I-Y-S-Q-K-F-R-D-C OH (V), et  (iii) the CDR-H2 domain of the following formula (V): NH2-G-I-N-P-A-D-G-G-T-I-Y-S-Q-K-F-R-D-C OH (V), and
(iv) le domaine CDR-H2 de formule (VI) suivante : NH2-A-I-S-G-S-G-G-S- T-Y-Y-A-D-S-V-K-G-COOH (VI),  (iv) the CDR-H2 domain of the following formula (VI): NH2-A-I-S-G-S-G-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G-COOH (VI),
c) un domaine CDR-H3 de chaîne lourde choisi parmi les domaines suivants : c) a heavy chain CDR-H3 domain selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-H3 de formule (VU) suivante : ΝΉ2 - S - R-G - Y- Y - D - P- F- D-V-COOH (VII). (i) the CDR-H3 domain of the following formula (VII): ΝΉ2-S-R-G-Y-Y-D-P-F-D-V-COOH (VII).
(ii) le domaine CDR-H3 de formule (VIII) suivante : NH2-S-A-R-S-D-A-F-D- (ii) the CDR-H3 domain of the following formula (VIII): NH 2 -S-A-R-S-D-A-F-D-
I (VIII), (iii) lc domaine CDR-H3 de formule ( IX) suivante : NH2-G-L-S-W-G-G-S-G- D-Y-COOH ( IX). I (VIII), (iii) the CDR-H3 domain of the following formula (IX): NH2-GLSWGGSG-DY-COOH (IX).
(iv) le domaine CDR-H3 de formule (X) suivante : NH 2 - E-R- D - Y- W - S - D-F- (iv) the CDR-H3 domain of the following formula (X): NH 2 -E-R-D-Y-W-S-D-F-
D-Y-COOH (X), D-Y-COOH (X),
(v) le domaine CDR-H3 de formule (XI) suivante : NH2-G-L-R-G-V-Y-Y-Y- (v) the CDR-H3 domain of the following formula (XI): NH2-G-L-R-G-V-Y-Y-Y-
F-D-Y-COOH (XI), et F-D-Y-COOH (XI), and
(vi) le domaine CDR-H3 de formule (XII) suivante : NH2-D-V-G-L-F-L-P-Y- Y-Y-G-M-D-V-COOH (XII),  (vi) the CDR-H3 domain of the following formula (XII): NH 2 -D-V-G-L-F-L-P-Y-Y-Y-G-M-D-V-COOH (XII),
d) un domaine CDR-L 1 de chaîne légère choisi parmi les domaines suivants : (ii) le domaine CDR-L1 de formule (XIII) suivante : NH2-S-G-S-S-N-I-G-N- d) a light chain CDR-L 1 domain selected from the following domains: (ii) the CDR-L1 domain of the following formula (XIII): NH2-S-G-S-S-N-I-G-N-
N-Y-V-S-COOH (XIII), N-Y-V-S-COOH (XIII),
(iii) le domaine CDR-L1 de formule (XIV) suivante : NH2-G-G-D-N-I-G-S- K-A-V-H-COOH (XIV), et  (iii) the CDR-L1 domain of the following formula (XIV): NH 2 -G-G-D-N-I-G-S-K-A-V-H-COOH (XIV), and
(iv) le domaine CDR-L l de formule (XV) suivante : NH2-S-G-S-R-S-N-I-G-I- N-L-V-N-COOH (XV),  (iv) the CDR-L 1 domain of the following formula (XV): NH 2 -S-G-S-R-S-N-I-G-I-N-L-V-N-COOH (XV),
e) un domaine CDR-L2 de chaîne légère choisi parmi les domaines suivants : e) a light chain CDR-L2 domain selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-L2 de formule (XVI) suivante : H2-X4- -N-K-R-P-S- COOH (XVI), dans laquelle X4 est un résidu d'acide aminé choisi parmi D et K (i) the CDR-L2 domain of the following formula (XVI): H2-X4 -N-K-R-P-S-COOH (XVI), wherein X4 is an amino acid residue selected from D and K
(ii) le domaine CDR-L2 de formule (XVII ) suivante : NH2-D-D-S-D-R-P-S- COOH (XVII). et  (ii) the CDR-L2 domain of the following formula (XVII): NH 2 -D-D-S-D-R-P-S-COOH (XVII). and
(iii) le domaine CDR-L2 de formule (XVIII) suivante : NH2-A-N-D-Q-R-P-S- COOH (XVIII). ou  (iii) the CDR-L 2 domain of the following formula (XVIII): NH 2 -A-N-D-Q-R-P-S-COOH (XVIII). or
f) un domaine CDR-L3 de chaîne légère choisi parmi les domaines suivants : f) a light chain CDR-L3 domain selected from the following domains:
(i) le domaine CDR-L3 de formule (XIX) suivante : NH2-G-X5-W-D-S-S-L- S-X6-X7-V-CO011 (XIX). dans laquelle : (i) the CDR-L3 domain of the following formula (XIX): NH2-G-X5-W-D-S-S-L-S-X6-X7-V-CO011 (XIX). in which :
- X5 est un résidu d'acide aminé choisi parmi A et T, - X5 is a residue of amino acid selected from A and T,
- X6 est un résidu d'acide aminé choisi parmi V et A, et - X6 is a residue of amino acid selected from V and A, and
- X7 est un résidu d'acide aminé choisi parmi A. W et V, - X7 is a residue of amino acid selected from A. W and V,
(ii) le domaine CDR-L3 de formule (XX) suivante : H2-G-S-W-D-I-G-L-G- A-Y-V-COOH (XX). (ii) the CDR-L3 domain of formula (XX) below: H2-G-S-W-D-I-G-L-G-A-Y-V-COOH (XX).
(iii) le domaine CDR-L3 de formule (XXI) suivante : NH2-Q-V-W-D-N-R-S- D-Q-V-V-COOH (XXI ). et (iv) le domaine CDR-L3 de formule (XXII) suivante : NH2-A-A-W-D-D-T-L- S-G-Y-V-COOH (XXII). (iii) the CDR-L3 domain of the following formula (XXI): NH 2 -QVWDNRS-DQVV-COOH (XXI). and (iv) the CDR-L3 domain of the following formula (XXII): NH2-AAWDDTL-SGYV-COOH (XXII).
4. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 3, ayant une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-Hl , CDR-H2 et CDR-H3 choisis parmi ceux définis dans la revendication 3.  4. Antibody according to one of claims 1 to 3, having a heavy chain comprising the three CDR-CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 chosen from those defined in claim 3.
5. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 3, ayant une chai ne légère comprenant les trois CDRs CDR-Ll , CDR-L2 et CDR-L3 choisis parmi ceux définis dans la revendication 3.  5. Antibody according to one of claims 1 to 3, having a light chain comprising the three CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 CDRs selected from those defined in claim 3.
6. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H l , CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  An antibody according to one of claims 1 to 5, having a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H 1, CDR-H2 and CDR-H3:
a. CDR-H l de séquence SEQ ID NO 10,  at. CDR-H l of sequence SEQ ID No. 10,
b. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 11, et  b. CDR-H2 of sequence SEQ ID No. 11, and
c. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 12.  vs. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 12.
7. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID O 7, et comprenant les 7. A human antibody having a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID No. 7, and comprising the
CDR-H l , CDR-H2 et CDR-H3 tels que définis dans la revendication 6. CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 as defined in claim 6.
8. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-Ll , CDR-L2 et CDR-L3 suivants :  An antibody according to one of claims 1 to 5, having a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
d. CDR-Ll de séquence SEQ ID NO 13,  d. CDR-L1 of sequence SEQ ID NO 13,
e. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 14, et  e. CDR-L2 of sequence SEQ ID No. 14, and
f. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 15.  f. CDR-L3 of sequence SEQ ID NO 15.
9. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 9. et comprenant les CDR-Ll , CDR-L2 et CDR-L3 tels que définis dans la revendication 8.  9. Human antibody having a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID No. 9 and including CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 as defined in the claim 8.
10. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H l , CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  10. Antibody according to one of claims 1 to 5, having a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H 1, CDR-H2 and CDR-H3:
g. CDR-Hl de séquence SEQ ID NO 20,  boy Wut. CDR-H1 of sequence SEQ ID No. 20,
h. CDR-H2 de séquence SEQ JD NO 21. et  h. CDR-H2 sequence SEQ JD NO 21. and
i. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 22. i. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 22.
11 . Anticorps humain ayant une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 17, et comprenant les CDR-H1 , CDR-H2 et CDR-H3 tels que définis dans la revendication 10. 11. A human antibody having a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 17, and comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 as defined in claim 10.
12. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-Ll , CDR-L2 et CDR-L3 suivants :  An antibody according to one of claims 1 to 5, having a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
j. CDR-Ll de séquence SEQ ID NO 23, k. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 24. et 1. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 25.  j. CDR-L1 of sequence SEQ ID NO 23, k. CDR-L2 of sequence SEQ ID NO. 24 and 1. CDR-L3 of sequence SEQ ID NO. 25.
13. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID O 19, et comprenant les CDR-L1 , CDR-L2 et CDR-L3 tels que définis dans la revendication 12. A human antibody having a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID No. 19, and comprising CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 as defined in the claim 12.
14. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H 1 . CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  The antibody of any one of claims 1 to 5 having a heavy chain comprising the three CDR-H 1 CDRs. CDR-H2 and CDR-H3:
m. CDR-H 1 de séquence SEQ ID NO 30, n. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 31 , et o. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 32.  m. CDR-H 1 of sequence SEQ ID NO 30, n. CDR-H2 of sequence SEQ ID NO 31, and o. CDR-H3 of sequence SEQ ID NO 32.
1 5. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 27, et comprenant les CDR-H 1 , CDR-H2 et CDR-H 3 tels que définis dans la revendication 14. 5. A human antibody having a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID No. 27, and comprising CDR-H 1, CDR-2 H and CDR-H 3 as defined in claim 14.
16. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-Ll , CDR-L2 et CDR-L3 suivants :  An antibody according to one of claims 1 to 5, having a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
p. CDR-Ll de séquence SEQ ID NO 33, q. CDR-L2 de séquence 34, et r. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 35.  p. CDR-L1 of sequence SEQ ID No. 33, q. CDR-L2 of sequence 34, and r. CDR-L3 of SEQ ID NO 35 sequence.
17. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne légère possédant au moins 80% d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 29. et comprenant les CDR-L I . CDR-L2 et CDR-L3 tels que définis dans la revendication 16. 17. The human antibody having a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 29. and comprising CDR-L I. CDR-L2 and CDR-L3 as defined in claim 16.
18. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5 ayant une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H 1 . CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  An antibody according to any one of claims 1 to 5 having a heavy chain comprising the three CDR-H 1 CDRs. CDR-H2 and CDR-H3:
s. CDR-H 1 de séquence SEQ ID NO 40. t. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 41 , et s. CDR-H 1 of sequence SEQ ID No. 40. t. CDR-H2 of sequence SEQ ID NO 41, and
u. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 42.  u. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 42.
19. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 37, et comprenant les CDR-H l , CDR-H2 et CDR-H3 tels que définis dans la revendication 18.  19. A human antibody having a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 37, and comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 as defined in US Pat. claim 18.
20. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-L1, CDR-L2 et CDR-L3 suivants : 20. Antibody according to one of claims 1 to 5, having a light chain comprising the three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 following:
v. CDR-L1 de séquence SEQ ID NO 43,  v. CDR-L1 of sequence SEQ ID NO 43,
w. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 44, et  w. CDR-L2 of sequence SEQ ID NO 44, and
x. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 45.  x. CDR-L3 of sequence SEQ ID No. 45.
21. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 39, et comprenant les CDR-L1, CDR-L2 et CDR-L3 tels que définis dans la revendication 20.  21. A human antibody having a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 39, and comprising CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 as defined in the claim 20.
22. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H l , CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  22. Antibody according to one of claims 1 to 5, having a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H 1, CDR-H2 and CDR-H3:
y. CDR-H l de séquence SEQ ID NO 50,  there. CDR-H l of sequence SEQ ID NO 50,
z. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 51, et  z. CDR-H2 of sequence SEQ ID NO 51, and
aa. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 52.  aa. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 52.
23. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80% d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 47, et comprenant les CDR-Hl , CDR-H2 et CDR-H3 tels que définis dans la revendication 22.  23. A human antibody having a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 47, and comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 as defined in the claim 22.
24. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-L1 , CDR-L2 et CDR-L3 suivants :  24. Antibody according to one of claims 1 to 5, having a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
bb. CDR-L1 de séquence SEQ ID NO 53.  bb. CDR-L1 of sequence SEQ ID NO 53.
ce. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 54. et  this. CDR-L2 of sequence SEQ ID NO 54. and
dd. CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 55.  dd. CDR-L3 of sequence SEQ ID No. 55.
25. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 49, et comprenant les CDR-L1 , CDR-L2 et CDR-L3 tels que définis dans la revendication 24. 25. A human antibody having a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 49, and comprising CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 as defined in the claim 24.
26. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H1, CDR-H2 et CDR-H3 suivants : The antibody according to one of claims 1 to 5, having a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3:
ce. CDR-H 1 de séquence SEQ ID NO 60,  this. CDR-H 1 of sequence SEQ ID NO 60,
ff. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 61 , et  ff. CDR-H2 of sequence SEQ ID NO 61, and
gg. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 62.  gg. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 62.
27. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 57, et comprenant les CDR-H1 , CDR-H2 et CDR-H3 tels que définis dans la revendication 26.  27. A human antibody having a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 57, and comprising CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 as defined in the claim 26.
28. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-Ll , CDR-L2 et CDR-L3 suivants :  28. Antibody according to one of claims 1 to 5, having a light chain comprising the following three CDRs CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3:
hh. CDR-Ll de séquence SEQ ID NO 63,  hh. CDR-L1 of sequence SEQ ID NO 63,
ii. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 64. et  ii. CDR-L2 of sequence SEQ ID NO 64. and
jj . CDR-L3 de séquence SEQ ID NO 65.  not a word . CDR-L3 of sequence SEQ ID No. 65.
29. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 59, et comprenant les CDR-Ll , CDR-L2 et CDR-L3 tels que définis dans la revendication 28.  29. A human antibody having a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO 59, and comprising CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 as defined in the claim 28.
30. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne lourde comprenant les trois CDRs CDR-H1 , CDR-H2 et CDR-H3 suivants :  Antibody according to one of claims 1 to 5, having a heavy chain comprising the following three CDRs CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3:
kk. CDR-H 1 de séquence SEQ ID NO 70,  kk. CDR-H 1 of sequence SEQ ID NO 70,
11. CDR-H2 de séquence SEQ ID NO 71. et  11. CDR-H2 of sequence SEQ ID No. 71. and
mm. CDR-H3 de séquence SEQ ID NO 72.  mm. CDR-H3 of sequence SEQ ID No. 72.
31. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne lourde possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID NO 67. et comprenant les CDR-H1 , CDR-H2 et CDR-H3 tels que définis dans la revendication 30.  31. A human antibody having a heavy chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID NO. 67 and including CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 as defined in the claim 30.
32. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 5, ayant une chaîne légère comprenant les trois CDRs CDR-Ll . CDR-L2 et CDR-L3 suivants :  An antibody according to one of claims 1 to 5, having a light chain comprising the three CDR-CDRs. CDR-L2 and CDR-L3 following:
nn. CDR-L l de séquence SEQ ID NO 73.  nn. CDR-L 1 of sequence SEQ ID No. 73.
oo. CDR-L2 de séquence SEQ ID NO 74. et  oo. CDR-L2 of sequence SEQ ID No. 74. and
pp. CDR-I.3 de séquence SEQ ID NO 75. pp. CDR-I.3 SEQ ID NO 75 sequence.
33. Anticorps humain ayant une région variable de chaîne légère possédant au moins 80 % d'identité en acides aminés avec la séquence SEQ ID O 69, et comprenant les CDR-L1, CDR-L2 et CDR-L3 tels que définis dans la revendication 32. 33. The human antibody having a light chain variable region having at least 80% amino acid identity with the sequence SEQ ID O 69, and comprising CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 as defined in claim 32.
34. Anticorps selon l'une quelconque des revendications précédentes, 5 caractérisé en ce qu'au moins une partie de la région Fc, de préférence le profil de glycosylation d'au moins une partie de la région Fc, est modifiée mutée de sorte que l'activité ADCC dudit anticorps est améliorée.  An antibody according to any of the preceding claims, characterized in that at least a portion of the Fc region, preferably the glycosylation profile of at least a portion of the Fc region, is mutated so that the ADCC activity of said antibody is improved.
35. Anticorps selon la revendication précédente, caractérisé en ce que ledit anticorps possède sur son site de glycosylation (Asn 297) du Fcy des structures 35. Antibody according to the preceding claim, characterized in that said antibody has on its glycosylation site (Asn 297) Fcy structures
10 glycanniques sélectionnées parmi les formes : 10 glycan selected from the forms:
Figure imgf000077_0001
Figure imgf000077_0001
GO, GOF. G l et G I F.  GO, GOF. G l and G I F.
Ί 5 H GlcNAc φ Maimo.sc Galactose fr. Fucosc  Ί 5 H GlcNAc φ Maimo.sc Galactose fr. Fucosc
dans lequel la teneur en formes GO + Gl + GOF + GIF est supérieure à 60 % et la teneur en formes GOF + G I F est inférieure à 50 %, de préférence la teneur en G I F est inférieure à 60 %, voire même inférieure à 30 %, et mieux comprise entre 20 et 45 % ou encore entre 25 et 40 %.  in which the content of GO + Gl + GOF + GIF forms is greater than 60% and the content of GOF + GIF forms is less than 50%, preferably the GIF content is less than 60%, or even less than 30% and better still between 20 and 45% or between 25 and 40%.
20 36. Fragment d'un anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 35, de préférence choisi parmi le group comprenant Fv, Fab. F(ab')2, Fab', dsFv, scFv, sc(Fv)2 et diabodies.  36. Fragment of an antibody according to any one of claims 1 to 35, preferably selected from the group comprising Fv, Fab. F (ab ') 2, Fab', dsFv, scFv, sc (Fv) 2 and diabodies.
37. Acide nucléique codant un anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 35 ou un fragment d'anticorps selon la revendication 36.  37. Nucleic acid encoding an antibody according to any one of claims 1 to 35 or an antibody fragment according to claim 36.
25 38. Vecteur comprenant au moins un acide nucléique selon la revendication 37, ledit acide nucléique étant sous contrôle des éléments permettant son expression. 38. A vector comprising at least one nucleic acid according to claim 37, wherein said nucleic acid is under control of the elements allowing its expression.
39. Cellule hôte transformée avec un acide nucléique selon la revendication 37 ou avec un vecteur selon la revendication 38.  39. A host cell transformed with a nucleic acid according to claim 37 or with a vector according to claim 38.
30 40. Composition pharmaceutique, et notamment vaccinale, comprenant au moins un composé choisi parmi : 40. Pharmaceutical composition, and especially a vaccine composition, comprising at least one compound chosen from:
- un anticorps humain tel que défini en revendications 1 à 35 ; - un fragment selon la revendication 36 ; a human antibody as defined in claims 1 to 35; a fragment according to claim 36;
- un acide nucléique selon la revendication 37 ;  a nucleic acid according to claim 37;
- un vecteur selon la revendication 38 ; ou  a vector according to claim 38; or
- un de leur mélange,  - one of their mix,
en association avec un véhicule pharmaeeutiquement acceptable. in association with a pharmaceutically acceptable vehicle.
41 . Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un agent anticancéreux distinct d'un composé tel que défini en revendication précédente. 41. Composition according to the preceding claim, characterized in that it further comprises at least one anti-cancer agent distinct from a compound as defined in the preceding claim.
42. Procédé pour la préparation d'un anticorps humain comprenant une étape de récupération d'un anticorps produit par une cellule hôte selon la revendication 39.  42. A process for the preparation of a human antibody comprising a step of recovering an antibody produced by a host cell according to claim 39.
43. Anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 35, ou fragment d'anticorps selon la revendication 36, comme principe actif de médicament.  43. An antibody according to any one of claims 1 to 35, or an antibody fragment according to claim 36, as a drug active ingredient.
44. Anticorps selon l'une des revendications 1 à 35, ou fragment d'anticorps selon la revendication 36, pour son utilisation pour la prévention ou le traitement d'une maladie associée au domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain, en particulier d'un cancer.  44. Antibody according to one of claims 1 to 35, or antibody fragment according to claim 36, for its use for the prevention or treatment of a disease associated with the extracellular domain of the human HER4 receptor, in particular a Cancer.
45. Utilisation d'un anticorps selon l'une des revendications 1 à 35, ou fragment d'anticorps selon la revendication 36, pour la préparation d'un médicament pour le traitement d'un cancer, en particulier choisi parmi le groupe comprenant le cancer à cellules squameuses, le cancer du sein, le cancer du foie, le cancer de la vessie, hépatome. le cancer gastrique, les tumeurs des cellules gliales telles que le glioblastome et la neurofibromatose, le cancer de l'utérus, le cancer de l'ovaire, le cancer du poumon, le cancer des testicules, le cancer du côlon, le cancer du rectum, le cancer du pancréas, le mélanome, le myélome multiple, le cancer colorectal, le carcinome de l'endomètre, le carcinome des glandes salivaires. le cancer du rein, le cancer de la prostate, le cancer de la vulve, le cancer de la thyroïde, le carcinome hépatique, les leucémies, le cancer hématopoïétique. les lymphomes, notamment la maladie de Hodgkin et le lymphome non- hodgkinien, le sarcome, notamment le sarcome de Kaposi ou le sarcome d'Ewing, le ncuroblastome et les cancers pédiatriques, notamment de type sarcome ou neuroblastome. 45. Use of an antibody according to one of claims 1 to 35, or antibody fragment according to claim 36, for the preparation of a medicament for the treatment of cancer, in particular selected from the group consisting of squamous cell cancer, breast cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma. gastric cancer, glial cell tumors such as glioblastoma and neurofibromatosis, uterine cancer, ovarian cancer, lung cancer, testicular cancer, colon cancer, rectal cancer , pancreatic cancer, melanoma, multiple myeloma, colorectal cancer, carcinoma of the endometrium, carcinoma of the salivary glands. kidney cancer, prostate cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma, leukemia, hematopoietic cancer. lymphomas, in particular Hodgkin's disease and non-Hodgkin lymphoma, sarcoma, in particular Kaposi's sarcoma or Ewing's sarcoma, noncuroblastoma and pediatric cancers, particularly of the sarcoma or neuroblastoma type.
46. Utilisation d'un anticorps selon l'une des revendications 1 à 35, ou fragment d'anticorps selon la revendication 36. pour la préparation d'un médicament pour la prévention de l'apparition et/ou le traitement de métastases. 46. Use of an antibody according to one of claims 1 to 35, or antibody fragment according to claim 36 for the preparation of a medicament for preventing the onset and / or treatment of metastases.
47. Utilisation d'un anticorps selon l'une des revendications 1 à 35, d'un fragment d'anticorps selon la revendication 36, ou d'un composé comprenant ledit anticorps ou ledit fragment d'anticorps, dans une méthode de détection ou de quantification du récepteur HER4 humain, ou du domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain. 47. Use of an antibody according to one of claims 1 to 35, an antibody fragment according to claim 36, or a compound comprising said antibody or antibody fragment, in a method of detection or quantifying the human HER4 receptor, or the extracellular domain of the human HER4 receptor.
48. Utilisation d'un anticorps selon l'une des revendications 1 à 35, d'un fragment d'anticorps selon la revendication 36, ou d'un composé comprenant ledit anticorps ou ledit fragment d'anticorps, dans une méthode de détection ou de quantification de métastases. 48. Use of an antibody according to one of claims 1 to 35, an antibody fragment according to claim 36, or a compound comprising said antibody or antibody fragment, in a method of detection or quantification of metastases.
49. Procédé de diagnostique d'une maladie associée au domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain, en particulier d'un cancer, sur un échantillon biologique humain, comprenant au moins les étapes suivantes :  49. A method for diagnosing a disease associated with the extracellular domain of the human HER4 receptor, in particular cancer, on a human biological sample, comprising at least the following steps:
- marquage d'une biopsie préalablement prélevée sur un patient avec un anticorps selon l'une des revendications 1 à 35 et/ou un fragment d'anticorps scion la revendication 36. et  - Marking a biopsy previously taken from a patient with an antibody according to one of claims 1 to 35 and / or an antibody fragment according to claim 36. and
- détermination de la présence du domaine extracellulaire du récepteur HER4 humain.  determination of the presence of the extracellular domain of the human HER4 receptor.
PCT/IB2015/052787 2014-04-16 2015-04-16 Anti-her4 human antibody WO2015159253A1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1453424 2014-04-16
FR1453424A FR3020063A1 (en) 2014-04-16 2014-04-16 ANTI-HER4 HUMAN ANTIBODY

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015159253A1 true WO2015159253A1 (en) 2015-10-22

Family

ID=51483551

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/IB2015/052787 WO2015159253A1 (en) 2014-04-16 2015-04-16 Anti-her4 human antibody

Country Status (2)

Country Link
FR (1) FR3020063A1 (en)
WO (1) WO2015159253A1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111108123A (en) * 2017-05-29 2020-05-05 加马玛布斯制药公司 Cancer-related immunosuppressive inhibitors

Citations (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4301144A (en) 1979-07-11 1981-11-17 Ajinomoto Company, Incorporated Blood substitute containing modified hemoglobin
US4486414A (en) 1983-03-21 1984-12-04 Arizona Board Of Reagents Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4670417A (en) 1985-06-19 1987-06-02 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
WO1987005330A1 (en) 1986-03-07 1987-09-11 Michel Louis Eugene Bergh Method for enhancing glycoprotein stability
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US4861719A (en) 1986-04-25 1989-08-29 Fred Hutchinson Cancer Research Center DNA constructs for retrovirus packaging cell lines
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
WO1989012624A2 (en) 1988-06-14 1989-12-28 Cetus Corporation Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
US4986988A (en) 1989-05-18 1991-01-22 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptides dolastatin 13 and dehydrodolastatin 13
US5076973A (en) 1988-10-24 1991-12-31 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 3
US5138036A (en) 1989-11-13 1992-08-11 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structural elucidation of the cytostatic cyclodepsipeptide dolastatin 14
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5278056A (en) 1988-02-05 1994-01-11 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Retroviral packaging cell lines and process of using same
WO1994019478A1 (en) 1993-02-22 1994-09-01 The Rockefeller University Production of high titer helper-free retroviruses by transient transfection
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
WO1995014785A1 (en) 1993-11-23 1995-06-01 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Composition for the in vivo production of therapeutic products
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
WO1996022378A1 (en) 1995-01-20 1996-07-25 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Cells for the production of recombinant adenoviruses
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5882877A (en) 1992-12-03 1999-03-16 Genzyme Corporation Adenoviral vectors for gene therapy containing deletions in the adenoviral genome
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US6130237A (en) 1996-09-12 2000-10-10 Cancer Research Campaign Technology Limited Condensed N-aclyindoles as antitumor agents
US6239104B1 (en) 1997-02-25 2001-05-29 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear and cyclo-depsipeptides dolastatin 16, dolastatin 17, and dolastatin 18
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
WO2002018444A2 (en) * 2000-09-01 2002-03-07 Genentech, Inc. Erbb4 antagonists
WO2002088172A2 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2004010957A2 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
WO2006091209A2 (en) 2005-02-23 2006-08-31 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Bispecific binding agents for modulating biological activity
WO2007077028A2 (en) 2005-12-30 2007-07-12 U3 Pharma Ag Antibodies directed to her-3 and uses thereof
WO2008100624A2 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Antibodies against erbb3 and uses thereof
WO2010108127A1 (en) 2009-03-20 2010-09-23 Genentech, Inc. Bispecific anti-her antibodies
US7931895B2 (en) 2000-04-12 2011-04-26 Lfb Biotechnologies Monoclonal antibodies with enhanced ADCC function
WO2012022814A1 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3)
WO2013138241A1 (en) * 2012-03-15 2013-09-19 Janssen Biotech, Inc. Human autotaxin antibodies and methods of use

Patent Citations (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4301144A (en) 1979-07-11 1981-11-17 Ajinomoto Company, Incorporated Blood substitute containing modified hemoglobin
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4486414A (en) 1983-03-21 1984-12-04 Arizona Board Of Reagents Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US4670417A (en) 1985-06-19 1987-06-02 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
WO1987005330A1 (en) 1986-03-07 1987-09-11 Michel Louis Eugene Bergh Method for enhancing glycoprotein stability
US4861719A (en) 1986-04-25 1989-08-29 Fred Hutchinson Cancer Research Center DNA constructs for retrovirus packaging cell lines
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5278056A (en) 1988-02-05 1994-01-11 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Retroviral packaging cell lines and process of using same
WO1989012624A2 (en) 1988-06-14 1989-12-28 Cetus Corporation Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5076973A (en) 1988-10-24 1991-12-31 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 3
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
US4986988A (en) 1989-05-18 1991-01-22 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptides dolastatin 13 and dehydrodolastatin 13
US5138036A (en) 1989-11-13 1992-08-11 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structural elucidation of the cytostatic cyclodepsipeptide dolastatin 14
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US5882877A (en) 1992-12-03 1999-03-16 Genzyme Corporation Adenoviral vectors for gene therapy containing deletions in the adenoviral genome
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
WO1994019478A1 (en) 1993-02-22 1994-09-01 The Rockefeller University Production of high titer helper-free retroviruses by transient transfection
WO1995014785A1 (en) 1993-11-23 1995-06-01 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Composition for the in vivo production of therapeutic products
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5665860A (en) 1994-08-01 1997-09-09 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
WO1996022378A1 (en) 1995-01-20 1996-07-25 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Cells for the production of recombinant adenoviruses
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
US6130237A (en) 1996-09-12 2000-10-10 Cancer Research Campaign Technology Limited Condensed N-aclyindoles as antitumor agents
US6239104B1 (en) 1997-02-25 2001-05-29 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear and cyclo-depsipeptides dolastatin 16, dolastatin 17, and dolastatin 18
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
US7931895B2 (en) 2000-04-12 2011-04-26 Lfb Biotechnologies Monoclonal antibodies with enhanced ADCC function
WO2002018444A2 (en) * 2000-09-01 2002-03-07 Genentech, Inc. Erbb4 antagonists
WO2002088172A2 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2004010957A2 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
WO2006091209A2 (en) 2005-02-23 2006-08-31 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Bispecific binding agents for modulating biological activity
WO2007077028A2 (en) 2005-12-30 2007-07-12 U3 Pharma Ag Antibodies directed to her-3 and uses thereof
WO2008100624A2 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Antibodies against erbb3 and uses thereof
WO2010108127A1 (en) 2009-03-20 2010-09-23 Genentech, Inc. Bispecific anti-her antibodies
WO2012022814A1 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3)
WO2013138241A1 (en) * 2012-03-15 2013-09-19 Janssen Biotech, Inc. Human autotaxin antibodies and methods of use

Non-Patent Citations (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AMON ET AL.: "Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy", 1985, ALAN R. LISS, INC.
AUSUBEL ET AL.,: "Current Protocols in Molecular Biology", vol. 1, 1994, JOHN WILEY & SONS, INC.
BALDWIN ET AL.: "Monoclonal Antibodies For Cancer Détection And Therapy", 1985, ACADEMIC PRESS
BAYER ET AL.: "Methods in Molecular Biology", vol. 10, 1992, THE HUMANA PRESS, INC., pages: 149 - 162
CHARI ET AL., CANCER RES., vol. 52, 1992, pages 127 - 131
COOK; SELF: "Monoclonal Antibodies : Production, Engineering and Clinical Application", 1995, CAMBRIDGE UNIVERSITY PRESS, pages: 180 - 208
DIAMANDIS: "Immunoassay", 1996, ACADEMIC PRESS, INC.
EA KABAT: "Sequences of immunological Interest, 5e édition,", NIH PUBLICATION, N° 91 -3242
ED HARLOW ET DAVID LANE,: "A Laboratory Manual", 1988, COLD SPRING HARBOR LABORATORY
GAO C ET AL: "De novo identification of tumor-specific internalizing human antibody-receptor pairs by phage-display methods", JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS B.V.,AMSTERDAM, NL, vol. 274, no. 1-2, 1 March 2003 (2003-03-01), pages 185 - 197, XP004411948, ISSN: 0022-1759, DOI: 10.1016/S0022-1759(02)00522-7 *
GENNARO: "Remington's Pharmaceutical Sciences I5eme édition,", article "1035-1038, 1570-1580"
GENNARO: "Remington's pharmaceutical sciences", 1995, MACK PUBLISHING COMPANY
HELLSTROM ET AL.: "Controlled Drug Delivery., 2e éd.,", 1987, MARCEL DEIKER, INC.
HOLLMEN M ET AL: "Suppression of breast cancer cell growth by a monoclonal antibody targeting cleavable ErbB4 isoforms", ONCOGENE, NATURE PUBLISHING GROUP, GB, vol. 28, no. 10, 1 March 2009 (2009-03-01), pages 1309 - 1319, XP002575079, ISSN: 0950-9232, [retrieved on 20090119], DOI: 10.1038/ONC.2008.481 *
HOLLMÉN MAIJA ET AL: "Potential of ErbB4 antibodies for cancer therapy", FUTURE ONCOLOGY, FUTURE MEDICINE LTD., LONDON, GB, vol. 6, no. 1, 1 January 2010 (2010-01-01), pages 37 - 53, XP008135811, ISSN: 1479-6694 *
KENNEDY ET AL., CLIN. CHIM. ACTA, vol. 70, 1976, pages 1
LI ET AL., CANCER RES., vol. 42, 1982, pages 999 - 1004
PERRY: "Monoclonal Antibodies : Principles and Applications", 1995, WILEY-LISS, INC., pages: 107 - 120
SCHURS ET AL., CLIN. CHIM. ACTA, vol. 81, 1977, pages 1
SHIH ET AL., INT'L J. CANCER, vol. 46, 1990, pages 1101
SKERRA; PLÜCKTHUN, SCIENCE, vol. 240, 1988, pages 1038 - 1041
STEIN ET AL., CANCER RES., vol. 50, 1990, pages 1330
SUNDVALL MARIA ET AL: "Role of ErbB4 in breast cancer", JOURNAL OF MAMMARY GLAND BIOLOGY AND NEOPLASIA JUN 2008,, vol. 13, no. 2, 1 June 2008 (2008-06-01), pages 259 - 268, XP002575077, DOI: 10.1007/S10911-008-9079-3 *
THORPE ET AL., IMMUNOL. REV., vol. 62, 1982, pages 119 - 58
THORPE ET AL.: "Monoclonal Antibodies '84 : Biological And Clinical Applications", 1985
TOVEY SIAN M ET AL: "HER4 in breast cancer: comparison of antibodies against intra- and extra-cellular domains of HER4", BREAST CANCER RESEARCH, CURRENT SCIENCE, LONDON, GB, vol. 8, no. 2, 7 April 2006 (2006-04-07), pages R19, XP021020714, ISSN: 1465-5411, DOI: 10.1186/BCR1394 *
WILCHEK ET AL.: "Methods in Enzymology", vol. 184, 1990, ACADEMIC PRESS

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111108123A (en) * 2017-05-29 2020-05-05 加马玛布斯制药公司 Cancer-related immunosuppressive inhibitors
US20200148777A1 (en) * 2017-05-29 2020-05-14 Gamamabs Pharma Cancer-associated immunosuppression inhibitor
JP2020521780A (en) * 2017-05-29 2020-07-27 ガママブス ファルマ Cancer-related immunosuppression inhibitor
JP2023073965A (en) * 2017-05-29 2023-05-26 ガママブス ファルマ Cancer-associated immunosuppression inhibitor

Also Published As

Publication number Publication date
FR3020063A1 (en) 2015-10-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6869218B2 (en) Humanized antibody against LIV-1 and its use for cancer treatment
US20220401557A1 (en) Multiple antigen binding molecular fusion, pharmaceutical composition, method for identifying linear epitope, and method for preparing multiple antigen binding molecular fusion
EP2723377B1 (en) Anti-axl antibodies and uses thereof
EP2723376B1 (en) Anti-axl antibodies and uses thereof
JP2021503927A (en) CD47 antibody and its use for treating cancer
KR102101806B1 (en) Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
JP2016102109A (en) Monoclonal antibodies and fragment thereof against the human anti-mullerian hormone type ii receptor (amhr-ii)
JP2016536988A (en) Anti-human HER3 antibody that is non-competitive and allosteric for neuregulin and uses thereof
KR20230062600A (en) Anti-CEACAM5 Antibodies and Conjugates and Uses Thereof
CN111201244A (en) anti-AQP 3 monoclonal antibodies that specifically bind to the extracellular domain of aquaporin 3(AQP3) and uses thereof
WO2015159253A1 (en) Anti-her4 human antibody
US20230365676A1 (en) Cd33 antibodies
US20180291098A1 (en) Anti-nrg1 (heregulin) antibodies and uses thereof
JP2023537714A (en) Anti-CD228 Antibodies and Antibody Drug Conjugates
WO2023170240A1 (en) Anti-ceacam5 antibodies and conjugates and uses thereof
ES2712736T3 (en) Anti-Axl antibodies and their uses
NZ618740B2 (en) Anti-axl antibodies and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15725885

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 15725885

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1