CN1928068A - 一种淡紫色链霉菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种淡紫灰链霉菌SPRI－94166(Streptomyces Lavendulae)CGMCC No.1368，通过发酵培养该菌株得到的培养物可用于可防除鳢肠、反枝苋、藜、稗草、牛筋草、香附子、千金子、莎草等各种杂草。

Description

一种淡紫色链霉菌及其应用

技术领域

本发明属微生物技术领域，具体涉及一种新的淡紫色链霉菌SPRI-94166及应用。

背景技术

由于我国境内的地理环境、气候条件千差万别，微生物资源相当地丰富。人们通过在各种不同纬度、海拔以及气候的地域寻找新的微生物菌种。一般地，通过菌株的形态特征、培养特征以及生理生化特征等对微生物菌种进行分类鉴别，同时还常常采用检测微生物菌种的16srDNA的序列来明确该菌种的分类地位。

通过对在全国各地采集得来的微生物菌种进行培养，在得到的代谢产物中寻找各种活性成分，并进而研究开发成各种药物(包括医药、农药、兽药等)。这种技术正在被广泛应用，如用作医用抗生素的青霉素、链霉素等，在农用、兽用方面有防治水稻纹枯病的井冈霉素、防治多种螨虫和夜蛾的阿维菌素等。

发明内容

本发明的目的就在于提供一种淡紫色链霉菌SPRI-94166。

本发明的又一个目的在于提供所述淡紫色链霉菌SPRI-94166的应用。

本发明的一种淡紫色链霉菌SPRI-94166属淡紫灰链霉菌(Streptomyces Lavendulae)，并已于2005年5月16日在中国普通微生物保藏中心保藏，保藏号为CGMCC No.1368。

本发明的淡紫色链霉菌SPRI-94166，为发明人1994年6月从我国广西采集的土壤中分离而得。该菌株的形态特征、培养特征、生理生化特征及16SrDNA的序列和菌种分类结果如下：

1、形态特征：以插片法在高氏合成一号琼脂，葡萄糖天门冬素琼脂上培养10～15天后用光学显微镜和电子显微镜分别观察菌丝和孢子的形态，结果表明，该菌基内菌丝体无横隔、不断裂、无分生孢子，气生菌丝体分支长，生长丰茂，孢子丝较长，顶端有2-5环圈螺旋，孢子椭圆形，表面光滑。

2、生理生化特征及碳源利用见表1：

表1、SPRI-94166菌株的生理生化特征及碳源利用

碳源利用	结果	生理生化特征	结果
				D-葡萄糖	+	明胶液化	+
D-木糖	+	牛奶凝固	-
				D-甘露醇	+	牛奶胨化	+
D-果糖	+	淀粉水解	-
				L-阿拉伯糖	+	纤维素上生长	-
L-肌醇	-	硝酸盐还原	+
				L-鼠李糖	-	H2S产生	+
绵子糖	-	类黑色素产生	+
				蔗糖	+	酪氨酸酶产生	+

3、细胞壁组成：94166菌株含有LL-DAP(LL-DIAMINOPIMELIC ACID二氨基庚二酸)、甘氨酸、无特征性糖，细胞壁化学组份属于I型。

4、本发明所述的94166菌株的16srDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

根据形态、生理生化特征以及16srDNA序列分析，该菌株属于链霉菌属(Streptomyces)的淡紫灰类群(Lavendulae)，故定为淡紫灰链霉菌(Streptomyces Lavendulae)。

本发明所述的淡紫灰链霉菌，其培养方法既可为深层液体培养，也可为圆体培养。为了有利于工业性的培养，宜将上述生产菌的孢子悬浮液接种到培养基上，并进行通气搅拌。

对培养基中的营养源并无特殊的规定，可使培养基中含有常用于微生物培养的碳源、氮源及其他营养源。其中碳源可为淀粉、糊精、葡萄糖、甘油、蔗糖、甘露醇等，氮源可为肉胨、黄豆饼粉、花生粉、酵母、肉膏、米糠、玉米浆、麦皮、铵盐、尿素、硝酸盐以及其他有机或无机含氮化合物。其他营养源可适当添加一些无机盐类，例如食盐、磷酸盐及钾、钙、锰、铁等金属盐。必要时可添加一些动、植、矿物油等作为消泡剂。

对温度、PH、时间等培养条件并无严格的限制，以适于产生菌的生产为准，并以选择活性组份产量最高的条件为好。例如，培养基的PH范围可为6-8，以接近中性为好；培养温度在20-35℃，通气量以通气比1∶0.3到1比4之间(通气比：指每分钟通过培养液的空气体积与培养液体积之比)。这些培养基的组份、PH、培养温度、通气条件等均应根据实际情况进行适当的调整，以获得最好的效果。

本发明所述的淡紫灰链霉菌经过发酵培养，得到的培养物可用于防除多种农田杂草，具体来说，可防除鳢肠、反枝苋、藜、稗草、牛筋草、香附子、千金子、莎草等各种杂草。

附图说明

图1为淡紫色链霉菌SPRI-94166(Streptomyces Lavendulae)CGMCC No.1368的菌株生长形态的扫描电镜照片。

具体实施方式

下面通过具体实施例，进一步说明本发明。

本发明的淡紫色链霉菌SPRI-94166已于2005年5月16日提交中国普通微生物保藏中心保藏，保藏号为CGMCC No.1368。

以下涉及到的原材料皆可通过市售得到，且以下涉及到的浓度均为重量浓度。

实施例1、淡紫色链霉菌SPRI-94166的培养

将淡紫色链霉菌SPRI-94166 Streptomyces caviscabies CGMCC No.1369以插片法在高氏合成一号琼脂，葡萄糖天门冬素琼脂上，于28℃培养箱中培养10～15天，取出用光学显微镜和电子显微镜分别观察菌丝和孢子的形态，电子显微镜扫描结果如图1所示。

由图1可见，本发明的淡紫色链霉菌SPRI-94166的菌基内菌丝体无横隔、不断裂、无分生孢子，气生菌丝体分支长，生长丰茂，孢子丝较长，顶端有2-5环圈螺旋，孢子椭圆形，表面光滑。

实施例2、淡紫色链霉菌SPRI-94166的发酵

以葡萄糖3％、淀粉5％、花生饼粉1％、黄豆饼粉2％、蛋白胨0.1％、酵母膏0.4％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.5％、硝酸胺0.2％、磷酸氢二钾0.05％的比例制成培养基，PH调节到7.2，消毒灭菌。将生长于高氏斜面的淡紫灰链霉菌(Streptomyces Lavendulae)SPRI-94166 CGMCC No.1368菌种接种于该培养基中，在28℃下培养36-40小时；以此培养物为种子，以5-20％的比例接种于上述培养基组成的发酵培养液中，28℃通气搅拌培养90-96小时。

实施例3、淡紫色链霉菌SPRI-94166的应用

在20ml水中加入1-2g琼脂粉，加热至60-100℃，使琼脂粉充分溶解。趁热加入实施例2培养得到的发酵液1ml，摇匀，待冷却凝固后分别将鳢肠、反枝苋、藜、稗草、牛筋草、香附子、千金子、莎草等杂草的种子撒在凝固琼脂的表面，同时按上述方法制备八组不加入发酵液的琼脂，并分别撒入上述八种杂草种子作为空白对照。在28℃培养7天，观察杂草种子发芽及生长情况，结果见表2。

表2、淡紫色链霉菌SPRI-94166的发酵液对植物病害试验结果

序号	杂草	杂草种子生长情况
			1	鳢肠	没有发芽
空白对照	发芽，生长正常
		2		反枝苋	没有发芽
空白对照	发芽，生长正常
			3	藜	没有发芽
空白对照	发芽，生长正常
		4		稗草	没有发芽
空白对照	发芽，生长正常
			5	牛筋草	没有发芽
空白对照	发芽，生长正常
		6		香附子	没有发芽
空白对照	发芽，生长正常
			7	千金子	没有发芽
空白对照	发芽，生长正常
		8		莎草	没有发芽
空白对照	发芽，生长正常

根据实施例3的结果表明，本发明所述的淡紫色链霉菌SPRI-94166(StreptomycesLavendulae)CGMCC No.1368经过发酵培养，其培养物中含有除草活性物质，可用于防除多种农田杂草，具体来说，可防除鳢肠、反枝苋、藜、稗草、牛筋草、香附子、千金子、莎草等各种杂草。可以进一步开发为一种新型的农用除草剂。

                                序列表

<110>上海市农药研究所

<120>一种淡紫色链霉菌及其应用

<130>051571C

<160>1

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>1481

<212>DNA

<213>Streptomyces lavendulae

<220>

<221>16srDNA

<222>(1)..(1481)

<400>1

gacgaacgct ggcggcgtgc ttaacacatg caagtcgaac gatgaaccgg cttcggtcgg     60

ggattagtgg cgaacgggtg agtaacacgt gggcaatctg cccttcactc tgggacaagc    120

cctggaaacg gggtctaata ccggatatga cacggggtcg catgatctcc gtgtggaaag    180

ctccggcggt gaaggatgag cccgcggcct atcagcttgt tggtgaggta gtggctcacc    240

aaggcgacga cgggtagccg gcctgagagg gcgaccggcc acactgggac tgagacacgg    300

cccagactcc tacgggaggc agcagtgggg aatattgcac aatgggcgaa agcctgatgc    360

agcgacgccg cgtgagggat gacggccttc gggttgtaaa cctctttcag cagggaagaa    420

gcgagagtga cggtacctgc agaagaagcg ccggctaact acgtgccagc agccgcggta    480

atacgtaggg cgcgagcgtt gtccggaatt attgggcgta aagagctcgt aggcggcttg    540

tcacgtcgga tgtgaaagcc cggggcttaa ccccgggtct gcattcgata cgggcaggct    600

agagttcggt aggggagatc ggaattcctg gtgtagcggt gaaatgcgca gatatcagga    660

ggaacaccgg tggcgaaggc ggatctctgg gccgatactg acgctgagga gcgaaagcgt    720

ggggagcgaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgttgg gaactaggtg     780

tgggcgacat tccacgtcgt ccgtgccgca gctaacgcat taagttcccc gcctggggag     840

tacggccgca aggctaaaac tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc agcggagcat     900

gtggcttaat tcgacgcaac gcgaagaacc ttaccaaggc ttgacataca ccggaaagca     960

ttagagatag tgcccccctt gtggtcggtg tacaggtggt gcatggctgt cgtcagctcg    1020

tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgttctg tgttgccagc    1080

atgcctttcg gggtgatggg gactcacagg agactgccgg ggtcaactcg gaggaaggtg    1140

gggacgacgt caagtcatca tgccccttat gtcttgggct gcacacgtgc tacaatggcc    1200

ggtacaatga gctgcgatgc cgcgaggtgg agcgaatctc aaaaagccgg tctcagttcg    1260

gattggggtc tgcaactcga ccccatgaag tcggagttgc tagtaatcgc agatcagcat    1320

tgctgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacgtca cgaaagtcgg    1380

taacacccga agccggtggc ccaacccctt gtgggaggga atcgtcgaag gtgggactgg    1440

cgattgggac gaagtcgtaa caaggtagcc gtaccggaag g                        1481

Claims (7)

1、一种淡紫色链霉菌SPRI-94166，其特征在于，该微生物分类归属为淡紫灰链霉菌属(Streptomyces Lavendulae)，其保藏号为CGMCC No.1368。

2、如权利要求1所述的放线链霉菌SPRI-94166，其特征在，该菌株的种子培养条件为：

在28℃下培养36-40小时；培养基组成：葡萄糖3％、淀粉5％、花生饼粉1％、黄豆饼粉2％、蛋白胨0.1％、酵母膏0.4％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.5％、硝酸胺0.2％、磷酸氢二钾0.05％，PH 7.2。

3、如权利要求1所述的放线链霉菌SPRI-94166，其特征在，该菌株的发酵培养条件为：

在28℃下通气搅拌培养90-96小时；培养基组成：葡萄糖3％、淀粉5％、花生饼粉1％、黄豆饼粉2％、蛋白胨0.1％、酵母膏0.4％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.5％、硝酸胺0.2％、磷酸氢二钾0.05％。

4、如权利要求1所述的淡紫色链霉菌SPRI-94166，其特征在于，该菌株具有SEQID NO：1所示的16SrDNA序列。

5、权利要求1-4中任一项所述的淡紫色链霉菌SPRI-94166的应用，其特征在于，用于生产防除以下杂草的除草剂：鳢肠、反枝苋、藜、稗草、牛筋草、香附子、干金子、莎草。

6、如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述淡紫色链霉菌SPRI-94166通过发酵培养生产除草剂。

7、如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述淡紫色链霉菌SPRI-94166的发酵培养条件为：

在28℃下通气搅拌培养90-96小时；培养基组成：葡萄糖3％、淀粉5％、花生饼粉1％、黄豆饼粉2％、蛋白胨0.1％、酵母膏0.4％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.5％、硝酸胺0.2％、磷酸氢二钾0.05％。